Name: 小規模セル処理のための自動カウンターフロー遠心システム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: 学ぶ 小規模細胞製造のための自動カウンターフロー遠心システムを用いたバッファー交換と濃縮の手法。高回収率と少量濃縮製品の回収を実現し、細胞製造の効率化に貢献します。

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この作業は、ビクトリア州政府の運用インフラ支援プログラムと、経済開発・雇用・運輸・資源省が提供するビクトリア州政府技術バウチャーによって支援されています。RLは、国民健康医療研究評議会キャリア開発フェローシップの受賞者です。ALはオーストラリアの大学院賞を受賞しています。

1. 緩衝交換のための試薬および細胞の調製
<ol><li>クラス 2 層流フードにバッファーを準備します(「材料の表」を参照)。注射器と針のアセンブリを使用して、500 mLの生理行袋から50 mLの生理行溶液を取り除きます。これを20%ヒト血清アルブミン(HSA)の50mLに交換して、生理線中に2%HSAを作り、洗浄バッファーとして機能します。</li>
	<li>培養容器から細胞を取り出し、細胞数を実行して、トリパンブルーの除外によって開始細胞の量と生存率を決定します。セルを転送バッグにロードします。 注:このプロトコルでは、Jurkat細胞をRPMIで培養し、MSCをDMEM:F12で培養した。両方の媒体は、10%胎児ウシ血清(FBS)および1%抗生物質抗粘液を補った。細胞を5%CO2で37°Cで培養した。MSCまたは付着細胞の場合、細胞を剥離するために消化酵素(例えばトリプシン)を培養容器に添加し、細胞が剥離したら培養媒性でクエンチする。培養容器内で細胞が膨張したため、このプロトコルでは転写袋が使用された。しかし、細胞が細胞培養袋内で培養される場合、滅菌管溶接を介して単独使用キットに直接接続することができる。このプロトコルでは、3 x 107 Jurkat細胞または1 x 107 MSCのいずれかを各実行に使用し、そこで細胞を40mLの培養媒性で懸濁させた。<ol>
<li>滅菌チューブ溶接機を使用して、搬送袋を単一使用処理キットに接続できる場合は、シリンジと針アセンブリを使用して、搬送バッグにセルをロードします(材料の表を参照)。</li>
		<li>または、オートクレーブされたハサミを使用して、転写袋に取り付けた残り約10cmの接続チューブを切断し、チューブの端にメスのルアーコネクタを追加します。注射器を使用して細胞とメディアを吸引し、そのシリンジをLuerコネクタとロードセルを転送バッグに接続します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>細胞を含む袋を接続し、ステップ1.1で調製した洗浄バッファ500mLを含む洗浄バッファバッグ、廃棄物袋、および注射器をシングルユースキットに回収する(図1B)。 メモ:各バッグの接続位置は、プログラムの設定によって異なります。このプロトコルでは、廃棄物袋を位置Aに接続し、位置Bでバッファを洗浄し、セルバッグを位置DとFに、位置Hに回収シリンジを接続した(図1C)。</li>
</ol>2. 自動バッファ交換プロトコルのプログラム
<ol><li>デバイスのグラフィック ユーザー インターフェイス (GUI) を開き、ラップトップ PC またはタブレットの[START]ボタンを押します。次に、既存のプロトコルを開くか、または [新規作成] をクリックして新しいプロトコルを作成します。</li>
	<li>[進む] ボタンと [後方へ] ボタンを使用して各ステップをナビゲートし、開閉するバルブ、遠心速度、ポンプ速度、ポンプ方向、およびアクション トリガを選択します。各手順の設定を表 1にまとめます。次に、プロトコルを保存します。</li>
</ol>3. マシンのセットアップ
<ol><li>単独使用の処理キットを機械に置き、それに応じて接続された袋を掛けます。赤い[停止/リセット]ボタンを押して、すべてのバルブをデフォルトの閉じた位置にリセットします。 メモ:ドアを閉めると、キットが正しく配置され、すべてのバルブが適切に機能していることを確認するために、マシンはテストを実行します。</li>
