Name: 目標シーケンシングアプローチによる比較病変分析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: 学ぶ マルチ病変シーケンスと免疫組織化学を統合した腫瘍内異質性評価プロトコル。原発・転移巣のクローン・サブクローン変異を特定し、固形腫瘍の進化と個別化治療設計に貢献する。

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この研究は、イタリアのがんゲノムプロジェクト(グラント番号)FIRB RBAP10AHJB), アソシアツィオーネ イタリアナ リケルカ カンクロ (AIRC;ASにNo.12182を付与し、18178をVCに付与し、FP7欧州コミュニティ補助金(カムパックNo 602783からAS)。資金調達機関は、データの収集、分析、解釈、または原稿の執筆に何の役割も持っていませんでした。

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</ol>

著者たちは何も開示する必要はない。

我々の方法は、特定の患者の異なる病変から垂直データ(すなわち、形態、DNAシーケンシング、免疫ヒスト化学)の統合を通じて固形腫瘍の進行に関与する分子変化の同定を可能にする。409のがん関連遺伝子8のコード配列を調問することにより、変異サイレント腫瘍型(すなわち、SPN、膵臓の固体偽毛細血管新生物)におけるクローンおよびサブクローナル事象を検出する方法を実証した。ここで使用されるアンプリコンベースのターゲットシーケンシングアプローチの利点は、カバレッジの均一性(90%のターゲットベースは100xをカバーし、95%は20倍)の範囲で、尋問対象地域(15,992)全体で、典型的な平均カバレッジ深度1000xです。マイクロディセクションを介して新生物細胞濃縮に結合された高い被覆量は、低いアレー周波数イベントの検出のための高い感度を保証します。前に示したように、標的シーケンシングアプローチは、FFPE組織からのDNAサンプル上の2%のアle周波数までの突然変異の検出を可能にします。一例として、本研究では転移標本におけるサブクローナル事象として4%対立遺...

次世代シーケンシング(NGS)の出現は、癌の診断と治療方法に革命をもたらした1.多地域シーケンシングに結合したNGSは、固形腫瘍2において高い腫瘍内不均一性(ITH)を露呈しており、これは薬物感受性の異なるサブクローンの存在による標的治療の失敗を部分的に説明している2.ゲノムワイドシーケンシング研究によって提起される重要な課題は、個々の癌における乗客(すなわち中性)と運転者の突然変異を区別する必要性である3。いくつかの研究は確かに、特定の腫瘍において、乗客の突然変異がITHの大部分を占める一方で、運転者の変化は同じ個体4の病変の間で保存される傾向があることを示している。また、大きな突然変異負担(肺癌および黒色腫に見られる)は、必ずしも大きな鎖下突然変異負担2を意味するわけではないことに注意することも重要である。したがって、高い程度のITHは、突然変異の負担が低い腫瘍に見出すことができる。
転移は、世界中の癌関連死の90%以上を占めています5;したがって、原発性病変および転移性病変の間でドライバ遺伝子の突然変異不均一性を捕捉することは、進行期疾患に対する有効な治療法の設計に不可欠である。臨床シーケンシングは、一般に固定組織からの核酸に対して行われ、DNA品質が悪いためゲノム全体の探査が困難になります。一方、臨床シーケンシングの目的は、所定の治療レジメンに対する応答性/応答を予測する可能性のある実用的な突然変異および/または突然変異を特定することです。現状では、シーケンシングは、臨床的に関連する情報をタイムリーに抽出するために、ゲノムの小さな割合に制限することができます。低スループットDNAプロファイリング(例えば、サンガーシーケンシング)からNGSへの移行により、数百のがん関連遺伝子を高いカバレッジで分析することができ、サブクローナルイベントの検出が可能になります。ここでは、同一個体の異なる検体間のクローン集団とサブクローナル集団の同定を可能にする比較病変解析方法を報告する。ここで説明する方法は、同定された変動の機能的な結果を予測するために、3つの確立されたアプローチ(組織学的分析、高カバレッジマルチレションシーケンシング、および免疫表現型解析)を統合します。このアプローチは図1に概略的に記述され、膵臓の固体偽毛細血管新生物(SPN)の5つの転移症例の研究に適用されている。ホルマリン固定パラフィン埋め込み(FFPE)組織標本の処理と解析について説明する一方で、同じ手順を新凍結組織の遺伝物質にも適用できます。

