Name: 過期治療アプリケーションを用いてラット頸動脈圧制御区分バルーン損傷 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: 学ぶラット頸動脈圧制御バルーン損傷法。血管新生内膜形成と治療介入効果を定量化し、臨床血管形成術のメカニズム解明に貢献する実験モデルです。

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N.E..Bは、国立環境衛生研究所(5T32ES007126-35、2018)と米国心臓協会の博士前フェローシップ(20PRE35120321)からの訓練助成金によって支援されました。E.S..M.Bは、UNC臨床・トランスレーショナルサイエンス賞K12奨学生プログラム(KL2TR002490、2018)、国立心臓・肺・血液研究所(K01HL145354)の一部の支援を受けたKL2学者でした。著者らは、LSFMを支援してくれたUNC顕微鏡サービス研究所のパブロ・アリエル博士に感謝する。光シート蛍光顕微鏡は顕微鏡サービス研究所で行いました。病理学・検査医学科の顕微鏡サービス研究所は、P30 CA016086がんセンターのコアサポート補助金によって、UNCラインバーガー総合がんセンターに支えられている。

ここに記載されているすべての方法は、ノースカロライナ大学チャペルヒル校の施設動物のケアと使用委員会(IACUC)によって承認されています。
1. 術前の手順
<ol><li>手術器具を殺菌する。手術前に手術器具をすべてオートクレーブ。同じ日に複数の手術を行う場合は、乾燥ビーズ滅菌器を使用して手術の間に器具を殺菌します。</li>
	<li>25%Pluronic-127ゲル(滅菌蒸留水で希釈)で治療を準備します。</li>
	<li>2F Fogartyバルーンカテーテルをインスフレーターに設置し、生理食音溶液で満たされた1mLシリンジにカテーテルのバルーン端を置きます。</li>
	<li>5%のイオブルランを有するチャンバーにラットを入れることによって麻酔を誘発する。<ol>
<li>チャンバーからラットを取り出し、ラットの体重を記録します。腹側首領域に毛皮を剃るためにヘアクリッパーを使用してください。</li>
		<li>5%イソファランでラットをチャンバーに戻し、麻酔の誘導を確実にします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ラットの顔が外科医に向かるように、鼻コーンに顔を挿入し、外科用プラットフォーム上にラットの上に置きます。<ol>
<li>吸入麻酔を1.5%のイオブルランに減らす。4フィートすべてでつま先ピンチ反射で麻酔の深さを確認します。</li>
		<li>手術用プラットフォームに4本の脚をすべてテープで留めます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ヒートランプをオンにします。</li>
	<li>アトロピン(0.01 mg/kg)を皮下に注入して気道分泌物を減らす。</li>
	<li>予防的な痛みの管理のためにカルプロフェン(5mg/kg)皮下に注入してください。抗炎症薬が実験に受け入れられない場合は、ステップ3.2.2および3.2.3を参照してください。</li>
	<li>手術中に角膜が乾燥するのを防ぐために、滅菌綿棒を使用して両眼に潤滑剤の眼軟膏を塗布します。</li>
	<li>70%のエチルアルコールの間で交互に回交する円形の動きで首を3回スワブし、続いて剃った領域の中心から外側にベタジンを回して切開部位を殺菌する。</li>
	<li>0.25%ブピバカインで切開線s.cを浸潤する。</li>
	<li>滅菌手術用器具および消耗品を取り扱う前に、無菌の外科用手袋を着用してください。</li>