	<li>GUIを処理デバイスに接続し、「接続」ボタンを押します。次に、保存したプログラムをダウンロードします。緑色の [再生] ボタンが点灯すると、プロトコルを開始する準備ができたことを示します。</li>
	<li>トランスファーバッグチューブの手動クランプを開きます。 メモ:オペレータがクランプを開け忘れると、デバイスが停止し、圧力センサの警告が表示されます。[停止] ボタンを押してデバイスをリセットし、クランプを開いてもう一度起動します。</li>
</ol>4. 自動バッファ交換
<ol><li>[開始]をクリックして、バッファ交換プログラムを開始します。 注 : 自動化されたプロセスを手動で変更するには、[次へ] ボタンを押して次の手順に進み、[トリガ] に到達する前に [一時停止] をクリックしてプロセスを保留にします。これは、バルブJとKのみを開いたまま、キットを通して細胞を再循環します(図1C)。</li>
	<li>オートメーションステップ6(表1)の終了時に、空になったバッグ内の空気がバブルセンサーをトリガーすると、プロセスが一時停止します。[次へ] をクリックして、バッグが実際に空の場合は次の手順に進むか、または [一時停止] を押して、行のバブルによってセンサーがトリガーされた場合は処理を再開します。</li>
</ol>5. セルの収集とサンプリング
<ol><li>自動化されたプロセスが完了したら、すべてのチューブクランプを閉じます。ドアを開け、シングルユースキットをデバイスから取り出します。注射器を取り外して、後続のプロセスのためにセルを収集します。細胞数と生存率チェックのために収集された細胞のサンプルを採取します(ステップ6.2を参照)。</li>
</ol>6. プロセス検証
<ol><li>手動バッファ交換プロトコルを使用して制御実験を実行します。<ol>
<li>200 x gでの遠心分離剤を5分間廃棄し、30mLの細胞洗浄緩衝液で細胞を再懸濁する。200 x gで再び細胞懸濁液を5分間遠心分離し、上清を廃棄し、10mLの細胞洗浄緩衝液で細胞を再懸濁する。</li>
	</ol>
</li>
	<li>トリパンブルー除外アッセイを介して細胞カウントを実行し、自動セルカウンタを使用して細胞生存率を評価します。</li>
	<li>MTSアッセイを行い、細胞増殖を2、24、および48時間で定量する。 注:MTSアッセイは、メーカーの指示に従って96ウェル組織培養プレート上で行われました。ウェル当たり100μLの細胞培養媒体(10,000ユルカット細胞または1,500個を含む)を、緩衝交換処理後にめっきした。各時点で、MTS試薬の20μLを各ウェルに添加し、37°Cで2時間インキュベートした。吸光度はプレートリーダーを用いて490nmで評価した。</li>
	<li>機能アッセイを実行して、自動プロセスの影響と Jurkat 細胞および MSC 関数に対する手動プロセスの影響を比較します。<ol>
<li>1x 106細胞/mLの密度で96ウェルプレート中のJurkat細胞を培養し、50ng/mL phorbol 12-ミリステート13-アセテート(PMA)および1μg/mLイオノマイシン(細胞刺激カクテル)で刺激したDMEM:F12媒体中で10%胎児ウシ血清(FBS)を24時間分 5%CO2で37°Cで細胞をインキュベートします。</li>
		<li>メーカーの指示に従って、ビーズベースのELISAアッセイ(材料表参照)を使用して培養上清からのインターロイキン-2産生を測定します。</li>
		<li>DMEMの1mLで10,000細胞/cm2の密度で12ウェルプレート中のMSCを培養する:10%FBSを含む10%FBSを含む10%FBSを含む48時間50単位/mL. キヌレニン濃度アッセイの上清を集めて、MSCのインドールミン2,3-ジオキシゲナーゼ(IDO)酵素活性を測定する。 </li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

