Name: ラットの急性脳卒中後の脳回復を評価する前臨床モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: 学ぶラットの脳虚血回復モデル。MCAO/R法を用いて虚血後の脳梗塞と感覚運動機能を1～90日間評価し、神経学的損傷の回復メカニズムと治療介入の可能性を探索する前臨床研究手法です。

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この研究は、中国国立自然科学財団(81603315,81603316)、中国江西省の主要な研究開発計画(20171ACH80001)、福建省の大学における産業・学術協力プロジェクトによって支援されました。中国 (2018Y41010011).

動物の被験者の手順と使用は、実験動物のケアと使用のための国立衛生研究所によって承認されています。このプロトコルは、中大脳動脈閉塞/再灌流(MCAO/R)および感覚運動機能のテストのために特に調整される。
1. 実験計画とグループ化
<ol><li>ラットMCAO/Rモデルを使用して、ロンガのスコアとTTC染色を使用して、より重度の脳損傷とより大きなモデル成功率を有するラット脳虚血モデル法をスクリーニングします。<ol>
<li>7-9週齢の体重260-330gの雄スプレイグ・ドーリーラットに対して実験を行う。実際のラット重量は275gで275±15g、300gで300±10g、320gで320±10gです。</li>
		<li>次の 7 つのグループ (重量、ねじボルトタイプ、梗塞時間): 15 ラットのグループ 1 (275 g, 2636, 2 h) を使用します。グループ 2 15 ラット (275 g, 2636, 3 h);グループ 3 15 ラット (275 g, 2838, 2 h);グループ 4 15 ラット (275 g, 2838, 3 h);グループ 5 13 ラット (300 g, 3040, 3 h);グループ 6 10 ラット (320 g, 3040, 3 h);グループ7は13匹のラット(300g、3043、3時間)を有する。</li>
	</ol>
</li>
	<li>TTC染色による脳回復状態を研究し、適切な感覚運動機能試験を用いて、両側非対称性試験、グリッドウォーキング試験、ロタロッド試験およびMCAO/Rの1、35、60、90日後のリフティングロープ試験による長期的な機能障害を示す。<ol>
<li>体重が8~9週の男性スプレイグ・ドーリーラットを300±10g使用してください。</li>
		<li>次の 5 つのグループを使用します: 20 匹のラットを持つコントロール (通常) グループ。16匹のラットを持つ1日のグループ;16匹のラットを持つ35日間のグループ;17匹のラットを持つ60日間のグループ;19匹のラットを持つ90日間のグループ。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ステップ1.1のロンガのスコアまたはステップ1.2の感覚運動機能テストの後、TTC染色のためにすべてのラットを麻酔し、切断します。</li>
</ol>2. ラットにおける一方的MCAO/Rモデルの確立9
メモ:手術中は、マイクロフォースプを穏やかに使用して血管の破損を防ぎます。血管が単離されるとき、ラットの頸部の神経や他の血管への損傷を避けてください。すべての生存外科的処置のための適切な無菌技術を提示するために注意が必要です。ビデオの後半で説明するテクニックは、手順全体を通して実践する必要があります。
<ol><li>手術を通じて、ラットの体温を37.0±0.5°Cの小動物サーモスタットに保ちます。4つの6 cm 5-0縫合糸を準備します。</li>
	<li>小動物麻酔機(廃ガス処理装置付き)の酸素流量を0.4−0.6 L/min、イソフルランの濃度を5%に設定します。麻酔機にラットを置きます。</li>
	<li>動物が気を失った後、ラットを外科的固定テーブルの上に置く。ラットの口を麻酔機のマスクに接続します(酸素流量は変わりません;アイソフルランの濃度を3%に調整します)。四肢の緊張、角膜反射、痛みの欠如を観察して、動物が深い麻酔に入っていることを確認します。</li>
	<li>紙の包帯(または他のツール)で手術台に横たわるように手足を固定します。</li>
	<li>電気剃風器でネックコートを取り外し、75%のアルコールで殺菌します(ヨウドファーの方が良いです)。ラットの口をフックで固定します。</li>
	<li>眼科はさみで首の中央縦形状に沿って2−3センチメートルをカットします。</li>
	<li>一般的な頸動脈を分離します。皮下筋を眼科鉗子で分離する。完全に視野を露出するために自家製リトラクタを使用してください。気管の前筋を眼科鉗子で分離した後、一般的な頸動脈が見えるまで右胸鎖筋腫性腱に沿って分離する。</li>
	<li>一般的な頸動脈、外頸動脈、眼科鉗子を用いて内頸動脈を分離する。一般的な頸動脈(硬い結び目)、心臓端から遠く離れた外頸動脈(硬い結び目)、内頸動脈(緩い結び目)を5-0縫合でリゲートします。心臓端の近くの外頸動脈を5-0縫合で並べて下ろします。</li>
