Name: ラット型異形肝移植モデルにおける動脈リコネクション後の合併症の減少 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: 学ぶラット型異形肝移植モデルにおける動脈リコネクション後の合併症の減少について。マイクロサージャリー技術を用いた改良手術法により、長期生存率の向上と肝障害の軽減を実現する方法を詳しく解説します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、UHNの多臓器移植プログラムからの資金とトロント将軍とトロント西部財団からの支援を通じて資金提供されました。

著者らは開示するものは何もない。

小動物の肝臓移植モデルは、移植免疫を理解し、新しい治療戦略32を同定するために重要である。理想的な小動物の肝臓移植モデルは動脈吻当を含む人間のプロシージャのすべてのステップを複製する。ほとんどのバージョンは、合併症や罹患率の高い率につながるHA吻病ステップを組み込んでいないので、ラットOLTモデルからの結果を解釈することは困難な場合があります 42.いくつかの再建手順は、腎臓27の除去を必要とする腎動脈を使用している。このプロトコルは、人間の手順で発生するものを超えているため、臓器の除去を回避します。
動脈再建は、ラット大動脈31を操作することによっても行うことができる。しかし、これらの方法は、大動脈の広範な解剖およびクランプを必要とする。クランプ時間が長引くと、レシピエントラットは遠位虚血43に関連する悪い結果を有する。ヒトでは、LT外科技術は、レシピエント胃十二指腸動脈(GDA)の結紮および分裂を伴う。しかし、げっ歯類の生理学的および解剖学的特徴は、この技術を用いた移植をより生理的に困難にし、合併症(すなわち、膵臓および胆管35 および胆汁漏れ44の壊死)を引き起こす可能性がある。このプロトコルにおける動脈の再接続は、この課題を回避し、ダクト血流を維持し、レシピエントの結果を改善することを目的としています。
ラットHAの再構成のためのスリーブおよびステント技術の使用については、先に27を説明した。この技術では、ステントをガイドとして使用し、ドナーセリアックトランクからレシピエント共通HAに動脈を再構築する。受信者共通 HA は解剖され、受信者 GDA は27に縛られます。その結果、レシピエントBDの下の部分と膵臓の頭部への血液供給が損なわれる可能性があります。この領域への副循環は、多くの場合、胆管に不十分な血流を提供すると考えられています。例えば、このプロトコルは、最初に受け取り側GDAを微小血管クリップでクランプし、次に受取人BDを分割する。GDAをクランプすると、分割されたBDはブリードしません。GDAクランプを取り外した後、BDからの活発な出血が観察される。このプロトコルは、分割されたレシピエント胆管への良好な流れを維持し、十分な肝臓血灌流を提供し、OLT低酸素症肝傷害を予防することによって、レシピエント肝臓組織の生理学を保護する。
ドナー側では、HAステントは、セリアックトランク、左胃動脈、脾動脈からパッチを作成することによって、移植片調製中にセリアックトランクに容易に挿入される。ステントは広い開口部を通して挿入することができ、セリアックトランクだけにステントを挿入しようとするよりも難しい。HAステントに使用するのに最適なサイズは24Gであることがわかりました。ステントの長さは、受取人の適切なHAをドナーの共通HAに容易に引き込むことを可能にする開放ゲートとして機能するため、長さは1.0〜1.5mmでなければならない。10-0エチロン縫合糸が置かれている場所に注意を払って、この接続を流れる血液はステントに直接触れることはありませんし、レシピエントの適切なHAは、合併症のリスクを減らし、内部からそれを保護します。重要なことに、ドナーのHAは血管れん縮を避けるために締め付けられません。動脈再建の成功は、ドナーGDAを開いたままにしておくことで評価される。成功した吻合は、再建が完了するとドナーGDAからの良好な血流をもたらす。
このプロトコルでは、他のプロトコルと同様に、SHVC再接続は最も遅いステップであり、最終的には、アンパラフェティック相の持続時間を指示する。肝期間が長くなるにつれて、リスク虚血性傷害および肝機能障害は45を増加させる。OLTラットモデルのもう一つの重要な要素は、移植片、ステント、およびカフスのサイズです。移植片が小さすぎると、移植片がねじれたり反転したりして、血管接続を妨げる。ステントと袖口のサイズは、ラットの年齢、性別、体重、および株に応じて調整を必要とする場合があります。ここで使用したカフスのサイズは、前に説明した28と選択され、ラットサイズに制御する1つのカフサイズが使用された。フォローアップ期間中に苦痛や合併症(すなわち、肝臓の混雑、浮腫、腹水、または脾腫)の兆候はなかった(現在まで:中央値=133日後、最低=115日後、最大=161日後)。年齢と性別の両方を考慮した様々なラット株に対するPVおよびIHVCの適切なサイズを決定するためのさらなる研究が保証されている。
この変更されたラット OLT プロトコルは、PVおよび IHVC に 3D プリントされたカフスを使用します。PVとIHVCを接続するための既存の方法は、マイクロスチュージ技術32、カフ技術46、及びマイクロス合面一時副木技術47を含む。3Dプリントカフ技術は、ラット株に応じてカフのサイズを標準化することができ、準備と使用が容易であるため、選択されました。同じ寸法のカフスを大量に一度にプリントできます。カフの外面は、ネクタイを固定し、スリップを防ぐために2つの溝を持っています。袖口の操作を容易にするために袖口はまた袖口の設計に組み込まれる。全体として、3Dプリントされたカフスを組み込むことは、無肝時間を短縮することによって、高い成功率とOLT手順の再現性につながると考えられています。この技術はまた、外科的学習曲線を短縮すると判断される。
結論として、記載されたプロトコルは、動脈再接続工程を組み込むことによりヒト肝移植に類似したモデルを確立した。このプロトコルは、肝臓移植の多くの免疫学的および外科的側面を研究するために適応することができ、移植に関連する新しい治療介入をテストするためのモデルとして役立つことができる。

