Name: コラゲナーゼEを用いてマウスコロンからのラミナプロプリア単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-26T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: 学ぶコラゲナーゼEを用いたマウス結腸ラミナプロプリア単核細胞の単離法。免疫表現型解析により腸管免疫細胞群を研究し、炎症性疾患のメカニズム解明に貢献します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、助成金#1K08HL088260と#1R01HL133462-01A1(A.B.P.、H.N.、S.J.)、および小児研究のためのバチェラー財団(D.M.、H.N.、S.J.、A.A.H.、A.B.P.)によって支援されました。本研究で使用したC57BL/6およびBALB/cマウスは、当施設で飼育されるか、ジャクソン・ラボまたはタコニックによって提供された。

すべての研究は、米国協会によって設定された獣医基準を満たすマイアミミラー大学医学部の機関動物ケアおよび使用委員会(IACUC)によって検討され、承認されたげっ歯類の研究プロトコルの下で行われました。実験動物科学(AALAS)用。
1. ソリューションの準備
<ol><li>
表1に説明するように、コロンバッファー、シリカ系密度分離媒体100%、シリカ系密度分離媒体66%、シリカ系密度分離媒体44%、コラゲナーゼE消化バッファー、およびFACSバッファーを調製する。
	<ol>
<li>手順の前日にコロンバッファを準備し、4 °Cで一晩保存します。</li>
		<li>手順の前日に100%シリカベースの密度分離媒体を準備し、4°Cで一晩保存し、解凍する手順の朝に室温に置きます。</li>
		<li>室温100%シリカベース密度分離媒体とコロンバッファを使用して、分離の朝に66%および44%のシリカベースの分離媒体を準備します。</li>
		<li>クロストリジウムの口論体由来コラーゲナーゼEの適量を測定し、手順の前に一晩-20°Cで保存します。翌朝、コロナセ消化バッファーを導出するために適切な量のコロンバッファーに溶解する。手順の日にコラゲナーゼ消化バッファーを持つすべてのインキュベーションのために、37 °Cに溶液を事前に温めます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>プロトコルステップ全体について、1つの遠心分離機を20°Cに保ち、回転速度は859 x gで、勾配遠心分離のためにブレーキが不活性化(0減速)します。洗浄ステップのために、標準的な減速で、別の4 °Cと859 x gの回転速度に別のものを設定します。</li>
</ol>2. コロンの収穫
<ol><li>CO2窒息を介してマウスを安楽死させ、AALAC承認の確認方法を行う。</li>
	<li>マウスをサフィンの位置に置き、70%のエタノールで毛皮をスプレーします。大きな組織はさみを使用して、垂直中線切開を行い、無傷の下腸膜を露出させる。</li>
	<li>細かい解剖はさみを使用して、ペリトネウムを開きます。鉗子を使用して小腸を片側に移動し、下側の結腸を露出させる。下降コロンをわずかに上方に引き上げ、結腸の直腸部分を最大限に露出します。骨盤の深部の遠位直腸を切り取り、解剖し、遠位直腸からセカルキャップまで、結腸全体を1単位として取り除きます。</li>
	<li>50 mLポリプロピレンチューブで20 mL冷蔵コロンバッファーにコロンを移します。</li>
</ol>3. コロンのクリーニング
<ol><li>湿ったペーパータオルの上にコロンを置き、はさみや鉗子の鈍い端で腸壁に軽度の圧力を加えることによって固体便を抽出します。</li>
	<li>ペトリ皿にコロンを入れ、18Gの鈍い充填針で10 mLの注射器を使用して、冷やしたコロンバッファーの10 mLで腸を洗い流します。</li>
	<li>コロンバッファー湿潤ペーパータオルにコロンを転送し、ハサミの鋭い端で腸間膜と脂肪を削除します。</li>
	<li>5-10 mLの冷蔵コロンバッファーで満たされたペトリ皿にコロンを入れ、残りのコロニックコンテンツを洗浄するために手動で攪拌します。2~3回繰り返します。</li>
	<li>新鮮な冷蔵コロンバッファーで満たされたペトリ皿で、より筋肉の直腸端から近位結腸(単一の長方形の開いたコロンピースを生成する)に長手方向に大腸をカットします。既存のメディアを破棄し、きれいな冷蔵コロンバッファで補充します。</li>
	<li>ペトリ皿に激しく旋回し、各洗浄後に冷やしたコロンバッファーの5-10 mLを交換することにより、腸を3回洗います。</li>
	<li>長方形の大腸組織をコロンバッファーで湿らせてペーパータオルに置き、水平にスライスしてから小さな断片(3mm x 3mmのセクション)に切り取ります。</li>
	<li>50 mLポリプロピレン円錐管で20 mL冷やされたコロンバッファーに細かい鉗子を使用して慎重にコロン断片を収集します。
</li>
	<li>結腸断片を3回洗浄し、各洗浄を20mLコロンバッファーで洗浄し、各攪拌の間に30秒間チューブを激しく旋回させることにより、組織断片がチューブの底部に沈着することを可能にする。各洗浄間の吸引プロセスにおける組織断片の損失を防ぎながら、上清を吸引するデカントまたは真空。 注:各洗浄後にチューブを交換する必要はありません。</li>
</ol>4. コラゲナセ消化 1
<ol><li>50 mLポリプロピレン円錐管の洗浄された結腸断片にコラゲナーゼ消化バッファーの20 mLを追加します。</li>
	<li>閉じた50 mLチューブを37°Cのインキュベートされた軌道シェーカーに置き、回転速度を2 x gに60分間設定し、組織断片が攪拌中に一定の動きにあることを確認します。必要に応じて、回転速度を増やして、組織断片がチューブ底部に落ち着かないようにします。</li>
</ol>5. シリカベースの分離メディアグラデーションの準備
