ラットにおける胸部脊髄半切除手術とオープンフィールドロコ運動評価

ラット胸部脊髄ヘミセクションは、一方的な脊髄損傷の貴重で再現可能なモデルであり、運動回収および治療効果の神経機構を調べる。この記事には、ヘミセクション手順を実行し、オープンフィールドアリーナでのローコモーターの性能を評価するための詳細なステップバイステップガイドが含まれています。

脊椎の切断は、我々が開発した機関車のスケールでキャプチャすることができ、定量化可能かつ理想的な再現性のロコモ運動の欠陥を生成します。この技術の主な利点は、動物間の行動の現象の変動を減少させる病変の選択性と再現性です。麻酔をかけてきた成体ラットのつまみつまみに対する反応の欠如を確認した後、T-6からT-10椎骨の上に剃った皮膚に2.5センチメートルの切開を行い、鈍いはさみを使用して皮膚および表面性脂肪を引き込む。

鈍い解剖はさみと自己保持リトラクターを使用して、T-7からT-9椎骨の後ろ面に挿入し、細かい鉗子と綿先端アプリケーターを使用してデブライドし、残りの組織をクリアしてスピナスプロセスと椎体層を露出させます。速度をステレオ顕微鏡の下に置き、繊細な骨トリマーを使用して、T-7とT-8椎骨の両側のファセットを慎重に切断します。メスを使用して、T-8とT-9椎骨薄層の間の背骨結合組織で1ミリメートルの表面的な切断を行い、基礎となるコードを傷めないように注意し、骨トリマーを使用してT-8椎骨のスピナスプロセスを取り除きます。

曲面止血鉗子を慎重にT-7の紡錘プロセスで締め付けた、T-8薄片の尾端をわずかにわずかにロストリーに回し、T-8薄層の下に骨トリマーを挿入する。脊椎のラミネラ内側の左右の切り傷を脊髄を露出させる横方向のプロセスに繰り返すことによって、ラミネクトミーを続けて、ラミネクナに沿って正中切を行います。露出した脊柱管に2%リドカインの100マイクロリットルを点滴し、T-8脊髄セグメントを重ねる硬膜を取り除くために細かい鉗子およびイリデックハサミを使用する。

露光されたコードにリドカイン投与を繰り返し、露出したT-7~T-9椎骨の間に延びるスピナスプロセスの間に作成された中心線を可視化してコードの正中線を同定する。細かい鉗子を使って脊髄を安定させ、解剖ナイフを使って脊髄を正中から動物の片側に向かって半球化し、腹側の前脊椎動脈を切り裂かないように注意する。虹色の十二次的なはさみを使用して、脊髄の病変側に残っている組織を慎重に切断して、腹側側象限が適切に切り換えられ、滅菌を置き、約6×2ミリメートルの生理学的な止血スポンジを脊髄の上の露出した空洞に入れる。

次に、4-Oポリグラクチン910縫合糸を使用して、筋肉層と切開部位の周りの皮膚を閉じ、完全に回復するまで監視するヒートランプの下で暖かい環境にラットを置きます。行動検査のための適切な実験時間で、ラットがアリーナに慣れさせた後、ビデオ録画を開始し、運動活動を奨励するために薄暗い光条件下で、アリーナの中央にラットを置く。ラットが移動を促進するために20秒以上静止しているときにラットをアリーナの中央に戻して、少なくとも4分間探検することを許可します。

次に、記録されたテストセッションの運動性能をスコア付けする。関節肢の動きの場合、足首、膝、股関節の自発的な移動中に、通常、わずか、または不在のいずれかとして、後肢関節の動きを個別にスコア付けします。体重サポートのために、ラットが静止しているとき、および活動的な移動中に、手足が地面にあるときに、後肢伸長筋が装填された体重を収縮させ、支える能力を評価する。

桁位置については、ラットが静止している間と移動中の後肢の桁の位置を評価します。最初の接触時に後肢の足の配置の向きを評価し、ステップ中のスイングフェーズの流動性に加えて地面から離陸して、ラットが足の重みを支えることができる場合にのみ、ステップパラメータを完了します。前肢/後肢調整パラメータは、テスト中に4つの連続したステップが発生し、手足が体重を積極的にサポートできる場合にのみ完了します。

移動中の尾の位置を上または下のいずれかとして評価します。次に、各パラメーターの個々のスコアを追加して、各後肢の合計を最大 20 ポイントに提供します。実験群間の病変サイズを評価および比較するために、脊髄の全断面の割合としての病変の最大面積を、脊髄切片の組織学的染色で容易に計算することができる。

例えば、ラット間で共有される最大病変面積の割合をオーバーレイした左ヘミコードのこの代表的な病変は、断面コード領域の約47%の平均病変サイズを示した。左側の片方面の後の最初の5週間の無傷状態におけるこれらの代表的な変化は、手術後の最初の3週間の間に動物の左後肢における移動の有意な障害を示す。右後肢では、術後2週間で移動レベルの改善が観察される。

覚えておくべき最も重要なことは、半細断面と適切な外科後の動物のケアと監視のための脊髄正線の正確な同定が成功したプロトコルのために不可欠であるということです。この行動評価は、運動運動回復に関する特定の問題に対処するための特殊なテストを補完するための上部パレットレコルビアル指数をスクリーニングするための理想的なプロトコルを提供します。