	<li>ねじボルトを挿入します。眼科はさみを使って外頸動脈の小さな開口部を切り、糸ボルトをそっと挿入します。緩い結び目にあった外頸動脈の縫合糸をリゲートし、外頸動脈を切断する。<ol>
<li>内頸動脈の緩い結び目を緩め、中大脳動脈の始まりに糸ボルトを挿入し続けます(縫合糸がマークされています)。次に、露出したねじボルトを切り取ります。</li>
	</ol>
</li>
	<li>虚血時間(2-3時間)に達したら、外頸動脈の骨折を1つのマイクロフォースプで固定し、別のマイクロフォースプで糸ボルトをそっと引き出します。ねじボルトの前端が内頸動脈から完全に引き抜かれたら、5-0縫合糸が並んでいた外頸動脈をリゲートし、その後、糸ボルトを完全に引き出します。</li>
	<li>一般的な頸動脈を緩め、感染を防ぐために創傷の表面にペニシリンナトリウム粉末のダウブ〜50,000 U。縫合皮下筋肉と皮膚を4縫合。</li>
	<li>ラットをケージに戻した後の術後水不足を防ぐために、1 mL注射器(SQ-PEN注入の方が良い)を使用してラットに滅菌生理食塩水の〜0.2mLを経口与える。</li>
	<li>ロンガのスコア10に従って再灌流の24時間後に動物を選択してください。ステップ 1.1 の次の TTC 染色に対してロンガのスコアが 1-3 の動物と、ステップ 1.2 で 1、35、60、90 日の学習で 2-3 のスコアを持つ動物を選択します。 注:ロンガのスコア10:0スコア、神経学的な欠陥なし。1スコア、左前爪を拡張する失敗。左に回る2スコア。左に落ちる3スコア。4スコアは、自発的に歩くことができず、意識が落ち込んでいます。</li>
	<li>一方向ANOVAでロンガのスコアを分析します。示された値は平均±S.D. P < 0.05の差を示す。</li>
</ol>3. TTC染色
注:ラット脳スライス金型とブレードは、大きな温度差による密着性を防ぐために、使用前に-20°Cの冷蔵庫で事前に冷却する必要があります。染色中は、脳スライスと培養プレートとの密着性を防ぎ、染色が不十分になる可能性があります。
<ol><li>ステップ1.1のロンガのスコアまたはステップ1.2の感覚運動機能テストの後に400mg/kgの塩素水和物の腹腔内注射によってラットを麻酔する。</li>
	<li>外科的なはさみまたはラットの切断装置でラットを切断します。外科的はさみと止血性鉗子で脳を取り除く。</li>
	<li>スライスを容易にするために、脳を-20°Cの冷蔵庫に30分間入れます。</li>
	<li>冷蔵庫から脳を取り除き、事前に冷却されたラットの脳スライス型に入れます。あらかじめ冷却されたブレードで、脳を6つの2mmの厚さの連続したセクションにカットします。</li>
	<li>セクションを2%5-トリフェニル-2H-塩化テトラゾリウム(TTC)で6ウェル培養プレートに染色します。</li>
	<li>揺れるベッドで37°Cで30−60分のセクションを培養する。脳虚血領域と正常領域が明らかに白と赤になるまで10分ごとにセクションを反転します。</li>
	<li>脳のスライスを背中から脳の前に向けた順序で垂直に並べられます。ルーラーを使用して、各行の全長が同じであることを確認します。デジタル カメラで写真を撮る。</li>
	<li>梗塞の体積を分析します。<ol>
<li>フォトショップソフトウェアで写真を前処理<ol>
<li>フォトショップCS6を使用して写真をインポートします。00:00-00:14</li>
			<li>[選択]をクリックして脳スライスを選択し、[選択|逆.00:15-00:36</li>
			<li>[前景]をクリックして黒を選択し、[OK]をクリックします。00:37-00:42</li>
			<li>Alt キーを押しながら Del キーを押して背景色を塗りつぶし、Ctrlキーを押しながら D キーを押して選択を解除します。00:43-00:46</li>
			<li>[ファイル|デスクトップに保存します。00:47-01:08</li>
		</ol>
</li>
		<li>イメージプロプラスソフトウェアで写真を前処理します。<ol>
<li>イメージプロプラス6.0ソフトウェアを開き、写真をインポートします。01:09-01:24</li>
			<li>欠陥の変更については、コントラストエンハンスメントツールで明るさを調整し、背景が黒になるようにします。01:25-01:37</li>
			<li>[フィルター]の[中央値]ツールを使用して、ハイライトを削除します。01:38-01:46</li>
		</ol>
</li>
		<li>Image Pro Plusソフトウェアで左(通常)の脳領域を計算<ol>
<li>セグメンテーションを使用して色を選択し、脳のスライスが黒の背景から分離されるようにH/S/Iの値を調整します。01:47-02:12</li>