<ol><li>20°C(室温)とコロンバッファーで100%シリカベースの密度分離媒体を使用して、66%および44%のシリカベースの密度分離媒体を準備します。</li>
	<li>66%のシリカベースの密度分離媒体の5 mLを3つの別々の15 mLポリプロピレン管のそれぞれに注ぎます。コロンごとに3本のチューブを準備します。これは、グラデーション分離手順の高密度ベースを形成し、その上に低密度分離媒体が層化され、分離勾配が作成されます。</li>
	<li>使用するまで20°Cで保管してください。</li>
</ol>6. 消化からの上清のコレクション 1
<ol><li>25 mLの血清ピペットを使用して上清のみを収集し、コラーゲナーゼ消化1が完了した後、クリーンな50 mLポリプロピレン円錐管に置かれた40 μmの細孔ろ過布セルストレーナーを通して上清を濾過します。既存の組織断片を吸引しないように注意してください。 注:チューブ内の残りの可視組織断片を保持します。これらは第2のコラーゲナーゼ消化を受ける(ステップ8)。</li>
</ol>7. コラゲナーゼ消化バッファーのクエンチング
<ol><li>50 mLポリプロピレンチューブを冷やしたコロンバッファーで完全に充填します。 注:コラゲナセは37 °Cで活性です。したがって、冷やしたバッファーは、この酵素を不活性化します。</li>
	<li>チューブを4°Cで800 x gで5分間遠心分離します。<ol>
<li>真空吸引を介して上清を廃棄します。新鮮なコロンバッファーと遠心分離機の25 mLで細胞を5分間800 x gで洗浄します。</li>
		<li>新鮮な冷蔵コロンバッファーの1 mL未満でペレットを再中断します。</li>
		<li>50 mLポリプロピレン円錐管を氷の上に置きます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. コラゲナセ消化 2
<ol><li>ステップ4(消化1)を繰り返し、残りの組織断片をステップ6.1から保持します。</li>
</ol>9. 消化後の組織分解 2
<ol><li>18 Gの鈍い端の針を通して管および10 mLの注射器の間で組織の断片を激しく前後に洗い流す。</li>
	<li>このフラッシュを7~8回の完全な通路で繰り返し、グロス組織の断片や破片が見えなくなるまで続きます。</li>
</ol>10. セルのフィルタ
<ol><li>40 μm-poreろ過布セルストレーナーを通して組織の溶解懸濁液をきれいな50 mLポリプロピレンチューブに渡します。</li>
	<li>濾過布地のストレーナーを10mLの冷蔵コロンバッファーで洗浄し、フィルターに入った細胞を回収します。</li>
</ol>11. コラゲナセ消化をクエンチング
<ol><li>50 mLポリプロピレン円錐管を冷やしたコロンバッファーでリムに充填します。 注:コロナバッファーの温度は、コラゲナーゼ活性の消光を確保するために重要です。</li>
	<li>4 °C と 800 x gで 5 分間スピンします。</li>
	<li>真空吸引を介して上清を廃棄します。</li>
	<li>新鮮な冷蔵コロンバッファーの25 mLで再中断し、続いて4°Cで遠心分離、800 x gを5分間洗浄します。</li>
	<li>真空吸引を介して上清を廃棄します。</li>
	<li>コラーゲンナーゼ消化1(ステップ7)からステップ11.4から対応するチューブに再懸濁ペレットをプールします。</li>
	<li>ステップ11.4(洗浄と遠心分離)を繰り返します。</li>
</ol>12. シリカベースの密度分離媒体グラデーション分離
注:可能な限り迅速にステップ12〜18を実行し、コラゲナーゼ活性の迅速な消光を確保する。
<ol><li>ステップ11.7に続いて、結腸当たり44%のシリカ系密度分離媒体の合計24mLで各ペレットを再中断する。</li>
	<li>ステップ12.1からステップ5.2(66%シリカ系密度分離媒体を含む)で調製された3本のチューブのそれぞれに、10mLの血清ピペットを用いて、培線の8mLをゆっくりと層化する。インターフェイスの中断を避けるためにグラデーションを重ねながら、44% 密度分離メディアの安定した低速な流れを維持します。</li>
	<li>計量スケールまたはバランスを使用して、遠心分離管内のすべてのチューブを慎重にバランスを取ります。</li>
	<li>20°Cでブレーキなしで遠心分離機で859 x gでチューブを20分回転させます。ローターがチューブを取り外す前に休息を完了するようにし、グラデーションインターフェイスでセルを破壊しないように注意してください。</li>
</ol>13. グラデーション界面から単核細胞を収集する
<ol><li>グラデーション インターフェイス(5 mL マーク付近)を視覚化し、通常は 1 ~ 2 mm の厚さの白いバンド (MNC を含む) が存在します。 注:白いバンドが表示される場合と見えない場合があります。ただし、MNC はこのインターフェイスにあり、グラデーション インターフェイスの明瞭さを曇らせる必要があります。</li>
	<li>真空吸引し、インターフェイスへのより簡単なピペットアクセスを可能にするために、トップグラデーションのトップ7 mLを破棄します。</li>
	<li>連続的な手動吸引および安定した回転手首の動きを使用して、きれいな50 mLポリプロピレン円錐形の管に細胞の界面層を集める。2つのグラデーション間のインターフェイスが明確で、再フラクタイル(セルのクリア)になるまで収集します。</li>
	<li>回収管に50mLの冷蔵FACSバッファーを充填します。4 °C、800 x gで5分間スピンします。</li>
	<li>真空吸引を介して上清を吸引し、FACSバッファの1 mLでペレットを再中断します。</li>
	<li>適切な死細胞排除法を用いて1:2希釈で血球計上の細胞を数えます。</li>
	<li>新たに単離された結腸MNCを用いてFACS染色または他のアッセイに進みます。</li>
</ol>

