Name: ピロカルピン誘導てんかんマウスにおける記憶機能の評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 34 s
Description: 学ぶ ピロカルピン誘導てんかんマウスにおける記憶機能評価プロトコル。新規物体位置認識・新規物体認識・パターン分離テストを用い、低ストレスで空間記憶障害を評価する方法です。てんかん関連認知機能低下のメカニズム解明に貢献します。

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ジェイミン・リー博士の技術サポートに感謝します。この研究は、韓国政府が資金を提供する韓国国立研究財団(NRF)助成金(NRF-2019R1A2C1003958、NRF-2019K2A9A2A0800167)によって支援されました。

著者らは開示するものは何もない。

この研究は、慢性てんかんを有するマウスにおける認知機能を評価するための実験的手順を説明する。多くの異なる行動テストパラダイムは、マウス18の学習および記憶機能を評価するために使用される。モリス水迷路、ラジアルアーム迷路、Y迷路、文脈恐怖コンディショニング、およびオブジェクトベースのテストは、最も頻繁に使用される行動テストであり、信頼性の高い結果を提供します。中でも、NL、NO、およびPS試験は、てんかんマウス88,1010における学習と記憶を評価するための効率的で簡単な方法である。てんかんマウスは行動セッション中に予期せぬ自発的な発作を起こす可能性があるため、恐怖のコンディショニング、軽度の飢餓、または強制的に泳ぐなど、他の肯定的または否定的な強化剤を追加することなく、動物の自然な傾向に基づく行動検査を使用して、再発発作を引き起こす可能性があります。,20さ...

てんかんは、自発的な,再発発作1、2、32を特徴とする1慢性疾患である。3反復発作は,5,,脳1、2、32において構造的および機能的異常を引き1起こす可能性があるため、異常発作活動は、最も一般的なてんかん関連の併存疾患の1つである認知機能障害に寄与し得る。3一過性で一時的な慢性的な発作イベントとは対照的に、認知障害はてんかん患者の生涯を通じて持続し、生活の質を低下させる可能性があります。したがって、てんかん関連認知機能低下の病態生理学的メカニズムを理解することが重要である。
,てんかんの様々な実験動物モデルは、慢性てんかん,7、8、9、10、11、128,に関連7する学習と記憶障害を12実証するために使用されてきた。91011例えば、モリス水迷路、文脈恐怖コンディショニング、ホールボード、新規物体位置(NL)、および新しい物体認識(NO)試験は、側頭葉てんかん(TLE)における記憶機能障害を評価するために頻繁に使用されてきた。海馬は、TLEが病理を示す主要領域の1つであるため、海馬依存性記憶機能を評価できる行動検査が優先的に選択されることが多い。しかし、発作が異常な海馬神経新生を誘発し、てんかん関連認知機能低下10に寄与する可能性があることを考えると、デンテート新生児神経機能を検査するための行動パラダイム(すなわち、空間パターン分離、PS)8、13はまた8,13、てんかんにおける記憶障害の細胞メカニズムに関する貴重な情報を提供することができる。
この記事では、てんかんマウスのメモリテスト(NL、NO、PS)のバッテリーを示します。テストは簡単で簡単にアクセスでき、洗練されたシステムを必要としません。

