Name: マウス横紋筋肉腫から単離された原発性腫瘍細胞からの腫瘍球誘導と治療 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: 学ぶマウス横紋筋肉腫の原発性細胞分離と腫瘍球形成法。腫瘍微小環境を模倣し薬剤スクリーニングに応用可能な再現性の高い実験系を確立し、がん幹細胞の同定と治療開発の基盤を提供する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、エリソン医療財団助成金AG-NS-0843-11とNCIがんセンターサポート助成金P30CA030199内のNIHパイロット助成金によってA.S.に支援されました。

<ol><li>Dagogo-Jack, I., Shaw, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+resistance+to+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and resistance to cancer therapies.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (2), 81-94 (2018).</li>
<li>Wicha, M. S., Liu, S., Dontu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+old+idea--a+paradigm+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an old idea--a paradigm shift.</a> Cancer Research. 66 (4), 1883-1890 (2006).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+National+Academy+of+Science+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings National Academy of Science of the United States of America. 100 (7), 3983-3988 (2003).</li>
<li>Oishi, N., Yamashita, T., Kaneko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+liver+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of liver cancer stem cells.</a> Liver Cancer. 3 (2), 71-84 (2014).</li>
<li>Crous, A. M., Abrahamse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+stem+cells+and+low-intensity+laser+irradiation%3A+a+potential+future+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Lung cancer stem cells and low-intensity laser irradiation: a potential future therapy.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4 (5), 129(2013).</li>
<li>Tomao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+molecular+profiles+of+ovarian+cancer%3A+an+update+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Investigating molecular profiles of ovarian cancer: an update on cancer stem cells.</a> Journal of Cancer. 5 (5), 301-310 (2014).</li>
<li>Zhan, H. X., Xu, J. W., Wu, D., Zhang, T. P., Hu, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+stem+cells%3A+new+insight+into+a+stubborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer stem cells: new insight into a stubborn disease.</a> Cancer Letters. 357 (2), 429-437 (2015).</li>
<li>Sharpe, B., Beresford, M., Bowen, R., Mitchard, J., Chalmers, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Searching+for+prostate+cancer+stem+cells%3A+markers+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Searching for prostate cancer stem cells: markers and methods.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 9 (5), 721-730 (2013).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Lee, C. -H., Yu, C. -C., Wang, B. -Y., Chang, W. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorsphere+as+an+effective+in+vitro+platform+for+screening+anti-+cancer+stem+cell+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Tumorsphere as an effective in vitro platform for screening anti- cancer stem cell drugs.</a> Oncotarget. 7 (2), 1215-1226 (2015).</li>
<li>Sultan, I., Qaddoumi, I., Yaser, S., Rodriguez-Galindo, C., Ferrari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+adult+and+pediatric+rhabdomyosarcoma+in+the+surveillance%2C+epidemiology+and+end+results+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Comparing adult and pediatric rhabdomyosarcoma in the surveillance, epidemiology and end results program.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (20), 3391-3397 (1973).</li>
<li>Blum, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+overlapping+sarcoma+subtypes+initiated+from+muscle+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Distinct and overlapping sarcoma subtypes initiated from muscle stem and progenitor cells.</a> Cell Reports. 5 (4), 933-940 (2013).</li>
<li>Rubin, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+unanticipated+relationship+between+undifferentiated+pleomorphic+sarcoma+and+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an unanticipated relationship between undifferentiated pleomorphic sarcoma and embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 19 (2), 177-191 (2011).</li>
<li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+rhabdomyosarcomas+in+conditional+Pax3%3AFkhr+mice%3A+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22of+Ink4a%2FARF+and+Trp53+loss+of+function.+Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Alveolar rhabdomyosarcomas in conditional Pax3:Fkhr mice: cooperativity.</a> of Ink4a/ARF and Trp53 loss of function. Genes & Development. 18 (21), 2614-2626 (2004).</li>
<li>Tremblay, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+transducer+YAP1+transforms+activated+satellite+cells+and+is+a+potent+effector+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Hippo transducer YAP1 transforms activated satellite cells and is a potent effector of embryonal rhabdomyosarcoma formation.</a> Cancer Cell. 26 (2), 273-287 (2014).</li>
<li>Hatley, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+rhabdomyosarcoma+originating+from+the+adipocyte+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A mouse model of rhabdomyosarcoma originating from the adipocyte lineage.</a> Cancer Cell. 22 (4), 536-546 (2012).</li>
<li>Drummond, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Drives+Fusion-Negative+Rhabdomyosarcoma+Initiated+From+Non-myogenic+Endothelial+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Drives Fusion-Negative Rhabdomyosarcoma Initiated From Non-myogenic Endothelial Progenitors.</a> Cancer Cell. 33 (1), 108-124 (2018).</li>