<ol><li>Schneeman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+physiology+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal physiology and functions.</a> British Journal of Nutrition. 88, S159-S163 (2002).</li>
<li>Arranz, E., Pena, A. S., Bernardo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediators+of+inflammation+and+immune+responses+in+the+human+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+of+inflammation%22%5BJournal%5D)">Mediators of inflammation and immune responses in the human gastrointestinal tract.</a> Mediators of inflammation. 2013, 1-3 (2013).</li>
<li>Blumberg, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+in+the+intestinal+tract%3A+pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+diseases%22%5BJournal%5D)">Inflammation in the intestinal tract: pathogenesis and treatment.</a> Digestive diseases. 27 (4), 455-464 (2009).</li>
<li>Pabst, R., Russell, M. W., Brandtzaeg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Distribution+of+Lymphocytes+and+Plasma+Cells+and+the+Role+of+the+Gut%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Tissue Distribution of Lymphocytes and Plasma Cells and the Role of the Gut.</a> Trends in Immunology. 29 (5), 206-208 (2008).</li>
<li>Reibig, S., Hackenbrunch, C., Hovelmeyer, N. Isolation of T Cells from the Gut. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aReibig%2C+S+%22T-Helper+Cells%3A+Methods+and+Protocols%2C+Methods+in+Molecular+Biology%22">T-Helper Cells: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology</a>. Waisman, A., Becher, B. , Humana Press. New York, NY. 21-25 (2014).</li>
<li>Mowat, A. M., Agace, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+Specialization+within+the+Intestinal+Immune+System%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Regional Specialization within the Intestinal Immune System.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (10), 667-685 (2014).</li>
<li>Brandtzaeg, P., Kiyono, H., Pabst, R., Russell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminology%3A+Nomenclature+of+mucosa-associated+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Terminology: Nomenclature of mucosa-associated lymphoid tissue.</a> Mucosal Immunology. 1 (1), 31-37 (2008).</li>
<li>Schieferdecker, H. L., Ullrich, R., Hirseland, H., Zeitz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+differentiation+antigens+on+lymphocytes+in+the+human+intestinal+lamina+propria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">T cell differentiation antigens on lymphocytes in the human intestinal lamina propria.</a> Journal of Immunology. 148 (8), 2816-2822 (1992).</li>
<li>Mowat, A. M., Viney, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomical+basis+of+intestinal+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The anatomical basis of intestinal immunity.</a> Immunological Reviews. 156, 145-166 (1997).</li>
<li>Ford, A. C., Lacy, B. E., Talley, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irritable+Bowel+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Irritable Bowel Syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 376 (26), 2566-2578 (2017).</li>
<li>Harb, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crohn%27s+Disease+of+the+Colon%2C+Rectum%2C+and+Anus%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Crohn's Disease of the Colon, Rectum, and Anus.</a> Surgical Clinics of North America. 95 (6), 1195-1210 (2015).</li>
<li>Ungaro, R., Mehandru, S., Allen, P. B., Pyrin-Biroulet, L., Colombel, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ulcerative+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Ulcerative Colitis.</a> The Lancet. 389 (10080), 1756-1770 (2017).</li>
<li>Mohty, B., Mohty, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+complications+and+side+effects+after+allogeneic+hematopoietic+stem+cell+transplantation%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+cancer+journal%22%5BJournal%5D)">Long-term complications and side effects after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation: an update.</a> Blood cancer journal. 1 (4), 1-5 (2011).</li>
<li>Hatzimichael, E., Tuthill, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells+and+cloning%3A+advances+and+applications%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell transplantation.</a> Stem cells and cloning: advances and applications. 3, 105-117 (2010).</li>
<li>Hernandez-Margo, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonic+Complications+Following+Human+Bone+Marrow+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Coloproctology%22%5BJournal%5D)">Colonic Complications Following Human Bone Marrow Transplantation.</a> Journal of Coloproctology. 35 (1), 46-52 (2015).</li>
<li>Del Campo, L., Leon, N. G., Palacios, D. C., Lagana, C., Tagarro, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+Complications+Following+Hematopoietic+Stem+Cell+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Radio+Graphics%22%5BJournal%5D)">Abdominal Complications Following Hematopoietic Stem Cell Transplantation.</a> Radio Graphics. 34 (2), 396-412 (2014).</li>
<li>Lee, J., Lim, G., Im, S., Chung, N., Hahn, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+Complications+Following+Hematopoietic+Stem+Cell+Transplantation+in+Children%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+Journal+of+Radiology%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal Complications Following Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Children.</a> Korean Journal of Radiology. 9 (5), 449-457 (2008).</li>