<table><tbody><tr><td>1mlシリンジ</td><td>Sung-shim</td><td></td><td>26または30ゲージの針と一緒に使用</td></tr><tr><td>70%エタノール</td><td>Duksan</td><td>UN1170</td><td>ボックスやオブジェクトをきれいにするための</td></tr><tr><td>スプレー 黒いカーテン</td><td></td><td></td><td>不必要な視覚的な手がかりを避けるため</td></tr><tr><td>クレシルバイオレット</td><td>シグマ</td><td>C5042</td><td>クレシルバイオレット染色用</td></tr><tr><td>クライオトーム</td><td>ライカ</td><td>E21040041</td><td>ティッシュ用セクショニング</td></tr><tr><td>両面粘着テープ</td><td></td><td></td><td>対象物をしっかりと配置するために</td></tr><tr><td>DPX封入剤</td><td>シグマ</td><td>06522エ</td><td></td></tr><tr><td>タノールシリーズ</td><td>Duksan</td><td>UN1170</td><td>100%、95%、90%、80%、70%のエタノール溶液を作る</td></tr><tr><td>狭いグリッドパターンの床板</td><td>Leehyo-bio</td><td></td><td>行動実験装置、プレートサイズ:42.5 x 42.5 x 0.5 cm、グリッドサイズ:2.75 x2.75 cm</td></tr><tr><td>床板 幅広格子模様</td><td>Leehyo-bio</td><td></td><td>行動実験装置、プレートサイズ:42.5 x 42.5 x 0.5 cm、グリッドサイズ:5.5 x 5.5 cm</td></tr><tr><td>照度計</td><td>TES Electrical Electronic Corp.</td><td>1334A</td><td>室内照明の測定用(60ルクス)</td></tr><tr><td>集中治療室</td><td>Thermocare</td> <td>#W-1</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン塩酸塩</td><td>Yuhan</td><td>7003</td><td>経心灌流用マウスの麻酔に使用</td></tr><tr><td>LEDランプ</td><td>Lungo</td><td>P13A-0422-WW-04</td><td>行動試験室の</td></tr><tr><td>物体</td><td></td><td></td><td>の照明ゴム人形、50mlプラスチックチューブ、ガラスコプリンジャー、プラスチックTフラスコ、ガラス瓶</td></tr><tr><td>オープンフィールドボックス</td><td>Leehyo-bio</td><td></td><td>行動実験装置、サイズ:44 x 44 x 31 cm</td></tr><tr><td>ペーパータオル</td><td>Yuhan-Kimberly</td><td>47201</td>オープン<td>フィールドボックスとオブジェクトを乾燥させるために使用</td></tr>パラ<tr><td>ホルムアルデヒド</td><td>メルクミリポア</td><td>104005</td><td>4%溶液ピ</td></tr><tr><td>ロカルピン塩酸塩</td><td>シグマ</td><td>P6503を作る</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>定規</td><td>オープンフィールドボックス内のオブジェクトを見つけるために使用</td></tr><tr><td>スコポラミン 硝酸メチル</td><td>シグマ</td><td>S2250</td><td>10倍ストックを作る</td></tr><tr><td>スマートシステム 3.0</td><td>Panlab</td><td></td><td>ビデオ追跡システム</td></tr><tr><td>ストップウォッチ</td><td>Junso</td><td>JS-307</td> マウスの探索<td>的活動の測定用</td></tr> ス<tr><td>クロー</td>ス <td>シグマ</td><td>S9378</td><td>組織切片テル</td></tr><tr><td>ブタリン半硫酸塩</td><td>シグマ</td><td>T2528</td><td>を作るために10Xストック</td></tr><tr><td>ビデオカメラ(CCDカメラ)</td><td>ビジョン</td><td>VCE56HQ-12</td>カメラを直接オープンフィールドボックスキシラジン(ロンプン)<td>の頭上にカメラを置き</td></tr>ますバイ<tr><td></td><td>エル韓国</td><td>KR10381</td>経心灌流キシレンデュクサンUN1307<td>のためのマウスを麻酔するために使用します</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>クレシルバイオレット染色</td></tr></tbody></table>

ピロカルピン誘導てんかんマウスにおける記憶機能の評価

Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice

認知障害は、側頭葉てんかんの最も一般的な併存疾患の一つである。てんかんの動物モデルにおけるてんかん関連認知機能の低下を再現するために、ピロカルピン処理慢性てんかんマウスを生成した。これらのてんかんマウスを用いた3つの異なる行動テストのプロトコルを提示します:新しい物体位置(NL)、新規物体認識(NO)、パターン分離(PS)テストをそれぞれ、場所、物体、および文脈の学習と記憶を評価する。動物の基底運動活動を測定するオープンフィールドテストに続いて、行動装置を設定し、NL、NO、PS試験の実験手順を提供する方法を説明します。また、てんかんマウスにおける記憶機能を評価するための他の行動検査に関するNL、NO、およびPS試験の技術的利点についても説明する。最後に、てんかんマウスが慣れ親しんだセッション中に30 sの物体と良好な接触を行わなかった場合の考えられる原因と解決策について議論します。したがって、このプロトコルは、マウスを使用しててんかん関連記憶障害を評価する方法に関する詳細な情報を提供する。NL、NO、およびPSのテストは、てんかんマウスの異なる種類の記憶の評価に適した、シンプルで効率的なアッセイです。