	<li>無菌の外科シート上のすべてのオートクレーブ外科器具をレイアウトします。</li>
	<li>無菌7-0プロレン縫合糸の3つの独立した1インチのストランドをカット。</li>
	<li>綿棒とガーゼを外科シートに置きます。</li>
	<li>滅菌された首領域のみを露出する無菌外科シートでラットをドレープする。</li>
	<li>ノーズコーンの一部を露出するシートに小さな開口部を追加で切ります。これは、傷害の間にバルーンカテーテルをテーピングするためのサイトになります。</li>
</ol>2. 手術手順
<ol><li>外科的処置全体の間に、呼吸数を監視することによって麻酔の深さを評価する(速度は一貫しており、正常とみなされるべきである)、また15分ごとにつまみつまみによって。呼吸数が増加するか、つま先ピンチに対する応答がある場合は、外科的操作を一時停止し、イオブルランを最大2.5%まで増加させる。</li>
	<li>一般的な頸動脈(CCA)を公開します。<ol>
<li>ラットの顎骨の間に表面的でまっすぐな縦方向のネックライン切開を行います。切開は約1.5~2cmの長さになります。</li>
		<li>筋肉層が露出するまで、皮膚の下の結合組織を通して切開を行います.皮膚の下の唾液腺を置き換えて、筋肉組織にアクセスする。</li>
		<li>筋肉層と結合組織の間に閉じたはさみを挿入して筋肉から結合組織を鈍く分離し、皮膚を上方に引っ張りながらはさみをそっと開く。</li>
	</ol></li>
	<li>2つの表面筋に垂直に走る第三の筋肉(オモヨイド)が観察されるまで、気管の左側に沿って2つの目に見える筋肉(ステルノヒロイドと胸骨腫)を縦方向に解剖する。</li>
	<li>鉗子を使用して、この垂直筋肉(オモヨイド)と気管の上を走る縦方向筋(ステルノヒョイド)を分離する窓を作ります。気管への鈍い外傷を防ぐために、この分離を穏やかに行います。</li>
	<li>垂直筋肉の下の鉗子に到達し、2つの縦筋を分離し、CCAを露出させるために切断する。</li>
	<li>CCAを解剖する。<ol>
<li>内部頸動脈(ICA)および外頸動脈(ECA)が露出するまで、分岐の近くでCCAを解剖する。</li>
		<li>ECAから分岐する上甲状腺動脈(STA)を解剖する。</li>
		<li>プレカットプロレン縫合糸を使用して、STAとECAをそれぞれの分岐の近くにリゲートします。結び目の片側に縫合糸の大部分を残し、湾曲した止まり糸で各縫合糸をつかむ。</li>
		<li>ICAの周りの解剖を終え、ICAの下および周囲の鉗子に達し、遠位制御を達成するために非破砕の血管クランプを使用する。ICAと一緒に後頭動脈をクランプします。</li>
		<li>CCA近位を分岐に解剖し、迷走神経をCCAから分離することを保証する。</li>
		<li>CCAの下および周囲の鉗子に達し、近位制御を達成するために非破砕の管クランプを使用する。分岐からクランプを5mm以上に配置します。</li>
	</ol></li>
	<li>バルーン損傷を行います。<ol>
<li>各連結動脈枝を保持する湾曲した止血を操縦し、ECAと上位枝の間の分岐を露出させる。</li>
		<li>分岐で組織を穏やかに解剖し、その後、マイクロディションハサミを使用してECAと優れた枝の間の動脈切開を行います。</li>
		<li>綿棒を使用して、CCAからすべての血液を押し出し、動脈切開部位をクリーンアップします。</li>
		<li>膨張していないバルーンカテーテルを動脈切開術を通して挿入し、バルーンの近位端が分岐を過ぎるまでCCAに進みます。</li>
		<li>バルーンがインフレ時に動脈から抜け出さないように、鼻コーンにカテーテルをテープで貼ります。</li>
		<li>ゆっくりと圧力の5気圧に気球を膨らませ、動脈損傷を誘発するために5分間CCAに残します。圧力が5分間一定であることを確認します。</li>
