円形RT-PCRベースの戦略を用いたトウモロコシミトコンドリオンにおける一次写物と処理された転写物の判別とマッピング
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2019年7月29日
2019年7月29日
•円形RT-PCR、定量RT-PCR、RNA 5'ポリホスファターゼ処理、ノーザンブロットを組み合わせることで、循環RT-PCRベースの戦略を提示する。このプロトコルには、不安定な5'三リン酸の影響を最小限に抑えるための正規化ステップが含まれており、トウモロコシミトコンドリオンに安定して蓄積された一次および処理された転写物を識別およびマッピングするのに適しています。
Chapters in this video
0:04
Title
0:39
Preparation of Crude Mitochondrion from Maize Developing Kernels
1:45
RNA 5’ Polyphosphatase Treatment and Circularization
2:33
Reverse Transcription and Normalization
3:30
PCR Amplification and Determination of Transcript Termini
4:34
Verification of the cRT-PCR Mapping Results by RNA Gel Blot Hybridization
5:00
Discrimination of Primary and Processed 5’ Ends
5:26
Determination of Maize mRNA Termini Using the Circular RT-PCR-based Strategy
7:05
Conclusion
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