認知機能を評価するための一般的な実験スケジュールと設定を図 1に示します。ピロカルピン誘発急性発作の導入から6週間後、マウスは、試験の間に3日間の休息期間で分離された順にNL、NO、およびPS試験を行った(図1A)。NL テストでは、慣れ親しんだセッション (F1) の間に 2 つの同一のオブジェクトがオープンフィールドに配置され、翌日に 1 つのオブジェクトが新しい場所に移動されました。NO テストでは、テスト セッション中に 1 つのオブジェクトが新しいオブジェクトに置き換えられました。PS テストでは、2 つの慣れ親しんだセッション (F1、F2) に、異なるフロア グリッド パターンとオブジェクトの組み合わせが導入されました。そして、試験日に、各慣れ親しんだセッションから1つのオブジェクトを狭いグリッド床パターンに配置し、狭いグリッドフロアパターンの文脈で1つのオブジェクトを斬新にした(図1B)。オープンフィールドボックスは、電荷結合デバイスカメラの下...

本稿では、ピロカルピン誘発てんかんマウスにおける記憶障害を評価するための実験的手順を提示する。このプロトコルは、てんかんの最も一般的な併存疾患の一つであるてんかん関連認知機能の病態メカニズムを研究するために使用することができる。

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal ...

認知障害は、側頭葉てんかんにおける最も一般的な共罹患率の1つである。慢性てんかんのマウスモデルを用いて記憶障害を評価する方法を説明するプロトコルを提示する。新しい物体の位置、新しい物体認識およびパターン分離テストは、動物に最小限のストレスを与えることができるシンプルで短いお尻である。これは、自発的な再発発作のための追加のトリガーなしに、てんかんマウスの記憶機能を評価するために、このテストを最適にします。まず、動物を自宅のケージの低光に少なくとも30分間順応させる。開いているフィールド ボックスを準備します。1日目に、開いたフィールドボックスの中央に習慣、場所、照度計を配置します。そして、照度を60ルクスに調整します。各マウスの運動活動を評価するには、動物行動ビデオ追跡ソフトウェアを使用します。ビデオトラッキングソフトウェアを開いたら、開いているフィールドボックスのサイズを調整します。次に、壁に面したオープンフィールドボックスに実験用マウスをそっと置きます。スマートプログラムを開き、[カスタマイズして受け入れる]をクリックします。[イメージ ソース] をクリックします。インストールされているカメラを選択したら、設定ボタンを押します。カメラの解像度を調整し、押して、受け入れます。キャリブレーションのクリック後、ボックスサイズに合わせてコンピュータのマウスをドラッグします。そして、内側のボックスのサイズを記入します。[ゾーン定義] をクリックして、各ボックスのサイズを保存して調整し、[保存] をクリックします。赤いボックスは追跡範囲であるため、内側のボックスサイズに収まり、ピンクのボックスはアウトラインに収まります。[検出設定]を押します。[スナップショット] をクリックし、[テストの開始] をクリックして特定の領域が追跡されているかどうかを確認し、テストの終了を事前に確認してから[承認]をクリックします。[時刻の設定] をクリックします。事前設定時間を選択した後、3秒の取得時間で待ち時間を15分に設定し、[Accept]を押します。[サブジェクト] を押してコード名を設定します。[スケジューラ] をクリックして既存の詳細を削除し、サブジェクトで変更したコード名をセッション 1 にドラッグします。[データ収集]をクリックします。[録音]ボタンをクリックし、[開始]をクリックします。ボックスにマウスを入れて、15分間追跡します。録音の15分後にマウスをホームケージに戻します。明るい光を元に戻します。[データ取得] をクリックします。次に、[アクティブ解析] コード名 Sham を隣のウィンドウにドラッグします。[レポート定義] ボタンをクリックします。[新しいレポート定義] ボタンをクリックし、[概要レポート] をクリックして[承認]をクリックします。[サブジェクト

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Research

JoVE Journal

Behavior

行動

このビデオでは、モデル側頭葉てんかんにピロカルピンを全身投与することにより、マウスでてんかん重積状態(SE)を誘発する手順を紹介しています。...