		<li>5分後、バルーンを収縮させ、動脈切開術を通してCCAから静かに取り除きます。</li>
		<li>CCAでクランプを軽く絞ってCCAをフラッシュします。クランプを取り外さない。</li>
		<li>ECA近位を動脈切除術にリゲートし、CCAとICAからクランプを取り外して、CCAからICAへの血流を回復させます。動脈切開術の周りに目に見える出血がなく、CCAが脈動していることを確認してください。</li>
	</ol></li>
	<li>100 μLの治療用またはプルロニックゲル車両を、負傷したCCAに沿って単独で回来して塗布します。CCAの左側に50 μLを塗布し、次に50 μLをCCAの右側に塗布して、損傷した動脈のコーティングを確実にします。</li>
	<li>創傷部位を閉じます。<ol>
<li>余分なプロレン縫合糸をカットします。</li>
		<li>結合組織に沿って中断された4-0または6-0のvicryl層を使用して創傷を閉じます。</li>
		<li>皮膚に沿って4-0ナイロン縫合糸を実行して傷を閉じます。</li>
	</ol></li>
</ol>3. 術後の手順
<ol><li>ラットを暖房ランプの下にケージの半分を持つきれいなケージに一人で入れ、ラットが胸骨の不通を維持するのに十分な意識を取り戻すまで監視します。動物が完全に警戒し、元のケージに戻す前に移動するまで、別のケージにラットを保管してください。</li>
	<li>次の3日間、そして安楽死まで週に3回、ラットを毎日監視する。イソフルランの過剰摂取を用いて安楽死させ、続いて後に、後述するように両側性乳房切除術を行う。<ol>
<li>国立研究研究動物改良&amp;縮小センターを活用して、術後の痛みのレベルを特定します。いずれかの動物が痛みを経験しているか、神経学的妥協を開発しているように見える場合は、すぐに犠牲を払ってください。</li>
		<li>カルプロフェンを受け取らない動物の場合、手術後48時間までに24時間前に飲料水中にアセトアミノフェン6mg/mLを投与する。アセトアミノフェンは、最小限の抗炎症効果と鎮痛を提供します.</li>
		<li>あるいは、抗炎症作用が最小限の他の鎮痛戦略を、ブプレノルフィンまたはブプレノルフィン拡張放出など使用することができる。所属機関の獣医チームに相談してください。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 組織の収穫とイメージング
<ol><li>手術の2週間後、麻酔の過剰摂取によってラットを安楽死させる(5%イソファラン)。あるいは、早期の時点でラットを安楽死させ、動脈損傷応答の様々な側面を分析する。<ol>
<li>呼吸停止が終了すると、安楽死の二次的な方法として両側性乳房間術を行う。</li>
	</ol></li>
	<li>腹部を横切りし、横隔膜と肋骨を通して上方に切り、胸腔を露出させる。</li>
	<li>動脈を浸透させ、固定する。<ol>
<li>左心室を通して重力灌流固定システムに取り付けられた18Gカニューレを挿入します。ベンチトップ(120cmの高さ、91±3 mmHgに相当)に対して灌流システムの高さを印示することによって、ラット間の同等の圧力を維持する。</li>
		<li>湾曲した止止まりを使用して、心室と一緒にカニューレをクランプします。</li>
		<li>右心房で切り取り、血管回路を開き、PBSで灌流を開始し、続いて2〜4%パラホルムアルデヒド(それぞれ約250mL)を続けます。</li>
		<li>犠牲の日、またはせいぜい犠牲の前夜にPBSで希釈したパラホルムアルデヒドを準備します。犠牲の日に準備する場合は、パラホルムアルデヒドが灌流を開始する前に室温まで冷却されていることを確認してください。パラホルムアルデヒドを4°Cで保存する。</li>
