Name: ジメチルベンズを用いた化学的誘発性皮膚発癌モデル a アントラセンと12-O-テトラデカノイル・ホルボル-13-酢酸(DMBA-TPA) (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 12 s
Description: 学ぶDMBA-TPA二段階皮膚発癌モデルで炎症と腫瘍発生機構をマウスで解析する方法。このモデルはヒト扁平上皮癌と類似した病理を示し、免疫系や血管新生の役割を研究するのに適している。

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この作品は、フィンランドアカデミー(助成金25013080481および25013142041(I.J.)、286377および295814(M.P.)、287907(T.J.))、パイビッキとサカリ・サルベルク財団(M.P.)によって資金提供されました。 T.J.)、フィンランド医学財団(T.P.)、競争国家研究タンペレ大学病院の専門家責任領域(助成金9V049および9X044(M.P.)、9X011および9V010(T.J.))、フィムラボ研究所の専門家責任領域の競争国家研究ファイナンス(助成金X51409(I.J.))、テイズ支援財団(I.J.、M.P.、T.J.)、タンペレ結核財団(I.J.、M.P.、T.J.)、フィンランド文化財団(M.V.)、パウロ財団(T.P.)、フィンランド癌協会(M.P.)、エミール・アールトネン財団(T.P.)。

ここで説明するプロトコルは、フィンランドの国家動物倫理委員会(プロトコル番号ESAVI/23659/2018)によって承認されています。
1. 実験動物・試薬・機器
<ol><li>年齢と性別に一致したマウスを使用します。ほとんどのマウスの皮膚は、その2歳の周りのテロゲン(休息段階)にあるので、7〜9週齢で研究を開始します。</li>
	<li>研究中に動物の行動を観察し、彼らが戦う場合は、しばしば男性と起こる場合は、それらを別々に収容します。けんかは皮膚の切り傷を引き起こし、腫瘍形成を促進する。雌マウスは、攻撃的な行動が少ないため好ましい。典型的な実験群の大きさは、群24、25、26、27につき8〜20匹の動物の間で変化する。 メモ:以前の研究で見られた生物学的分散に基づく電力計算は、十分に大きなグループサイズを選択するのに役立ちます。この記事の例として使用される株には、Balb/c および C57BL/6 が含まれます。しかし、SENCARやFVBなどの他の多くのマウス株は、DMBA-TPAモデルだけでなく、ウィスターとスプレイグ・ドーリーラット2、28、29で使用されています。研究開始前に、動物の仕事の国家または地方委員会からのライセンスが必要です。一般的な福祉に関する考慮事項に加えて、モデル固有のエンドポイントは、典型的には扁平上皮癌(SCC)および皮膚の感染である。アセトン中の腫瘍性化学物質の適用後のかゆみによる皮膚の傷は典型的であるが、そうでなければ動物は不快感の徴候を示すべきではない。定期的に(例えば、月に2倍)体重を量ると、動物の福祉を評価するのに役立ちます。</li>
	<li>DMBAとTPAを使用し、両方ともアセトンで希釈します。DMBAの作動濃度は250 g/Lである。1匹の動物の用量は、アセトンの200μLでDMBAの50μgである。TPAのストック濃度は125g/L、処理濃度は25g/Lです。1匹の動物のTPA用量は、アセトンの200μLで5μgである。 注意: DMBAは飲み込むと有害であり、癌を引き起こす可能性があります。アセトンは急速に蒸発し、可燃性である。めまいを引き起こし、目を刺激する可能性があります。呼吸マスクを使用し、真空の流れの下で作業します。これらの化学物質のいずれかを取り扱った後、手袋を交換してください。個々に換気されたケージは、マウスの収容中に化学物質の拡散を防ぎます。塗布後、DMBAの取り扱いに使用するピペットチップを収集し、危険廃棄物として処分してください。 メモ:DMBAは光から保護する必要があります。希釈されたTPAは−20°Cに貯蔵され、好ましくは光から保護される。</li>