			<li>カウントに戻る |サイズ:02:13-02:16</li>
			<li>カウントをクリック |[編集]でオブジェクトを分割して、脳を中間線から分離します。ソフトウェアは自動的に左右の脳領域を区別します。02:17-02:49</li>
		</ol>
</li>
		<li>イメージプロプラスソフトウェアで右梗塞脳領域を計算<ol>
<li>ステップ 3.8.1-3.8.2 を実装します。02:50-03:14</li>
			<li>カウントを選択 |サイズ:03:15-03:21</li>
			<li>[描画]をクリックします。 |[編集]の[オブジェクトのマージ]ツール 。虚血領域を手動で選択し、[カウント]をクリックして虚血領域を計算します。03:16-05:31</li>
		</ol>
</li>
		<li>イメージプロプラスソフトウェアで健康脳領域を計算<ol>
<li>ステップ 3.8.1-3.8.2 を実装します。05:32-06:44</li>
			<li>セグメンテーションを使用してカラーを選択し、脳スライスの通常の部分が黒の背景から分離されるようにH/S/Iの値を調整します。06:45-07:10</li>
			<li>カウントに戻る |サイズを設定し、[カウント]をクリックしてこの領域を計算します。07:11-07:21</li>
			<li>[編集]で[オブジェクトを分割]をクリックして、脳を中間線から分離します。ソフトウェアは自動的に左右の脳領域を区別します。07:22-08:08</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>梗塞量の計算 (%)梗塞と収縮量 (%): 梗塞量(%) = [右梗塞領域/(2×左脳領域)] x 100. 梗塞および収縮体積(%) = [(左脳領域 - 右健康脳領域)/(2 x 左脳領域)] x 100. メモ:右脳は負傷した部分です。データは一方向ANOVAによって分析された。示された値は平均±S.D. P < 0.05の差を示す。</li>
</ol>4. 感覚運動機能の評価
注:ロンガのスコアが2~3のラット(300g、3040スレッドボルト、3時間脳梗塞時間)を選択し、1~90日の感覚運動機能実験を行いました。静かにして、この研究期間中に動物を邪魔しないでください。データは双方向ANOVAによって分析された。示された値は平均±S.D. P < 0.05の差を示す。
<ol><li>二国間非対称試験11<ol>
<li>同じ圧力でラットの各前爪のサフェノウス部分に紙テープ(長さ5cm、幅0.8cm)をラップします。</li>
		<li>各ラットについて、各前爪に接触し、影響を受けない足の時間と影響を受けた足の時間を含むカメラで5分でテープを取り外した回数を記録します。</li>
		<li>30 分後、手順 4.1.1 と 4.1.2 をもう一度繰り返します。</li>
		<li>感覚運動バイアスの平均値(%)を計算します。 感覚運動バイアス(%) = (影響を受けない足の時間 - 影響を受ける足の時間)/(影響を受けない足の時間 + 影響を受ける足の時間) x 100</li>
	</ol>
</li>
	<li>グリッドウォーキング試験<ol>
<li>2.5 cm2のグリッド開口部を持つ高いグリッド サーフェス プラットフォーム (面積: 1 m2; 高さ: 90 cm) の中央にラットを配置します。</li>
		<li>ラットの腰を軽く押して、ラットがグリッドサーフェスを横断するように促します。</li>
		<li>影響を受けていない(右)手足と影響を受けた(左)手足による足の断層の数と、カメラで1分で合計ステップ数を記録します。</li>
		<li>エラー時間を計算します。 エラー時間 (%) = [影響を受けない (右) 四肢 - 影響を受ける (左) 四肢]/合計ステップ番号 x 100. 注: 20 ステップデータを下回るステップの合計数は削除されました。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ロタロッド試験12、13<ol>
<li>支持ソフトウェアを用いたラットのラット回転バー疲労装置(直径90mm)を、コンピュータ上で5分の期間にわたって13rpmの速度に設定します。</li>
		<li>コンピュータプログラムを起動し、ラットをロタロッドラングに同時に置きます。</li>
		<li>ラットがラングから落ちたり、5分間歩き続けたり、回転時間を記録したりする場合は、トライアルを終了します。</li>
		<li>ラットを30分間休ませなさい。</li>
		<li>手順 4.3.2-4.3.4 をさらに 2 回繰り返し、最後の回転時間となる最大値を選択します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>リフティングロープテスト14<ol>
<li>リフティングロープの器具(高さ70cm、直径0.2cm、長さ40cm)を机の上に置きます。</li>