肝臓病の世界的な負担は増加し続け、2005年から2013年の間に肝臓病関連死が30%増加し1,、2.肝移植は、多くの場合、末期肝疾患の患者のための唯一の頼りである。肝臓は2番目に移植頻度の高い固形臓器であり、世界的に行われた肝臓移植の数は2015年から2016年の11,2に7.25%増加した。その有病率にもかかわらず、移植後の生存率は33、4、54,5で停滞している。15年の患者生存率は53%と報告され、20年の患者生存率は21%3、5と低3,5い。新しい治療法や臨床成果の改善につながる可能性のあるエキサイティングな新しい免疫生物学のイニシアチブがありますが、それらをテストするための信頼性の高い小動物モデルはまだありません。
ラットOLTモデルは、拒絶,,反応66、7、8、9、10、7,8免疫寛容性11、移植虚血再灌流傷害12、免疫10抑制13、胆道樹損傷14、15、16、17,15,16,を含む肝臓移植の調査に広く使用されている。917しかし、現在の形態におけるモデルの欠点は、その高い術後罹患率および死亡率18、19,である。これは人間の操作と対立している重大な欠点であり、モデル20から臨床的に関連する結論を引き出す能力を損なう。
さらに、この罹患率の大部分は、存在しない、または不完全な肝動脈(HA)再接続18に起因することができる。ヒト肝臓移植の重要なステップであるが、技術的な困難はラットOLTモデルにおけるHA再接続を損なう傾向がある。その結果、胆管(BD)吻合は緊張し、胆汁漏れおよびBD壊死率が高い結果となる。胆道合併症22の高発生率を超えて、動脈流入の欠如は移植片肝臓移植後23の生理学を変え、ドナー肝臓移植片24の低酸素症および炎症した葉の炎症を起こした葉19、25、2625,26で観察された肝臓損傷を有する。19動脈リコネクションのないラットOLTも線維症27を促進する傾向がある。以下に説明するラットOLTプロトコルは、以前に公表されたラットOLT法28を用いた簡単なHA再構成ステップを組み込むことでこれらの問題に対処し、肝臓のパレンチマの保存と生存率の向上をもたらす。
肝臓移植には、(1)ドナーからの肝臓移植片の抽出、(2)ドナー肝臓移植片の調製、および(3)レシピエント肝臓を肝臓移植片に置換する3つの相を有する。この手順は、上皮下静脈(SHVC)、門脈静脈(PV)、インフラ下静脈(IHVC)、肝動脈(HA)、胆管(BD)の5つの解剖学的構造の操作を含む。
ラット中のOLTは、SHVC、PVおよびIHVCの微小吻合を用いて、まず、BD29のプルスルー技術を用いてLeeらによって導入された。このモデルは197930年に2カフ技術を使用して後に改良された。それ以来、いくつかの代替技術が提案されており、大部分は静脈吻合に焦点を当て、いくつかの修正を加えた2カフ技術を使用する31。27,HA吻合は、マイクロスチャー、カフ、およびイントラアルミニウムスリーブ,26、31、32、33、34などの技術を用26,いたラットOLTモデルに以前に説明されているが、これらの技術はしばしば高度な訓練を受けた微小外科的スキルを必要とし、ラット生理学を有意に変化させ、血栓症および/または胆道合併症によって妨31,32,3334げられる。
さらに、外科的処置の選択はまた、ラット肝移植の成功のために重要である、肝制時間(PVクランプから再構成されたPVを通る移植片の再灌流までの時間)に影響を与える可能性がある。具体的には、高い生存率は15〜20分36の無肝時間で観察され、30分は成功の上限である37、38。37,したがって、この方法の目的は、肝動脈を再接続し、移植された肝臓の効率的な灌流を促進し、レシピエント胆管への流れを維持し、レシピエントの生理学的状態を維持することができる、より侵襲的で、より容易に採用可能な外科用ラットOLTモデルを実施することです。
ここでは、ドナー肝臓のセリアックトランクの操作や1)1.5mmステントを使用して、受取人の適切なHAとの外皮スリーブ接続を行うなど、この改訂されたプロトコルのすべてのステップについて詳述します。 2)SHVC再構成のための流れ縫合糸、3)PVおよびIHVC再構成用の2つの3Dプリントプラスチックカフス39、40、4)HA39401818、27、4127および415)に対する微小血管スリーブリコネクションを、先に説明したBDステント技術28。,,PV によるコールド フラッシュと、以前の調査結果17に基づく抗生物質レジメンの 2 つの追加ステップも含まれます。この最適化されたOLTプロトコルは、周術期合併症および罹患率を最小限に抑え、ヒト肝臓移植に用いられた外科的手術手順をより密接にモデル化する。