<li>Takatsuka, H., Iwasaki, T., Okamoto, T., Kakishita, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+Graft-Versus-Host+Disease%3A+Mechanisms+and+Management%5BTitle%5D)+AND+%22Drugs%22%5BJournal%5D)">Intestinal Graft-Versus-Host Disease: Mechanisms and Management.</a> Drugs. 63 (1), 1-15 (2003).</li>
<li>Shuyu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+immune+tolerance+in+nonmyeloablative+MHC-mismatched+BMT+for+murine+%CE%B2-thalassemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Bidirectional immune tolerance in nonmyeloablative MHC-mismatched BMT for murine β-thalassemia.</a> Blood. 129 (22), 3017-3030 (2017).</li>
<li>van der Merwe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+myeloid-derived+immunomodulatory+cells+induce+PD-1+ligand-dependent+donor+CD4%2BFoxp3%2B+regulatory+T+cell+proliferation+and+donor-recipient+immune+tolerance+after+murine+nonmyeloablative+bone+marrow+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recipient myeloid-derived immunomodulatory cells induce PD-1 ligand-dependent donor CD4+Foxp3+ regulatory T cell proliferation and donor-recipient immune tolerance after murine nonmyeloablative bone marrow transplantation.</a> Journal of Immunology. 191 (11), 5764-5776 (2013).</li>
<li>Couter, C. J., Surana, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Flow+Cytometric+Characterization+of+Murine+Small+Intestinal+Lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (111), e54114(2016).</li>
<li>Qiu, Z., Sheridan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+Lymphocytes+from+the+Mouse+Small+Intestinal+Immune+System%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e57281(2018).</li>
<li>Weigmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+subsequent+analysis+of+murine+lamina+propria+mononuclear+cells+from+colonic+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation and subsequent analysis of murine lamina propria mononuclear cells from colonic tissue.</a> Nature Protocols. 2, 2307-2311 (2007).</li>
<li>Bull, D. M., Bookman, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+functional+characterization+of+human+intestinal+mucosal+lymphoid+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Isolation and functional characterization of human intestinal mucosal lymphoid cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 59 (5), 966-974 (1977).</li>
<li>Davies, M. D., Parrott, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+purification+of+lymphocytes+from+the+epithelium+and+lamina+propria+of+murine+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Preparation and purification of lymphocytes from the epithelium and lamina propria of murine small intestine.</a> Gut. 22, 481-488 (1981).</li>
<li>Carrasco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Lymphocyte+Isolation+Methods+for+Endoscopic+Biopsy+Specimens+from+the+Colonic+Mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of Lymphocyte Isolation Methods for Endoscopic Biopsy Specimens from the Colonic Mucosa.</a> Journal of Immunological Methods. 389 (1-2), 29-37 (2013).</li>
<li>Zhang, Y., Ran, L., Li, C., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity%2C+Structures%2C+and+Collagen-Degrading+Mechanisms+of+Bacterial+Collagenolytic+Proteases%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Diversity, Structures, and Collagen-Degrading Mechanisms of Bacterial Collagenolytic Proteases.</a> Applied and Environmental Microbiology. 81 (18), 6098-6107 (2015).</li>
<li>Harrington, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+collagenases+and+collagen-degrading+enzymes+and+their+potential+role+in+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Bacterial collagenases and collagen-degrading enzymes and their potential role in human disease.</a> Infection and immunity. 64 (6), 1885-1891 (1996).</li>
<li>Duarte, A. S., Correia, A., Esteves, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+collagenases+-+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Bacterial collagenases - A review.</a> Critical Reviews in Microbiology. 42 (1), 106-126 (2014).</li>
<li>Autengruber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Enzymatic+Tissue+Disintegration+on+the+Level+of+Surface+Molecule+Expression+and+Immune+Cell+Function%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Microbiology+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Impact of Enzymatic Tissue Disintegration on the Level of Surface Molecule Expression and Immune Cell Function.</a> European Journal of Microbiology and Immunology. 2 (2), 112-120 (2012).</li>
<li>Goodyear, A. W., Kumar, A., Dow, S., Ryan, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+Murine+Small+Intestine+Leukocyte+Isolation+for+Global+Immune+Phenotype+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of Murine Small Intestine Leukocyte Isolation for Global Immune Phenotype Analysis.</a> Journal of Immunological Methods. 405, 97-108 (2014).</li>
<li>van der Heijden, P. j, Stok, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Procedure+for+the+Isolation+of+Functionally+Active+Lymphoid+Cells+from+the+Murine+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved Procedure for the Isolation of Functionally Active Lymphoid Cells from the Murine Intestine.</a> Journal of Immunological Methods. 3 (2), 161-167 (1987).</li>
</ol>