		<li>ラットに前肢でロープをつかみ、ネズミをぶら下げさせます。</li>
		<li>ぶら下がり時間を記録し、スコアを計算します。 注:ロープ上の3:0-2 sのスコア。ロープ上の2:3−4 sのスコア;ロープ上の1:5−6のスコア;0のスコア:ロープに7 s以上。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Kong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+chemokine-like+factor+1%2C+a+novel+C-C+chemokine%2C+protects+against+focal+cerebral+ischemia+by+inhibiting+neutrophil+infiltration+via+MAPK+pathways+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Neutralization of chemokine-like factor 1, a novel C-C chemokine, protects against focal cerebral ischemia by inhibiting neutrophil infiltration via MAPK pathways in rats.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 112(2014).</li>
<li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+bilobalide+on+cerebral+ischemia+and+reperfusion+injury+are+associated+with+inhibition+of+pro-inflammatory+mediator+production+and+down-regulation+of+JNK1%2F2+and+p38+MAPK+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of bilobalide on cerebral ischemia and reperfusion injury are associated with inhibition of pro-inflammatory mediator production and down-regulation of JNK1/2 and p38 MAPK activation.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 167(2014).</li>
<li>Thomas, A., Detilleux, J., Flecknell, P., Sandersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Stroke+Therapy+Academic+Industry+Roundtable+%28STAIR%29+Guidelines+on+Peri-Anesthesia+Care+for+Rat+Models+of+Stroke%3A+A+Meta-Analysis+Comparing+the+Years+2005+and+2015%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) Guidelines on Peri-Anesthesia Care for Rat Models of Stroke: A Meta-Analysis Comparing the Years 2005 and 2015.</a> PLoS One. 12, e0170243(2017).</li>
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<li>Abrahám, H., Somogyvári-Vigh, A., Maderdrut, J. L., Vigh, S., Arimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filament+size+influences+temperature+changes+and+brain+damage+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Filament size influences temperature changes and brain damage following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Exp. Brain Res. 142, 131-138 (2002).</li>
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</ol>