<table><tbody><tr><td>10-0 Ethilon</td><td>Ethicon</td><td>2830G</td><td>10-0 Ethilon Black 1X5" BV100-4 テーパー</td></tr><tr><td>10mL シリンジ</td><td>BD</td><td>B302995</td><td>Luer-Lok チップ、滅菌済み、使い捨て</td></tr><tr><td>1mL シリンジ</td><td>BD</td><td>B309628</td><td>Luer-Lok チップ、滅菌済み、使い捨て</td></tr><tr><td>20mL シリンジ</td><td>BD</td><td>B301031</td><td>Luer-Lok チップ、滅菌済み、</td></tr><tr><td>IHVC</td><td></td> <td>用使い捨て 3D プリントカフ</td><td></td></tr><tr>PV<td></td><td></td><td></td><td>用カスタム3Dプリントカフ</td></tr><tr><td>IHVC</td><td></td><td></td><td></td>用カスタム3Dプリントホルダー</tr><tr><td>PV</td><td></td><td></td>用カスタム3Dプリントホルダー <td>PV用カスタム</td></tr><tr><td>3mLシリンジ</td><td>BD</td><td>B309657</td><td>Luer-Lokチップ、滅菌済み、使い捨て</td></tr><tr><td>4-0 Sofsilk</td><td>Coviden</td><td>GS-835</td><td>Wxコード化編組シルク、30インチ、縫合糸1本針26mm長さ1/2サークルテーパーポイントニードル</td></tr><tr><td>5-0モノクリル</td><td>エチコン</td><td>Y433H</td><td>未染色モノフィラメント1X27 "TF</td></tr><tr><td>5mLシリンジ</td><td>BD</td><td>B309646</td><td>ルアーロックチップ、滅菌、使い捨て</td></tr><tr><td>7-0</td>シルク<td>テレフレックスメディカル</td><td>103-S</td><td>ブラック</td></tr><tr><td>8-0プロレン</td><td>エチコン</td><td>2775G</td><td>8-0プロレンブルー1X24"BV130-5EVPダブルアーム</td></tr><tr><td>バラカーマイクロニードルホルダーキャッチなし</td><td>Aesculap外科用器具</td><td>FD231R</td><td>湾曲120ミリメートル、4 3/4&プライム;</td></tr><tr><td>バラカーニードルホルダー、極細顎8.0mm、ロックなしで湾曲</td><td>Rumex International Co.</td><td>8-025T</td><td>小型 チタン</td></tr><tr><td>バラッカー ニードルホルダー 細顎 12.0mm 湾曲 アウトロックなし</td><td>Rumex International Co.</td><td>8-021T</td><td>小型、チタン</td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard BC 22 GA x 1.00 IN</td><td>BD 血管 / オートガード</td><td>382523</td><td>22 G x 1.00" (0.9 mm x 25 mm) ウィングレスカテーテル、37 mL/分</td></tr><tr><td>BDPrecisionGlide 使い捨て針: レギュラーベベル - レギュラーウォール。</td><td>BD</td><td>B305106</td><td>PrecisionGlide ステンレス製ニードル、半透明、色分け、ポリプロピレン製ハブ 22 G</td></tr><tr><td>BD プレシグライド シリンジニードル 21G</td><td>BD</td><td>305167</td><td>ゲージ 21、長さ 1.5 インチ、皮下注射針</td></tr><tr><td>BD プレシグライド シリンジ ニードル 30G</td><td>BD</td><td>305128</td><td>ゲージ 30、長さ 1 インチ、皮下注射針</td></tr><tr><td>ベタジン ソリューション by Purdue Products LP</td><td>Purdue Products Lp</td><td>67618-150-17</td><td>10%ポビドン&ndash;ヨウ素局所溶液USP</td></tr><tr><td>ブピバカイン注射BP 0.5%</td><td>ステリマックス株式会社</td><td>DIN:02443694</td><td>0.5% (100mg/20mL)</td></tr><tr><td>湾曲結束鉗子</td><td>ダックワース &ケント</td><td>2-501E</td><td>6mmタイイングプラットフォーム、ストレートシャフト、フラットハンドル、長さ88mm</td></tr><tr><td>DC温度</td><td>コントローラーFHC Inc.</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>DKアイリスハサミ(湾曲)</td><td>ダックワース &ケント</td><td>1-211B</td><td>鈍い先端、切断長さ4mm、先端からピボットまでの長さ11mm、丸ハンドル、長さ107mm</td></tr><tr><td>エタノール、200プルーフ(100%)、USP、Decon Labs</td><td>Decon Labs、Inc.