Name: 小さな毛髪サンプルで11の薬剤耐性結核薬を定量化するための検証済みのLC-MS/MSパネル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: 学ぶ 薬剤耐性結核治療の服薬コンプライアンス評価法。LC-MS/MSを用いて2mgの毛髪サンプルから11種類の抗結核薬を同時定量し、客観的な薬物曝露指標を提供する。早期の服薬問題検出により治療計画の改善と耐性発現防止に貢献する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者らは、ケープタウン肺大学のキールタン・デダ教授、アリ・エスメール博士、マリエチエ・プレトリウス教授に感謝したいと考えており、この研究のために毛髪サンプルの収集を促進した。著者らは、この研究の参加者の貢献をさらに感謝して認める。

<ol><li>WHO. Global Tuberculosis Control 2017. , Geneva. Available from: 
 <a target="_blank" href="www.who.int/tb/publications/global_report/en/">www.who.int/tb/publications/global_report/en/</a> (2017).</li>
<li>WHO. Tuberculosis. , Geneva. Available from: 
 <a target="_blank" href="www.who.int/mediacentre/factsheets/fs104/en/">www.who.int/mediacentre/factsheets/fs104/en/</a> (2017).</li>
<li>Kurbatova, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+poor+outcomes+among+patients+treated+for+multidrug-resistant+tuberculosis+at+DOTS-plus+projects%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Predictors of poor outcomes among patients treated for multidrug-resistant tuberculosis at DOTS-plus projects.</a> Tuberculosis (Edinb). 92, 397-403 (2012).</li>
<li>Dheda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology%2C+pathogenesis%2C+transmission%2C+diagnosis%2C+and+management+of+multidrug-resistant%2C+extensively+drug-resistant%2C+and+incurable+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">The epidemiology, pathogenesis, transmission, diagnosis, and management of multidrug-resistant, extensively drug-resistant, and incurable tuberculosis.</a> Lancet Respiratory Medicine. , (2017).</li>
<li>Berg, K. M., Arnsten, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+and+conceptual+challenges+in+measuring+antiretroviral+adherence%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Acquired+Immunodeficiency+Syndromes+%28JAIDS%29%22%5BJournal%5D)">Practical and conceptual challenges in measuring antiretroviral adherence.</a> Journal of Acquired Immunodeficiency Syndromes (JAIDS). 43, Suppl 1 79-87 (2006).</li>
<li>Kagee, A., Nel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+association+between+self-report+items+for+HIV+pill+adherence+and+biological+measures%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Care%22%5BJournal%5D)">Assessing the association between self-report items for HIV pill adherence and biological measures.</a> AIDS Care. 24 (11), 1448-1452 (2012).</li>
<li>Haberer, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adherence+to+antiretroviral+prophylaxis+for+HIV+prevention%3A+a+substudy+cohort+within+a+clinical+trial+of+serodiscordant+couples+in+East+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adherence to antiretroviral prophylaxis for HIV prevention: a substudy cohort within a clinical trial of serodiscordant couples in East Africa.</a> PLoS Medicine. 10 (9), 1001511(2013).</li>
<li>Pullar, T., Kumar, S., Tindall, H., Feely, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+to+stop+counting+the+tablets%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Time to stop counting the tablets.</a> Clinical Pharmacology & Therapeutics. 46 (2), 163-168 (1989).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+study+of+multiple+measures+of+adherence+to+HIV+protease+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">A comparison study of multiple measures of adherence to HIV protease inhibitors.</a> Annals of Internal Medicine. 134 (10), 968-977 (2001).</li>
<li>Wendel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barriers+to+use+of+electronic+adherence+monitoring+in+an+HIV+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Barriers to use of electronic adherence monitoring in an HIV clinic.</a> Annals of Pharmacotherapy. 35, 1010-1101 (2001).</li>
<li>Ruiz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+voriconazole+plasma+concentrations+on+treatment+response+in+critically+ill+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+%26+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Impact of voriconazole plasma concentrations on treatment response in critically ill patients.</a> Clinical Pharmacology & Therapeutic. , (2019).</li>
<li>Saktiawati, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+sampling+strategies+for+therapeutic+drug+monitoring+of+first-line+tuberculosis+drugs+in+patients+with+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Phamacokinetics%22%5BJournal%5D)">Optimal sampling strategies for therapeutic drug monitoring of first-line tuberculosis drugs in patients with tuberculosis.</a> Clinical Phamacokinetics. , (2019).</li>
