Name: プロミニニン-1+出生後マウス小脳由来幹細胞の精製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-04-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 学ぶ プロミニニン-1陽性出生後マウス小脳幹細胞の精製法。磁気カラムを用いた簡便かつ低コストな培養・分化プロトコルにより、神経細胞やグリア細胞への分化能を評価できます。小脳発生や疾患研究に有用です。

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私たちは、彼らの提案のためのオパールラボのメンバーに感謝します.この作業は、NIH助成金1RO1 NS062051と1RO1NS08251(オパールP)によってサポートされました

すべての動物実験は、NIHの実験用動物のケアと使用ガイド(2011)に従って行われ、ノースウェスタン大学IACUC(プロトコルIS00011368)によって承認されました。
1. ソリューションの準備
<ol><li>無菌フェノール赤含有ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)をパパイン(100 U/ml)、システイン(0.2mg/ml)、DNase(250 U/ml)で作られた組織解離液を調製します。</li>
	<li>DNase溶液を調製するために、DNase Iの凍結乾燥粉末(1本)を50mLのH2Oで100mg希釈して調製し、ストック溶液を濾過する。10 mLストックアリコートを準備します。1つのストックチューブを0.5 mLの単一使用アリコートに分割します。これらの単一使用アリコートを-80 °Cに保存してください。</li>
	<li>磁気カラムバッファーX:0.5%のウシ血清アルブミン(BSA)および2 mM EDTA溶液を調製して、磁気分離試薬を調製します。</li>
	<li>神経圏培地を調製するには、ペニシリン/ストレプトマイシンを含む神経基底培地をL-グルタミンと共に使用し、2%B27、20 ng/mLヒト組換え表皮成長因子(EGF)、および20ng/mLヒト組換え塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)を添加する。</li>
	<li>分化培地を調製するには、神経基底培地を使用し、10 ng/mL分化因子血小板由来成長因子(PDGF-AA)または10ng/mL白血病阻害因子(LIF)および2%B27を添加する。</li>
	<li>超低添付ファイル12ウェル(3.5cm2)と6ウェル(9.6 cm2)の培養プレートを使用してください。</li>
</ol>2. 小脳の解剖
<ol><li>イオブルランでマウスの子犬(P3-P7)を麻酔し、手術用ハサミを使用して首を切る。</li>
	<li>分離した子犬の頭部に70%エタノールをスプレーします。</li>
	<li>空の無菌10センチ培養皿に各ヘッドを転送します。マイクロディセクセを使用して皮膚を分離し、その後、正中線に沿ってはさみを矢状に動かして頭蓋骨を取り除きます。</li>
	<li>鉗子#7使用して、頭蓋骨の骨を脳幹から突き出して剥がします。慎重にヘラを使用して脳を持ち上げ、小脳をそのままにし、15 mLの氷冷ハンクスバランスソルト溶液(HBSS)溶液を含む新鮮な無菌10.0cm皿に脳を移します。</li>
	<li>脳を含む皿を解剖顕微鏡の下に置きます。微細な#5鉗子を使用して、小脳から髄液と大きな血管を取り除き、へらを使用して脳幹から小脳を分離する。</li>
	<li>5.0 mLの氷冷HBSS溶液を含む15 mL遠心分離管に小脳を移します。5.0 mLのHBSSで3倍の洗浄とデカンスを行い、小脳を洗浄します。 注:各小脳は、さらなる処理のために独自のチューブに配置する必要があります。</li>
</ol>3. 細胞懸濁液調製
<ol><li>最後のすすめの後、37°Cに予め温めた5 mLのパパインベースの組織解離液(前の作業13、18,18に基づく)を加える。37°Cで15分間、水浴中に組織をインキュベートします。3分ごとに3x-5倍のチューブを上下に反転させ、3分ごとに、または手でゆっくりと内容を混ぜます。</li>
	<li>広径(通常のガラスピペット)と狭径パスツールピペット(ブンゼンバーナーで加熱して火を磨く)を用意する(19.</li>
	<li>5 mLのHBSS溶液で組織3xを洗浄し、手でデカンスしながら組織の損失を防ぐ。</li>
	<li>最後のHBSS洗浄を取り除き、250 μLのDNase溶液を含むDPBS溶液を5 mL加えます。広径パスツールピペットを使用して10x-15xを三つ引きすることにより、組織を解約します。気泡の形成を避けるために、このステップを穏やかに実行します。</li>
	<li>その後、スラリーを水浴中の37°Cでさらに10分間インキュベートし、チューブを反転してまっすぐにして混合します。</li>
	<li>還元された直径のパスツールピペットを使用して、組織スラリーを10倍にしてさらにトリチュレートします。大きな組織が残っている場合は、ピペットの先端を持つチューブの底に組織片をそっと押し付け、細胞が微細な懸濁液に達するまでピペットを続けます。</li>
	<li>37°Cで組織をさらに10分間インキュベートし、前の混合工程を繰り返します。</li>