</td><td>2716</td><td>d2H2Oで70%に希釈</td></tr><tr><td>微調整ワイヤーリトラクター</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>17004-05</td><td>最大スプレッド:3.5cm、深さ5cm</td></tr><tr><td>ハーバード装置 イソフルラン漏斗充填気化器</td><td>ハーバードアパルタスリミテッド</td><td>34-1040SV</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリンレオ(ヘパリンナトリウム)</td><td>レオファーマ株式会社</td><td>DIN:00453811</td><td>10,000 i.u./10 mL</td></tr><tr><td>Ice-Pak</td><td>Cryopak</td><td>FIP88016</td><td>4.00 in. x 7.00 in., thickness 1.50 inch</td></tr><tr><td>Isoflurane United States Pharmacopeia (USP) 99.9%</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>DIN: 02231929</td><td>250 mL, 吸入麻酔薬, NDC 66794-017-25</td></tr><tr><td>Khaw 経結膜調整可能縫合糸制御鉗子</td><td>Duckworth &ケント</td><td>2-502N</td><td>5mm高度に磨かれた結束プラットフォーム、ストレートシャフト、フラットハンドル、長さ84mm</td></tr><tr><td>乳酸リンガーの注入USP、1000mL</td>バ<td>クスター株式会社</td><td>DIN:00061085</td><td>JB2324</td></tr><tr><td>マクファーソンタイイング鉗子</td><td>ダックワース&ケント</td><td>2-500E</td><td>6mm 結束プラットフォーム、ストレートシャフト、フラットハンドル、長さ 90mm</td></tr><tr><td>メッツェンバウムはさみ - 14.5 cm</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14024-14</td><td>ストレートシャープ/ブラント</td></tr><tr><td>マイクロ キッツミラークランプ</td><td>スキャンラン</td><td>3003-630</td><td>顎の長さ 23mm、長さ 11cm</td></tr><tr><td>顕微鏡-ライカ M525 F20</td><td>ライカマイクロシステム</td><td></td><td>カタログ番号なし</td></tr><tr><td>不織布ガーゼスポンジ</td><td>フィッシャーブランド</td><td>22-028-556</td><td></td></tr><tr><td>オルセン・ヘガー 縫合カッター</td><td>付き ファインサイエンスツール</td><td>12002-14</td><td>15 mm 刃先、2mm 顎表面 - 14cm</td></tr><tr><td>OptixCare アイルーブ、25gm</td><td>OptixCare</td><td>ES-KE8O-69U1</td><td>旧 OptixCare 外科用アイ潤滑剤</td></tr><tr><td>ピペラシリンナトリウム塩</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>P8396</td><td>ペニシリンアナログ</td></tr><tr><td>ピューリタン 3 インチ スタンダード綿棒 w/木製ハンドル</td><td>ピューリタンメディカルプロダクツカンパニーLLC</td><td>803-WC</td><td>木製ハンドル付きレギュラーコットンチップアプリケーター</td></tr><tr><td>ラウンドハンドルニードルホルダー ストレート ロック付き</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>12075-12</td><td>ラウンドハンドルにより、指先で簡単に調整できます - 12.5cm</td></tr><tr><td>シアはさみ 湾曲 鈍</td><td>いファインサイエンスツール</td><td>14105-12</td><td>軽くて繊細なパターンの移植はさみ - 12cm</td></tr><tr><td>ステンレス鋼マイクロSerrefines湾曲 - 4ミリメートル</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-06</td><td>顎の長さ4ミリメートル、顎幅0.75ミリメートル、全長16ミリメートル、顎の圧力125グラム</td></tr><tr><td>ステンレス鋼マイクロSerrefines湾曲 - 6ミリメートル</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-05</td><td>顎の長さ6ミリメートル、顎幅1ミリメートル、全長17ミリメートル、顎の圧力100グラム</td></tr><tr><td>ステンレス鋼マイクロSerrefinesストレート - 6ミリメートル</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-03</td><td>顎の長さ6mm、顎の幅1mm、全長15mm、顎圧100g</td></tr><tr><td>手術プラットフォーム</td><td></td><td></td><td>カスタム、磁気</td></tr><tr><td>SurgiVetヴェイパースティック麻酔器</td>一般<td>麻酔器</td>株式会社 <td>V7015</td><td></td></tr><tr><td>T/ポンプローカライズセラピー</td><td>ストライカーTP700</td><td></td><td>シリーズ</td></tr><tr><td>真空圧力ポンプ</td><td>Barnant Co.</td><td>400-1901</td><td></td></tr><tr><td>Vannas はさみ、マイクロセレーションストレート</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15070-08</td><td>刃先:5mm、先端径:0.1mm - 8.5cm</td></tr><tr><td>獣医学ブプレノルフィン</td><td>Ceva アニマルヘルス株式会社</td><td>NAC No.:12380352</td><td>0.324 mg/ml ブプレノルフィン水塩化物 犬と猫のための注射用溶液</td></tr><tr><td>Vetroson V-10 バイポーラ電気メスユニット</td><td>サミットヒル研究所</td><td></td><td>いいえカタログ番号</td></tr><tr><td>サージカルドレープ</td><td>PDC ヘルスケア</td><td>DRP1824</td><td>多目的滅菌透明プラスチック、18インチ x 24インチ、40 /ケース</td></tr></tbody></table>