<li>Podsadecki, T. J., Vrijens, B. C., Tousset, E. P., Rode, R. A., Hanna, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22White+coat+compliance%22+limits+the+reliability+of+therapeutic+drug+monitoring+in+HIV-1-infected+patients%5BTitle%5D)+AND+%22HIV+Clinical+Trials%22%5BJournal%5D)">"White coat compliance" limits the reliability of therapeutic drug monitoring in HIV-1-infected patients.</a> HIV Clinical Trials. 9 (4), 238-246 (2008).</li>
<li>Cuypers, E., Flanagan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interpretation+of+hair+analysis+for+drugs+and+drug+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The interpretation of hair analysis for drugs and drug metabolites.</a> Clinical Toxicology. 56 (2), 90-100 (2018).</li>
<li>Knitz, P., Villain, M., Crimele, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+analysis+for+drug+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Drug+Monitoring%22%5BJournal%5D)">Hair analysis for drug detection.</a> Therapeutic Drug Monitoring. 28 (3), 442-446 (2006).</li>
<li>Barroso, M., Gallardo, E., Vleira, D. N., Lopez-Rivadulla, M., Queiroz, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair%3A+a+complementary+source+of+bioanalytical+information+in+forensic+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Bioanalysis%22%5BJournal%5D)">Hair: a complementary source of bioanalytical information in forensic toxicology.</a> Bioanalysis. 3 (1), 67-79 (2011).</li>
<li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atazanavir+concentration+in+hair+is+the+strongest+predictor+of+outcomes+on+antiretroviral+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Atazanavir concentration in hair is the strongest predictor of outcomes on antiretroviral therapy.</a> Clinical Infectious Diseases. 52 (10), 1267-1275 (2011).</li>
<li>Koss, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+concentrations+of+antiretrovirals+predict+viral+suppression+in+HIV-infected+pregnant+and+breastfeeding+Ugandan+women%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS%22%5BJournal%5D)">Hair concentrations of antiretrovirals predict viral suppression in HIV-infected pregnant and breastfeeding Ugandan women.</a> AIDS. 29 (7), 825-830 (2015).</li>
<li>Pintye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+Report%3A+Lopinavir+Hair+Concentrations+Are+the+Strongest+Predictor+of+Viremia+in+HIV-Infected+Asian+Children+and+Adolescents+on+Second-Line+Antiretroviral+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Acquired+Immune+Deficiency+Syndromes+%28JAIDS%29%22%5BJournal%5D)">Brief Report: Lopinavir Hair Concentrations Are the Strongest Predictor of Viremia in HIV-Infected Asian Children and Adolescents on Second-Line Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes (JAIDS). 76 (4), 367-371 (2017).</li>
<li>Baxi, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nevirapine+Concentration+in+Hair+Samples+Is+a+Strong+Predictor+of+Virologic+Suppression+in+a+Prospective+Cohort+of+HIV-Infected+Patients%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Nevirapine Concentration in Hair Samples Is a Strong Predictor of Virologic Suppression in a Prospective Cohort of HIV-Infected Patients.</a> PLoS One. 10 (6), 0129100(2015).</li>
<li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiretroviral+concentrations+in+hair+strongly+predict+virologic+response+in+a+large+HIV+treatment-naive+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Antiretroviral concentrations in hair strongly predict virologic response in a large HIV treatment-naive clinical trial.</a> Clinical Infectious Diseases. 5, 1044-1047 (2019).</li>
<li>Gerona, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+analysis+of+11+medications+for+drug+resistant+TB+in+small+hair+samples+to+quantify+adherence+and+exposure+using+a+validate+LC-MS%2FMS+panel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Simultaneous analysis of 11 medications for drug resistant TB in small hair samples to quantify adherence and exposure using a validate LC-MS/MS panel.</a> Journal of Chromatography B. 1125, 121729(2019).</li>
<li>Metcalfe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+anti-tuberculosis+drug+concentration+in+hair+and+treatment+outcomes+in+MDR-+and+XDR-TB%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respriatory+Journal+Open+Research%22%5BJournal%5D)">Association of anti-tuberculosis drug concentration in hair and treatment outcomes in MDR- and XDR-TB.</a> European Respriatory Journal Open Research. 5 (2), (2019).</li>
<li>Metcalfe, J. Z., O'Donnell, M. R., Bangsberg, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moving+Beyond+Directly+Observed+Therapy+for+Tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Moving Beyond Directly Observed Therapy for Tuberculosis.</a> PLoS Medicine. 12 (9), 1001877(2015).</li>
</ol>