SW、IF、およびDJは、シノジーPty株式会社のCOO、CTO、およびCEOです。CFCデバイスへのアクセスは、Scinogyによっても提供されました。

説明されている自動バッファ交換プロトコルは、シンプルで使いやすいプロトコルです。それにもかかわらず、このプロトコルには、重要で特定の注意が必要ないくつかの重要な手順があります。私たちの経験では、MSC(平均直径10~15μm)などの大きなセルを処理する場合、各実行に最適な細胞回収を達成するために少なくとも1 x 107個のセルを含める必要があります(図4B)。Jurkat細胞のような小さい細胞(直径は平均〜10μm)を処理するには、安定した流動細胞床を達成するために約3x107細胞が必要です(図4B)。細胞数が少なすぎると、流動層から細胞が取り出される可能性が高くなり、最終的な細胞回収に影響を及ぼします。さらに、一定の遠心速度を加えると、異なるポンプ速度でのセル損失率を比較しました。ここでは、流動層の不安定性が高い流量に起因する流量(図6)に伴って細...

現代医学の風景は、遺伝子および細胞ベースの治療法(GCT)の最近の発展によって急速に変化しました。翻訳研究で最も急速に成長している分野の1つとして、GCTセクターはユニークで前例のない課題にも直面しています。堅牢な臨床成果に加えて、GCTの商業的成功には効率的で費用対効果の高い製造プロセスが不可欠であり、小規模製造業では特に達成が困難である1.時間、労力、品質保証のコストは、細胞の各バッチが数百または数千の代わりに1人の患者に対して数回の用量しか生成する場合に拡大されます。製造プロセスが抗体および組換えタンパク質の産生に近い同種細胞療法とは異なり、自家細胞療法は、典型的には小規模な操作1として産生される。バイオ医薬品製造における比較的新しい現象として2は、小規模な細胞処理の選択肢が非常に限られている。
細胞製造には緩衝液交換が不可欠です。これは、細胞が培養媒体から取り出され、凍結保存または注入のために濃縮される下流のプロセスの一つです。現在、小規模な細胞製造は、多くの場合、学術研究の設定と同様のプロセスを適用し、不妊3を維持するために専門のクリーンルームに依存しています。手動下流プロセスは、多くの場合、ボリューム削減とバッファー交換のために細胞をペレット化し、再サスペンドするためにベンチトップ遠心分離機を使用します。これらのオープンプロセスは高価であり(すなわち、労働およびクリーンルームのメンテナンス)、商業生産2、3に理想的ではない限られた製造能力を有する。
製造効率を向上させ、商業規模の生産を達成するためのソリューションとして自動化を導入することが提案されている2.ガンマ照射や末端濾過などの生物学的製剤に使用される従来の方法では、細胞ベースの製品では無菌性を達成できません。代わりに、自動クローズドシステムを導入して、汚染のリスクを軽減し、オペレータは無菌性を維持するためにクリーンルームに依存しています。また、プロセス自動化は、複数のシステムを並列に実行 (スケールアウト) するか、個々のデバイスの処理能力を増やす (スケールアップ) ことでスケーラビリティの問題に対処し、オペレーター間の変動を最小限に抑えます。さらに、自家療法のコストモデリング分析は、自動化が製造5、6のコストを削減する可能性があることを示唆しています。しかし、自動化された製造プラットフォームが7を使用した自家幹細胞臨床試験では、費用便益は見つかっておらず、自動化のコストメリットは個々の製造プロセスに依存する可能性があることを示唆している。