著者は、競合する金銭的利益を宣言しません。

この視覚プロトコルは、ラミナプロプリアリンパ球(LPL)を含む大腸単核細胞の単核細胞の単離のための十分に許容される方法を説明する。このプロトコルは、炎症性サイトカインおよび組織損傷が回収されたMNCの生存率の低下に自分自身を貸し出す重度の移植後マウス大腸炎モデルの評価に最適化されたことを考えると、これらの方法は他の方法に翻訳できると予想される結腸MNCのフェオティピック分析を必要とするアプリケーション。これらには、炎症性腸疾患のマウスモデルにおける結腸炎症の評価、大腸炎標的治療の免疫応答の研究、および感染性病原体によって産生される大腸炎が含まれる。さらに、健康な(合成BMT)マウスにおける単離を用いての我々のデータは、MNC単離物における免疫細胞検出を可能にするために、分離手順が有意な炎症浸潤を必要としないことを示している。実際、同様のデータは、未処理の健氏(非BMT)マウスを用いて得られた(データは示さない)。
このプロトコルのいくつかの重要なステップは、他の公開された方法と区別し、高収率と実行可能性に貢献します。例えば、クロストリジウム組織組織-由来コラゲナー...

消化管(GI)管は主に食物からの栄養素の処理と再吸収に専念していますが、GI管はまた、血管、リンパ系、神経系および他の多くの器官の完全性において中心的な役割を維持しています。その粘膜および粘膜下免疫システム1.GI免疫システムは、食品、共生細菌、または侵入病原体1、2からの外来抗原への絶え間ない暴露による消化管および全身の健康の両方に影響力のある役割を有する。したがって、GI免疫系は、病原性抗原1、2に適切に応答しながら非病原性抗原に許容する微妙なバランスを維持しなければならない。耐性と防御のバランスが崩れると、局所的または全身性免疫不自由および炎症が起こり得る1、2、3の無数の疾患をもたらす。
腸は、体内のすべてのリンパ球の少なくとも70%を収容する4.ほとんどの一次免疫相互作用は、腸内の3つの免疫局の少なくとも1つを含む:1)ペイヤーのパッチ、2)上皮内リンパ球(IEL)および3)ラミナプロプリアリンパ球(LPL)。これらの各々は、腸内の正常な免疫課題に迅速に応答する免疫細胞の複雑な相互接続されたネットワークで構成されています5.筋粘膜上の間質に制限され、緩やかに構造化されたラミナプロプリアは腸粘膜の結合組織であり、絨毛、血管系、リンパ液の排液、粘膜神経系、ならびに多くの自然の足場を含む。および適応免疫サブセット6,7,8,9.LPLは、CD4+およびCD8+T細胞を2:1の近似比で構成し、血漿細胞および骨髄系統細胞、樹状細胞、マスト細胞、好酸球およびマクロファージ6を含む。
様々な疾患状態に関連する腸の免疫不調と炎症を理解することに対する関心が高まっています。クローン病および潰瘍性大腸炎のような状態はすべて、大腸炎症10、11、12の様々なレベルを現す。さらに、同種骨髄移植(allo-BMT)を受ける骨髄または免疫系の悪性または非悪性障害を有する患者は、1)コンディショニングレジメンからの直接的な毒性を含む様々な形態の大腸炎を発症する可能性がある。BMTの前に、2)BMTおよび3)BMT後の免疫抑制によって引き起こされる感染症および3)BMT13、14、15の後に組織内のドナー・アロ抗原に反応するドナー型T細胞によって駆動される移植片対宿主病(GVHD)。これらすべてのポストBMT合併症は、腸16、17、18の免疫環境に有意な変化をもたらす。提案された方法は、マウス結腸における免疫細胞蓄積の信頼できる評価を可能にし、BMT後のマウスレシピエントに適用すると、移植耐性に関与するドナーおよびレシピエント免疫細胞の両方の効率的なアッセイを容易にする19 、20.腸の炎症の追加の原因は、悪性腫瘍、食物アレルギー、または腸内微生物叢の破壊が含まれます。このプロトコルは、結腸からの腸単核細胞のアクセスを可能にし、修飾して、これらの前臨床マウスモデルのいずれかで小腸の白血球にアクセスする。
検索語「腸と免疫細胞と分離」を用いたPubMed検索は、免疫細胞を抽出するための小腸消化の方法を記述する200以上の出版物を明らかにする。しかし、コロンの同様の文献検索では、結腸からの免疫細胞の単離を指定する十分に記述されたプロトコルは得られなかった。これは、結腸がより筋肉と間質の層を持っているので、小腸よりも完全に消化するのが難しいからかもしれません。既存のプロトコルとは異なり、このプロトコルは、特に他の細菌性コラゲナーゼ(コラゲナーゼD/コラゲナーゼI)なしでクロストリジウム内素体からコラゲナーゼEを使用します。我々は、このプロトコルを用いて、ナトリウムversenate(EDTA)、ディスパーゼIIなどの抗束試薬を添加することなく、単核免疫細胞(MNC)の単核免疫細胞の品質を維持しながら、大腸組織の消化を達成できることを実証する。デオキシリボヌクレアーゼI(DNAse I)21、22、23.このプロトコルは、さらなる指示された研究のためにマウス結腸から生存可能なMNCの再現可能な堅牢な抽出を可能にするために最適化され、コロンの免疫学の研究または(修飾を伴う)小腸24、25.