<table><tbody><tr><td>2100バイオアナライザー機器</td><td>アジレントテクノロジーズ</td><td>G2939BA</td><td>&nbsp;自動電気泳動ツール</td></tr><tr><td>Agencourt AMPure XPキット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>NC9959336</td><td>PCR産物を精製するためのビーズ技術。ビーズベースの精製試薬</td></tr><tr><td>Agilent 高感度 DNA キット</td><td>アジレントテクノロジーズ</td><td>5067-4627</td><td>ライブラリの定量化</td></tr><tr><td>アンチBAP1</td><td>サンタクルーズバイオテクノロジー</td><td>SC-28383</td><td>抗体</td></tr><tr><td>抗GLUT1</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>RB-9052</td><td>抗体</td></tr><tr><td>アンチKDM6A</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>#33510</td><td>抗体</td></tr><tr><td>抗p53</td><td>ノボカストラ</td><td>NCL-L-p53-DO7</td><td>抗体</td></tr><tr><td>アンチ&ベータ;カテニン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>C7207</td><td>抗体</td></tr><tr><td>ブロッキングソリューション</td><td>自家製</td><td>-</td><td>TBST中の5%ウシ血清アルブミン(BSA)</td></tr><tr><td>内因性ペルオキシダーゼ不活化液</td><td>自家製</td><td>-</td><td>トリス緩衝生理食塩水(TBS)中の3%H2O2 1x</td></tr><tr><td>ライカCVウルトラ</td><td>ライカ</td><td>70937891</td><td>Entellan mountin メディア</td></tr><tr><td>エピトープ検索ソリューション1</td><td>ライカバイオシステムズ</td><td>AR9961</td><td>クエン酸ベースのpH 6.0エピトープ検索溶液</td></tr><tr><td>エピトープ検索ソリューション2</td><td>ライカバイオシステムズ</td><td>AR9640</td><td>EDTAベースのpH 9.0エピトープ検索液</td></tr><tr><td>エッペンドルフ 0.2 ml PCRチューブ、透明</td><td>エッペンドルフ</td><td>951010006</td><td>チューブ</td></tr><tr><td>Eppendorf DNA LoBindチューブ、1.5 mL</td><td>エッペンドルフ</td><td>22431021</td><td>チューブ</td></tr><tr><td>エタノール</td><td>ダイアパス</td><td>A0123</td><td>IHC脱パラフィン試薬</td></tr><tr><td>ImmEdge ペン&nbsp;疎水性&nbsp;バリア&nbsp;ペン</td><td>ベクター研究所</td><td>H&shy;4000</td><td>疎水性ペン</td></tr><tr><td>ImmPACT DAB&nbsp;ペルオキシダーゼ</td><td>ベクター研究所</td><td>SK&シャイ;4105</td><td>HRP基質</td></tr><tr><td>ImmPRESSアンチ&シャイ;ウサギ&nbsp;Ig&nbsp;試薬&nbsp;ペルオキシダーゼ</td><td>ベクター研究所</td><td>MP&shy;7401&シャイ;50</td><td>二次抗体</td></tr><tr><td>ImmPRESSアンチ&シャイ;マウス&nbsp;Ig&nbsp;試薬&nbsp;ペルオキシダーゼ</td><td>ベクター研究所</td><td>MP&shy;7402&shy;50</td><td>二次抗体</td></tr><tr><td>統合ゲノミクスビューア(IGV)</td><td>ブロード研究所</td><td>-</td><td>https://software.broadinstitute.org/software/igv/home</td></tr><tr><td>Ion AmpliSeq Comprehensive Cancer Panel</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4477685</td><td>409癌関連遺伝子の多重標的選択https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CSD/Reference-Materials/ion-ampliseq-cancer-panel-gene-list.pdf</td></tr><tr><td>Ion AmpliSeqライブラリキット2.0</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4480441</td><td>Ion AmpliSeqパネルを用いたアンプリコンライブラリーの調製</td></tr><tr><td>Ion Chef インストゥルメント</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4484177</td><td>自動ライブラリ調製、テンプレート調製、チップローディング</td></tr><tr><td>Ion