この研究は、国立アレルギー・感染症研究所RO1 AI123024(共同ピ:ジョン・メトカーフとモニカ・ガンジー)によって支えられました。

ここでは、LC-MS/MSを用いた小さな毛髪サンプルでのDR-TBの治療に利用される11の抗結核薬を定量化するために開発し、検証した方法のプロトコルを報告します。毛髪中のこれらの11の薬物を定量化するための他の方法は、以前に開発され、検証され、公開されていません。我々の方法は、約3センチメートル(cm)の長さ(〜2mg)のわずか20〜30本の毛鎖で薬物のサブナノグラムレベルを定量化することができ、すでに22を検証している。分析された毛髪の低体重は、研究に関与する患者が慎重に参加し、ハゲ頭皮を暴露することを恐れずに繰り返し検査のために戻ることができることを意味します。我々は以前に毛髪におけるDR-TB薬物レベルとDR治療結果23との関連に関するデータを発表した。したがって、この多検体パネル法の開発および検証は、DR-TB治療薬モニタリングの分野における有意な進歩を表す。
毛髪は、液体バイオマトリクスで必要とされるものとは異なる均質化技術を必要とします。毛髪の毛の毛の毛の毛のマトリックスの分...

21世紀において、薬剤耐性結核(DR-TB)は、すでに弱い国家結核対策プログラムの進化する大惨事であり、過去5年間だけで確認された症例は倍増し、世界的に1,22の抗菌性に関連する全死亡のほぼ3分の1を占めている。DR-TBの治療は、従来、薬物感受性結核の治療よりも長く、より有毒な第2ラインレジメンを必要としてきた。さらに、DR-TB患者は、しばしば、初期3の抵抗の出現に寄与した、遵守に重要な既存の課題を有する。
ウイルス負荷が治療を監視するために使用できるHIV感染とは異なり、結核における治療応答の代理エンドポイントは、個々のレベル4で遅延し、信頼性が低い。治療下の抗結核薬濃度および治療障害の重要な予測者である患者の付着を監視することも困難である。自己申告された遵守は、リコールバイアスとプロバイダ55、66を喜ばせたいという願望に苦しんでいます。ピル数と投薬イベント監視システム (MEMS) は、より客観的な7をすることができますが、実際の薬物消費量を測定しません8,9,10.バイオマトリスの薬物レベルは、付着データと薬物動態データの両方を提供することができます。従って、血漿薬物レベルは、治療用薬物モニタリング11,12,12において一般的に使用される。しかし、薬物付着モニタリングの文脈では、血漿レベルは短期的な暴露を表し、適切な付着基準範囲を決定する際に有意な患者間変動によって制限される。「ホワイトコート」効果は、診療所や研究訪問の前に付着が改善され、正確な薬物付着パターン13を提供する血漿レベルの能力をさらに複雑にする。
毛髪は、長期薬物暴露14,15,15を測定できる代替バイオマトリックスである。多くの薬物および内因性代謝産物は、毛髪が成長するにつれて全身循環から毛タンパク質マトリックスに組み込まれる。この動的プロセスは、毛髪の成長中に継続して、毛髪マトリックスに堆積する薬物の量は、循環する薬物の継続的な存在に依存し、毛髪は薬物摂取量の優れた時間的読み出しを行う。バイオマトリックスとしての毛髪は、血液と比較して保管および出荷のためのコールドチェーンを必要とせずに容易に収集されるという付加的な利点を有する。さらに、毛髪は非生物的有害性であり、この分野でさらなる実現可能性の利点を提供する。
毛髪薬のレベルは、長い法医学のアプリケーションで使用されてきました16.過去10年間で、毛髪抗レトロウイルス(ARV)レベルは、私たちのグループが貢献したHIV治療と予防における薬物遵守を評価する際の有用性を実証してきました。髪の毛のARVレベルは、HIV感染,,17、18、19、20、21,18における治療結果の最も強力な独立した予測変数であることが示されている。,192021DR-TB患者の毛髪レベルが治療結果を予測する際に同じ有用性を有するかどうかを判断するために、LC-MS/MSを使用して、小さな毛髪サンプル中の11個のDR-TB薬を分析する方法を開発し、検証しました。アッセイの性能の初期評価として、南アフリカ西ケープ州で直接観察治療(DOT)を受けているDR-TB患者のコンビニエンスサンプルでDR-TB薬レベルを測定した。

<table><tbody><tr><td>2mL注射バイアル</td><td>アジレント・テクノロジーズ</td><td>5182-0716</td><td></td></tr><tr><td>250 uL注射バイアルインサート</td><td>アジレント・テクノロジーズ</td><td>5181-8872</td><td></td></tr><tr><td>ビードラプター24</td><td>OMNIインターナショナル</td><td>19001</td><td></td></tr><tr><td>ビーズラプターチューブ(2 mLビーズキット、2.8mmセラミック、2 mLマイクロチューブ)</td><td>OMNIインターナショナル</td><td>19628</td><td></td></tr><tr><td>ベダキリン</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>B119550</td><td></td></tr><tr><td>ベダキリン-d6</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>B119552</td><td></td></tr><tr><td>クロファジミン</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>C324300</td><td></td></tr><tr><td>クロファジミン-d7</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>C324302</td><td></td></tr><tr><td>使い捨て石灰ガラス培養チューブ</td><td>VWR</td><td>60825-425</td><td></td></tr><tr><td>エタンブートール</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>E889800</td><td></td></tr><tr><td>エタンブートール-d4</