<table><tbody><tr><td>60 mm ペトリ DIsh</td><td>Thermo Scientific</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Lonza BioWhittaker</td><td>BW17-517Q</td><td></td></tr><tr><td>10 mL ディスポーザブル血清ピペット</td><td>Corning</td><td>4100</td><td></td></tr><tr><td>10 mL シリンジ</td><td>Becton Dickinson</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 非滅菌コニカルチューブ</td><td>TruLine</td><td>TR2002</td><td></td></tr><tr><td>18 G ブラント ニードル</td><td>ベクトン ディキンソン</td><td>305180</td><td></td></tr><tr><td>25 mL 使い捨て血清ピペット</td><td>Corning</td><td>4250</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu;m 細孔サイズ セルストレーナー</td><td>Corning</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon Tube</td><td>Corning</td><td>21008-951</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A4503-1KG</td><td></td></tr><tr><td>固定バッファー</td><td>Biolegend</td><td>420801</td><td></td></tr><tr><td>E. coli Clostridium histolyticum</td><td>Sigma</td><td>C2139</td><td></td>EDTA由来のコラゲナーゼE</tr><tr><td>ソリューション</td><td>Amresco</td><td>E177-500ML</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>サーモ/フィッシャーサイエンティフィック -HyCLone</td><td>SV30014.03</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>GE Healthcare-HyClone</td><td>SH30237.01</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE Healthcare-Life Sciences</td><td>1708901</td><td></td></tr><tr><td>RPMI Medium</td><td>Corning</td><td>17-105-CV</td><td></td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム</td><td>VWR ライフサイエンス Amresco</td><td>97064-646</td><td></td></tr><tr><td>トリパン ブルー</td><td>ロンザ BioWhittaker</td><td>17-942E</td><td></td></tr></tbody></table>

コラゲナーゼeを用いてマウスコロンからのラミナプロプリア単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞

Isolation of Lamina Propria Mononuclear Cells from Murine Colon Using Collagenase E

腸は、体内の免疫細胞の最大数に家です。小規模および大規模な腸内免疫系は、外因性抗原への暴露を警察し、強力な微生物由来の免疫刺激に対する応答を調節する。このため、腸は、クローン病や潰瘍性大腸炎、骨後の移植片対宿主病(GVHD)などの炎症性腸疾患に限定されない多くの疾患における免疫調節および炎症の主要な標的部位である。骨髄移植(BMT)、および多くのアレルギーおよび感染性状態。消化管炎症および大腸炎のマウスモデルは、GI合併症を研究し、予防と治療のための前臨床最適化戦略に多く使用されています。これらのモデルから収集されたデータは、腸からの免疫細胞の単離および発型分析を介して収集され、消化管および全身性炎症性疾患を改善するために適用することができるさらなる免疫理解に不可欠である。本報告では、混合シリカベースの密度勾配界を用いて結腸から単核細胞(MNC)を単核細胞(MNC)を単離するための非常に有効なプロトコルについて述べている。この方法は、汚染された破片を最小限に抑えながら、かなりの数の生存性白血病を再現可能に分離し、その後の血流サイトメトリーまたは他の方法による免疫表現型を可能にする。

マウス結腸疾患モデルを使用する場合、結腸のMNCの中で、炎症過程に関与する複数の免疫細胞サブセットを定量化および定性的に評価することができるのが有用である。このプロトコルの適用を介して得られたMNCの単一細胞懸濁液は、堅牢で再現可能な方法でそのような型近性特性を容易にする。多様な実験設定下でこの単離法を適用するための原理の証明として、この方法を用いて大腸MNCを回収し、マウスから単離した細胞に対して多パラメータフローサイトメトリーを行った(図1および図 2,同種BMT)(図2A、合成BMT)BMT後の有意な免疫媒介性結腸損傷なし。
フローサイトメトリーとデータ分析は、DNas...

このプロトコルの目的は、コラゲナーゼを用いて組織の酵素消化によって結腸のラミナプロプリに存在する単核細胞を単離させることである。このプロトコルは、単核細胞の効率的な単核分離を可能にし、その結果、単一細胞懸濁液を生成し、堅牢な免疫表現型に使用することができます。

コラゲナーゼEを用いてマウスコロンからのラミナプロプリア単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞

The intestine is the home to the largest number of immune cells in the body. The small and large intestinal immune systems police exposure to exogenous ...