PIチップキットv3またはIon 540チップ</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A26771またはA27766</td><td>シーケンシング用のバーコードチップ</td></tr><tr><td>Ion PI Hi-Q Chef KitまたはIon 540 Kit-Chef</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A27198またはA30011</td><td>テンプレートの準備</td></tr><tr><td>Ion PI Hi-Q シーケンシング 200 キットまたは Ion S5 シーケンシングキット</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A26433またはA30011</td><td>シークエンシング</td></tr><tr><td>Ion ProtonまたはIon GeneStudio S5システム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4476610またはA38196</td><td>シーケンシングシステム</td></tr><tr><td>Ion Reporterソフトウェア - AmpliSeq Comprehensive Cancer Panel tumour-normal pair</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4487118</td><td>ワークフロー</td></tr><tr><td>Ion Reporter Software - アップローダープラグイン</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4487118</td><td>データ分析ツール</td></tr><tr><td>Ion Torrent Suiteソフトウェア - Coverege Analysisプラグイン</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4483643</td><td>生成されたシーケンスカバレッジのレベルを記述するプラグイン</td></tr><tr><td>Ion Torrent Suite ソフトウェア - Variant Callerプラグイン</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4483643</td><td>リファレンス全体でサンプル内の一塩基多型(SNP)、挿入および欠失を識別できるプラグイン</td></tr><tr><td>Ion Xpress バーコードアダプタ 1-96 キット</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4474517</td><td>独自のバーコードアダプター</td></tr><tr><td>NanoDrop 2000/2000c 分光光度計</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ND-2000型</td><td>DNA純度検出</td></tr><tr><td>NCBI 参照配列 (RefSeq) データベース</td><td>NCBIの</td><td>-</td><td>https://www.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/</td></tr><tr><td>Platinum PCR SuperMix ハイフィデリティ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12532-016または12532-024</td><td>PCR増幅用のSuperMix。高忠実度PCRミックス</td></tr><tr><td>QIAamp DNA 血液ミニキット</td><td>クイアゲン</td><td>51106 0R 51104</td><td>DNA採血キット</td></tr><tr><td>QIAamp DNA FFPEティッシュ</td><td>クイアゲン</td><td>56404</td><td>DNA FFPE組織抽出キット</td></tr><tr><td>Qubit 2.0蛍光光度計</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>質問32866</td><td>DNA定量</td></tr><tr><td>Qubit dsDNA BRアッセイキット</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>質問32850</td><td>Qubit 2.0蛍光光度計でのDNA定量用キット</td></tr><tr><td>TBSTの</td><td>自家製</td><td>-</td><td>トリス緩衝生理食塩水(TBS)および0.1%のトゥイーン20</td></tr><tr><td>ティッシュテック プリズマ プラス &ティッシュテックフィルム</td><td>サクラヨーロッパ</td><td>6172</td><td>自動組織スライド染色装置</td></tr><tr><td>バリアント効果予測器(VEP)ソフトウェア</td><td>EMBI-EBI</td><td>-</td><td>http://grch37.ensembl.org/Homo_sapiens /ツール/VEP</td></tr><tr><td>キシレン、異性体の混合物</td><td>カルロ・エルバ</td><td>492306</td><td>IHC脱パラフィン試薬</td></tr></tbody></table>