自動化を既存の製造プロセスに導入できるさまざまな戦略があります。これは、完全に統合されたプラットフォームまたはモジュラーベースの処理チェーンを実装することによって実現できます。CliniMACS Prodigy(ミルテニ・バイオテック)、コクーン(オクタンバイオテック)、量子(テルモBCT)など、自家用細胞製造に市販されている完全に統合されたプラットフォームがいくつかあります。「GMP-in-a-box」と呼ばれることが多いこれらの統合プラットフォームは、インフラストラクチャに対する要求が少なく、運用が容易です。ただし、完全に統合されたセットアップの製造能力は、システムに取り付けられたインキュベーターによって制限される場合があります。例えば、Prodigyの培養能力は、その400 mLチャンバー8に制限され、量子カートリッジは、2.1m2(120 T175フラスコに相当)7に設定された制限表面積を有し、より高い細胞用量9、10を必要とする患者には十分ではないかもしれない。さらに、ProdigyおよびQuantumは、その使用を制限する共通の属性を有する:操作単位は、細胞膨張期間を通じて細胞の単一のバッチによって占有され、したがって、各ユニット11によって製造することができるバッチの数を制限する。自動化へのモジュラーアプローチは、商業製造プロセス12、13をシミュレートする複数のモジュラーユニットを有する製造チェーンを作成することです。このアプローチは、培養装置と細胞洗浄装置を分離し、これにより製造効率を最大化することができる。理想的な処理装置は、製造ニーズ12に適応性と拡張性を備えたものであろう。
1970年代にさかのぼる逆流遠心分離(CFC)技術は、細胞処理14に長い歴史を持っています。遠心力と逆流力のバランスをとることで細胞濃度と分離を実現します。典型的には、細胞懸濁液は、遠心力を受けながら一定の流量下で細胞チャンバの狭い端から入る(図1A)。流体の流れは遠心力とは逆の方向に発揮される。これは、細胞チャンバ内に勾配を形成する逆流力と呼ばれる。逆流力は、細胞チャンバーが円錐形の細胞チャンバの先端から広がるにつれて減少します。より高密度で大きな直径を持つ細胞は、より高い沈下速度を有し、したがって、それらは円錐形の細胞チャンバーの先端に向かって力平衡に達する。より小さい粒子は、チャンバーの基部に向かって平衡に達するか、またはチャンバーに保持するには小さすぎて洗い流される。CFC技術は、樹状細胞療法のための単球を単球を分離するなどの血液アペレーシス製品の処理における応用で主に知られている15、16。緩衝液交換の面では、CFC技術は大規模な製造17年にのみ適用され、自家細胞療法の小規模な製造にはまだ使用されていません。
小規模なセル製造に適した装置の必要性に対処するために、自動化されたCFC装置(材料表参照)が最近開発された。自動セル処理装置は、逆流遠心分離技術を使用して細胞破片を除去し、バッファ交換を容易にします。この装置は細胞移動袋に無菌接続することができる単一使用キットとの緩衝交換を行い、細胞は無菌の封入されたシステムの中で処理することを可能にする。ここでは、自動プロトコルで哺乳動物細胞培養物の緩衝交換を行うカウンターフロー遠心装置の使用を検討する。本研究では、ユルカト細胞と間葉系間質細胞(MSC)を用いて緩衝交換プロトコルを試験し、それぞれ非付着細胞型と付着細胞型をモデル化した。ユルカート細胞は、急性T細胞白血病19、20の研究にしばしば使用される不死化T細胞である。MSCは、広範囲の疾患9に対するヒト臨床試験で研究されている成体幹細胞である。