著者たちは何も開示する必要はない。

急性脳虚血によく使用されている方法および行動指標を確立する多くのモデルは、脳虚血16、17の回復および後遺症段階に有意な変化を有しないかもしれない。しかし、回復および後遺症期における脳虚血患者の数は最も多い。虚血脳卒中の回復および後遺症段階に適した動物モデルを選択することが不可欠である。
ラットのMCAO/Rモデルを使用して、ラットの適切な重量(260−330g)、糸ボルトの種類(2636/2838/3040/3043)、および最も重篤な梗塞損傷の脳梗塞時間(2-3時間)、高いモデル成功率、および目に見える行動の指標をスクリーニングします。脳虚血の回復および後遺症の段階に適しているであろう。
3040スレッドボルトと3時間の脳梗塞時間で300gの重さのラットは、より大きな梗塞量、より重度の行動欠陥、およびより大きなモデル成功率を有する(図1)。さらに、...

脳虚血は、急性期(1週間以内)、回復段階(1週間~6ヶ月)、後遺症の3つの段階に分けられる。現在、ほとんどの研究は、その有意な効果と多対相対研究モデル1、2、3のために脳虚血の急性期に焦点を当てています。しかし、脳虚血の回復と後遺症の段階は、障害の長期的な合併症のために無視することはできません。そこで、本研究の目的は、脳虚血の回復段階と後遺症を研究するために、安定した信頼性が高く比較的単純な動物モデルを探索することになる。
多くの実験的脳虚血モデルの中で、中脳動脈閉塞(MCAO)を使用して、右中大脳動脈(MCA)への糸ボルト挿入を使用しています。このモデルは、より大きな梗塞量を産生し得るヒト脳卒中に類似しており、脳卒中に関連する多くの行動障害をもたらし、糸ボルト4、5、6を除去することによって血液再灌流(R)を可能にすることができる。MCAO/Rはまた、脳虚血7の金標準動物モデルと考えられている。さらに、脳損傷の重症度は、糸ボルトの直径および挿入長さ、脳虚血の持続時間、および動物重量(より大きなラットは、より大きな脳およびより厚い脳血管を有する)8に依存する。したがって、糸ボルトの種類、梗塞時間、およびラット重量を変更することにより、MCAO/Rラットにおける脳虚血の回復および後遺症の段階に適したモデルを見つけることができる。ラットモデルを検証するために、TTC染色と感覚運動機能実験(両側非対称性試験、グリッドウォーキング試験、ロタロッド試験、リフティングロープテスト)を用いて、MCAO/Rモデルの1日間、35日間、60日間、90日間の研究を行いました。