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>E889802</td><td></td></tr><tr><td>エチオナミド</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>E890420</td><td></td></tr><tr><td>エチオナミド-d5</td><td>クリアシンス</td><td>CS-O-06597</td><td></td></tr><tr><td>蟻酸</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>F0507-100mL</td><td></td></tr><tr><td>ガラス瓶</td><td>コーニング</td><td>1395-1L</td><td></td></tr><tr><td>ホットシェイカー</td><td>ベルコ・グラス社</td><td>7746-32110</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td><td>アジレント・テクノロジーズ</td><td>インフィニティ1260</td><td></td></tr><tr><td>HPLCグレードアセトニトリル</td><td>ハネウェル</td><td>015-4</td><td></td></tr><tr><td>HPLCグレードメタノール</td><td>ハネウェル</td><td>230-1L</td><td></td></tr><tr><td>HPLCグレードの水</td><td>アクア・ソリューションズ株式会社</td><td>W1089-4L</td><td></td></tr><tr><td>イソニアジド</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>I821450</td><td></td></tr><tr><td>イソニアジド-d4</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>I821452</td><td></td></tr><tr><td>LCカラム、Synergi 2.5 um Polar RP 100 A 100 x 2 mm</td><td>現象</td><td>00D-4371-B0</td><td></td></tr><tr><td>LCガードカートリッジ</td><td>現象</td><td>AJ0-8788</td><td></td></tr><tr><td>LCガードカートリッジホルダー</td><td>現象</td><td>AJ0-9000</td><td></td></tr><tr><td>LC-MS/MS定量ソフトウェア</td><td>サイエックス</td><td>マルチクオンツ 2.1</td><td></td></tr><tr><td>レボフロキサシン</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>1362103-200MG</td><td></td></tr><tr><td>レボフロキサシン-d8</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>L360002</td><td></td></tr><tr><td>リネゾリド</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>L466500</td><td></td></tr><tr><td>リネゾリド-d3</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>L466502</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心分離機チューブ</td><td>E&Kサイエンティフィック</td><td>695554</td><td></td></tr><tr><td>モキシフロキサシン</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>M745000</td><td></td></tr><tr><td>モキシフロキサシン-13C、d3</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>M745003</td><td></td></tr><tr><td>MS/MS</td><td>サイエックス</td><td>トリプルクアッド5500</td><td></td></tr><tr><td>OPC 14714</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>O667600</td><td></td></tr><tr><td>プレトマニッド (PA-824)</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>P122500</td><td></td></tr><tr><td>プロチオナミド</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>P839100</td><td></td></tr><tr><td>プロチオナミド-d5</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>P839102</td><td></td></tr><tr><td>ピラジナミド</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>P840600</td><td></td></tr><tr><td>ピラジナミド-15N、d3</td><td>トロント・リサーチ・ケミカルズ</td><td>P840602</td><td></td></tr><tr><td>注射バイアル用のセプタムキャップ</td><td>アジレント・テクノロジーズ</td><td>5185-5862</td><td></td></tr><tr><td>ターボバップLV蒸発器</td><td>ビオテージ</td><td>103198/11</td><td></td></tr></tbody></table>