ラット型異形肝移植モデルにおける動脈リコネクション後の合併症の減少

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

ラットの異形性肝移植(OLT)モデルは、急性および慢性拒絶反応を研究するための強力なツールです。しかし、動脈の再接続がないため、ヒト肝臓移植の完全な表現ではありません。ここに記載されているのは、肝動脈(HA)の再結合を含む改変移植手順であり、移植結果の著しい改善につながる。平均12分および14秒の平均抗肝時間で、HAの再接続は、移植された肝臓の灌流を改善し、37.5%から88.2%に長期のレシピエント生存期間の増加をもたらす。このプロトコルは、ポータル静脈とインフラフェパティック劣った静脈を接続するために3Dプリントされたカフスとホルダーの使用が含まれています。これは、肝臓移植の複数の側面を研究するために実装することができます, 免疫応答や感染症から手順の技術的な側面に.この修飾ラットOLTプロトコルは、微小血管技術を用いた動脈の再接続のための簡単かつ実用的な方法を組み込むことで、ヒトの肝臓移植の側面を密接に模倣し、貴重で臨床的に関連する研究モデルとして機能する。

先に説明したプロトコル28を用いて非HA吻合ラットOLTモデルを確立する一方で、我々のチームは、それぞれ21日と60日後に50%および37.5%の生存率を観察した。HA吻合のない長期生存率が高い場合、28のグループでは報告されているが、これらの初期の結果は動脈の流入を有さないという欠点を強調している。対照的に、最適化されたHAリコネクション手順は、長期生存期間を37.5%から88.2%(p = 0.015)に有意に増加させた(図6)。
HAリコネクションを伴わない移植動物の代表的なサブセットの組織学的分析(6日目および13日目の手術後)は、眼球壊死による低酸素性肝損傷の徴候を示した(図7)。広範な肝壊死は、これらの動物におけるアラニンアミノトランスセファーゼ(ALT)およびアスパラギン酸アミノトランスセファーゼ(AST)の非常に高いレベルと関連していた(図7)。対照的に、移植されたラットは、HAリコネクションで肝損傷の徴候を示さなかったし、組織化されたアチーニ、小葉(例えば、中央静脈および肝静脈を有する門脈)、動脈および胆管を有する正常な肝臓の接合構造を明らかにした(図7)。
23回の別々の操作の間に平均の抗肝時間は許容されたが(12分および14 s[±78 s])、非HA再接続モデルでの生存は、最終的に増加した練習で改善することができる。しかし、HAの再接続なしで移植された4匹の動物のうち3匹(長期生存のために追跡されていた)は、56日、96日、111日目の苦痛のために安楽死させたことは注目に値する。さらに、肝臓の組織学的分析は、著しい胆管増殖、門脈線維症および炎症、および歪んだ肝臓のパレンチマを含む低酸素肝傷害後の反応性変化を明らかにした(補足図2)。低酸素性肝損傷の形態学的特徴の存在は、HA再接続が効率的な肝臓灌流および正常な機能にとって重要であるという知見を裏付ける。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig1.jpg"> 図1:ポータル静脈とインフラフェパティック下静脈の3Dプリントカフデザインの模式図。 最初のネクタイはハンドル(iii)に最も近い溝(ii)で締め付け、2番目のネクタイはハンドルから最も遠い溝(i)で締め付けます。外径は、(iv)ポータル静脈(PV)2.38mm、インフラフェパティック下静脈(IHVC)の2.15mmです。内径は、PVの場合は(v)1.74 mm、IHVCの場合は1.38mmです。長さは、(vi) PV 2.60 mm、IHVC 用 2.15 mm です (すべての 3D プリント材料の正確な仕様は 補足資料にあります)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig1large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig2.jpg"> 図2:移植片における肝動脈ステント挿入。(A)セリアック幹(i)の開口部端部は、脾動脈を左胃動脈に切断することによって広がり、共通HAの分岐を露呈する。(ii) BDステントは、ドナーラット肝臓の抽出前に結ばれている。(iii)PVカフと(iv)IHVCカフは、袖口の上に容器の端部を折りたたんで挿入され、結ばれています。(B)(i) HAステントを挿入するために、露光された共通HAは鉗子で複数回伸張される。(C) (i) HA ステントは、HA に安全に配置され、8-0 で結ばれています。プロレン。(D)(i) HAステントは(ii)リンガーの乳酸溶液(BD=胆管、IHVC=インフラ下静脈、HA=肝動脈)で洗い流される。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig2large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig3.jpg"> 図3:3Dプリントホルダーを使用したインフラヘパティック劣ったカバ接続。 (A) (i) PV は、IHVC 接続と同じ手法を使用して接続されます。移植片は(ii)IHVCカフの上にクランプされる。受け取ったIHVC開口部は、開口部の側面で(iv)3Dプリントホルダーに縫合され、開いた状態に保ちます。緩い(v)7-0シルクは、受取人IHVCの周りに結ばれています。(B)移植片IHVCのカフは、(i)レシピエントIHVC内に挿入される。緩いネクタイが締め付けになりました。(C)クランプを取り外し、(i) 3Dプリントホルダーははさみで取り外します。(D) 追加の (i) 7-0シルクは、安全でない場合は接続の周りに結ばれていますが、通常は 1 つのネクタイで十分です (PV = ポータル静脈, IHVC = インフラパティック下静脈). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig3large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig4.jpg"> 図4:肝動脈の微小血管スリーブ接続。(A) (i) BD ステントが受信者に接続されていない。(ii)HAステントは、(iv)レシピエントの適切なHAにリンクされている移植片に配置される。(iii) PVが接続されている。(B)10-0エチロン(i)湾曲針を有するエチロンは、HAステントを通して受信者HA開口部端の側面に引き込まれる。B(C) 10-0 エチロンは HA ステントを通して引き戻されます。したがって、受取人の適切なHAはステントをスリーブのように引き抜きます。(D) (i) 10-0 エチロンのネクタイは、受信者の適切な HA が最初に HA ステントを通る部分にステントに引き込まれると行われます。