<li>Almazan-Moga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Inhibition+Hampers+Sphere+and+Holoclone+Formation+in+Rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Inhibition Hampers Sphere and Holoclone Formation in Rhabdomyosarcoma.</a> Stem Cells International. , (2017).</li>
<li>Walter, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133+positive+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population+is+enriched+in+rhabdospheres%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD133 positive embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population is enriched in rhabdospheres.</a> PLoS One. 6 (5), (2011).</li>
<li>Ciccarelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+MEK%2FERK+pathway+in+sustaining+tumorigenicity+and+in+vitro+radioresistance+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Key role of MEK/ERK pathway in sustaining tumorigenicity and in vitro radioresistance of embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population.</a> Molecular Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Deel, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Transcriptional+Coactivator+TAZ+Is+a+Potent+Mediator+of+Alveolar+Rhabdomyosarcoma+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Transcriptional Coactivator TAZ Is a Potent Mediator of Alveolar Rhabdomyosarcoma Tumorigenesis.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2616-2630 (2018).</li>
<li>Boscolo Sesillo, F., Fox, D., Sacco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Stem+Cells+Give+Rise+to+Rhabdomyosarcomas+in+a+Severe+Mouse+Model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Muscle Stem Cells Give Rise to Rhabdomyosarcomas in a Severe Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Cell Reports. 26 (3), 689-701 (2019).</li>
<li>Chamberlain, J. S., Metzger, J., Reyes, M., Townsend, D., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+mdx+mice+display+a+reduced+life+span+and+are+susceptible+to+spontaneous+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma.</a> The FASEB Journal. 21 (9), 2195-2204 (2007).</li>
<li>Kessel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+3D+Tumor+Spheroid+Screening+Method+for+Cancer+Drug+Discovery+Using+Celigo+Image+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Technology%22%5BJournal%5D)">High-Throughput 3D Tumor Spheroid Screening Method for Cancer Drug Discovery Using Celigo Image Cytometry.</a> SLAS Technology. 22 (4), 454-465 (2017).</li>
<li>Johnson, S., Chen, H., Lo, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Tumorsphere+Formation+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">In vitro Tumorsphere Formation Assays.</a> Bio-Protocol. 3 (3), (2013).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+tumorsphere+culture+system+for+the+efficient+and+low-cost+enrichment+of+cancer+stem+cells+with+natural+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional tumorsphere culture system for the efficient and low-cost enrichment of cancer stem cells with natural polymers.</a> Experimental and Therapeutic. 15 (1), 85-92 (2018).</li>
<li>Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+molecular+pathways+of+FLT3+in+the+pathogenesis+of+acute+myeloid+leukemia%3A+biology+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Jornal+of+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute myeloid leukemia: biology and therapeutic implications.</a> Jornal of Hematology and Oncology. 4, (2011).</li>
<li>Laouar, Y., Welte, T., Fu, X. Y., Flavell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+is+required+for+Flt3L-dependent+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation.</a> Immunity. 19 (6), 903-912 (2003).</li>
<li>Ogawa, M., Bergsagel, D. E., McCulloch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+melphalan+on+mouse+myeloma+%28adj.+PC-5%29+and+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential effects of melphalan on mouse myeloma (adj. PC-5) and hemopoietic stem cells.</a> Cancer Research. 31 (12), 2116-2119 (1971).</li>
<li>Hamburger, A. W., Salmon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bioassay+of+human+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Primary bioassay of human tumor stem cells.</a> Science. 197 (4302), 461-463 (1977).</li>
<li>Hamburger, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+tumor+clonogenic+assay+as+a+model+system+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">The human tumor clonogenic assay as a model system in cell biology.</a> The International Journal of Cell Cloning. 5 (2), 89-107 (1987).</li>
<li>Jimenez-Hernandez, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRP1-positive+lung+cancer+cells+possess+tumor-initiating+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">NRP1-positive lung cancer cells possess tumor-initiating properties.</a> Oncology Reports. 39 (1), 349-357 (2018).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+%283D%29+models+in+cancer+research%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li>
<li>Salerno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+cell+subsets+with+cancer+stem+cell+properties+in+human+musculoskeletal+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming cell subsets with cancer stem cell properties in human musculoskeletal sarcomas.</a> International Journal of Oncology. 43 (1), 95-102 (2013).</li>
</ol>