このプロトコルを用いた腸からの免疫細胞の表述法解析における単離は、GIおよび全身性炎症性疾患の理解に適用可能であることが証明されている。この方法は、フルールの原子数または他の方法によってその後の免疫表現を可能にする汚染破片を最小限に抑えることによって、かなりの数の生存可能な単核細胞を分離する。腸は多くの疾患における炎症の主要な標的部位であるため、このプロトコルは、癌、アレルギー、移植、および自己免疫のマウスモデルにおける腸内免疫集団の研究に有用であり得る。このプロトコルの歩留まりと効率を最適化するために、重要なソリューションと材料を事前に準備しておくことをお勧めします。マウスを安楽死させ、垂直中線切開を行った後、腹骨を開くために細かい解剖はさみを使用してください。鉗子を使用して、小腸を片側に移動し、下降結腸を露出させる。コロンの直腸部分を最大限に露出させるために、下降結腸をわずかに上向きに引っ張ります。次に、骨盤の奥深くに遠位直腸を切断し、遠位直腸からセカールキャップまでの1つの単位として結腸全体を解剖する。まず、湿らせたペーパータオルの上にコロンを置き、はさみまたは鉗子の鈍い端を使用して、腸壁に軽度の圧力を加え、固形便を抽出します。次に、ペトリ皿にコロンを入れ、18ゲージの鈍い充填針で10ミリリットルの注射器を使用して、10ミリリットルの冷たい結腸バッファーで腸を洗い流します。5~10ミリリットルの冷たい結腸バッファーを充填したシャーレにコロンを入れ、残りの大腸内容物を洗浄するために手動で攪拌します。この洗浄を2~3回繰り返し、洗浄ごとに新鮮なバッファーを含む新しいシャーレを使用します。この後、新鮮な冷やした結腸バッファーを含む新しいシャーレにコロンを移します。結腸を縦方向に切断し、そのより筋肉質の直腸端から近位結腸まで、単一の矩形の開いた結腸片を生成する。皿の中の中央値を捨て、きれいな冷やした結腸バッファーに置き換えます。長方形の結腸組織をコロンバッファーで湿らせたペーパータオルの上に置き、水平にスライスしてから小さな断片にスライスして切ります。20ミリリットルのチルドコロンバッファーを含む50ミリリットルのポリプロピレンコンピカルチューブに結腸断片を集めるために、細かい鉗子を使用してください。その後、チューブを30秒間激しく旋回して断片を洗浄します。洗浄後、上清を消す前に組織断片をチューブの底に落ち着かせ、組織断片を失うことを避けるために、洗浄ごとに新鮮な結腸バッファーを使用してこの洗浄プロセス全体を3回繰り返します。まず、洗浄された結腸フラグメントを含むチューブに20ミリリットルのコラゲターゼ消化バッファーを加える。チューブを密封し、60分間2倍のGの回転速度で摂氏37度で軌道シェーカーに置きます。組織断片が撹拌中に一定の動きをしていることを確認します。まず、66%シリカベースの密度分離培地を3つの別個の15ミリリットルのポリプロピレンチューブのそれぞれに5ミリリットル注ぎます。次に、25ミリリットルの血清ピペットを使用して、コラゲナーゼ消化器1から上清のみを収集する。40マイクロリットルのろ過不良生地セルストレーナーを通して上清をフィルターし、清潔な50ミリリットルのポリプロピレンコニカルチューブに入れ。冷却された結腸バッファーでチューブを完全に充填し、コラゲラーゼ消化バッファーをクエンチします。次に細胞を回転させ、上清を吸引し、ペレットを氷の上に置いておきます。テキストプロトコルで概説されているようにコラゲラーゼ消化2を実行し続けます。コラゲナーゼ消化2が完了した後、18ゲージの鈍い端の針を通して、チューブと10ミリリットルのシリンジの間で組織断片を激しく往復させる。このフラッシュを少なくとも7〜8個の通路に対して繰り返し、総組織断片または破片が見えないまで続ける。次に、40マイクロメートルのろ過不良の生地セルストレーナーを通して組織分解懸濁液を、清潔な50ミリリットルのポリプロピレンチューブに入れる。チューブを冷やした結腸バッファーでリムに充填し、消化と遠心分離機を摂氏4度で5分間クエンチします。真空吸引を介して上清を捨て、コラゲナーゼ消化器1から対応するチューブに再懸濁ペレットを引き出します。この後、各ペレットを24ミリリットルの44%シリカベースの密度分離培地に再び中断します。10ミリリットルの血清学的ピペットを使用して、この培地の8ミリリットルを66%シリカベースの密度分離媒体を含む3つのチューブのそれぞれにゆっくりと重ね合わせて使用してください。計量スケールまたはバランスを使用して遠心分離バケツ内のチューブのバランスを慎重に調整します。859倍のGで20°Cで20分間、休憩なしで遠心分離機。ロッドは、勾配のインターフェースで細胞を破壊しないように注意して、チューブを取り外す前に完全な休息に来るようにします。まず、通常1〜2ミリリットルの厚い白いバンドが存在する5ミリリットルマーク付近の勾配界面を視覚化する。真空吸気し、インターフェイスへの簡単なピペットアクセスを可能にするために勾配の上7ミリリットルを捨てます。連続的な手動吸引および安定した回転の手首の動きを使用して、細胞のインターフェイス層を集める。2つの勾配の間の界面が明確かつ屈折するまで収集し、新しい50ミリリットルのポリプロピレンコニカルチューブにインターフェイスを転送します。次に、全懸濁液が50ミリリットルに達するまで、この浴槽にFACSバッファを追加します。摂氏4度で5分間800倍Gで遠心分離機。次いで、真空吸引を介して上清を吸引し、ペレットをFACSバッファーの1ミリリットルで再懸濁させた。このビデオで説明する手順は、結腸から、または、変更を加えて、小腸から単核細胞を単一核細胞を分離するために使用することができる。さらに、細胞測定およびデータ分析は、コラゲナーゼEまたはDのいずれかを単離に使用する場合のアポトーシスリンパ球および壊死/死死リンパ球の分画を比較するために行われ、DNAse 1治療なし。アネキシン5および各単一の単一細胞懸濁液上の固定可能な生死死性染料染色に続いて、ドナーゼを含まないコラゲナーゼEは、ドナーゼを含まないコラゲナーゼDと比較して、単離後の生細胞の割合が有意に高いことを示した。ドナーゼを使用していずれかのコラゲナーゼと比較しても.また、コラゲナーゼE群の壊死細胞を41.0%、コラゲナーゼD群で90.0%の中央値割合で同定しました。コラゲラーゼE DNAse群では75.9%、コラゲナーゼD DNAse群では80.3%。その後、BMTまたは同種異系または同系のBMTモデルを受けた後、7日目にCD45.2バルブCレシピエントマウスから分離されたMNCにマルチペリメトリックフローサイトメトリーが適用されます。BMTレシピエントの結腸から抽出されたドナーCD4陽性およびCD8陽性T細胞の平均絶対数を計算し、比較する。したがって、このようなマウスモデルで希少な免疫細胞集団を同定および/または定量することが重要です。希少なサブセットは、ドナー由来FOX-P3陽性T調節細胞を含む、同系および同種異系のBMTモデルの両方で評価される。この方法を用いて、ドナー由来のコロニーT調節性レシピエントマウスの結腸など、BMT後の稀なサブセットであっても、分析することができる。コラゲターゼEは摂氏37度で活動していることに留意すべきである。したがって、すべてのコラゲターゼ溶液は、適切なコラゲターゼ活性のために事前に温め、活動を終了するために徹底的に消し止める必要があります。このプロトコルは、フルールサイトメトリー、分子生物学技術、顕微鏡、培養、および部位などによって、その後の特性評価に使用できる多数の単核細胞を可能にする。このプロトコルは、骨髄移植モデルにおける実験的対制御マウスの結腸における炎症の信頼できる評価を提供した。このように移植耐性の新しい調節免疫機構の発見を促進する。クロストリジウム・イストリチカムのコラゲナーゼは、ラボの安全技術で取り扱うべき試薬です。吸入すると健康に有害であり、皮膚や眼の刺激を引き起こす可能性があります。