</ol>4. 幹細胞の免疫標識
<ol><li>遠心分離管を氷の上に置き、次のステップには氷冷溶液を使用します。解約した細胞を40μmの細胞ストレーナーを通して50 mL遠心分離チューブにひずみます。10.0 mLのHBSSソリューションでフィルターを上にして、この追加ソリューションでセルがメッシュを通過するようにします。</li>
	<li>濾過した細胞を新鮮な15 mL遠心チューブに移し、4°Cで10分間300 x gの細胞懸濁液を遠心分離します。吸気し、真空吸引器を用いて上清を完全に捨てます。</li>
	<li>ペレットを160 μLの磁気カラムバッファに再懸濁します。磁気ラベリングの前に単細胞懸濁液を得るために、30 μmのナイロンメッシュを通して細胞を通して細胞の塊を取り除き、それ以外の場合はカラムを詰まらせることができます。</li>
	<li>各15 mLチューブに40 μLの抗プロミニリン-1マイクロビーズを加え、混合し、15分間冷蔵庫でインキュベートし、抗体をプロミニン-1発現細胞に結合させます。</li>
	<li>100 x gで1.0~2.0mLのカラムバッファーXと遠心分離機を10分間加えて細胞を洗浄し、上清を完全に吸引します。</li>
	<li>ペレットをカラムバッファXの1.0 mLに再懸濁します。 注:カラムバッファXの1.0 mLでペレットを再懸濁した後に小さな塊が見られる場合、それらはパスツールピペットの先端を使用して慎重に除去されるべきであり、そうでなければこれらの塊は細胞のソート中に磁気カラムをブロックすることができる。</li>
</ol>5. 磁気カラムの準備、細胞のソート、およびめっき
注:遅延が神経圏形態に影響を与える可能性があるため、異なる遺伝子型条件(疾患対コントロール)からの磁気分離を同時に行う必要があります。
<ol><li>磁界に露出した磁気スタンドに置いて、磁気カラムを準備します。500 μL のバッファー X でカラムを 1 回リンスし、投げる遠心分離管に滴下するバッファーを塗布します。 注:実験ごとに新鮮な磁気カラムバッファXを準備します。そうでなければ、幹細胞の収率は低くなります。</li>
	<li>ラベル付きセルサスペンションを列に適用します。主に小脳神経/グリア混合細胞からなる標識されていない細胞を含むフロースルーを、新鮮な15 mLチューブに集める(図1A)。</li>
	<li>500 μLのバッファー X でカラム 3x を洗います(各洗浄は約 2 ~ 4 分かかります)。 注:小脳顆粒性ニューロンを富化した小脳神経/グリア混合培養は、この精製ステップの有用な副産物として役立つ可能性がある。</li>
	<li>磁界からカラムを取り外し、1.5 mLチューブに入れる。1.0 mLの培養培地(神経球培地)をカラムに加え、プランジャーをカラムに押し込み、プロミニン-1ビーズでタグ付けされた細胞を新鮮な1.5mLのハヤブサチューブに洗い流します。</li>
	<li>プロミニン1標識細胞の純度を高めるには、手順5.1~5.4の後の2列目に溶出した細胞を渡します。</li>
	<li>ヘモサイトメーターで細胞を数えます。典型的な収量は小脳あたり107細胞である。細胞を超低い取り付けプレート(下流の実験に必要な密度に基づいて6または12ウェル)にプレートします。</li>
</ol>6. 神経球の通過と分化
<ol><li>プロミニン1標識幹細胞を神経球培地(5,000細胞/ウェル)の超低添付着12ウェルプレートにプレートします。</li>
	<li>7~10日後、細胞は分裂してボール状の浮遊神経球(一次神経球)を生み出す。 注:本実験では、数が増える二次神経球が生成され、さらに使用されます。原発性神経球集団は、幹細胞特性を持たない汚染細胞を含み、神経球と一緒に凝集する可能性があるため、これらの実験には使用されません。</li>
	<li>通過する場合、1.0 mLピペットチップを使用して15 mLの無菌遠心分離管に一次神経球を培養します。5分間300xgで遠心分離により神経球をペレット化 gし、上清を捨てる。</li>
	<li>パパインまたは0.05%トリプシン溶液を含む組織解離培地の5 mLにペレットを再懸濁します。37°Cで10分間インキュベートします。</li>
	<li>5分間、300 x gで細胞懸濁液を遠心分離し、5 mLの神経圏培地で細胞を再懸濁し、プラスチック製のパスツールピペットを使用して細胞を機械的に解約し、ゆっくりと上下10倍のピペットを作ります。</li>
	<li>先に述べたように、神経球培地に細胞を(再び)プレートします。培養で7〜10日後、プレートは二次神経球で濃縮されるべきである。 注:これらの培養物は、効率がよい8倍まで継代することができ、その後、神経球のサイズは小さく、増殖の減少を示唆する傾向がある。</li>
	<li>血球計上の細胞を数え、ポリD-リジンコーティングされたプレート(6または12ウェル)の将来の実験に最適な数をプレートします。</li>
	<li>幹細胞を分化するために、先に述べたように遠心分離によって第2から第8の通路から神経球を採取するが、ペレットに分化媒体を加える以外。 注:7日間のインビトロの後、幹細胞はニューロン、アストロサイト、およびオリゴデンドロサイトに分化し、ニューロンマーカーβ-III管状管状、アストロサイトマーカーGFAP、およびオリゴデンドロサイトメーカーO4で染色することによって示されるように。</li>
</ol>