	</ol></li>
	<li>固定後、左右の頸動脈を抽出し、2〜4%パラホルムアルデヒドで4°Cで2時間保存します。</li>
	<li>動脈を30%スクロースに移し、4°Cで一晩保管する。</li>
	<li>16-24時間後、最適な切断温度(OCT)化合物に動脈を埋め込み、OCT組み込み動脈ブロックを凍結する。<ol>
<li>室温で10分間の10分間の状態動脈。1000で満たされたクリオマールの平面に平行に動脈を置き、動脈分岐が直面しているクライオムドの側面をマークする。液体窒素でスナップフリーズ。</li>
		<li>冷凍ブロックを-80°Cで長期保存。</li>
	</ol></li>
	<li>クライオスタットを使用してブロックを凍結セクション。<ol>
<li>スライド1は分岐から始まる、スライドごとに6μmの厚い動脈断面を収集します。</li>
		<li>過形成が見えなくなるまで、セクション凍結ブロック(約100枚のスライド)。</li>
	</ol></li>
	<li>ヘマトキシリン&amp;エオシン(H&amp;E)の汚れスライド18<ol>
<li>分岐から始まる動脈全体に沿って10回に1回のスライドを染色することによって傷害の領域を見つける(例えば、スライド1、10、20、30、40、50、60、70、80、90、および100)。</li>
		<li>損傷部位の周りに追加のスライドを染色して、ピーク咬合を有するスライドを見つける(例えば、スライド20、30、および40は目に見える過形成を有し、したがって、スライド15、25、35、および45を染色する)。</li>
		<li>ピークオクルージョンスライド前後のピークオクルージョンと等距離スライドでスライドを染色し定量化し(例えば、スライド35で見つかったピークオクルージョン、スライド25、45等)を染色し、ラット当たり合計3〜10枚のスライドを定量する。</li>
	</ol></li>
	<li>光シート蛍光顕微鏡画像処理の場合、ステップ4.4で固定後4°Cで動脈を一晩保存します。<ol>
<li>ウサギ抗CD31一次抗体を1:500希釈して3日間の希釈剤(pH7.4)で動脈をプローブする。次に、抗ウサギアレクサフルオール647二次抗体の1:500希釈で動脈に対して2日間19.</li>
		<li>iDISCO+20を使用して動脈をクリアします。</li>
		<li>光シート蛍光顕微鏡21を用いて動脈を画像化する。ソフトウェア(例えば、イマリス)を使用して画像をレンダリングする19.</li>
	</ol></li>
	<li>新内皮過形成を定量化する。可能であれば、ブラインドで定量を行います。<ol>
<li>ImageJソフトウェアを使用して、上で決定した3〜10スライドのそれぞれ上の動脈のインティマ、内部弾性層(IEL)、および外的弾性層(EEL)の周囲を追跡します(ステップ4.8.3)。</li>
		<li>ImageJ でトレースされた各領域の面積を数値化し、これらの値をエクスポートします。インティマ トレースはルーメン領域を生成し、IEL トレースは IEL 領域を生成し、EEL トレースは EEL 領域を生成します。</li>
		<li>ラット頸動脈あたりの平均傷害(%閉塞、インティマ:培地(I:M)比、新内皮過形成)を得るために3-10スライドから得られた値を平均する。 ネオインティマル過形成 = IELエリア - ルーメンエリア <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/60473/60473eq1.jpg"> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/60473/60473eq2.jpg">
</li>
	</ol></li>
</ol>