<table><tbody><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ライカ(ドイツ)</td><td>S8</td><td>顕微鏡手術器具</td></tr><tr><td>ブレード</td><td>ジェレット</td><td>/</td><td>脳切片の切断</td></tr><tr><td>恒温振とうベッド</td><td>太倉実験装置工場</td><td>THZ-C</td><td>脳切片を均一に、かつ恒温に保つため</td></tr><tr><td>デジタルカメラ</td><td>キヤノン</td><td>700D</td><td>撮影用TTC染色</td></tr><tr><td>電気シェーバーShanghai</td><td>Yuyan Scientific Instruments Co.、Ltd.の写真</td><td>3000#</td><td>ネズミの首の脱毛</td></tr><tr><td>鉗子ハモスタット</td><td>上海医療機器有限公司</td><td>14cm</td><td>脳の除去に使用</td></tr><tr><td>Image Pro Plus Software</td><td>Media Cybernetics Inc.</td><td>6.0</td><td>梗塞量の</td></tr><tr><td>分析 イソフルラン</td><td>RWD ライフサイエンス</td><td>217170702</td><td>麻酔ガス</td></tr><tr><td>マイクロ鉗子</td><td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td><td>10 cm</td><td>血管マイクロマニピュレーション</td></tr><tr><td>マイクロせん断</td><td>上海Jinzhong Medical Devices Co.、Ltd.</td><td>10 cm</td><td>血管マイクロマニピュレーション</td></tr><tr><td>眼科用鉗子Shanghai</td><td>Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td><td>10 cm</td><td>補助皮膚および筋肉解剖学</td></tr><tr><td>Pphthalmicはさみ</td><td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co.、Ltd.</td><td>首</td><td>の皮膚を切るために使用して</td></tr><tr><td>ラットブレインスライスモールド</td><td>上海Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td><td>400 g</td><td>脳組織の標準的な、均一な切断のために</td></tr>ラット<tr><td>回転バー疲労装置</td><td>安徽省Zhenghua生物器械および装置Co.、株式会社。</td><td>ZH-300B</td><td>感覚運動機能をテストするために</td></tr><tr><td>小動物麻酔器</td>上海<td>Yuyan科学機器有限公司。</td><td>ABM3000</td><td>ガス麻酔器</td></tr><tr><td>小動物用サーモスタット</td><td>北京大曹田科技有限公司</td><td>DM.7-YLS-20A</td><td>手術中に動物の体温を一定に保つために</td></tr><tr><td>手術用ハサミ</td><td>上海医療機器有限公司</td><td>16 cm</td><td>斬首および脳除去用</td></tr><tr><td>縫合</td>糸 <td>Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.</td><td>4-0 / 5-0</td><td>皮膚・筋肉縫合糸用 / 血管結紮用</td></tr>スレッド<tr><td>ボルト</td><td>北京シノンテック株式会社</td><td>2636/2838/3040/3043-A4</td><td>ラットの中大脳動脈の閉塞</td></tr>5<tr><td>-トリフェニル-2H-テトラゾリウムクロリド(TTC)</td><td>Sigma</td><td>LOT#BCBP3272V</td><td>脳切片染色試薬</td></tr></tbody></table>

ラットの急性脳卒中後の脳回復を評価する前臨床モデル

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

本研究の目的は、回復段階および後遺症段階における動物脳虚血モデルを確立し、検証することにあった。男性スプレイグ・ドーリーラットにおける中大脳動脈閉塞/再灌流(MCAO/R)モデルが選択された。ラットの重量(260-330g)、糸ボルトタイプ(2636/2838/3040/3043)、脳梗塞時間(2-3時間)を変更することにより、ロンガのスコアが高く、より大きな梗塞量とより大きなモデル成功率をロンガのスコアとTTC染色を用いてスクリーニングした。最適なモデル条件(300g、3040スレッドボルト、3時間脳梗塞時間)を取得し、感覚運動機能と梗塞量の評価を介して再灌流後1〜90日間の観察期間に使用した。これらの条件では、両側非対称性試験は1日から90日の間に有意な差があり、グリッドウォーキング試験は1〜60日の有意な差を有した。両方の違いは、適切な感覚運動機能試験である可能性があります。したがって、脳虚血の回復および後遺症段階における新規ラットモデルの最も適切な状態が発見された:3時間の脳梗塞のための3040スレッドボルトでMCAOを受けた300gラットが見つかり、その後再浸透した。適切な感覚運動機能試験は、両側非対称性試験とグリッドウォーキング試験であった。

