マウスの心筋梗塞を研究する凍結傷害モデル

この方法は、例えば幹細胞移植後の心筋梗塞の発生や、心臓回復の調査に使用する優れたプラットフォームを研究する信頼性があります。この手順の主な利点は、迅速かつ容易に、再現可能な方法で均一な梗塞サイズを生成するために使用することができるということです。薬理学、または組織に基づく戦略を設計した組織などの新しい実験的介入は、このモデルでテストすることができる。

そして、大きな動物モデルでさらにオプションを確認できることをテストに成功しました。麻酔付き27グラム、14週齢マウスにおける疼痛反射に対する反応の欠如を確認した後、ヘアトリマーを使用して動物の胸と首の毛皮を取り除き、マウスを加熱パッドの上に、マウスを置く。後ろと前肢を広げワシの位置にテープで貼り付け、シーケンシャルなポビドネヨウ素と80%エタノールスクラブを使用して、露出した皮膚を消毒します。

胸骨の下3分の1から顎に中線の皮膚切開を行い、湾曲した鉗子を使用して首の周りの筋肉を慎重に分離して気管を露出させます。マイクロハサミを使用して、第2軟骨リングと第3軟骨リング間の気管切開を行います。そして、0.5ミリリットルの潮量で1分あたり110の換気周波数に換気装置を設定します。

次に、換気装置に接続されたプラスチック、20ゲージカニューレを気管に挿入する。次に、焼灼を使用して、3番目と7番目の肋骨の間の胸骨起源から右胸筋を取り外します。そして、側面斜めのスプリングハサミを使用して、4番目から6本の肋骨を胸骨にできるだけ近づけます。

基礎となる結合組織を解剖して胸腔に明確な視界を得て、必要に応じて出血を止めるために乳腺動脈を焼灼する。リブを広げ、胸腔を開いたままにするためにミニゴールドの汚れレトラクターを挿入します。そして、心臓を露出させるために心膜を開くために鈍い鉗子を使用してください。

鈍い棒を使用して胸腔から心臓を持ち上げ、胸部の開口部を減らし、心臓が腹腔に戻らないようにレトラクターの緊張を下げます。直径3ミリのクライオプローブを10秒間予冷し、左心室壁の中にクライオプローブを10秒間塗布して左心室、凍結傷害梗塞を発生させます。室温生理満水性灌漑で左心室壁からクライオプローブを取り外し、レトラクタで胸の開口部を再び拡大します。

ロッドを使用して心臓を胸腔にそっと戻し、レトラクタを取り外します。6-0縫合糸を使用して、単一の結び目でステノトミーを接続します。そして、胸腔を閉じるために走っている6-0縫合糸を使用してください。

10ミリリットルの注射器を使用して、結び目を結ぶ前に胸から残りの空気を避難させ、尾骨端で皮膚を適応させ、ランニング5-0縫合糸を使用して組織を気管開口部のポイントまで閉じます。イオフルランを減らし、動物が自発的に呼吸を得た後、気管カテーテルを取り除き、気管切開を1つの8-0で閉じる縫合。腹側頸部の筋肉を気管の上の解剖学的位置に戻し、皮膚縫合を完了します。

その後、8週間の毎日の動物モニタリングで3日間の痛み鎮痛のための飲料水にメタミゾールを追加します。凍結傷心心エコー検査では、7日目の手術後から56日の実験エンドポイントまで機能的障害が観察され、放出分率および分面積変化が有意に減少した。圧力量ループ解析によって評価されるように、凍結分は、脳卒中の体積、打撃の仕事、心拍出量、および前負荷調整最大電力の減少として反映される障害された左心室機能を導く。

蛍光電圧に敏感な染色心臓の元生体光学マッピングは、傷害の境界における電気伝導の閉塞を示し、局所的な電気結合を示す。マッソンのトリクロムによる組織学的染色は、傷害部位における経壁線維組織形成を明らかにする。梗塞サイズは、梗塞の瘢痕領域または中線瘢痕長を測定することによって算出することができる。

また、心筋細胞マーカーおよびコラーゲンIに対する免疫蛍光染色は、線維性リモデリングの存在および損傷部位における心筋細胞の喪失を確認する。異なる持続時間が不一致の梗塞サイズにつながる可能性があるため、各動物の凍結問題の同じ接触持続時間を維持することが重要です。この技術を習得したら、正しく実行すれば20分で実行できます。

このビデオを見た後、あなたは凍結傷害モデルを実行する方法をよく理解している必要があります。あなたの実験で幸運を祈ります。