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著者らは、この原稿の出版に関して利益相反はないと宣言している。

ラット頸動脈バルーン損傷は、最も広く使用され、研究されたレステノーシス動物モデルの1つです。元のバルーン傷害モデル3および改変された圧力制御性区分損傷変動10はいずれも、ヒトにおいても起こる動脈損傷応答の多くの側面を知らせており、フィブリンが豊富な血栓はめったに発症せず、局所炎症は高コレステロール血症ウサギまたはブタモデル9,22のような他の傷害モデルと比較して最小限であるという制限はほとんどない。ラットはまた、動脈損傷応答の異なる側面を定量化し、分析するために異なる時点で犠牲にすることができます。例えば、早期の時点で細胞増殖、血管平滑筋細胞の表現型切り替え、早期免疫応答などの傷害に対する早期応答の側面を研究するために使用できます。我々は、白血球の浸潤および細胞増殖が3日から1週間16の間で最大であることを示した。中間の時点は再内皮化の速度を査定するために使用することができる。こ...

心血管疾患(CVD)は、世界的に主要な死因である1.アテローム性動脈硬化症は、ほとんどのCVD関連の罹患率および死亡率の根本的な原因である。アテローム性動脈硬化症は、動脈内のプラークの蓄積であり、管腔が狭くなり、臓器および遠位組織への適切な血液灌流を妨げる2。重度のアテローム性動脈硬化症を治療するための臨床介入には、ステント配置の有無にかかわらずバルーン血管形成術が含まれる。この介入は、バルーンカテーテルをプラークの部位に進め、バルーンを膨らませてプラークを動脈壁に圧縮し、明るい領域を広げることを含む。しかし、この手順は動脈損傷応答3を発する動脈に損傷を与える。この傷害応答の長時間の活性化は、動脈の修復、または再狭小化、新内皮過形成および血管リモデリングに二次的に至る。血管形成術の間、内皮層は、即時血小板の形成および局所炎症をもたらす内皮細胞の脱ヌードである。局所シグナル伝達は、血管平滑筋細胞(VSMC)および発着性線維芽細胞における表皮変化を誘発する。これは、内腔へのVSMCおよび線維芽細胞の内向きの移動および増殖につながり、新内皮過形成4、5に至る。循環前駆細胞および免疫細胞も、全量の休止に寄与する。適用可能な場合、薬物溶出ステント(DES)は、残り性化7を阻害するための現在の標準である。しかし、DESは動脈再血管形成を阻害し、従って、後期ステント血栓症8を生じさせるプロ血栓性環境を作り出す。したがって、動物モデルは、再脳炎の病態生理を理解し、再血管化手順の有効性を延長するためのより良い治療戦略を開発するために不可欠である。
この病理を研究するために、大小の動物モデル9がいくつか利用されている。これらは、動脈の光側のバルーン傷害3、10またはワイヤー傷害11、ならびに動脈の周りの部分結紮12またはカフ配置13を含む。バルーンとワイヤーの損傷は、両方とも動脈の内皮層を脱裸にし、血管形成術後に臨床的に起こることを模倣する。特に、バルーン傷害モデルは、臨床設定(すなわちバルーンカテーテル)と同様のツールを利用する。ラット動脈は市販のバルーンカテーテルに適したサイズであるため、バルーン損傷はラットモデルで最もよく行われます。ここで我々は、圧力制御された細分動脈損傷、ラット頸動脈バルーン損傷の確立された、改変されたバージョンを記載する。この圧力制御アプローチは、臨床血管形成術を密接に模倣し、傷害14、15の2週間後に再現可能な新内皮過形成を可能にする。さらに、この圧力制御動脈損傷は手術後2週間までに完全な内皮層復帰をもたらす16.これは、内皮層が完全なカバレッジ3に戻らないクロウズによって記述された元のバルーン傷害モデルと直接対照的です。
手術後、治療はいくつかのアプローチを通じて、損傷した動脈に適用されるか、または向けられ得る。本明細書に記載される方法は、プルロン酸ゲル溶液に埋め込まれた小分子の回来期適用を使用する。具体的には、100μMシンナミックアルデヒドの溶液を25%プルロニックF127ゲルで動脈に塗布し、新内膜過形成を阻害する損傷直後に動脈に塗布する。Pluronic-F127は、制御された方法で薬物を局所的に送達することができる無毒、熱可逆ゲルである17.一方、動脈損傷は局所的であるため、地方行政はオフターゲット効果を最小限に抑えながらアクティブな原則をテストすることを可能にする。それにもかかわらず、この方法を用いた治療の有効な送達は、使用される低分子または生物学的の化学に依存する。

