厳密嫌気性/無酸素条件下での微生物の培養のための培地製剤

好気性生物とは対照的に、厳密に嫌気性微生物は酸素の不在を必要とする。酸素は空気中で遍在性であるため、培養中の無酸素条件の保持は嫌気性培養の前提条件です。この適用技術は、液体培養中の混合微生物集団を培養する無酸素条件を提供する簡便かつ安価な方法を表す。

この技術は、純粋な文化の栽培にも応用できる。しかし、酸素感受性の高い微生物の場合、この手順は適用できない場合があります。適切なフラスコで中程度の成分を計量し、蒸留水の半分のボリュームでそれらを溶解することによって開始します。

次に、REDOXインジケータのミリリットルを追加し、続いて微量元素溶液中にビタミンを加えます。生物の要件に従ってpHを調整し、蒸留水で最終体積を1リットルにします。REDOXインジケータの色はpHに依存し、調整に時間が必要な場合があります。

120ミリリットルの血清フラスコに50ミリリットルの培地を充填し、100°Cの水浴中に20〜30分間インキュベートし、液相中の酸素の溶解度を低下させます。ヘッドスペースを窒素で洗い流します。窒素を使用する場合は、適切な部屋の換気の世話をします。

ブチルゴムセプタでフラスコを閉じ、アルミニウムキャップを固定します。次に、各フラスコに0.1ミリリットルの還元剤を加え、REDOX電位をさらに低減させる。そして、121°Cで20分間フラスコをオートクレーブします。

閉鎖された容器の殺菌のための証明されるオートクレーブはこの議定書を適用するとき使用されなければならない。それ以外の場合、温度上昇に起因する過圧は、血清フラスコが爆発する可能性があります。嫌気性消化器から接種を調製するには、フラスコに蒸留水400ミリリットルを加えて沸騰させます。

頭のスペースを窒素で永久に洗い流しながら、約30°Cまで冷却します。嫌気性消化器に由来する約100グラムのスラッジを加え、希釈の測定のために汚泥の正確な質量を記録することを確認する。フラスコのヘッドスペースを窒素と交換し、ブチルゴム中隔で閉じます。

フラスコを120RPMで30分間振ります。より大きな汚泥粒子を堆積させ、注射器とカヌラを使用して5ミリリットルの接種を除去し、以前に調製した血清フラスコに注入します。接種した血清フラスコを実験に適した温度でインキュベートし、温度上昇に起因する過圧を、インキュベーション開始後約15~30分後に確実に排出する。

インキュベーション時にバイオガスの生産と組成を評価するには、現在の大気圧を記録し、フラスコ内の圧力を評価するためにマノメーターを準備します。フラスコを振り、シリンジとカニューラを使用して1ミリリットルのヘッドスペースガスを取り除きます。ガスクロマトグラフィーを用いて水素、酸素、メタン、二酸化炭素濃度を測定します。

原稿の指示に従って、フラスコから1ミリリットルの液体を使用して、すべての背の高い脂肪酸の濃度を監視し、適切な温度に戻した後、フラスコを圧力をかけて排水します。このプロトコルは、嫌気性消化を行うミニチュアバイオリアクターを作成するために使用されました。トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、肉エキス、カゼインを3種類の濃度で添加し、メタンの生産を28日間にわたってモニタリングした。

メサノゲンは、電子キャリアである共酵素F420を放射して可視化し、最大420ナノメートルの吸収を有する青色緑色蛍光を呈する。ガス分析と並行して、サンプルをインキュベーション期間中に揮発性脂肪酸およびフェニル酸濃度について分析した。特定の微生物および/または微生物群集の組成の存在を標的とする分子生物学的方法は、実験のある時点で、記載された手順を用いて適用することができる。