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</ol>

利益相反は宣言されていません。

プロミニン1発現小脳幹細胞は、出生後の最初の3週間の間に将来の白質に存在する。彼らの増殖は、Purkinje細胞17によってサポートされるソニックヘッジホッグ経路によって厳密に制御される。これらの幹細胞/前駆細胞は、バスケット細胞および星状細胞と呼ばれる後生まれのGABAergicインターニューロンに寄与する。これらのインターニューロンは分子層に存在し、そこでそれらはプルキンジェ細胞上にシナプスし、GABAergic阻害13、17、23,17,23を介してPCの地形および機能を彫刻する。インターニューロンの形成に加えて、この幹細胞集団はまた、すべての出生後由来小脳アストロサイト17、24,24を生成する。
このプロトコルは、出生後マウ...

小脳は、自主的な動きを調整する主要な神経回路として長い間認識されてきた1.それは、運動出力を微調整し、運動を調整するように、周囲からのプロプリオセプティブ情報を含む神経軸の広いスワッシュからの入力を受け取る。最近では、同様の情報処理ネットワーク,2、3、43を使用する可能性を有して認知や感情の調節にも関与している2。4
成体小脳は、外側の小脳皮質と内白物質で構成される。これらの構造内に散在する深いイントレースレクラ核である。神経系の他の部分と同様に、小脳の発達は、このよく組織化された構造を生み出すために移行し、分化する多能性前駆細胞(幹細胞)の増殖によって駆動される。初期の開発(E10.5-E13.5)では、第4心室の周りの心室幹ニッチ,は、ベルクマングリア,5、6、7、86と共にGABAergicニューロン(すなわち、プルキンジェ細胞、ルガロ細胞、ゴルジ5細胞)を生成する。7
開発の後半(出生後第1週)において、菱唇の第2の幹細胞ニッチは、励起性顆粒ニューロン99、10、11、1210,11,12を生じさせるMATH1およびNestin発現前駆体を生成する。最近第三の幹細胞ニッチは13を説明した。これらの細胞は、プロミニン-1(CD133とも呼ばれる)を発現し、腸内および造血系14、15、16,15,16における幹細胞のサブセットを定義する膜スパン糖タンパク質である。生体内運命マッピングは、これらの幹細胞が出生後の最初の3週間の間に、アストロサイトと共に主要な分子層インターニューロン(すなわち、バスケット細胞および星状細胞)を生成することを示している。従来、これらの細胞をインビトロで研究することは困難であった従来の方法では、プロミニン-1染色12、13、17,13,17に依存する高価で時間のかかる技術(すなわち、蛍光活性化細胞選別[FACS])が必要であった。このプロトコルは、これらの幹細胞を容易に培養し、分化することができるこれらの幹細胞の単離のための免疫磁気ベースの方法を記述する。