<table><tbody><tr><td>1 mL</td><td>シリンジ フィッシャー</td><td>14955450</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 針付きシリンジ</td><td>BD</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>2 フレンチ フォガティ バルーン塞栓切除カテーテル</td><td>エドワーズ ライフサイエンス</td><td>120602F</td><td></td></tr><tr><td>4-0 エチロン (ナイロン) 縫合糸</td><td>Ethicon Inc</td><td>662H</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Vicryl 縫合糸</td><td>Ethicon Inc</td><td>J214H</td><td></td></tr><tr><td>7-0 プロレン縫合</td><td>Ethicon Inc</td><td>8800H</td><td></td></tr><tr><td>70%エチルアルコール</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>抗ウサギ アレクサフルーア 647</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A21245</td><td></td></tr><tr><td>アトロピン硫酸塩</td><td>獣医用</td><td>Vedco Inc</td><td></td></tr><tr><td>綿棒</td><td>ピューリタン</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>湾曲止血器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>細かい湾曲した鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11203-25</td><td></td></tr><tr><td>ファインハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼ</td><td>Covidien</td><td>2252</td><td></td></tr><tr><td>IHC-TEK希釈剤(pH 7.4)</td><td>IHCワールド</td><td>IW-1000</td><td></td></tr><tr><td>インシャフレーター</td><td>メリットメディカル</td><td>IN4130</td><td></td></tr><tr><td>ヨウ素溶液</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>獣医用潤滑眼軟膏</td><td>Dechra</td><td></td><td></td></tr><tr><td>メイヨーはさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14010-15</td><td></td></tr><tr><td>マイクロSerrefines</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Microdissectionはさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15004-08</td><td></td></tr><tr><td>マイクロSerrefineクランプ鉗子を適用する</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18057-14</td><td></td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>12003-15</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic-127(滅菌水で希釈)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443</td><td>25%調製</td></tr><tr><td>ウサギ抗CD31</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td></td></tr>リ<tr><td>トラクター</td><td></td><td></td>曲<td>がったペーパークリップはよく機能します</td></tr>リ<tr><td>マジル(カルプロフェン)</td><td>ゾエティス株式会社</td><td></td><td>獣医用</td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>標準的な鉗子</td><td>のファイン サイエンス ツール</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>滅菌ドレープ</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td></td></tr><tr><td>T ピン</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

過期治療アプリケーションを用いてラット頸動脈圧制御区分バルーン損傷

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症の一部により、世界中の死亡および障害の主な原因であり続けている。動脈硬化性プラークは、動脈の発光表面積を狭くし、器官および遠位組織への十分な血流を減少させる。臨床的には、ステント配置の有無にかかわらずバルーン血管形成術などの血管形成術のような再血管形成手順は、血流を回復させることを目的としている。これらの手順は、プラークの負担を軽減することによって血流を再確立するが、それらは、動脈治癒応答を開始する血管壁を損傷する。長期の治癒応答は動脈の修復、または再狭動を引き起こし、最終的にこれらの再血管化処置の長期的な成功を制限する。したがって、前臨床動物モデルは、レステノーシスを駆動する病態生理学的メカニズムを分析するために不可欠であり、新たな治療戦略をテストする機会を提供する。ネズミモデルは、大型動物モデルよりも安価で操作が簡単です。バルーンまたはワイヤー損傷は、マウスモデルで使用される2つの一般的に受け入れられている傷害モダリティです。特にバルーン傷害モデルは、臨床血管形成術を模倣し、修復の発達のために動脈に十分な損傷を引き起こす。ここでは、改変された、圧力制御されたラット頸動脈バルーン傷害モデルを行い、組織学的に分析するための外科的詳細を説明する。さらに、このプロトコルは、新内皮過形成を阻害するためにどのように治療の局所的な来期適用を使用することができるかを強調する。最後に、3次元で動脈損傷を可視化・可視化するための新しいアプローチとして、光シート蛍光顕微鏡を紹介する。

図1は、この手術を行うために使用されるすべての材料および外科用具を示しています。ヘマトキシリン&amp;エオシン(H&amp;E)2週間の損傷した動脈断面の染色は、新内皮肥大の明確な視覚化を可能にする。図2は、健康、負傷、治療された動脈のH&amp;E染色動脈断面の代表的な画像を示しています。図2はまた、画像処理ソフトImageJを用いて、損傷した動脈における新内皮過形成のレベルを定量化する方法を概説する。このアプローチを使用して、ネオインティマの周囲、ならびに内部および外部弾性層層がそれぞれの領域を定量化するために追跡される。我々が記述する圧力制御された区分傷害法は、0.29(2つの異なる外科医およびn=11ラット)の標準偏差を有する0.80のメディア比に対するインティマをもたらすと説明する。PLUROnicにおけるCAの回来期適用による治療は、前に示したように、新内皮過形成の阻害をもたらす(閉塞率の61%減少)15。</...