小さな毛髪サンプルで11の薬剤耐性結核薬を定量化するための検証済みのlc-ms/msパネル

Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples

薬剤耐性結核(DR-TB)は公衆衛生上の脅威の増大であり、治療薬レベルの評価には重要な臨床的利点がある可能性があります。血漿薬物レベルは現在のゴールドスタンダード評価ですが、フレボトミーとコールドチェーンを必要とし、非常に最近の付着のみをキャプチャします。当社の方法は、11の抗結核薬をテストするために、収集が容易で長期的な付着を反映するマトリックスである髪を使用しています。私たちのグループによる以前の研究は、髪の抗レトロウイルス薬レベルがHIVの結果に関連していることを示しています。DR-TB薬の私達の方法は、2mgの毛(根に近い3cmの近位)を使用し、メタノールで粉砕および抽出されます。サンプルは単一のLC-MS/MS法で分析され、16分で11の薬剤を定量化します。11の薬剤の定量(LLOQ)の下限は0.01 ng/mgから1 ng/mgの範囲である。サンプルは、重水素化、15N-または13C標識薬物アイソトポログに対する薬物の面積比を使用して定量化される。0.001~100 ng/mgの範囲の較正曲線を用いた。 DR-TB患者から採取した毛髪サンプルの都合のよいサンプルへのこの方法の適用は、直接観察された治療(DOT)において、9種類の薬物(イソニアジド、ピラジナミド、エタンブトール、リネゾリド、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、クロファジミン、ベダキリン、プレトマン)の直線的なダイナミックレンジ内の毛髪の薬物レベルを示した。プロチオンアミドの患者はおらず、エチオンアミドの測定レベルはLLOQに近かった(代わりにエチオンアミドの代謝産物の適合性を検査して暴露を監視する)。要約すると、薬剤耐性結核治療中の薬剤モニタリングのための技術として、毛髪中のDR-TB薬用多検体パネルの開発について述べています。