<table><tbody><tr><td>20 ml ルアー ロック シリンジ</td><td>BD</td><td>302830</td><td></td></tr><tr><td>20% ヒト血清アルブミン (HSA)</td> <td>CSL ベーリング</td><td>AUST R 46283</td><td></td></tr><tr><td>4-(ジメチルアミノ)ベンズアルデヒド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>156477-25g</td><td></td></tr><tr><td>500ml IV 生理食塩水バッグ</td><td>フレゼニウス カビ</td><td>K690521</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質-抗真菌剤</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィック 15240112</td><td></td><td></td></tr><tr><td>自動セルカウンター (Countess)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counting chamber slides</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>Cell stimulation cocktail (500x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4970-93</td><td></td></tr><tr><td>Cell transfer bags</td><td>Terumo</td><td>T1BBT060CBB</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS)</td><td>Promega</td><td>G3582</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>DMEM: F12 メディア</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック サイエンティフィ</td>ック <td>11320082</td><td></td></tr><tr><td>EnVision プレートリーダー</td><td>パーキン エルマー</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (FBS)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>サイエンティフィック 10099141</td><td></td></tr><tr><td>ヒト インターロイキン 2 (IL2) キット</td><td>パーキン エルマー</td><td>Al221C</td><td></td></tr><tr><td>ルアー(メス)フィッティング</td><td>CPC</td><td>LF41</td><td></td></tr><tr><td>PCラップトップまたはPCタブレットデバイス</td><td>ASUS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>プレートリーダー(SpectraMax i3)</td><td>分子デバイス</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒトIFN-&γ;</td><td>PeproTech</td><td>300-02</td><td></td></tr><tr><td>ロテア 向流遠心分離機 細胞処理装置</td><td>Scinogy</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ロテア 使い捨て処理キット</td><td>Scinogy</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>RPMI培地</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィック 11875119</td><td></td><td></td></tr><tr><td>手術用ハサミ</td><td>ProSciTech</td><td>420SS</td><td></td></tr><tr><td>トリクロロ酢酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6399-250g</td><td></td></tr><tr><td>トリパンブルーステイン</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン消化酵素(TrypLE Express Enzyme)</td><td>サーモフィッシャー・サイ</td>エンティフィック <td>12604013</td><td></td></tr></tbody></table>

小規模セル処理のための自動カウンターフロー遠心システム

Automated Counterflow Centrifugal System for Small-Scale Cell Processing

遺伝子および細胞ベースの治療法の商業化を成功させるには、費用対効果が高くスケーラブルな製造プロセスが必要です。バッファー交換と製品濃度は、ほとんどの製造プロセスに不可欠なコンポーネントです。ただし、製品開発の初期段階では、これらの手順は手動で実行されることがよくあります。バッファ交換のための手動行き止まり遠心分離は、手間がかかり、コストがかかり、スケーラブルではありません。閉じた自動化システムは、この面倒なステップを効果的に排除できますが、実装は困難な場合があります。ここでは、小規模から中規模の細胞処理に適した新開発の細胞処理装置を紹介し、手動処理と大規模自動化のギャップを埋めることを目的としています。このプロトコルは、流量と遠心分離速度を変更することで、さまざまなセルタイプやプロセスに簡単に適用できます。当社のプロトコルは、手動プロセスと比較して、処理時間が短い高いセルリカバリを実証しました。自動化されたプロセスから回収された細胞はまた、その増殖速度を維持した。装置は緩衝交換、細胞製剤および凍結保存のようなステップを収容するために閉じた製造プロセスのモジュラー部品として適用することができる。

このプロトコルでは、Jurkat セルと MSC を代表的な例として使用して、自動バッファー交換プロセスを示しました。この過程で、JurkatセルとMSCは、流量を制御する遠心力とポンプ速度の差を伴う同じ処理ステップを共有しました(表1)。図2は、緩衝交換処理中に流動細胞床がどのように現れるかについてカメラによって撮影された代表的な画像を示す。通常、流動セルベッドは図2Aの画像に似ており、細胞がチャンバーの先端に小さなスペースを持つ円錐の中央と前方に向かって蓄積し、細胞が蓄積せず、細胞負荷入口の開口部が見える。流動細胞床は、異なる粘度または密度にある新しい緩衝液を導入する際に圧縮され得る(図2B)。このプロトコルでは、ポンプ速度を洗浄工程開始時に30~35mL/minから20 mL/minに下げた。チャンバーが新しい緩衝液で満たされると、ポンプ速度はチャンバの...