ラット頸動脈バルーン傷害は、アテローム硬化性血管の血流を回復させるために行われる臨床血管形成術手順を模倣する。このモデルは、動脈壁を遠ざけ、内皮細胞の内皮層を脱脂することによって動脈損傷応答を誘導し、最終的にはリモデリングおよびインティタル過形成応答を引き起こす。

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...

圧力制御された分節頸動脈バルーンの損傷。は、重度のアテローム性動脈硬化症のヒト患者に行われるバルーン血管形成術血行再建術を模倣した、研究室で使用される実験的手順です。これは、動脈損傷反応のさまざまな側面を研究するために研究室で使用されます。この再狭窄モデルは、臨床現場でバルーン血管形成術と同様の方法で実施され、血管損傷の定義された領域と、損傷から 2 週間以内に完全な内皮再形成が可能になります。大学のIACUC基準に従って、すべての術前手順を実行した後、麻酔をかけた成体ラットのペダル反射に対する反応の欠如を確認します。ラットを解剖顕微鏡の下に置き、はさみを使用して、顎の骨の間の首のラインに沿ってまっすぐな1.5〜2センチメートルの表在性縦方向の皮膚切開を行います。筋肉層が露出するまで、皮下の結合組織を通して2回目の切開を行います。そして、皮膚の下の唾液腺を変位させて、筋肉組織にアクセスします。閉じたハサミの先端を筋肉層と結合組織の間に挿入し、皮膚を上に引っ張りながらハサミを静かに開き、結合組織を筋肉から鈍く分離します。胸骨舌骨筋と胸骨乳様突起筋を気管の左側に沿って縦方向に解剖し、2つの表在筋に垂直に走る舌骨筋が観察されるまで観察します。鉗子を使用して、垂直な舌骨筋と気管上を走る縦方向の胸骨舌骨筋を分離する窓を優しく作成します。そして、舌骨筋の下の鉗子に到達して、胸骨舌骨筋と胸骨乳様突起筋を分離して、総頸動脈を露出させます。総頸動脈を分離するには、内頸動脈と外部頸動脈が露出するまで分岐部の近くで動脈を解剖します。プレカットされたプロリン縫合糸を使用して、上甲状腺動脈と外部頸動脈をそれぞれの分岐部の近くで結紮します。縫合糸の大部分をうなずきの片側に残し、湾曲した止血剤で各縫合糸をつかみます。内頸動脈の周りの解剖を終了し、動脈の下と周りの鉗子に到達します。非破砕性血管クランプを使用して、内頸動脈で後頭動脈の周りを慎重にクランプし、血管をねじれることなく遠位制御を実現します。分岐部の近位にある総頸動脈を解剖し、迷走神経を動脈から分離するように注意します。そして、総頸動脈の下と周りの鉗子に到達します。次に、非破砕性血管クランプを使用して近位制御を実現し、クランプを分岐部から少なくとも5ミリメートル離して配置します。バルーン損傷を誘発するには、訴訟された各動脈枝を保持している湾曲した止血器を操作して、外部頸動脈と上枝との間の分岐部を露出させます。分岐部で組織を穏やかに解剖して、動脈切開部位をできるだけきれいにします。また、マイクロダイセクションハサミを使用して、外頸動脈と上枝との間に動脈切開術を切開します。マイクロハサミを挿入する前にサイトをクリアするように注意し、切開を行う前にマイクロハサミの1つのブレードが動脈内に完全に入っていることを確認してください。綿棒を使用し

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JoVE Journal

Medicine

医学

血液脳関門の乱れは、脳にある種の薬物の送達を助ける。動脈配信マンニトールは、物理的障壁を破壊するために、血管周囲の細胞を縮小します。...