全 11 個の DR-TB 薬のレベルが確認されたクロマトグラムの図を図 1に示します。各検致物の保持時間は、異なる計測器や列を使用する場合に変更される可能性があるため、正確な保持時間は個別に決定する必要があります。
抽出されたイオンクロマトグラム(EIC)を、キャリブレータの1つ(イソニアジド、INH)の1つの特定の薬剤(DR-TB薬物参照基準でスパイクされたブランクヘアサンプル)について図2に示す。定量化器と修飾子の遷移は、定量化器の面積と予選面積の比率がサンプル全体で一定のままであるため、薬物の存在を定性的に確認するために使用される。内部標準も監視され、各サンプル注入が正規化されていることを確認します。
デモンストレーションの目的で、南アフリカの西ケープ州からDOT条件でDR-TB薬を服用している96人の患者の総研究集団のうち、15の毛髪サンプルの利便性サンプルを分析した。表6</str...

複雑な薬剤耐性結核(DR-TB)レジメンへの患者の付着を分析する現在の方法は、不正確でリソース集約的な可能性があります。当社の方法は、11のDR-TB薬の濃度について、容易に採取され保存されたマトリックスである毛髪を分析します。LC-MS/MSを用いて、薬物の付着をよりよく理解するために利用できるサブナノグラムの薬物レベルを決定することができます。

小さな毛髪サンプルで11の薬剤耐性結核薬を定量化するための検証済みのLC-MS/MSパネル

Drug resistant-tuberculosis (DR-TB) is a growing public health threat, and assessment of therapeutic drug levels may have important clinical benefits. ...