著者は何も開示していない。

腫瘍異種細胞集団からのTPCの単離および特性解析には、腫瘍クロノゲンアッセイ、FACS単離、腫瘍球形成アッセイなど、複数の方法が採用されています。腫瘍クロノジェニックアッセイは、1971年に最初に記載され、幹細胞研究に用いられ、その後癌生物学29,30にのみ適用された。この方法は、がん幹細胞本体性に基づいて、軟式ゲル培養31に制約なく膨張する。その開発以来、この方法は、腫瘍細胞の不均一性研究、細胞増殖に対するホルモン治療の効果、および腫瘍耐性研究31を含む複数の目的のために癌研究に広く使用されてきた。現在までに、このアッセイは、複数のタイプの癌32に対する腫瘍開始細胞の同定のためにまだ用いられている。
FACSの単離は、目的の細胞の表面に存在する分子マーカーの事前知識に基づいています。それは液体および固体腫瘍からのTPCの単...

癌は不均一な病気です。さらに、同じタイプの腫瘍は、異なる患者に異なる遺伝子変異を提示することができ、患者内で腫瘍は細胞1の複数の集団によって構成される。異種性は、がんの発症と伝播を担う細胞の同定に課題を提示しますが、効率的な治療法の開発にはその特徴付けが不可欠です。腫瘍伝播細胞(TPC)の概念は、腫瘍の発達に寄与する稀な細胞集団であり、以前に広範囲に見直された2.TPCは複数のタイプの癌で特徴付けられてきたにもかかわらず、信頼性の高い単離のためのマーカーの同定は、いくつかの腫瘍タイプ3、4、5、6のための挑戦のままである,7,8,9.したがって、分子マーカーに依存せず、むしろTPC機能特性(高い自己再生および低アタッチメント条件下で成長する能力)に依存しない方法は、腫瘍球形成アッセイとして知られており、ほとんどの腫瘍からのTPCの同定。重要なことに、このアッセイはTPCの拡大にも用いられ、したがって癌薬物スクリーニングおよび癌耐性1、10に関する研究に直接適用することができる。
横紋筋肉腫(RMS)は、幼児11で最も一般的な軟部組織肉腫のまれな形態である。Althoug RMSは、筋原性マーカーの発現の評価を通じて組織学的に同定することができ、起源のRMS細胞は、腫瘍発達刺激の複数の腫瘍サブタイプおよび高い不均一性のために単元的に特徴付けられていない。実際、最近の研究では、RMSが筋原性または非筋原起源のどちらであるかに関する重要な科学的議論が生じ、RMSは文脈12、13に応じて異なる細胞タイプから派生する可能性があることを示唆している。14歳,15歳,16歳,17.RMS細胞株に関する多数の研究は、腫瘍の発達に関与する経路の同定および高度自己再生集団に関連するマーカーの特徴付けのための腫瘍球形成アッセイを用いて行われている。18歳,19歳,20歳,21.
しかしながら、発産元のRMS細胞を同定する腫瘍球形成アッセイの可能性にもかかわらず、一次RMS細胞に用いることができる信頼性の高い方法はまだ説明されていない。この文脈において、我々のグループからの最近の研究は、デュシェンヌ筋ジストロフィー(DMD)マウスモデル22における起源のRMS細胞の同定のための最適化された腫瘍球形成アッセイを採用した。筋肉組織から単離された複数の腫瘍形成前細胞型は、低アタッチメント条件で増殖する能力について試験され、ジストロフィー性コンテキストにおけるRMSの起源細胞としての筋肉幹細胞の同定を可能にする。ここで説明する腫瘍球形成アッセイ(図1)の再現性と信頼性の高いプロトコルは、マウスRMS開発を担う極めて稀な細胞集団の同定に成功している。