ロンガのスコアとTTC染色を持つMCAO/Rモデルの上記の手順を使用して、平均重量(275/300/320 g)、ボルトタイプ(2636/2838/3040/3043;)表 1)虚血時間(2-3時間)と1日の再灌流は、ラットにおける最適な脳虚血モデルのスクリーニングに使用された。300 g重量、3040スレッドボルト、および3時間脳梗塞時間のモデルパラメータは、最大の脳梗塞、最も高いロンガのスコアと最大のモデル成功率に最も適していました。これは、275g重量、2636スレッドボルト、および2時間脳梗塞時間の従来の治療において有意に改善された(図1)。
さらに、300g重量、3040スレッドボルト、3時間脳梗塞時間、2−3ロンガのスコアを有するラットは、感覚運動機能試験(両側非対称性試験、グリッドウォーキング試験、ロタロッド試験、およびリフティングロープ試験)と...

本研究の目的は、1-90後の中大脳動脈閉塞/再灌流(MCAO/R)後の脳梗塞および感覚運動機能を試験することにより、脳虚血の回復および後遺症の研究のための動物モデルを確立し、検証することですネズミの日。

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

この研究は、脳虚血の回復と後遺症の段階を研究するために確立された動物モデルを使用しています。この技術の主な利点は、安定した信頼性が高く、比較的簡単であることです。手術用固定テーブルに麻酔をかけたラットを置くことから始めます。手術を通して、小さい動物のサーモスタットでラットの体温を摂氏37度に保つ。口を麻酔機のマスクに接続し、四肢の緊張、角膜反射および痛みの欠如によって深い麻酔を確認する。紙包帯を使用して、ラットの手足を手術台に固定します。電気剃毛で、ネックコートを取り外し、75%アルコールで首を殺菌します。眼科用はさみを使用して、首の中央縦方向の形状に沿って2〜3センチメートルをカットします。そして、眼球鉗子で、皮下筋を分離する。完全に視野を公開するために自家製のリトラクターを使用してください。すべての生存外科手術に適切な無菌技術を提示するために注意が必要です。ビデオの後半で説明するテクニックは、手順全体を通して実践する必要があります。マイクロ鉗子を使用して、一般的な頸動脈、外的頸動脈および内頸動脈を分離する。顕微鏡で作業し、8-0を使用硬い結び目で一般的な頸動脈をリゲートする縫合糸、硬い結び目で心臓端から遠く離れた外部頸動脈、緩い結び目を持つ内部頸動脈、そして心臓端付近の外頸動脈を並べるようにする。マイクロハサミを使用して、外頸動脈の小さな開口部を切断し、そっと糸ボルトを挿入します。細く、ゆるい結び目である外頸動脈の縫合をリゲートし、外頸動脈を切断する。内部頸動脈のゆるい結び目を緩め、縫合糸でマークされた中大脳動脈の始めに糸ボルトを挿入し続け、露出した糸ボルトを切断します。2~3時間後に虚血時間に達した後、マイクロ鉗子を用いて外頸動脈の骨折を修正し、別のマイクロ鉗子で糸ボルトをそっと引き抜く。ねじボルトの前端を内側頸動脈から完全に引き出した後、8-0で並んでいる外的頸動脈をリゲートする縫合し、糸ボルトを完全に取り外します。一般的な頸動脈を緩めた後、約50,000単位のペニシリンナトリウム粉末を創傷表面にアブし、感染を防ぐ。皮下筋と皮膚を縫合するために4つの縫合糸を使用してください。ラットをケージに戻した後、1ミリリットルの注射器を使用して、術後脱水を防ぐためにラットに約0.2ミリリットルの水を経口で与えます。TTC染色または感覚運動研究のための最長スコアに従って動物を選択してください。TTC染色用に分離した脳を30分のマイナス20度でインキュベートした後、あらかじめ冷却されたラットの脳スライス型に入れます。事前に冷却されたブレードを使用して、脳を6つの2ミリメートルの厚さの連続したセクションに切断します。6ウェル培養プレートに2%TTCのセクションを染色し、振りながら摂氏37度で30〜60分間インキュベートします。10分ごとに、脳虚血と影響を受けない領域が

a-preclinical-model-to-assess-brain-recovery-after-acute-stroke

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ラットにおける虚血性脳損傷の外科的誘導は、脳卒中の研究に広く使用されているモデルです。ここでは、中大脳動脈の閉塞による局所脳虚血の誘導を示す。組織染色および磁気共鳴イメージングによる結果梗塞の可視化も示されている。...