isolation-lamina-propria-mononuclear-cells-from-murine-colon-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

マウス生殖管からリンパ球を分離するための効率的な方法が記載されている。この方法では、効率的な分離を可能にするために酵素消化し、パーコール勾配分離を利用しています。この手法は、他の種で使用するためにもに適応可能である...

マウス生殖管粘膜からのリンパ球の単離

このビデオでは、コラゲナーゼEを用いた酵素消化とシリカベースの密度分離培地勾配分離によるマウスの結腸組織からの固有層単核細胞の単離を実演します。単離された単核細胞は、その後の下流分析に使用できます。...

Lamina propria単核細胞単離:マウス結腸から単核細胞を得るためのシリカベースの密度勾配遠心分離技術

筋線維芽細胞は、正常および疾患状態の両方において重要な生理学的プロセスを調節、胃腸管の有力な間質細胞である。我々は、マウスおよびインビトロ実験のために利用することができるヒト結腸組織の両方からの一次筋線維芽細胞の単離を可能にする技術が記載されている。...

マウスおよびヒト結腸組織からの一次筋線維芽細胞の分離

ここでは、空間的に異なるマウスの結腸上皮表面細胞を根底にある陰窩基部細胞から分離するための簡単な方法について説明します。...

マウス結腸粘膜の顕微解剖のための凍結切片法

腸管関連リンパ組織パイエル排水腸間膜リンパ節など誘導サイトと粘膜を含むエフェクター...

マウス小腸管免疫系からリンパ球を分離すること

ここで説明されているプロトコルは、超腸サイトにコロンから移住免疫細胞を特定する新生児マウスの photolabeling アプローチを採用しています。この戦略は、初期の生活におけるホスト...

生体内で新生児マウスの造血細胞の移動の可能性を評価するためにコロンの細胞の Photolabeling

ここでは、文化人間 enteroid または colonoid 単分子膜細胞および生化学的レベルでホスト上皮細菌相互作用を研究するそのままバリア機能を持つプロトコルを提案する.

病原体、共生生物、およびホストの腸上皮間の相互作用を研究する人間 Colonoid 単分子膜

本研究では、クローン線維症に匹敵する病態生理学を示すTNBS媒介腸線維症の詳細な手順について述べる。我々はまた、ラパマイシンが腸線維症に対する阻害作用を促進したことを考慮して、このアプローチについて議論する。...

TNBS媒介性腸線維症の発症に関する機械的洞察とラパマイシンの阻害効果の評価

本プロトコルでは、腸内窩から直接マウスの一次上皮結腸単層を生成する方法を説明する。透過性フィルター上にコンフルエント単層を生成する実験的アプローチ、傷創傷治癒および生化学的研究のためのコンフルエント単層、免疫蛍光分析のためのまばらでコンフルエントな単層を提供する。...

腸管内窩からのネズミ原発結上皮単層の生成

ここでは、初代マウス肝臓正弦波内皮細胞(LSEC)単離のためのプロトコールを概説し、実証する。このプロトコールは、肝臓コラゲナーゼ灌流、低速遠心分離による非実質細胞精製、およびCD146磁気ビーズ選択に基づいている。また、フローサイトメトリーと走査型電子顕微鏡を用いて、これらの単離されたLSECの表現型と特性評価も行っています。...

マウス初代肝臓正弦波内皮細胞の単離と特性評価

ここでは、テロサイトを含むマウス腸間葉系を単離するためのプロトコルを提示します。これらは、マウスまたはヒト由来のオルガノイドとの共培養など、いくつかの用途に使用して、成長をサポートし、元の組織の状況をよりよく反映することができます。...

マウス腸間葉系の単離により、テロサイトの高収率が得られます

学ぶコラゲナーゼEを用いたマウス結腸ラミナプロプリア単核細胞の単離法。免疫表現型解析により腸管免疫細胞群を研究し、炎症性疾患のメカニズム解明に貢献します。

コラゲナーゼEを用いてマウスコロンからのラミナプロプリア単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞

さらに動画を探す