<table><tbody><tr><td>Accutase cell dissociation reagent</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>接着細胞の剥離と腫瘍球の解離</td></tr><tr><td>Celigo</td><td>Nexcelom</td><td>Celigo</td><td>マイクロウェルプレートベースの接着細胞および浮遊細胞用イメージサイトメーター</td></tr><tr><td>コラゲナーゼ、Type II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td>組織消化酵素</td></tr><tr><td>Dispase II、プロテアーゼ</td><td>Life Technologies</td><td>17105041</td><td>組織消化酵素</td></tr><tr><td>DMEM 高グルコース培地</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>腫瘍細胞培地</td></tr><tr><td>DMEM/F12 培地</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td>黄斑培地の成分</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>サーモフィッシャー</td><td>S312500</td><td>FACS緩衝液の成分</td></tr><tr><td>EGF組換えマウスタンパク質</td><td>Gibco</td><td>PMG8041</td><td>黄斑培地</td></tr><tr><td>の成分FACSAria II フローサイトメトリー</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>650033</td><td>蛍光活性化セルソーター</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>オメガサイエンティフィック</td><td>FB-11</td><td>腫瘍細胞培地の成分</td></tr><tr><td>フルリソ(Isofluornae) 麻酔薬</td><td>MWI Vet サプライ</td><td>502017</td><td>動物用麻酔試薬</td></tr><tr><td>FxCycle バイオレット ステイン</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>F10347</td><td>生細胞と死細胞の識別</td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>ライフテクノロジー</td><td>16210072</td><td>FACSバッファーの成分</td></tr><tr><td>ハムのF10培地</td><td>ライフテクノロジー</td><td>ズ 11550043</td><td>FACSバッファーの成分</td></tr><tr><td>馬血清</td><td>ライフテクノロジー</td><td>ズ 16050114</td><td>細胞単離培地の成分</td></tr><tr><td>リポフェクタミン3000トランスフェクション試薬</td><td>サーモフィッシャー</td><td>L3000015</td><td>トランスフェクション試薬</td></tr><tr><td>マトリゲル膜マトリックス</td><td>コーニング</td><td>CB40234</td><td>移植細胞へのサポートを提供</td></tr><tr><td>N-2 Supplemtns (100X)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>タモスフェア培地の成分</td></tr><tr><td>ネオマイシン-ポリミキシン B 硫酸塩-バシトラシン 亜鉛眼科用軟膏</td><td>MWI 獣医 供給</td><td>701008</td><td>眼軟膏</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>FACS緩衝液の成分で、細胞の洗浄に使用</td></tr><tr><td>pEGFP-C1</td><td>Addgene</td><td>6084-1</td><td>GFPプラスミド</td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトミオシン</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>15140163</td><td>腫瘍圏および腫瘍細胞培地の成分</td></tr><tr><td>組換えヒト & ベータ;FGF-basic</td><td>Peprotech</td><td>10018B</td><td>tumosphere mediaのコンポーネント</td></tr><tr><td>組換えマウスFlt-3リガンドタンパク質</td><td>R&D Systems</td><td>427-FL-005</td><td>組換えタンパク質</td></tr><tr><td>トリパンブルー</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>生細胞と死細胞を区別</td></tr></tbody></table>

マウス横紋筋肉腫から単離された原発性腫瘍細胞からの腫瘍球誘導と治療

Tumorsphere Derivation and Treatment from Primary Tumor Cells Isolated from Mouse Rhabdomyosarcomas

横紋筋肉腫(RMS)は、小児で最も一般的な軟部組織肉腫である。RMSに関連する一般的な変異の同定を可能にし、異なるRMSサブタイプの判別を可能にする多大な努力がなされたが、予後をさらに改善するための新しい治療法の開発には大きな課題が依然として存在する。筋原性マーカーの発現によって同定されるが、RMSが筋原性または非筋原起源を有するかどうかについては、起源の細胞がまだ十分に理解されていないため、依然として重大な論争がある。本研究では、マウスRMSに対する腫瘍球アッセイに対して信頼性の高い方法が提供される。アッセイは腫瘍細胞の機能特性に基づいており、腫瘍機能を有する腫瘍中の稀な集団の同定を可能にする。また、組換えタンパク質の検査、トランスフェクションプロトコルと腫瘍球アッセイの統合、腫瘍の発達および増殖に関与する候補遺伝子の評価の手順についても説明します。さらに説明する、生体内で腫瘍属機能を検証するレシピエントマウスへの腫瘍球の同種移植移植の手順である。全体的に、記載された方法は、異なる文脈で生じるRMSに適用することができる希少なRMS腫瘍属集団の信頼性の高い同定および試験を可能にする。最後に、このプロトコルは、薬物スクリーニングおよび治療の将来の開発のためのプラットフォームとして利用することができる。