ラット中大脳動脈の血管縫合閉塞による局所脳虚血モデル

脳卒中の病態生理学を理解するためには、信頼性のあるモデルを使用することが重要です。この論文は、マウスにおいて最も頻繁に使用される脳卒中モデルのいずれかを説明する、中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルと呼ばれる再潅流と（また腔内フィラメントまたは縫合モデルと呼ばれます）。...

マウスの中大脳動脈閉塞再灌流誘発性の脳卒中のための外科的アプローチ

ここで提示されるのが、単一のパルスによる電気刺激を介してラットモデルにおける急性ポンチン梗塞を確立するためのプロトコルである。...

電気刺激によるラットにおける急性ポンチン梗塞の確立

このプロトコルは、げっ歯類の脳サンプルの同じセット上の虚血性脳損傷の3つの最も重要なパラメータを測定する新しい技術を記述する。1つの脳サンプルのみを使用することは、倫理的および経済的コストの面で非常に有利である。...

げっ歯類の脳サンプルの単一のセットで脳卒中後脳浮腫、梗塞ゾーンおよび血液脳関門破壊を測定する

ここで説明するフォトトロンボミックストロークモデルは、感光性染料の投与後にレーザー照明を用いて永久的な微小血管閉塞を誘導することによって無傷の頭蓋骨を通してストロークが生成される。...

マウスにおける脳卒中のモデリング:光血栓症による焦点性皮質病変

中大脳動脈閉塞の異なるモデル(MCAo)は、実験的な脳卒中研究で使用されています。ここでは、外部頸動脈(ECA)を介した一過性MCAoの実験的ストロークモデルについて説明し、これは、自然血栓溶解または治療のために脳血管血栓が除去されるヒトの脳卒中を模倣することを目的とする。...

マウスにおける脳卒中のモデリング:外頸動脈を介した過渡中脳動脈閉塞

このプロトコルは、中型の梗塞と優れた生存率を持つユニークなマウスストロークモデルを示しています。このモデルにより、脳卒中前臨床研究者は虚血期間を延長し、高齢マウスを使用し、長期的な機能的転帰を評価することができます。...

高齢マウスの脳卒中転帰を研究するための修正経頭蓋中大脳動脈閉塞モデル

ラット のin vivo モデルは、虚血性脳卒中の病態メカニズムと治療標的を調査するために不可欠なツールです。この研究では、ラットの中大脳動脈閉塞 (MCAO)...

虚血性脳卒中のラットモデルにおける免疫蛍光法による細胞死シグナル伝達の評価

嗅神経鞘細胞（たOEC）が、一次嗅覚ニューロンの成長を可能にする神経堤細胞である。この特定のプロパティは、細胞移植のために使用することができる。ここでは喉頭神経損傷モデルでたOECの使用に基づいて細胞移植のモデルを提示。...

末梢神経損傷後の機能回復を評価する嗅神経鞘細胞の移植

このプロトコルは、最適化されたNの実装方法を示します-メチル-D-glucamine (NMDG) 保護回復法脳スライス標本。1 つのメディアの定式化は、確実にあらゆる年齢層の様々...

最適化されたNを使用して急性脳スライスの準備-メチル-D-glucamine 保護回復法

学ぶラットの脳虚血回復モデル。MCAO/R法を用いて虚血後の脳梗塞と感覚運動機能を1～90日間評価し、神経学的損傷の回復メカニズムと治療介入の可能性を探索する前臨床研究手法です。

ラットの急性脳卒中後の脳回復を評価する前臨床モデル

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