	<li>次の機器を調達する:スケール、毛皮のための通常の剃毛器、適切なサイズのピペットとヒント、通常の定規、デジタルカメラ、メモ帳とパンピロマを記録するためのペンまたはコンピュータ、吸入麻酔システムまたはマウス拘束器背面の開口部と、マウスを犠牲にするための二酸化炭素ナルコシスシステムを備えています。</li>
</ol>2. 皮膚乳頭腫の誘導と促進
<ol><li>背中の皮膚を剃り、動物の重さを量る。後で、化学暴露時ではなく、必要なときにはいつでも皮膚を剃ります。 メモ:乳頭腫の周りを剃るときは注意し、皮膚に切り傷を与えないでください。潜在的な体重減少に気づくには、2週間ごとに各動物の体重を量ります。</li>
	<li>毛皮を削った後、ピペット48時間を使用して、シェービングエリアに200μLのアセトンに50μgのDMBAを塗布します。必要に応じて、光吸入麻酔またはマウス拘束剤を使用して動物を拘束する。</li>
	<li>7日後、最初のTPA用量を与える。週2xのピペット、好ましくは月曜日、木曜日または火曜日と金曜日に、200°Lのアセトンに5μgのTPAを局所的に適用します。</li>
	<li>毎週乳頭腫を数え、記録し、撮影します。直径1mmを超える触知可能な塊は、それが1週間より長くとどまる場合、乳頭腫とみなされます。地図上の個々の乳頭腫をマークし、毎週そのサイズをリストします。デジタル写真を保存します。</li>
</ol>3. 動物の犠牲とサンプルコレクション
<ol><li>腫瘍応答が高原に達するまで治療を続ける。一般に、乳頭腫の負担は、使用されるマウス株に応じて、開始後10〜20週増加すると予想される。高原は15~20週間で予定されています。乳頭腫の小さな割合(3%以下)20~50週間以内にSCCに発展する可能性があります。</li>
	<li>最後のTPAアプリケーションの後に動物24時間を犠牲にします。子宮頸部脱臼または別の適切な方法で二酸化炭素ナルコシスを使用してください。</li>
	<li>研究の質問に応じて、動物30、31から適切なサンプル材料を収集する。<ol>
<li>例えば、犠牲の前に血液サンプルを採取し、血漿を分離する。</li>
		<li>免疫ヒストケミストリー(IHC)染色のための皮膚の切断片(例えば、ヘマトキシリンおよびエオシン、増殖または炎症性細胞)。</li>
		<li>生検パンチを使用して、遺伝子発現(例えば、qPCR)および/またはタンパク質分析(例えば、ウェスタンブロットまたはELISA)のために乳頭腫組織または非乳頭腫(治療)皮膚のいずれかで皮膚片を収集します。</li>
		<li>免疫細胞集団のより詳細な分析が望まれる場合は、フローサイトメトリー分析のために脾臓と皮膚を排出するリンパ節の一部を収集します。さらに分析するために、表皮層と真皮層を分離することもできます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 統計
<ol><li>乳頭腫フリー時間のカプランマイヤー生存曲線を描き、生存のためのマンテルコックスログランクテストを使用します。週あたりの乳頭腫の数の線形曲線を描きます。これはカウント データであるため、非線形回帰モデルを使用します。必要に応じて統計学者に相談してください。</li>
</ol>