腫瘍球検出 細胞単離は、腫瘍組織に存在する細胞集団の最大不均一性を得るために最適化された。まず、単離された組織は形態的に異なる領域を提示するので、均一な希少細胞集団を単離する可能性を高めるために、腫瘍の複数の領域からサンプリングを行った(図1A、左の第1パネル)。第二に、採取したサンプルの機械的解離は、サンプル全体に存在する可能性のある異なる抵抗にもかかわらず、ミンチ組織サイズの均質性を維持しながら行った(図1A、左から3番目および第4パネル)).出発物質(腫瘍の攻撃性、マウスの年齢および遺伝子型、腫瘍位置)に応じて、単離プロセスの機械的ストレスからの細胞の回復は、3〜7日(図1A、右側の最後のパネル)の範囲で変化してもよい。細胞の生存と増殖を高めるために、培養は単離の翌日に変更し、その後2日ごとに変更する必要があります。これにより、細胞の生存率に影響を与...

このプロトコルは、マウス横紋筋肉腫原発細胞の単離、腫瘍球形成および治療、および腫瘍球培養から始まる同種移植片移植のための再現可能な方法を説明する。

Rhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children. Although significant efforts have enabled the identification of common ...

横紋筋肉腫は、組織形態と筋形成マーカーの発現によって組織学的に特徴づけられる軟部肉腫の稀な形態である。しかし、これらの腫瘍の異なるサブタイプの存在とその形成に寄与する刺激の不均一性を考えると、起源の細胞の同定は非常に困難であった。ここでは、マウスから採取したばかりの腫瘍組織から始まる横紋肉腫の起源の細胞を同定するための再現性と信頼性の高い方法を説明し、このアッセイは腫瘍球形成アッセイである。腫瘍球形成アッセイの主な利点は、腫瘍発生細胞に存在することが知られている細胞特性に依存し、特定の細胞集団の拡張および濃縮にも使用できることである。さらに、そのスフェロイド構造は腫瘍環境を模倣し、したがって、それらは薬物スクリーニング研究として使用することができる。この方法は、分子マーカーの事前知識を必要としないが、培養条件の最適化を必要とするため、他のタイプの腫瘍に適用される可能性がある。腫瘍球は、特にあなたの腫瘍内のまれな細胞集団を同定しようとする場合、形成するのに時間がかかるかもしれません。したがって、サブカルチャープレートは実験の結果に悪影響を及ぼす可能性があるため、毎日サブカルチャープレートを見ることをお勧めしません。摂氏37度のインキュベーターに5ミリリットルの隔離媒体を備えた10センチメートルのプレートを温めることから始めます。腫瘍組織の500〜1,000ミリグラムの重量を量り、プレートに入れる。腫瘍組織のプレートを無菌培養フードに持ち込み、カミソリの刃でミンチします。最適な消化のために、ひき肉のサイズが均一であることを確認してください。細かく組織と細胞分離媒体を15ミリリットルの遠心分離チューブに移します。別の4ミリリットルの媒体でプレートを洗い、それをチューブに加えます。1ミリリットルのコラゲターゼ溶液をチューブに加え、摂氏37度の揺れる水浴に1時間半インキュベートします。インキュベーション後、室温で5分間、300回gで組織を回転させます。ペレットを破壊することなく上清を吸引し、その後、ペレットを2番目の消化液の10ミリリットルで再懸濁し、さらに30分間振る水浴中でインキュベートする。2回目の消化後、細胞懸濁液を上下にピペットし、50ミリリットル遠心管の70マイクロメートルナイロンフィルターを通過します。その後、10ミリリットルの細胞分離培地でフィルターを洗浄し、300倍gの組織を5分間回転させます。上清を吸引し、20ミリリットルの腫瘍細胞培地でペレットを再懸濁する。懸濁液を15センチメートルの培養プレートに移し、細胞を一晩摂氏37度のインキュベーターに入れます。翌日、細胞の生存に悪影響を及ぼす破片や死んだ細胞を除去するためにメディアを変更します。この時点で、細胞の合流を評価し、細胞が毎日90%に達するまで培養器で増殖させ、2日ごとに培地を変更します。腫瘍

tumorsphere-derivation-treatment-from-primary-tumor-cells-isolated

Research

JoVE Journal

Genetics

遺伝学

このプロトコルは、分離、濃縮、および異所性ソニックヘッジホッグ経路の活性をもつ変異マウス由来の髄芽腫の腫瘍幹細胞の維持を説明します。...