血液脳関門の破壊のラットモデルは、対象となる神経血管治療を許可する

動脈瘤のエンドグラフト除外後の組織学的および生化学的な修正は、まだ不明である。我々は、マウス動脈瘤でエンドグラフト移植の新たなモデルを記述する。永続的な循環血液ストリームインタフェース、新しい血管内生体材料の評価の有無にかかわらず血栓分析を通して、このモデルでは、より良い血管内動脈瘤の除外病理生物学を理解するのに役立ちます。...

血管内大動脈瘤の修復の新しいマウスモデル

これらの研究は、アデノウイルス遺伝子ベクターのステントおよびモデルメッシュディスクのコートレス金属表面への可逆的な付着について報告しています。ベクター固定化に使用される架橋剤の加水分解を条件として、形質導入にコンピテントなウイルス粒子が持続的に放出されるため、血管細胞やステント留置動脈において、部位特異的な導入遺伝子の持続的な発現が得られます。...

加水分解性架橋剤を介してアデノウイルスベクターテザーを使用した金属ステント表面からの血管の遺伝子導入

このプロトコルは、ラット頚動脈上の管腔内損傷を引き起こすと今後新生内膜過形成を誘発するためにバルーンカテーテルを使用しています。これは、傷害に応答する脈管リモデリングのメカニズムを研究するための十分に確立されたモデルである。また、広く、潜在的な治療的アプローチの有効性を決定するために使用される。...

ラット頸動脈における血管バルーン傷害と管腔内投与

以下に説明するラット頸動脈バルーン損傷モデルにより、研究者は損傷による動脈過形成を否定する薬や治療法を評価することができます。動物の詳細な術前準備、外科的処置、および術後ケアが記載されている。...

ラット頸動脈バルーン損傷モデルは、抗血管リモデリングの治療薬をテストします

動脈硬化症の動物モデルは、メカニズムを理解してプラークの開発や破断、先進国の死亡原因を防止するための新しいアプローチを調査するために不可欠です。このプロトコルは、ウサギ腸骨動脈の動脈硬化性プラークを誘発するのにバルーン傷害と高コレステロール食の組み合わせを使用します。...

加速動脈硬化家兎モデル: 内腸骨動脈バルーン傷害の方法論的視点

継続的な動脈血圧記録により、さまざまな血行動態パラメータの影響を調査できます。このレポートは、脳卒中の病態生理学、さまざまな血行動態因子の影響、および新しい治療アプローチの評価を決定するための虚血性脳卒中の大型動物モデルにおける継続的な動脈血圧モニタリングの適用を示しています。...

虚血性脳卒中のウサギモデルにおける血圧のリアルタイムモニタリングと調節

大動脈弁狭窄症(AVS)の根底にある病理学的メカニズムを理解し、治療的介入の有効性を評価するには、適切な動物モデルが必要である。本プロトコルは、in...

直接バルーン損傷によるウサギ大動脈弁狭窄モデル

この記事では、マウスで心筋虚血再灌流障害(IRI)を誘発するための独自の閉鎖胸部技術を紹介します。提示された方法は、マウスが遠隔で心筋虚血を誘発しながら自発的に呼吸することを可能にする。これにより、虚血と再灌流の動的プロセスを非侵襲的イメージングを介してその場でリアルタイムに研究するための動物へのアクセスが提供されます。...

自発呼吸マウスにおけるバルーンカテーテルを用いた遠隔トリガーLAD閉塞

現在のプロトコルは、損傷を引き起こすことなく脳血管の解剖学的構造を保存する中大脳動脈閉塞/再灌流のラットモデルを記述しています。...

脳血管の解剖学的構造を損なうことなく中大脳動脈閉塞・再灌流のラットモデル

学ぶラット頸動脈圧制御バルーン損傷法。血管新生内膜形成と治療介入効果を定量化し、臨床血管形成術のメカニズム解明に貢献する実験モデルです。

過期治療アプリケーションを用いてラット頸動脈圧制御区分バルーン損傷

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