著者たちは何も開示する必要はない。

DMBA-TPA誘発性皮膚癌は、非常に再現性が高く、開始から悪性腫瘍への腫瘍進行に関する情報を提供するため、最も一般的に使用される癌モデルの1つである。主要な結果測定は、乳頭腫形成が容易かつ確実に定量的である。このモデルは、腫瘍開始(腫瘍フリー生存)と進行(腫瘍数とサイズ)の両方に同時に対処する。このモデルは、潜在的な治療薬などの異なる化合物の研究、および遺伝子組み換え動物の腫瘍進行に対する個々の遺伝子の影響を研究するのに適しています。任意のひずみにモデルを適用する場合は、既存の文献を研究して、モデル内でひずみが反応する方法のアイデアを得ることをお勧めします(例えば、最初の乳頭腫がどれくらい速く現れるかを調べるために)。遺伝子組み換えマウスを使用する場合は、野生型のリターメイトを常に使用することをお勧めします。DMBAまたはTPAのいずれか、またはその両方をアセトンで置き換えるなどの潜在的な追加制御の使用は、DMBAまたはTPAのいずれかを除去するか、またはその投与順序を反転させることが乳頭腫増殖34の誘導をもたらす可能性が非常に低いことを知っているので、非常に議論の余地がある。腫瘍開始を...

癌は世界の主要な死因の一つである。したがって、疾患のより良い理解を得るために、また潜在的な治療アプローチを探求するために、信頼性の高い実験疾患モデルを開発する必要があります。皮膚癌の発症を研究するために生体内モデルで最も一般的に使用される実験の1つは、化学的に誘導された二段皮膚発癌モデル1、2である。このモデルは、免疫細胞浸潤や血管新生などの特定の事象に加えて、腫瘍の開始、促進、および進行を研究するためのツールを提供します。
二段皮膚発癌モデルを使用するために、マウスの背部皮膚は、一緒に腫瘍形成を誘導する2つの異なる化学物質で治療される。モデルは、変異原、DMBAの低用量で開始され、続いて腫瘍プロモーターへの長期暴露、TPA3(図1)。DMBAは、表皮細胞および原発性角化細胞幹細胞4、5、6、7のDNAと共有付加を形成することによりDNAをランダムに変異させる。これらのランダム突然変異の一部は、Hras1(KrasおよびNrasの突然変異も検出される)のようなプロトオンコジーンで起こり、プロトオンコゲ遺伝子を腫瘍遺伝子に変換すると、適切な刺激の下で腫瘍形成を促進する。TPAは、順番に、最も一般的に使用される腫瘍増殖促進剤である。その分子標的はプロテインキナーゼC(PKC)8である。TPAはまた、モデル9の腫瘍形成に不可欠なWnt/β-カテニンシグナル伝達を活性化する。促進剤への反復および長期暴露は、細胞シグナル伝達の増強、増殖因子の産生の増加、および治療された皮膚におけるDNA合成および炎症性細胞浸潤の増加によって明らかである局所炎症反応につながる。
DMBA-TPAモデルの主要な炎症メディエーターは10.インターロイキン-17A(IL-17A)は、DMBA-TPAモデル11、12において特に腫瘍原性であることが知られている。インターロイキン6(IL-6)との相乗効果で動作し、マクロファージおよび好中球募集13、14に参加しています。さらに、CD4+T細胞および好中球は、DMBA-TPAモデルにおいて腫瘍原性であることが示されている。最後に、マクロファージはまた、モデル15、16、17における腫瘍形成を促進することができる。
促進段階では、変異細胞の細胞増殖が増強され、表皮の持続的な過形成が1に維持される。これは、10〜20週で皮膚の乳頭腫の発症につながり、その後乳頭腫は悪性腫瘍に変換し始め、扁平上皮癌(SCC)2。しかしながら、乳頭腫の10%未満は悪性腫瘍に進行するが、この割合はマウス2、18の遺伝的背景にも依存する。何十年もの間、悪性腫瘍につながる腫瘍で最初にどのような種類の細胞が変異したのかは分かっていなかったが、良性乳頭腫19、20と比較した場合、悪性腫瘍の明らかに明確な特徴を報告していた。しかし、最近の研究は、DMBA-TPAモデル21における腫瘍形成のクローン起源に関する我々の理解を大幅に高めています。22.23.骨髄由来上皮細胞および毛包幹細胞の両方が腫瘍形成22に寄与することが実証された。ステージ特異的系統追跡研究は、良性乳頭腫がモノクローナル起源であることを明らかにしたが、彼らは新しい上皮細胞集団21、23を募集する。しかし、細胞クローンの1つだけは発癌のドライバーとして機能します。それはフラス突然変異23を含んでいます。癌形成への進行は、クローンススイープ23に関連している。
発がん性DMBAは乳頭腫形成を開始し、TPAは腫瘍の増殖を促進する。したがって、腫瘍開始は、TPA治療期間の前に実験を中断することによって、促進とは別に研究することができる。腫瘍の進行が毎週研究されているように、それは研究全体を通して詳細な腫瘍の成長分析のための素晴らしい機会を提供しています。腫瘍は外部化学物質によって生成されるため、生殖細胞系列の発癌性突然変異は不要である。従って、遺伝的背景(例えば、ノックアウト/トランスジーン対野生型)が腫瘍形成に及ぼす影響を研究することは、簡単な2である。要するに、DMBA/TPA皮膚癌モデルは、腫瘍進行における免疫系の役割を研究するだけでなく、腫瘍の開始および促進ステップを独立または相互に依存的に評価するための特に有用なアプローチである。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60445/60445fig1a.jpg"> 図1:DMBA-TPA誘発皮膚発癌モデルの概要発がん性DMBAは、モデルの開始段階でDNA突然変異を誘導するために局所的に適用される。増殖促進剤TPAは、促進段階の間に細胞増殖を増強するために週2倍投与され、皮膚における乳頭腫の発症につながる。動物は、乳頭腫応答が高原に達した後、マウスの遺伝的背景に応じて、通常15〜20週以内に犠牲にされる。乳頭腫のごく一部は、さらに20〜50週間以内にSCCに発展することができます。開始および早期プロモーション段階の初期の事象を研究するために、サンプルを収集することができる(例えば、2番目のTPAアプリケーションの直後)。19週間の治療後のC57BL/6マウス皮膚上の乳頭腫の代表的な写真およびヘマトキシリンおよびエオシン染色断面が示されている。スケール バー = 0.1 mm.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60445/60445fig1large.jpg" target="_blank">ここをクリックすると、この図の大きなバージョンが表示されます。</a>