患者の付着は非常に困難であり、薬物代謝は人によって異なるため、薬物レベルの客観的な測定は結核治療中の抵抗の出現を防ぐ上で重要であることが証明される可能性があります。遵守をより正確かつ容易に定量化できれば、医療従事者は薬剤耐性の開発を制限する治療計画を策定できる。我々は、単一のアッセイで小さな毛髪サンプル内の複数の結核薬のための最初の複数の分析物質量分析パネルを開発しました。当社の多剤パネルは、患者1人につき1つの2ミリグラムサンプルのみを必要とし、サンプル量の損失を防ぐために固相抽出またはフィルタリングステップを使用しません。治療コースの早い段階で測定された薬物暴露の客観的措置は、治療レジメンにおける個々の薬物の問題に臨床医に警告する可能性がある。正確な薬物濃度の測定のために、毛髪サンプルは分析の日に粉砕されなければなりません。毛髪サンプルを取得するには、書面によるインフォームド・コンセントを得た後、薄いラベル、2つの参加者ラベル、ハサミ、展開されたアルミニウム箔、アルコール拭き、ビニール袋などの材料を準備してください。はさみの刃をアルコール拭きできれいに拭きます。必要に応じて、頭の後ろに移動し、ヘアクリップを使用して髪の上部を持ち上げます。頭の後ろから髪の毛の30本のストランドを収集し、あなたの手でかやぶきを分離します。頭皮にハサミを取り、髪のかやぶきをカットします。アルミ箔に毛のかやぶきを慎重に置きます。毛のかゆみの遠位の端に薄いラベルを貼り、アルミ箔にしっかりとテーピングします。遠位の端は頭皮から最も遠い側です。かやぶき毛の上にアルミ箔の部分の上に折り畳み、アルミ箔の上に参加者ラベルを置きます。折りたたんだアルミホイルをビニール袋に入れ、ビニール袋の上に別の参加者ラベルを貼ります。毛髪サンプルからの薬物抽出のために、各毛髪サンプルの2ミリグラムを個別にラベル付けされたビーズチューブに、2ミリグラムのブランクヘアサンプルを16個の追加のビーズチューブのそれぞれに計量します。計量後、すべてのビーズチューブをビードミルホモジナイザーに入れ、各サイクル間の15秒の休息期間で2つの30秒サイクルで毎秒6.95メートルの速度でサンプルを均質化します。2番目の均質化の後、適切な内部標準ミックスの500マイクロリットルを各サンプルに加え、500マイクロリットルのメタノールをマトリックスブランクチューブに加えます。テーブルに従って適切な基準標準ミックスの量でキャリブレーションカーブチューブをスパイクし、2時間穏やかな揺れで37度の水浴にすべてのチューブを置きます。インキュベーションの最後に、各ビーズチューブから新しいラベル付きマイクロ遠心チューブに上澄み液を移し、500マイクロリットルのメタノールをビーズチューブに加えます。ビードチューブをボルテックスし、対応するマイクロ遠心チューブにメタノール洗浄を移します。サンプルを遠心分離し、慎重に毛のペレットを邪魔することなく、新しいチューブに上清を転送します。チューブ内の液体を蒸発させて摂氏32度で乾燥し、1%のギ酸を含む高圧液体クロマトグラフィーグレード水200マイクロリットルでサンプルを再構成します。ボルテックス後、液体サンプルを250マイクロリットルのインサートでアンバーバイアルに移します。液体クロマトグラフィータンデム質量分析の場合、まず、2.5マイクロメートルの粒子径と100オングストローム細孔径を有する2~100ミリメートルのカラムを、ポーラスコンパートメントに極端のエテリンクされたフェノールビーズを完全に取り付けます。この列に製造元が推奨するガード カートリッジが取り付けられていることも確認します。MDR-TB LCMS メソッドの遷移に含まれる複合情報をコピーして貼り付けます。csv ファイルをマススペック ウィンドウのボックスに表示します。スプレッドシートでは、キャリブレーション曲線、品質管理、患者サンプル、キャリブレーション曲線、品質制御、患者サンプル、キャリブレーション曲線、品質制御のバッチシーケンスを作成します。ランの開始と終了、およびキャリブレーション曲線、品質制御、患者サンプルの前後に、溶剤ブランク注射を追加します。次に、少なくとも8回の溶剤ブランク注入を較正曲線の注入に入れ、高い品質管理バイアルを入れて、検点の持ち越しを減らします。バッチが完了したら、定量ソフトウェアを開きます。遷移をスクロールして、自動的に選択された保持時間が正確であることを確認し、ガウス 平滑化が 1.5 に設定されていることを確認します。次に、クリックすると、キャリブレーション曲線と回帰が表示され、待機タイプがx上に1つ設定されます。[OK] をクリックし、キャリブレーション カーブと品質管理サンプルを検証して、バッチが正常に実行されたことを確認します。各量指定子の参照検体について、キャリブレーションポイントの少なくとも3分の2は、80~120%以内の精度を持つ必要があります。上記の条件がすべて満たされている場合は、バッチが渡され、サンプルを定量化できます。ツールバーの「編集」をクリックし、「表全体をコピー」をクリックします。次に、表をスプレッドシートに貼り付け、2つのサンプル注入の計算された濃度の平均を使用して、各サンプルの報告された濃度を決定します。ここでは、すべての試験された11の薬剤耐性結核薬の確認されたレベルを有するクロマトグラムの図を示す。これらの図では、1つの特定の薬物について、カリフレータの1つに対して抽出されたイオンクロマトグラムが観察される。量指定子と修飾子の遷移は、定量化器の面積と修飾子の面積の比率がサンプル全体で一定のままであるため、薬物の存在を定性的に確認するために使用されます。内部標準も監視され、各サンプル注入が正規化されていることを確認します。この分析では、南アフリカの西ケープ州から直接観察された治療条件下で薬剤耐性結核薬を服用している96人の患者の総研究集団のうち15の毛髪サンプルの便利なサンプルを評価し、各分析物の最低および最高レベルにわたる薬剤耐性結核薬の代表的なレベルを決定した。固相抽出または濾過工程がない場合は、上清を蒸発管に移す際には注意してください。チューブに移されたものは、最終的に列に注入される可能性があります。ビーズラプターのローターは、しっかりとねじ込んだりロックしたりしないと飛び去ることができるので、操作する前にローターを再確認してください。HIVの分野における抗レトロウイルス薬とは対照的に、結核薬薬物動態、付着および臨床結果の関係はほとんど研究されていない。私たちは、いくつかの結核薬が髪によく蓄積されないと仮定しています。これらの薬物の代謝物を標的にすることは、患者の遵守のより良い理解を提供するかもしれない。