目標シーケンシングアプローチによる比較病変分析

Comparative Lesions Analysis Through a Targeted Sequencing Approach

腫瘍内不均一性(ITH)を評価することは、標的治療の失敗を予測し、それに応じて効果的な抗腫瘍戦略を設計することが最も重要です。サンプル処理とカバレッジの深さの違いにより懸念が頻繁に生じますが、固形腫瘍の次世代シーケンシングは、腫瘍タイプ全体で非常に可変的なITH程度を解明しています。クローン集団とサブクローナル集団の同定を通じて原発性病変と転移性病変の間の遺伝的関連性を捉えることは、前段階疾患の治療法の設計に不可欠である。ここでは、同じ患者の異なる検体間のクローン集団とサブクローナル集団の同定を可能にする比較病変解析の方法を報告する。ここで説明する実験的アプローチは、組織学的分析、高カバレッジ多病変シーケンシング、免疫表現型解析の3つの確立されたアプローチを統合しています。不適切なサンプル処理によるサブクローナル事象の検出への影響を最小限に抑えるために、慎重な病理学的検査と腫瘍細胞濃縮に組織を行った。腫瘍性病変および正常組織からの品質管理されたDNAは、その後、409の関連する癌遺伝子のコード領域を標的とする高カバレッジシーケンシングを行った。限られたゲノム空間だけを見ながら、当社のアプローチは、所定の患者とは異なる病変における体性変化(単一ヌクレオチド突然変異およびコピー数変動)間の不均一性の程度を評価することを可能にする。シーケンシングデータの比較分析により、クローンとサブクローナルの変化を区別することができました。ITHの大部分は、多くの場合、乗客の突然変異に起因します。そこで、免疫ヒストケミストリーを用いて、突然変異の機能的影響を予測しました。このプロトコルは特定の腫瘍タイプに適用されているが、ここで説明する方法論は他の固形腫瘍タイプに広く適用可能であると予想される。

スタディ ワークフローを図 1に示します。409個の癌関連遺伝子のコード配列を標的とする5つのSPN症例のマルチ病変(n=13)シーケンシングは、8遺伝子で合計27個の体系変異を同定した(CTNNB1、KDM6A、BAP1、TET1、SMAD4、TP53、 FLT1、およびFGFR3)。突然変異は、所定の患者のすべての病変の間で共有された場合の創設者/クローン、および特定の患者の一部の病変で検出された場合の進行/サブクローンとして定義された(図5A,B)。全体として、コホート全体で同定された点突然変異の大部分はクローン事象であり、これにはCTNNB1、KDM6A、TET1、FLT1の変異が含まれていた。 一貫して、β-カテニン(CTNNB1のタ...

この記事では、所定の患者から異なる検体間のクローンおよびサブクローンの変化を同定する方法について説明する。ここで説明する実験は特定の腫瘍タイプに焦点を当てていますが、このアプローチは他の固形腫瘍に広く適用可能です。

Assessing intra-tumoral heterogeneity (ITH) is of paramount importance to anticipate failure of targeted therapies and design accordingly effective ...