(E)図示は、(B)、(C)及びC(D)(BD=胆管、HA=肝動脈、PV=門脈)に記載のHA吻合の模式図である。D*セリアックの幹の開口は、左胃動脈に脾動脈を切断することによって広がる。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig4large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig5.jpg"> 図5:2つのステントを使用した胆管接続。(A)(i) グラフトBDステントは、受取人のBDの開口部でゆるやかに結ばれた(ii)ステントの助けを借りて受取人BDに挿入される。B(C)受け手側ステントをゆるやかに固定しているネクタイが接続を結ぶのに使用され、(i) ステントの滑りやねじれを避けるために、別の7-0シルクがしっかりとステントを固定するために使用されます。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig5large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig6.jpg"> 図6:移植率生存率。 HAリコネクションなしの直交性ラット肝移植(n=8)及びHAリコネクション(n=17)を用いた。動物は、少なくとも60日間、肝不全および/または感染の徴候に対する移植後に密接に従う。手術後に合併症を示さなかったラットは生存者と見なされた(*p = 0.015、カプラン・マイヤー推定[ロングランクテスト]によって計算された)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig6large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig7.jpg"> 図7:肝臓組織病理学的評価肝臓移植後6日目および13日目に肝動脈(HA)再接続を伴う(A)動物(A)を有する代表的なヘマトキシリンおよびエオシン染色切片(A)。(C)正常な肝臓のパレンチマは、門脈のトライアド(門脈、動脈、胆管)、中央静脈、およびアチーニを含む小葉を示す。ポータルトライアドの隣にある肝細胞はゾーン1肝細胞です。葉葉内の中央静脈の隣にある肝細胞は、ゾーン3肝細胞である。ゾーン1と3の間の肝細胞は、ゾーン2肝細胞(ALT=アラニンアミノトランスビシラーゼ、AST=アスパラギン酸アミノトランスセファーゼ、CV=中央静脈)である。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig7large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Supplementary Figure 1" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1.jpg"> 補助図1:ステントとカフ寸法<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1large.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Supplementary Figure 2" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2.jpg"> 補助図2:肝臓パレンチマの破壊を示す肝臓組織病理学的評価 LTxの後の54、96、および111日でHA再接続のない動物の代表的なヘマトキシリンおよびエオシン染色切片は、 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2large.jpg" target="_blank">この図のより大きなバージョンを表示するにはここをクリックしてください。</a>
補足材料1:ポルタカフ200g - サポート2.0。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary1.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料2:カヴァカフ200g - サポート2.0。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary2.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料 3: 肝臓のレトラクター 200g.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary3.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料4:バックホルダー - 1.2。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary4.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料 5: Cava 150g - 2.1.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary5.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料 6: ポルタ 1.4.1.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary6.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料7:ホルダーアームマクギル。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary7.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料8:ホルダーミニアームラボ。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary8.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料9:ホルダーおよび腕のソフトパーツ1.3。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary9.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>
補足材料 10: ホルダーベース - 3.1.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary10.stl" target="_blank">このファイルを表示するには、ここをクリックしてください (右クリックしてダウンロードしてください)。</a>