<table><tbody><tr><td>0.05%トリプシン</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>25300054</td><td>0.05%</td></tr><tr><td>2%B27</td><td>ギブコ;サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>17504001</td><td></td></tr><tr><td>2 mM EDTA溶液</td><td>コーニング</td><td>46-034-CI</td><td></td></tr><tr><td>抗プロミニン-1マイクロビーズ</td><td>ミルテニーバイオート</td><td>130-092-333</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>シグマ</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>カラムマルチスタンド</td><td>ミルテニーバイオテック</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>培養プレート 超低アタッチメント</td><td>コーニング</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>システイン</td><td>シグマ</td><td>C7880</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>シグマ</td><td>D4513-1VL</td><td>250 U/ml</td></tr><tr><td>ダルベッコ'S リン酸緩衝液生理食塩水</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>14040141</td><td></td></tr><tr><td>ハンクの平衡塩溶液-HBSS</td><td>Gibco</td><td>14025-092</td><td></td></tr><tr><td>ヒト組換え塩基性線維芽細胞成長因子</td><td>Promega</td><td>G507A</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>ヒト組換え上皮成長因子</td><td>Promega</td><td>G502A</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>白血病抑制因子</td><td>Sigma</td><td>L5158</td><td></td></tr><tr><td>l-グルタミン</td><td>Gibco</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>Lieca TCS SP5 共焦点顕微鏡</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS セパレーター</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>マウス 抗プロミニン-1</td><td>Affymetrix eBioscience</td><td>14-1331</td><td>1 in 100</td></tr><tr><td>Nestin</td><td>Abcam</td><td>ab27952</td><td>1 in 200</td></tr><tr><td>神経基礎培地</td><td>サーモフィッシャー</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>O4</td><td>Millopore</td><td>MAB345</td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>LS003126</td><td>(100 U/mL)</td></tr><tr><td>血小板由来成長因子</td><td></td><td>Σ H8291</td><td>10 ng/mL</td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine</td><td>Σ</td><td>P6407</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit anti-tubulin, b-III</td><td>Σ</td><td>T2200</td><td>1 in 500</td></tr><tr><td>Rabit anti-GFAP</td><td>Dako</td><td>Z0334</td><td>1 in 500</td></tr><tr><td>分離カラム-MS カラム</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>滅菌セルストレーナー</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td>40 &mu;メートル</td></tr></tbody></table>

プロミニニン-1+出生後マウス小脳由来幹細胞の精製

Purification of Prominin-1+ Stem Cells from Postnatal Mouse Cerebellum

ほとんどの小脳ニューロンは、すべての小脳興奮性グルタミン酸ニューロンを生成する菱唇ニッチと、深部小脳核を構成するニューロンである抑制性GABAergic Purkinje細胞を生成する心室領域ニッチの2つの胚性幹細胞ニッチから生じる。近年、第3の幹細胞ニッチは、心室領域ニッチから二次的な発芽領域として生じると述べられてきた。このニッチの細胞は、細胞表面マーカープロミニニン-1によって定義され、出生後小脳の開発白色物質に局在する。このニッチは、出生後に生成された小脳アストロサイトと共に後期生まれた分子層GABAergicインターニューロンを占めています。彼らの発達の役割に加えて、このニッチは神経変性および腫瘍形成への関与に関して翻訳的重要性を得ている。これらの細胞の生物学は、その精製のための効率的な技術の欠如のために解読することが困難であった。ここで実証されているのは、これらの出生後小脳幹細胞を精製、培養、および分化するための効率的な方法です。