<table><tbody><tr><td>1000 ul RPT XL 目盛り付きフィルターチップ (滅菌済み), リフィル</td><td>Starlab</td><td>S1182-1730-C</td><td></td></tr><tr><td>300 ul RTP 目盛り付きフィルターチップ (無菌), リフィル</td><td>Starlab</td><td>S1180-9710-C</td><td></td></tr><tr><td>7,12-ジメチルベンズ[a]アントラセン (DMBA)</td><td>シグマ</td><td>D3254-100MG</td><td>飲み込むと有害で、がんを引き起こす可能性があります。光から保護して保管してください。</td></tr><tr><td>アセトン</td><td>シグマ</td><td>1000141011</td>は<td>急速に蒸発し、引火性です。</td></tr><tr><td>Attane vet 1000 mg/g</td><td>Piramal Critical Care Limited</td><td></td><td>吸入用液体イソフルラン</td></tr><tr><td>電池式クリッパー Isis</td><td>Albert Kerlb GmbH</td><td>GT421</td><td>毛皮を剃る</td></tr><tr><td>CONTRAfluran-Restgasfilter</td><td>ZeoSys GmbH</td><td></td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>Linex Nature N1030 定規 30 cm</td><td>ステープルズ ビジネスアドバンテージ</td><td>60383</td><td>乳頭腫</td></tr><tr><td>の測定用中型 CO2 チャンバー 300 x 200 x 200mm - Red</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN045AR</td><td>犠牲のために</td></tr><tr><td>Mekasoft</td><td>Mekalasi</td><td>23008</td><td>テーブルカバー</td></tr><tr><td>マウス (Balb/c JRj)</td><td>Janvier labs</td><td></td><td>他の株も可能</td></tr><tr><td>マウス (C57BL/6JRj)</td><td>Janvier labs</td><td></td><td>他の株も可能</td></tr><tr><td>パナソニック Lumix DMC-FS5 デジタルカメラ</td><td>パナソニック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>メルク</td><td>30525-89-4</td><td>組織学サンプルの場合</td></tr><tr><td>ホルボール 12-ミリスチン酸 13-アセテート別名 12-オテトラデカノイルホルボール-13-アセテート (TPA)</td><td>エンツォ</td><td>BML-PE160-0001</td><td></td></tr><tr><td>精密バランス PLJ-C/PLJ-G</td><td>KERN &SOHN GmbH</td><td>PLJ 600-3CM</td><td></td></tr><tr><td>プリセット CO2 System-2 Chamber-S/S ハウジング</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN044BX</td><td>犠牲用</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Qiagen</td><td>76104</td><td>核酸サンプル用</td></tr><tr><td>タクタピペット 100-1000 ul</td><td>ザルトリウス</td><td>LH-729070</td><td></td></tr><tr><td>タクタピペット 20-200 ul</td><td>ザルトリウス</td><td>LH-729060</td><td></td></tr><tr><td>UNO 麻酔キーフィラー</td><td>Scintica instrumentation株式会社</td><td></td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>マウス用UNOフェイスマスク、</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>UNO FM2200 流量計</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>UNOガス排気ユニット</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>UNOインダクションボックス</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>麻酔</td></tr><tr><td>用UNO200VAP気化器</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>麻酔用</td></tr></tbody></table>