本研究の目的は、ヒトの肝臓移植をよりよく表し、レシピエントの生存率を改善するために、ラットの異所性肝移植モデルを変更することです。提示された方法は、ドナー肝臓の一般的な肝動脈をレシピエント肝臓の適切な肝動脈に接続することによって、肝動脈の流入を再確立する。

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

ラットの異形性肝移植モデルは、肝臓移植の複数の側面を研究するための強力なツールです。感染に対する免疫応答から、手順の技術的側面へ。この技術の主な利点は、合併症を減らし、来たてくる肝臓移植をよりよく表し、レシピエントの生存率を向上させることができるということです。この改変ラットの異形性肝移植プロトコルは、ヒトの肝臓移植の側面を密接に模倣し、可変的で臨床的に関連する研究モデルとして機能する。視覚デモンストレーションを通して、視聴者がすべての詳細を学び、この技術に必要なマイクロサージャストスキルを習得するための学習曲線を短くできることを願っています。ヘパリンナトリウムの300国際単位を麻酔後12〜14週齢ラットの肝内劣性カバに注入した後、胆管二切れ下に5ミリメートルの切開を行い、胆管ステントを共通の胆管に挿入する。切り込みから1ミリメートル上の7-0シルク合字、1つの合字、分岐の10ミリメートル下の1つの合字でステントを固定します。2つのネクタイの間に胆管を切断し、適切な肝動脈を露出.2つの7-0シルク合字の間で胃十二指腸動脈を分割し、左胃動脈、脾動脈およびセリアック幹を露出させる。その後、左胃動脈、脾動脈、および動脈の間のセリアック幹を切断します。21.5ゲージの針を装備した20ミリリットルの注射器を使用して、ゆっくりと4度のリンガーの乳酸溶液をポータル静脈に注入します。ドナー肝臓を準備するために、セリアック幹の分岐を切り開き、脾動脈および左胃動脈より大きな動脈スリーブを形成し、カフを介してドナー共通肝動脈ステントに長さ1.5ミリメートルの長さ24ゲージ動脈ステントを挿入する。その後、8-0でステントを確保ポリプロピレン合字とリンガーの乳酸溶液でステントを洗い流します。12〜14週齢のラットのレシピエントの門脈を露出させた後、受取人の胆管をタイル分岐の下0.5センチメートルで分割し、遠位共通胆管に胆管ステントを挿入する。左、中、右肝動脈を露出し、血管を遠位の肝動脈分岐に結び付ける。ネクタイの上の肝臓に近い動脈を切断し、超肝的な下の大静脈の後ろにガーゼの長い薄い部分を置きます。3Dプリントされた肝内静脈のカバホルダーを肝内静脈の後ろに置き、天野非吸収性モノフィラメント縫合糸を使用して3Dプリントされたハンドルの端を縫い合わせます。肝内大静脈と門脈の間の3Dプリントホルダーの下に7-0シルクの合字をゆるやかに結び、3Dプリントカバホルダーのすぐ下の右腎静脈のすぐ上に肝内静脈をクランプします。気熱静脈のすぐ上と3DプリントされたPVホルダーの下にポータル静脈をクランプします。27本のゲージ針を取り付けた3ミリリットルの注射器を使用して、ポータル静脈の分岐を介して摂氏37度リンガーの乳酸塩溶液の2ミリリットルを洗い流し、キッツミラークランプで肝臓の上のスーパー肝静脈をクランプします。その後、可能な限り肝臓の近くにクランプの下にカットし、レシピエント肝臓を除去するために、ポータル静脈と肝臓間静脈の両方の3Dプリントホルダーの上にカットします。ドナーの肝臓移植のために、上石畳の吻合を作り出すことができるように、ドナーの肝臓をレシピエントの体内に慎重に向ける。ドナーからポータル静脈カフをレシピエントポータル静脈に挿入し、7-0シルクのネクタイを締めます。スーパー肝静脈から外傷性クランプを取り外し、門脈の微小血管クリップを取り外します。肝臓に温かい血液を再浸透した後、ドナーの肝内静脈カフをレシピエント肝内静脈に挿入し、7-0シルクタイで血管を固定します。次に、ドナーの肝内静脈カバクリップを取り外してから、受信者クリップを取り外します。動脈吻合を行うために、ステントを越えて伸びるドナーからセリアック幹の部分を切り落とし、レシピエントの適切な肝動脈をクランプする。最後にネクタイを切断し、血管を囲む余分な組織。そして、リンガーの乳酸溶液を使用して、ドナーとレシピエント容器の両方のルーメンを洗い流します。湾曲した針を使用して、ドナー肝動脈の左側面を通って10-0エチロン縫合糸を、ステントの遠位オリフィスの上に2.5ミリメートル、ステントの端を通って出る。血管の左側から、血管の右側に、受取人の適切な肝動脈0.5ミリメートル下にトランスフィックスします。次の縫合糸は、ドナー肝動脈の右壁を通って、元のステッチと同じステントオリフィスから離れた位置に置き、10-0非吸収性モノフィラメントの両端を引き上げて、受取人の適切な肝動脈を滑り上げ、肝動脈ステントに入れる。その後、ドナー肝動脈の上に10-0非吸収性モノフィラメントをそれ自体と結びます。受け手とドナーの胆管の両方を洗い流し、ドナー胆管ステントをレシピエント胆管に挿入します。その後、以前にレシピエント胆管の周りに置かれたネクタイを締めます。本代表的な実験では、非肝動脈吻合骨症ラットの同位所性肝移植モデルは、それぞれ21日および60日で50および37.5%の生存率を示した。対照的に、最適化された肝動脈再接続手順は、長期生存期間を有意に増加させた。肝動脈リコネクションのない移植動物の代表的なサブセットの組織学的分析は、移植後6日目と13日目に、中枢小葉壊死による低酸素肝損傷の徴候を明らかにした。広範な肝壊死は、これらの動物におけるアラニン免疫転移およびアスパラギン酸アミノトランスファーゼの驚異的な上昇レベルに関連していた。対照的に、肝動脈リコネクションを有する移植ラットは肝臓損傷の徴候を示さなかったし、組織化されたアキニ、小葉、動脈および胆管を有する組織学的な肝臓の接合構造を組織した組織学的分析は、正常な肝臓の気質構造を明らかにした。さらに、非肝動脈再接続モデルラットからの肝臓の組織学的分析は、低酸素肝損傷後の反応性変化を明らかにした。市場胆管増殖、ペリ門脈管線維症および炎症、および歪んだ肝臓のパレンチマを含む。このプロトコルは、肝臓移植の多くの免疫学的および外科的側面を研究するために適応することができ、移植に関連する新しい治療介入をテストするためのモデルとして役立つことができる。