プロミニン-1陽性出生後小脳幹細胞は、成長因子が豊富な神経圏培地(EGFおよびbFGF)において神経球を形成した。これらの神経球は、プロミニン1染色に陽性であり、単離に使用されるマーカー、およびネスチンおよびGFAP13などの他の幹細胞マーカーの染色剤としてもあった(図1)。幹細胞マーカー発現は培養中、および少なくとも8節20まで維持した。成長因子の離脱時およびLIFおよびPDGF-AA(神経およびグリア分化を支持する因子である21,22)の21存在下で、神経球は神経およびグリア系統に分化した(図2)。
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ここで実証されているのが、白物質幹細胞を出生後マウス小脳から精製、培養、分化するための効率的で費用対効果の高い方法です。

Most cerebellar neurons arise from two embryonic stem niches: a rhombic lip niche, which generates all the cerebellar excitatory glutamatergic neurons, ...

このプロトコルは、出生後小脳から幹細胞を精製するための簡単で費用対効果の高い方法を記述する。これらの幹細胞は、後期生まれの分子的に文字化けしたインターニューロンを占めるが、出生後由来の小脳アストロサイトも占めている。したがって、これらの細胞を研究することは、小脳の発達を理解するために明らかに重要である。このプロトコルを使用すると、幹細胞の収率は、通常10倍高価であるFACSベースの戦略の収量に匹敵する。このプロトコルは、腸および骨髄などの他の組織から幹細胞を発現するプロミニン-1を抽出するために一般化することができる。まず、解剖顕微鏡の下に脳で皿を置くことから始めます。細かい5つの鉗子を使用して小脳から髄液および大きな血管を取り除き、ヘラを使用して脳幹から小脳を分離する。小脳を5ミリリットルの氷冷HBSS溶液を含む15ミリリットルの遠心分離管に移します。その後、HBSSをデカントします。さらに2回洗い流します。最後のすすみ後、摂氏37度に予め温めたパパインベースの組織解離液を5ミリリットル加えます。37°Cの水浴で15分間組織をインキュベートし、3分ごとに3〜5回反転してチューブの内容物をゆっくりと混ぜます。広径と狭径ガラスパスツールピペットをバンゼンバーナーで磨火で準備します。インキュベーション後、5ミリリットルのHBSS溶液で組織を3回洗浄し、デカンティング中に組織を失わないようにします。最後のHBSS洗浄後、250マイクロリットルのDNAseを含むDPBSを組織に5ミリリットル加え、広い直径のパスツールピペットで10〜15回穏やかに三度ずつ解約します。次に、狭いパスツールピペットを使用して、組織スラリーをさらに10回トリチュレートします。より大きな組織が残っている場合は、ピペットチップでチューブの底に押し付け、細かい懸濁液が達成されるまでピペットを続けます。遠心分離管を氷の上に置きます。その後、解約細胞を40マイクロメートルの細胞ストレーナーを通して50ミリリットルのチューブにひずみます。10 ミリリットルの氷冷 HBSS 溶液でフィルターを上にして、細胞がメッシュを通過するようにします。濾過した細胞を新鮮な15ミリリットルの遠心分離管に移し、300倍gの懸濁液を摂氏4度で10分間遠心分離する。その後、真空吸入器を使用して上清を完全に除去します。160マイクロリットルの氷冷磁気カラムバッファーで細胞ペレットを再懸濁します。細胞懸濁液に40マイクロリットルの抗プロミニニン-1マイクロビーズを加えます。次に、チューブを冷蔵庫で15分間インキュベートし、抗体がプロミニン-1発現細胞に結合できるようにします。細胞を1~2ミリリットルのカラムバッファーXで洗い、遠心分離機を300倍gで10分間洗浄します。上清を吸引し、ペレットを1ミリリットルのカラムバッファX.

purification-of-prominin-1-stem-cells-from-postnatal-mouse-cerebellum

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ここでは、出生後のマウスから小脳顆粒ニューロン前駆細胞や小脳顆粒ニューロンを分離して培養する方法を提示する。...