自動化は、セル製造におけるアップスケーリングとコスト管理の鍵となります。本稿は、小規模バイオプロセッシングのための緩衝交換および細胞濃度ステップを自動化するための逆流遠心細胞処理装置の使用について説明する。

Successful commercialization of gene and cell-based therapies requires manufacturing processes that are cost-effective and scalable. Buffer exchange and ...

このプロトコルは、小規模セル製造のための閉じた自動バッファ交換と濃度のためのソリューションを提供します。重要なことに、バッファー交換は、高い回収と濃縮物の非常に少量の配信で行うことができる。新規ユーザーは、すべての自動化手順に従うのに苦労する可能性があります。これらのステップのプログラミングを練習し、中程度でテスト実行を行うことは、デバイスに慣れる良い方法です。バッファー交換を開始する前に、クラス2の層流ヘッドで、注射器と針の組み立てを使用して、500ミリリットルの生理食塩水袋から50ミリリットルの生理食塩水を除去します。このボリュームを20%ヒト血清アルブミンの50ミリリットルに置き換え、その培養容器から目的の細胞を収穫する。カウント後、シリンジを使用してセルを転送バッグにロードし、Luerロックを使用して転送バッグを使い捨て処理キットに接続します。次に、以前に準備した洗浄バッファーの袋を、使い捨て加工キットに接続します。自動バッファ交換を設定するには、デバイスのグラフィックユーザーインターフェイスを開き、スタートボタンをクリックします。新しいプロトコルを作成するには、[新規] をクリックし、[コントロール] をクリックして開閉するバルブ、遠心およびポンプ速度、ポンプ方向、およびアクション トリガを選択します。すべてのパラメータが設定されたら、[保存]をクリックします。接続されている適切なバッグをデバイスに掛け、単独使用処理キットを機械に置きます。次に、接続ボタンをクリックして、保存されたプログラムをダウンロードします。再生ボタンが点灯すると、プロトコルを開始する準備が整います。自動バッファ交換を実行するには、転送バッグチューブの手動クランプを開き、[開始]をクリックしてバッファ交換プログラムを開始します。オートメーションステップ6の終わりに、プロセスは現在空の袋の空気によって気泡センサーのトリガーのために一時停止します。バッグが空の場合は、次の手順に移動する次のボタンを押します。自動処理が完了したら、チューブクランプをすべて閉じて、デバイスのドアを開けます。次に、デバイスから使い捨てキットを取り出し、シリンジを取り外して、後続の分析のために細胞を収集できるようにします。通常、流動化された細胞床は、この画像に示されるように表示され、細胞は真ん中に蓄積され、コーンの前方に向かって、細胞が蓄積しないチャンバーの先端の小さなスペース、および細胞ローディング入口内の目に見える開口部を持つ。流動セルベッドは、異なる粘度または密度にある新しいバッファーを導入する際に圧縮され得る。死んだ細胞が小さく、軽く、流量を増やすことによってチャンバーから強制的に出すことができるので、高い流量が生細胞のために選択するために適用されるかもしれない。バッファ交換処理時間の自動化処理は、手動バッファ交換処理の処理よりも短い。この分析では、手動プロセスと自動化プロセスの間の回復率は、テストされた細胞の両方のタイプで類似しており、細胞の生存率はどちらのプロセスの影響も受けませんでした。回収された細胞は、処理の種類に関係なく、同様の増殖速度、サイトカインを産生する能力、および表意体活動を示した。このプロトコルはガイドラインとしてのみ機能するため、ユーザーはセルの種類とバッファーに応じて流量と遠心速度をプログラミングする必要があることを覚えておくことが重要です。バッファー交換は、細胞培養の拡大または凍結保存および製剤に従い得る細胞製造における中間工程である。目標は、プロセス全体を囲む方法を開発することです。カウンターフロー遠心分離は非常に汎用性の高いプラットフォームです。今後の研究では、死細胞除去や単核細胞分離などの細胞選択における応用を探る。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

我々は、マイクロスケール細胞刺激実験のために自動細胞培養と尋問プラットフォームを開発した。プラットフォームは、栽培と細胞の小集団を刺激し、分子解析のための溶解物の回収で、シンプルで汎用性の高い、かつ正確なコントロールを提供しています。プラットフォームはよく貴重な細胞および/または試薬を使用した研究に適しています。...