validated-lc-msms-panel-for-quantifying-11-drug-resistant-tb

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

顕微鏡観測薬剤感受性（MODS）アッセイは、結核の高性能検出（TB）と多剤耐性結核（MDRTB）用の低コスト、ローテクのツールです。このビデオは、MODSの液体培地培養法を説明します。...

結核および多剤耐性結核の診断のためのMODSの方法

のメタボロームプロファイル...

のサンプル調製<em&gt;結核菌</em核磁気共鳴代謝研究のための&gt;抽出

ここでは、小干渉合成RNA(siRNA)、化学化合物、および 結核 菌変異体ライブラリーのハイスループット/高含有スクリーンに適用可能な表現型アッセイについて述べている。この方法は、自動共焦点顕微鏡を用いた蛍光標識された宿主細胞内の蛍光標識型 結核...

高スループット/高含有スクリーニングに適応した細胞内マイコバクテリアの定量化のための顕微鏡表現型アッセイ

増幅マイクロアレイは大幅にエンドユーザーのために、マイクロアレイのワークフローを合理化し、単一の室内に非対称PCR増幅およびマイクロアレイハイブリダイゼーションを兼ね備えています。マイクロアレイワークフローを簡略化する日常的低リソース環境において使用することができるマイクロアレイに基づく診断を作成するために必要な最初のステップである。...

多剤耐性を実証<em&gt;結核菌</em&gt;増幅マイクロアレイ

ここでは、簡単な手動タンパク質沈殿ステップとオンラインカラム抽出を使用して、乾燥血液スポット中の免疫抑制剤タクロリムスを定量するための高速液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析(HPLC-MS/MS)アッセイについて説明します。...

LC-MS / MSを用いて乾燥血液スポット上で免疫抑制タクロリムスの定量化

ここでは、結核の肉芽腫内の薬剤分布の定量化が空間的に LC/MS 分析と相まってマイクロダイゼクション...

レーザーによる肺の結核病変における薬物の空間の定量化をキャプチャ レーザーマイクロダイ セクション液体クロマトグラフィー質量分析法 (LCM-LC/MS)

マルチ セグメントの注入キャピラリー電気泳動質量分析法による高スループットかつ包括的な薬物監視

痰の熱不活化後に行われる結核分子細菌負荷検定試験について述べている。熱不活性化は痰サンプルを非感染にし、結核分子試験のための封じ込めレベル3の実験室の必要性を排除する。...

結核分子細菌負荷アッセイ(TB-MBLA)

このプロトコルは、ロングリードシーケンシングプラットフォームを使用して結 核菌...

ロングリードシーケンシング技術を用いたアンプリコンシーケンシング

ここでは、4-アミノキノリン化合物の化学合成、結核菌に対する最小阻害濃度の決定、哺乳類細胞株における細胞毒性の評価を含む表現型スクリーニングを通じて潜在的な抗結核薬候補を特定するプロトコルを提示します。...

潜在的な抗結核候補の同定:哺乳類細胞における合成、MIC決定、細胞傷害評価のステップバイステップガイド

学ぶ 薬剤耐性結核治療の服薬コンプライアンス評価法。LC-MS/MSを用いて2mgの毛髪サンプルから11種類の抗結核薬を同時定量し、客観的な薬物曝露指標を提供する。早期の服薬問題検出により治療計画の改善と耐性発現防止に貢献する。

小さな毛髪サンプルで11の薬剤耐性結核薬を定量化するための検証済みのLC-MS/MSパネル

さらに動画を探す