ジメチルベンズを用いた化学的誘発性皮膚発癌モデル[a]アントラセンと12-o-テトラデカノイル・ホルボル-13-酢酸(dmba-tpa)

Chemical-Induced Skin Carcinogenesis Model Using Dimethylbenz[a]Anthracene and 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

癌は最も壊滅的な人間の病気の一つです。実験的な癌モデルは、腫瘍の進行を促進する上で異なる細胞型および遺伝子の複雑な相互作用に関する洞察を得て、異なる治療アプローチの有効性をテストするためのプラットフォームを提供するために重要である。最も一般的に使用される実験的炎症性癌モデルの1つは、DMBA-TPA二段皮膚発癌モデルである。腫瘍形成は、7,12-ジメチルベンズ(a)アントラセン(DMBA)と12-O-テトラデカノイルホルボル-13-酢酸(TPA)の2つの異なる化学物質の局所適用によってこのモデルに誘導され、一緒に皮膚に乳頭腫形成を引き起こす。主な結果は皮膚における乳頭腫形成であるため、モデルは、腫瘍の開始(腫瘍を含まない生存)と腫瘍進行(目に見える腫瘍の数と大きさ)の両方に対処するための理想的で信頼性が高く、再現可能な方法です。DMBA-TPA治療の効果は炎症機構を介して伝達され、このモデルは腫瘍形成における免疫系の役割を研究するのに特に適している。しかし、このモデルは、化学物質を適用できる皮膚および他の表面に制限される。この記事では、モデルを正常に使用するための詳細なプロトコルが提供されています。

主な結果は、治療または遺伝子型群間の生存(すなわち、乳頭腫フリー)時間である。二次的な結果は、各グループの週あたりの乳頭腫の数です(図2)。期待される結果は、乳頭腫の自由時間と実験(2つ以上)群間の乳頭腫の数において統計的に有意な差である。その段階でのグループ間の違いを把握するために、パピロマの数をカウントし、プロモーション(TPA)フェーズ中に曲線を描くことをお勧めします。実験を早く終了しすぎると、統計的に有意な差が隠れる可能性があります。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60445/60445fig2b.jpg"> 図2:DMBA-TPA誘発皮膚発癌モデルの主な結果マウスの皮膚上の乳頭腫の代表的な画像と2つの主な結果。データは、4つの別々の実験から組み合わされた。注:Balb/CおよびC57BL/6マウスを用いた実験は別々に行った...