マイクロスケール細胞刺激のための実験のための多目的自動化プラットフォーム

このプロトコルは、マイクロ流体デバイスを使用して自動化された小容量(0.15–1.5...

マイクロ流体精密小容量サンプル処理のためのプラットフォームとアコースティックマイクロデバイスで区切り生物学的粒子サイズのためのその使用

ここでは、高効率のシングルセルの単離と長期のクローン培養を可能にする新しいマイクロウェル設計コンセプトを利用したマイクロ流体プラットフォームを使用して、単一細胞を分離および培養するためのプロトコルを紹介します。...

ハイスループットシングルセルの単離および培養のためのマイクロ流体プラットフォーム

このプロトコルは、非結合粒子を効率的に枯渇してマイクロ/ナノ粒子操作された細胞を精製するために、慣性マイクロ流体ベースのバッファ交換戦略の使用を記載しています。...

干渉のないマイクロ/ナノ粒子の細胞工学のためのマイクロ流体緩衝液交換

このプロトコルでは、異なる細胞周期の段階に主な急性リンパ芽球性白血病細胞を分離する遠心浄化の使用について説明します。...

遠心浄化によって異なった細胞周期の段階で主に急性リンパ性白血病細胞の調製

本稿では、細胞プロセスにおける溶質の分泌・吸収速度のダイナミクスを測定するための低コストのマルチチャネル灌流細胞培養システムを構築・運用する方法を提示する。システムはまた、細胞を動的刺激プロファイルにさらすこともできる。...

動的細胞培養のための出口分画と統合されたマルチストリーム灌流バイオリアクター

このプロトコルは、エアスプレーノズルのサイズ、シース液の圧力、サンプルフロー圧力、電圧、ゲイン、およびトリガーしきい値パラメータを最適化することにより、小さな細胞外小胞の迅速かつサイズ固有の分離方法を提供します。...

低分子細胞外小胞のハイスループット単離および精製のためのフローサイトメトリーソーティングパラメータの最適化(英語)

ここでは、向流遠心分離システムを使用して、多層フラスコから接着細胞を密閉半自動方式で回収するためのプロトコルを紹介します。このプロトコルは、既存のステップにほとんど変更を加えることなく、他の細胞増殖プラットフォームから接着細胞と浮遊細胞の両方を回収するために適用できます。...

クローズド半自動ワークフローを用いた臨床応用のためのヒト間葉系幹細胞処理

細胞外小胞は生物医学的応用に大きな期待を寄せていますが、現在の単離法は時間がかかり、臨床使用には実用的ではありません。本研究では、大量の生体液から細胞外小胞を最小限のステップで連続的に直接単離できるマイクロ流体デバイスを紹介します。...

二股A4Fマイクロ流体デバイスを用いた大量サンプルからの細胞外小胞のシングルステップ分離(英語)

このプロトコルは、プラスミドDNA抽出を加速するための費用対効果の高い方法を説明しています。標準的なスイングバケットプレートローターに対応したカスタム3Dプリントラックを使用することで、研究者は最大48本のキャップ付きスピンカラム、または最大116本のスピンカラムを同時に処理でき、手動のマイクロ遠心分離機法と比べて取り扱い時間を大幅に短縮できます。...

24ウェルラックを用いた中スループットカラムDNA抽出

学ぶ 小規模細胞製造のための自動カウンターフロー遠心システムを用いたバッファー交換と濃縮の手法。高回収率と少量濃縮製品の回収を実現し、細胞製造の効率化に貢献します。

小規模セル処理のための自動カウンターフロー遠心システム

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