髄芽腫の幹細胞の単離、濃縮、およびメンテナンス

メソッドは、マウスにヒトの網膜芽細胞腫の腫瘍を伝播するために記述されています。腫瘍細胞は、直接免疫欠損マウスの眼に注入されています。二次腫瘍が正常に直接ヒト腫瘍および培養tumorspheresから採取した細胞の両方を使用して確立されている。...

免疫不全マウスにおけるヒト網膜芽細胞腫の腫瘍の確立と伝播

このビデオプロトコルは、ニューロスフェアアッセイ培養法を用いて外科的に切除したヒト神経膠芽腫mutliforme（GBM）の腫瘍組織からの細胞のような分離と茎の拡大を示しています。...

ニューロスフェアのアッセイを用いたヒト多形性膠芽腫の腫瘍細胞の単離と拡大

骨肉腫における癌幹細胞（CSCを）の存在は、最近、その病因に関連しています。本稿では、非接着性条件下で増殖するのCSCの能力を用いて、従来の骨肉腫（OS）の人間の生検から得られた初代細胞培養物からのCSCの単離を提示します。...

がんの確立は、ヒト従来の骨肉腫からの幹細胞培養物

次のプロトコルは、患者由来の軟部肉腫 (STS) の主要な文化の確立に焦点を当てください。このモデルでは、分子の背景、これらのまれな悪性腫瘍の薬理学的プロファイルを理解する私たちを助けることができる、STS...

患者由来の軟部肉腫の主な文化の確立

蛍光活性化細胞選別によるヒト肉腫患者由来異種移植片からの腫瘍開始細胞の単離に関する詳細なプロトコルを説明し、ヒト白血病抗原-1(HLA-1)を陰性マーカーとして用い、さらなる検証を行う。これらのHLA-1陰性腫瘍始発細胞の特徴付け。...

肉腫患者由来異種移植片からの腫瘍始発細胞の単離と特徴付け

この方法論の目的は、癌細胞株および原発ヒト腫瘍試料中の癌幹細胞(CSC)を、細胞細胞の機能性アッセイと表現型特性評価を用いて堅牢に同定することである。しみ。...

婦人科腫瘍および乳がん腫瘍から癌幹細胞球体を取得する

このプロトコルでは、検査用軟部肉腫の不完全な外科的切除(neo)アジュバント療法のマウスモデルについて述べた。...

検査のための不完全切除軟部肉腫のマウスモデル(ネオ)アジュバント療法

骨転移モデルは、一様に転移を発症したり、発生率が100%であったりすることはありません。骨内腫瘍細胞を直接注射すると、肺の塞栓術を引き起こす可能性があります。固形腫瘍移植による骨への移植を用いて原発性骨腫瘍と骨転移をモデル化し,再現性のある生着と成長に導く技術を紹介します。...

固形腫瘍移植による骨原発性骨腫瘍と骨転移のモデリング

ここに提示されるのは、横紋筋肉腫マウスモデルにおいて温度感受性リポソームからの薬物放出を引き起こすために、磁気共鳴ガイド下高強度集束超音波によって生成される制御された温熱療法を使用するプロトコルです。...

磁気共鳴ガイド下高強度集束超音波生成温熱療法:マウス横紋筋肉腫モデルにおける実行可能な治療法

本プロトコルは、初代がん細胞から3D腫瘍培養モデルを生成し、細胞生存率アッセイおよび顕微鏡検査を使用して薬物に対するそれらの感受性を評価することを記載しています。...

患者由来の腫瘍サンプルから3次元スフェロイドを樹立し、薬物に対する感受性を評価

学ぶマウス横紋筋肉腫の原発性細胞分離と腫瘍球形成法。腫瘍微小環境を模倣し薬剤スクリーニングに応用可能な再現性の高い実験系を確立し、がん幹細胞の同定と治療開発の基盤を提供する。

マウス横紋筋肉腫から単離された原発性腫瘍細胞からの腫瘍球誘導と治療

さらに動画を探す