二段皮膚発癌は、局所的に適用される2つの化学物質によって誘発される。変異原7,12-ジメチルベンズ[a]アントラセン)は、表皮細胞の突然変異を引き起こし、一般的な増殖刺激剤12-O-テトラデカノイルホルボル-13-酢酸の連続的な適用は、皮膚乳頭腫形成を促進する。

ジメチルベンズを用いた化学的誘発性皮膚発癌モデル[a]アントラセンと12-O-テトラデカノイル・ホルボル-13-酢酸(DMBA-TPA)

Cancer is one of the most devastating human diseases. Experimental cancer models are important to gain insight into the complex interplay of different ...

この2段階の皮膚癌モデルは、皮膚癌における炎症の役割の研究を可能にし、腫瘍の進行とは別のプロセスとして腫瘍開始を研究することを可能にする。このモデルの腫瘍形成は化学的に誘導され、ノックアウト株を使用して環境因子または治療候補の効果を研究することを可能にする。このモデルは、がんにおける免疫系と血管新生の役割を研究するのに適しています。これは、ヒト患者における扁平上皮癌と同様の疾患病態を示す。この方法は比較的行いやすいですが、正確なタイミングが不可欠です。発がん性物質であるDMBAを取り扱う際には、適切な安全対策を講じることも重要です。実験を開始する前に、戦いと皮膚病変を避けるために、別々のケージに任意の積極的な7〜9週のマウスを収容します。皮膚乳頭腫誘導の場合は、まず実験動物の背中の皮膚を剃り、マウスを個別に計量する。シェービングの48時間後、ピペットを使用して、各麻酔マウスの剃った領域に200マイクロリットルのDMBAを50マイクログラム塗布します。皮膚乳頭腫の促進のために、DMBAの適用の7日後に、実験の終わりまで週に2回200マイクロリットルのアセトンで5マイクログラムのTPAで皮膚を治療する。乳頭腫の動物を調べ、毎週地図上の個々の乳頭腫の大きさを写真に記録します。直径1ミリメートルを超える触知可能な質量は、1週間以上残っている場合は乳頭腫と見なされます。腫瘍応答が高原に達すると、最後のTPAの適用の24時間後に動物から適切なサンプル材料を収穫し、免疫組織化学分析のために皮膚の完全な厚さの部分を採取する。生検パンチを使用して、乳頭腫および非乳頭腫の皮膚サンプルから遺伝子発現およびタンパク質アニールスを採取し、メスを使用して乳頭腫および非乳頭腫皮膚から断片を収集して免疫学的分析を行います。次に、皮膚のリンパ節を排出し、必要に応じてフローサイトメトリック分析のために脾臓の一部を収集します。乳頭腫の遊離時間と実験群間の乳頭腫の数の統計的に有意な差は、典型的にはDMBA TPA腫瘍モデルにおいて観察される。組織学的分析は、乳頭腫の構造、皮膚の形態、または目的の免疫細胞の浸潤を研究するのに適しています。皮膚にDMBAとTPAを均等に塗布し、一定の間隔でTPAを適用することが不可欠です。また、定期的に乳頭腫を数える事が重要です。腫瘍形成の数と時間に影響を与えるメカニズムは、免疫組織化学、フローサイトメトリー、定量PCR、タンパク質分析など、さまざまな方法を用いて研究することができます。この従来の技術は、腫瘍の開始および進行に対する異なる遺伝子、環境因子、または目的の治療薬の効果を研究するために容易に適応し、適用することができる。DMBAは発がん性があり、アセトンはすぐに蒸発するので、この技術を行う際には注意が必要です。適当な呼吸マスクとフローキャビネットの使用をお勧めします。

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Cancer Research

がん研究

私たちは迅速かつ一貫して人間の大腸炎に見られるものに形態学的および分子の類似点をもつマウスの大腸腫瘍を発生するプロ炎症剤デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）の3つのサイクルが続く遺伝毒性物質のアゾキシメタン（AOM）の投与にプロトコルを実証関連癌。...