ポストナタールマウス小脳顆粒ニューロン前駆細胞と神経細胞の単離と培養

特定の組織型から解離し細胞が組織aggitationのための特定のパラメータは、実行可能な、培養可能な細胞の大量を取得する必要があります。ミルテニーgentleMACS...

マウス神経組織から単細胞懸濁液の生成

このビデオは、マウスの子犬の小脳から小脳神経前駆細胞の分離と培養を示しています。小脳顆粒ニューロン前駆細胞は、接着差によって単離および精製され、アストロサイトを効果的に除去します。これらの培養された前駆細胞は、その後、小脳顆粒ニューロンに分化します。...

マウス小脳顆粒ニューロン前駆細胞の単離と培養

このビデオでは、出生後のマウス小脳から幹細胞を分離し、神経細胞に分化させる方法を紹介しています。単離された細胞懸濁液からの幹細胞は、抗体被覆磁気ビーズを用いて精製され、培養されてニューロスフェアが形成されます。その後、ニューロスフェアを分化培地に保持して神経細胞を生成します。...

出生後マウス小脳からの幹細胞の単離と神経細胞への分化

マウス胚性線維芽細胞は、転写因子Oct-4、Sox-2、Klf-4、c-Mycの強制発現により、低効率で人工多能性幹細胞に再プログラムすることができます。リプログラミング反応のまれな中間体は、細胞表面メーカーであるThy-1.2、Ssea-1、およびEpcamに対する抗体による標識により単離されたFACSです。...

リプログラマブルマウスモデルからのiPS細胞の中間体の精製を媒介細胞表面マーカー

ネスチン発現前駆細胞は、発展途上小脳における神経前駆細胞の新たに同定された集団である。蛍光活性化細胞選別と組み合わせてここで示さ顕微解剖技術を用いて、この細胞集団は、他の小脳領域から汚染を含んでいない精製することができ、さらなる研究のために培養することができる。...

マイクロダイセクションによる開発小脳とは異なる細胞集団の単離

ここでは、in vitroの実験のために出生後の仔マウス（1日目）からミクログリアを分離するためのプロトコルを提示します。分離のこの即興方法は、高収率および高純度、ミクログリア生物学を解明する目的で、広範囲の実験を可能にする別の方法を超える有意な利点の両方を生成します。...

強化された純度と汎用性を持つ初代ミクログリアの迅速かつ洗練されたCD11b磁気分離

ヒストン 3 リジン 79 ジメチル化 (H3K79me2) - 内にあるヒストン マークのクロマチン免疫沈降 (チップ) の胎生期および生後の脳組織から神経前駆細胞の培養を特定し効果的かつ再現可能な手法を提案しますヒストン 3...

3 ヒストンのリジン 79 ジメチル化マークのクロマチン免疫沈降に続いて神経前駆細胞の分離と培養

我々は、マウス脳ペリサイトの抽出のためのプロトコルを提示する。抗生物質フリー濃縮指向のペリサイト抽出に基づいて、このプロトコルは、高純度と高収率を提供するインビトロ研究のための貴重なツールであり、したがって、使用される実験動物の数を減少させる。...

マウスから脳ペリサイトを分離する高出力法

このプロトコルは、ヒト多能性幹細胞の制御されたサイズ凝集体を産生し、単一使用バイオリアクターを使用して化学的に定義されたフィーダーフリー条件下で小脳オルガノイドの分化をさらに刺激する動的培養システムを記述する。...

ヒト多能性幹細胞からの成熟小脳オルガノイドのスケーラブルな生成と免疫染色による特徴付け

ここでは、費用対効果が高く、効率的で実行可能な一次小脳顆粒細胞前駆体(GCP)の遺伝子操作のための再現性のある インビトロ...

顆粒細胞前駆体における原発性シリウム依存シグナル伝達経路を研究するための効率的で費用対効果の高いエレクトロポレーション法

学ぶ プロミニニン-1陽性出生後マウス小脳幹細胞の精製法。磁気カラムを用いた簡便かつ低コストな培養・分化プロトコルにより、神経細胞やグリア細胞への分化能を評価できます。小脳発生や疾患研究に有用です。

プロミニニン^-1+出生後マウス小脳由来幹細胞の精製

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