我々のプロトコルは、疾患進行に関与する分子変化の同定を通じて、一次病変と転移性病変の間の遺伝的関連を捕捉することを可能にする。我々の方法は、高感度および特異性を有する臨床検体における遺伝的関連を探求する機会を提供する。これは分子と組織病理学的分析の統合によるものです。がん研究分野における腫瘍内不均一性の評価は、効果的な抗腫瘍戦略の設計において最も重要であり、我々の方法は多くの固形腫瘍タイプに広く適用可能である。目的のライブラリを準備して定量化した後、各ライブラリをヌクレアーゼフリー水中の100ピコモラー濃度に希釈し、各希釈されたライブラリの10マイクロリットルを組み合わせて1本のチューブで1回実行します。次に、プールされたライブラリをピペット処理で混ぜます。シーケンス実行を開始するには、まずシーケンスシステムに接続されているコンピュータでTorrentブラウザを開きます。選択したアプリケーションの汎用テンプレートを使用して新しい実行を計画し、[キット]タブで[イオンプロトンシステム]または[イオンジーンスタジオS5システム]を選択します。チップタイプドロップダウンメニューから適切なチップを選択し、ライブラリキットのドロップダウンリストからIon AmpliSeq 2.0ライブラリキットを選択します。テンプレートキットの[Ion Chef]ボタンを選択し、テンプレートキットのドロップダウンリストから適切な Chef Kit を選択します。シーケンス キットドロップダウン メニューから適切なシーケンシング キットを選択し、バーコード セットのドロップダウン リストから [イオン エクスプレス] を選択します。プラグインタブで、カバレッジ分析プラグインを選択します。[プラン]タブで、参照ライブラリのドロップダウンリストからGRCH37HG19ゲノムを選択します。ターゲットリージョンドロップダウンリストから、シーケンスする適切なパネルを選択します。次に、シーケンス処理するバーコードの数を設定し、各ライブラリのバーコード名とサンプル名を設定します。プールされたライブラリ希釈の場合、ストックライブラリをヌクレアーゼフリー水で25ピコモラー濃度に希釈し、各希釈ライブラリのピペット50マイクロリットルを適切なライブラリサンプルチューブの底に希釈します。プールされた希釈されたライブラリを含むサンプルチューブをライブラリ調製システムにロードし、クローン増幅を開始します。次世代シーケンスの場合は、画面上の指示に従って計測器を初期化します。クローン増幅が終了したら、イオンシェフの計器ドアを開け、チップローディング遠心分離機の蓋を開け、ライブラリ調製システムから2つのチップを取り外します。チップを別々のチップストレージ容器に入れ、チップの1つを機器のチップコンパートメントにセットします。次に、チップコンパートメントの蓋を閉じて、シーケンスを開始します。突然変異解析の場合は、カバレッジ分析プラグインを開き、カバレッジ分析出力を使用して、カバレッジの深さと均一性を検証します。必要に応じて、生殖ラインまたは体系ワークフローを選択して呼び出しバリアントを実行するには、トレントバリアント発信者プラグインを使用します。次に、フィルタされたバリアントバリアントのコール形式ファイルをダウンロードし、NCBI RefSeqデータベースのバリアント効果予測ソフトウェアを使用してバリアントにアコージンを付けます。コピー数の変動を推定するには、イオンレポーターアップローダープラグインを使用して、シーケンシングデータをイオンレポーターソフトウェアにロードし、包括的ながんパネル腫瘍正常ペアワークフローを使用してデータを分析します。ソフトウェアによって割り当てられたスコアに基づいて、突然変異とコピー数のバリエーションを手動でフィルタリングし、統合ゲノミクスビューアで視覚的にバリエーションを検証します。次に、アーティフィファクト呼び出しを生成する異常な読み取り値のアライメントを視覚的に検査し、特定の遺伝子全体のすべてのアンプリコンの正規化されたカバレッジをベースラインの正規化されたカバレッジに対して検査して、コピー数の変動を検証します。それぞれの場合に対して、正常組織または血液または原発腫瘍または転移の順序から突然変異呼び出しをインデックス化する。生殖系列としてフラグを立て、生殖系列DNAのシーケンシングデータからも明らかなコールを破棄する。特定の患者のすべての病変の間で共有される突然変異をクローンまたは創設者としてフラグします。次に、特定の患者の一部ではなくすべての病変で検出される突然変異を、クローンまたは進行性または進行性としてフラグを立てます。本代表的な実験では、409個のがん関連遺伝子のコード配列を標的とした5つの固体偽パピラリー新生物症例の多病変シーケンシングは、8つの遺伝子で合計27の体細胞突然変異を同定した。突然変異は、特定の患者の病変の一部ではなく全ての病変で検出された場合、与えられた患者および進行性または亜クローナルのすべての病変の間で共有される場合、創始者またはクローンとして定義された。一貫して、β-カテニンおよびKMD6Aの免疫ヒストリカル染色は、対応する遺伝子の変異を有する症例の多様な病変の中で均質であった。変異標本におけるKMD6Aの適度な染色は、遺伝子改変がタンパク質の発現ではなく機能を変化させる可能性があることを示唆している。KMD6膵臓腫瘍における機能の喪失は、低酸素マーカーGLUT-1のアップ調節に関連している。それに応じて、KMD6A突然変異を有する症例においてGLUT-1が過剰に発現した。BAP1およびTP53の免疫染色法により、これらの遺伝子の変異がクローナルであることを確認した。この仮想核型は、改変遺伝子の位置、近接性、コピー数の状態を示す代表ケースの中で、シーケンシングデータを用いたコピー数変動解析により、解析対象となる全ての検体における変化が明らかになった。そして、ポイント突然変異とは対照的に、コピー数変動の大部分はクローン下であった。突然変異の検証とインデックス化と、腫瘍の正常なDNA比較を使用することは、結果を無効にする可能性のある実際の呼び出しの生成を避けるために重要です。この手順は、異なる固形腫瘍タイプの病変間の突然変異の同定のためにゲノム全体を尋問することを目的とした全ゲノムシーケンシング研究にも適用できる。がん研究分野では、これらの技術は、パーソナライズされた効果的な標的療法を設計することを目的とした重要な臨床的意味を持つ疾患の生物学を理解するための重要なツールです。

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Research

JoVE Journal

Behavior

行動

自閉症や統合失調症などの一般的な疾患を引き起こすのde...