アゾキシメタン（AOM）とデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）によるモデリング大腸炎関連癌

光線力学療法(PDT)は、肺がん治療のための非侵襲的かつ非外科的な方法です。光増感剤は腫瘍組織に選択的に蓄積し、酸素と適切な波長の光の存在下で腫瘍細胞死を引き起こします。このプロトコルビデオでは、PDTベースの方法を使用して、肺がん細胞の潜在的な光増感剤の光毒性の可能性を評価します。...

In vitro光毒性アッセイ:肺がん細胞における光増感剤の光毒性の可能性を評価するためのPDTベースの方法

このビデオでは、化学物質の局所適用による腫瘍開始を研究するために、2段階の皮膚発がんを誘発する手順を説明しています。最初のステップでは、変異原であるDMBAをマウスモデルの皮膚に適用して、幹細胞に変異を引き起こすことで腫瘍形成を開始し、続いて成長刺激剤であるTPAを適用して皮膚乳頭腫の形成を促進します。...

化学的に誘発された2段階皮膚発がんモデル:皮膚癌の実験的In vivoマウスモデル

このビデオでは、ヒト化マウスモデル(人間の皮膚を模倣したマウスモデル)でUV感度を測定する方法を説明しています。皮膚に紅斑や浮腫を引き起こす可能性のある紫外線の最小紅斑線量(MED)を決定します。この方法は、UV感受性を低下させるために使用される薬物の有効性を見つけるのに役立ちます。...

最小紅斑性用量アッセイ:マウスモデルにおけるUV感度の測定方法

発癌は、癌細胞とがん微小環境との相互作用を伴うプロセスである。分子事象を分析するためには、癌の開発中の異なる段階で異なる細胞集団を単離する必要がある。基底細胞癌のマウスモデルを用いて、発癌の間に、細胞分析のためのプロトコールを述べる。...

細胞集団分析スキン発がん中

表皮のメラニンは、色白の紫外線感受性人間のマウスモデルにおいてフォルスコリンの局所適用によって誘導される。最小紅斑量（MED）アッセイによって測定されるように強く、UV媒介炎症（日焼け）から保護暗く、皮膚および表皮におけるcAMPレベルの薬理学的操作。...

ヒト化マウスモデルにおける表皮のメラニンと保護に対する日焼け薬理学的誘導

このプロトコルは、ギャップ結合チャネルを介して細胞間通信を測定メスローディング蛍光色素転写技術が記載されています。ギャップジャンクション間の通信は、組織の恒常性を維持し、この細胞シグナル伝達の破壊は健康への悪影響がありますされる主要な細胞プロセスです。...

ギャップ結合細胞間コミュニケーション：毒物および毒素の有害効果を評価するための機能バイオマーカー、および天然物の健康上の利点

ここで潜在的な糖尿病誘発異物化学物質を識別するために、化学物質によって ROS の帰納法をスクリーニングするためのマウスの膵島細胞を分離するためのプロトコルを提案する.

マウスの膵島細胞ベースの糖尿病誘発環境化学物質のスクリーニング

以下の手順は、マウス背部皮膚における melanocytic...

変異体メラノサイト幹細胞からのマウス黒色腫開始の空間的および時間的制御

このプロトコルの目的は、マウスの皮膚で非致死レベルの活性酸素種(ROS)の一時的なin...

切り替え可能なプロトポルフィリンIX依存性活性酸素種のin situ光生成によるマウス皮膚における幹細胞ニッチの刺激と組織再生

tBHPを用いたHNMの早期老化誘導のための標準化プロトコル、成長停止、SA-βガラクトシダーゼ活性、SASP因子などの主要な老化マーカー解析の標準化プロトコル。...

テルトブチル過酸化物を用いた一次ヒトメラノサイトにおけるストレス誘発性早期老化を誘導する標準化されたプロトコル

学ぶDMBA-TPA二段階皮膚発癌モデルで炎症と腫瘍発生機構をマウスで解析する方法。このモデルはヒト扁平上皮癌と類似した病理を示し、免疫系や血管新生の役割を研究するのに適している。

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