全身ピロカルピン治療:側頭葉てんかんのマウスモデル

このビデオは、てんかん誘発性ラットのてんかん発作の脳波(EEG)記録を示しています。腹側海馬に電極を埋め込んだラットを脳波記録システムに接続し、プレキシガラスチャンバーに入れます。ラットは自由に動くことを許され、脳の活動が記録されて発作の発生を監視します。...

てんかん誘発性ラットにおけるてんかん発作の脳波記録

出典:Soukupová, M., et al.自由に動くラットの脳波記録中の興奮性アミノ酸の微小透析。J. Vis. Exp.

慢性てんかん誘発ラットにおける興奮性神経伝達物質レベルの評価

このプロトコルの目標は、げっ歯類の空間認知を調査することです。ダブルHウォーター迷路は新しいテストであり、学習、統合、記憶のさまざまな要素、および記憶システムの相互作用を解明するのに特に役立ちます。...

ダブルH迷路：げっ歯類での学習と記憶のための堅牢な行動試験

この論文は、鍼治療、てんかんモデル、およびげっ歯類の睡眠の分析の性能を示しています。鍼治療の手順とツボの特定について説明します。ピロカルピンまたはペンチレンテトラゾール(PTZ)は、てんかんを誘発するために使用されます。睡眠分析には、皮質電図(ECoG)、筋電図(EMG)、脳温度、および自発運動活動の記録が使用されます。...

鍼治療によりラットとマウスにおけるてんかんElectrocorticograms（ECoGs）の操作とスリープ

このプロトコルは pentylenetetrazole と化学的キンドリングの方法を記述しててんかんのマウス...

Pentylenetetrazole 誘起キンドリング マウス モデル

本稿では、全身ピロカルピン注射によるてんかん重積状態を誘導して無線テレメトリー...

側頭葉てんかんと脳波監視テレメーター システムを使用してマウスのピロカルピン モデル

ここでは、腹側海馬脳波との組み合わせで、てんかんと非てんかんラットのアスパラギン酸とグルタミン酸のリリースを分析する体内マイクロダイアリシス法について述べる。アスパラギン酸とグルタミン酸の細胞外濃度は、病気のさまざまな段階と相関があります。...

自由行動ラットの脳波記録中に興奮性アミノ酸の透析

本報告では,トランスジェニックVGAT-Creマウスの電気キンドリングに基づいて側頭葉てんかんのモデルを生成する方法について述べる.Kindled...

側頭葉てんかんモデル作製のためのVGAT-CREマウスの電気的キンドリング電極の作製と移植

C57BL / 6マウスにおけるTheilerマウス脳脊髄炎ウイルス(TMEV)による脳内感染は、ヒト患者におけるウイルス性脳炎およびその後のてんかんの初期および慢性の臨床症状の多くを再現します。この論文では、TMEVモデルのウイルス感染、症状、および組織病理学について説明します。...

Theilerマウス脳脊髄炎ウイルスを用いた感染病因のてんかんモデル

発作は、さまざまな機能や生活の質に悪影響を及ぼします。プラナリア線虫は、発作の表現型と破壊的な運動性を評価するために、さまざまな濃度の化学けいれん薬に曝露されました。この研究は、プラナリア線虫をヒトの急性発作のモデルとして使用することを提案しており、てんかんの医薬品開発において重要です。...

実験的急性発作の動物モデルとしてのプラナリア

学ぶ ピロカルピン誘導てんかんマウスにおける記憶機能評価プロトコル。新規物体位置認識・新規物体認識・パターン分離テストを用い、低ストレスで空間記憶障害を評価する方法です。てんかん関連認知機能低下のメカニズム解明に貢献します。

ピロカルピン誘導てんかんマウスにおける記憶機能の評価

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