そのような自閉症や統合失調症のような一般的な疾患でのde novo変異を同定するための戦略

我々は、超並列「次世代」配列決定による臨床腫瘍標本における主要癌関連変異の検出のためのバーコードDNAライブラリーおよびその後のハイブリダイゼーションに基づくエクソンキャプチャの製造を記載し​​ている。標的エクソン配列決定は、低周波の変異を検出するための高感度を得、高スループット、低コスト、かつ深い配列カバーの利点を提供しています。...

エクソンキャプチャと超並列配列決定することにより腫瘍標本における体細胞遺伝子変異を検出する

NGSシーケンシングのためのgDNA濃縮は、体質的突然変異の研究のための簡単で強力なツールです。この記事では、DNA損傷修復に関与する11個の遺伝子の完全な配列を簡単に解析する手順を紹介します。...

の全配列のNGS解析のためのトランスポゼースベースの技術によるgDNAのエンリッチメント BRCA1 BRCA2、およびDNA損傷修復に関与する遺伝子9

この原稿は、2つの次世代シーケンシングパネルの臨床プロトコルについて説明しています。1つのパネルは血液悪性腫瘍を調査し、もう1つのパネルは固形腫瘍で一般的に変異した遺伝子を対象としています。ヒト悪性腫瘍におけるドライバー変異の分子分類は、貴重な予後および予測情報を提供します。...

固体と液体の腫瘍におけるアクショナブル変異の検出のための次世代シーケンシング

腫瘍学検体の標的次世代シーケンシングのための統合システムが説明されています。このクロスプラットフォームシステムは、低品質および少量の腫瘍生検に最適化されており、低DNAインプットに対応し、十分に特徴付けられた多変量コントロールを含み、定量的な分析前品質管理手段によって通知される新しいバリアントコーラーを備えています。...

ウェットとドライベンチ・プロセスの統合は、低品質と低量腫瘍生検の標的次世代シーケンシングを最適化

ここでは、古典的なホジキンリンパ腫（HL）細胞から高品質、全exomeデータを生成するように設計された、フローサイトメトリーによる細胞ソーティングと低入力、次世代ライブラリー構築プロトコルを説明します。...

古典的なホジキンリンパ腫のリードステルベルグ細胞のフローソーティングとExome配列決定

腫瘍組織から高品質 DNA を取得は、次世代シーケンシングによる遺伝子の変異を分析するための重要な第一歩です。この記事では腫瘍細胞を豊かにし、押印細胞診標本のタッチから無傷の DNA を取得する簡単かつ迅速な方法を提案する.

タッチ捺印細胞診を用いた臨床病理標本から質の高い腫瘍 DNA を取得する簡易法

対象となる次世代シーケンサーは、病の研究と臨床検査の両方でますます人気になって時間とコスト効率の高いアプローチです。ここで説明されているプロトコルは、シーケンスに必要な複雑なワークフローと病に貢献する遺伝的変異を識別するために使用するバイオインフォマティクス...

対象に次世代シーケンサーとバイオインフォマティクス パイプライン体質性疾患の遺伝的決定因子を評価するには

ここでは、腫瘍のゲノム構成に基づいて選択された標的療法の有効性を試験するプロトコルを提示する。このプロトコルは、構造的DNA再構成の同定と検証、患者の腫瘍のマウスへの生着、および対応する薬物に対する応答のテストを記述する。...

構造DNA改変解析と患者由来異種移植片を用いたがんの標的治療の試験

この記事では、コンテキストのためのプロトコルを提示したマウスで恐怖学習と記憶を評価するために、ビデオ分析システムを使用して、恐怖条件付け試験に頭出し。...

マウスにおけるビデオ解析システムを用いた文脈と手掛り恐怖条件付け試験

学ぶ マルチ病変シーケンスと免疫組織化学を統合した腫瘍内異質性評価プロトコル。原発・転移巣のクローン・サブクローン変異を特定し、固形腫瘍の進化と個別化治療設計に貢献する。

目標シーケンシングアプローチによる比較病変分析

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