reduced-complications-after-arterial-reconnection-rat-model

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

ここでは、ゴールドスタンダードと思われる同所性ラット後肢移植の手順を、説明します。...

ラット同所性後肢移植

我々は簡単に確立するためにラット同所性肝移植のための古典的な2カフ法の改正を提示します。...

ラット同所性肝移植

ラットにおける同所性肝移植は、生物医学研究のための不可欠な実験モデルである。ここで我々は50％の部分移植を用い肝動脈再建同所ラット肝移植のための私達の手術を提示します。...

肝動脈再建を用いた部分同所性肝移植のラットモデルのための外科的処置

補助肝移植は、失敗した肝臓の再生まで、急性肝不全の一時的なサポートを提供します。門脈動脈化（PVA）と異補助肝移植（HALT）は、十分な肝機能をレンダリングします。私たちは、移植片の形態と機能に門脈動脈化の影響を調べるために、ラットに類似した技術を開発しました。...

急性肝障害における流れ調節性門脈動脈血と異補助ラット肝移植

ここでは、再門脈ラット部分肝移植を含むプロトコルが表示されます。具体的には、70% 肝切除だった体内肝の血管指向の更新手法を用いた肝動脈は、-側の方法で再建されました。カフのテクニックは、infrahepatic...

再門脈部分肝移植のラット体内血管指向 70% 肝切除

Suprahepatic 下大静脈 (グラフト) の再建のままラット同所性肝移植における困難なステップです。この記事で新規磁気吻合法を用いたラットにおけるグラフト再建の手順を追ってプロトコルを示す.

同所性同種のモデルラット Suprahepatic 上大静脈再建のため新規磁気吻合法を用いた肝移植

本論文では、肝移植後の虚血再灌流傷害に関する基礎研究を容易にするために、ラットにおける肝相(肝虚血)の動物モデルを構築する方法を詳しく説明する。...

ラット肝移植モデルにおける血球力学的変化をシミュレートすることによる臓器虚血再灌流損傷

このプロトコルでは、生着中に静脈-静脈バイパスを使用せずにドナー臓器を20時間静的に冷蔵した後のブタ同所性肝移植のモデルが説明されています。このアプローチでは、無肝相を最小限に抑え、体積と昇圧剤の管理を簡素化した外科的技術を使用します。...

拡張基準ドナーモデルとしての静脈バイパスなしのブタ肝移植

このプロトコルは、マウス同所性肝移植におけるカフ技術を使用した血管再建のための技術情報を提供します。...

マウス同所性肝移植におけるカフ技術による血管再建

このビデオでは、ラットでは移植の血管障害（TVP）の開発を研究するための単純なモデルとして同所性大動脈移植モデルを示しています。...

同所性大動脈移植：慢性血管障害の発生研究のラットモデル

学ぶラット型異形肝移植モデルにおける動脈リコネクション後の合併症の減少について。マイクロサージャリー技術を用いた改良手術法により、長期生存率の向上と肝障害の軽減を実現する方法を詳しく解説します。

ラット型異形肝移植モデルにおける動脈リコネクション後の合併症の減少

さらに動画を探す