動物の香り信号のサンプリングと解析

動物のコミュニケーションにおける臭気の役割は現在過小評価されており、研究が行われている。特に、ヒトを含む動物の嗅覚信号を支える化学的変化についてはほとんど知られていない。これらはまた、方法論的な課題、記録し、通信するために動物によって使用される臭いの化学化合物を定量化によるものです。

複雑な化学混合物を使用する場合、いくつかの潜在的な課題があり、これらはまた、臭いサンプルをサンプリングし、分析する場合が含まれます。動物が互いに通信する際に、動物がどのような方法で使われるかを理解するために、動物が使用する臭いの分析を行っています。細胞化学と生生態学と細胞診を組み合わせて、動物のコミュニケーションにおける臭いの役割についての理解を深めた。

ウォルヴァーハンプトンの現在の方法論では、ヘッドスペース固相微細構造の技術を、ガスクロマトグラフィー質量分析と組み合わせた技術を採用しており、過去には目に見えない方法論が使用されています。サンプル臭気は、以下のいずれかの方法で収集される。一つは、慣例的な研究対象から自発的に放出されたサンプル臭。

例えば、動物園の霊長類は、滅菌濾紙や尿サンプルの香りマーキングによって香りの腺臭気分泌物を直接バイアルに集めます。2つは、試験対象を訓練した後、陽性補強を用いて、滅菌綿棒で香りの視線をこすって臭気分泌物を収集する。3つは、研究対象者のセデション後、無菌綿棒で香りの腺をこすり、サンプルによって無菌10ミリリットルねじキャップにサンプルすることによって、透明なガラスバイアルとシールがP T F Eシリコーンセクタを組み込んだスクリュートッピングキャップでシールします。

すぐにマイナス20度でバイアルを保存します。なお、サンプリング時にはニトリル手袋などの清潔な個人用保護具を使用することが重要です。手袋を交換すると、サンプルやバイアルとの直接皮膚接触を避ける。

新しいバイアルを使用することが好ましいです。ただし、使用されたバイアルの場合は、バイアルを事前に清掃してから、同じプロトコルを使用することが重要です。香りのマークが収集されるたびに環境ブランクを取ります。

サンプリングを行う間、未使用のろ紙や綿棒やバイアルを環境にさらしてこれを行います。サンプルは現場で用意されています。香りの印紙の場合は、紙から約10ミリメートルの正方形をカットし、10ミリリットルのネジトッピングヘッドスペースバイアルに置きます。

綿棒の場合は、綿棒シャフトの一番端にある綿棒の頭を切り落とし、ヘッドスペースバイアルに入れられます。各サンプルを調製した後、適切な抗菌ワイプおよびアルコールで、サンプリング媒体を切断するために使用するブレードを処分または洗浄し、十分に乾燥する。すべてのサンプルをマイナス20°Cで保存します。

サンプルはマイナス20°Cで保存する必要がありますが、最も低いのは可能な温度でフィールドストアに保存し、できるだけ早い機会にマイナス20度に転送してください。分析の前に、冷凍庫からサンプルを取り除き、少なくとも1時間室温まで自然に歩行させた。SPMS 解析条件の解析方法を次のように GCMS に設定し、メーカーの指示に従って SBME ファイバーを最初に使用する前に条件を設定します。

SBME アセンブリがオートサンプラーに正しく取り付けられ、自動サンプラー トレイのファイバーコンディショニング ユニットと GC 入口ポートに位置合わせされていることが重要です。位置合わせが正しくないと、Sbme ファイバーが破損または破壊される可能性があります。ファイバコンディショニングユニットへの止まり木ガス供給がオンになっていることを確認します。

サンプル保持時間の一貫性を向上させるために、分析方法は、保持時間がロックされ、サンプルバイアルをオートサンプラートレイに追加し、空のヘッドスペースバイアルを置き、自動サンプラートレイの最初の位置にシステムブランクとして機能します。環境ブランクを 2 番目の位置に配置し、残りのサンプルをすべて自動サンプラートレイの後続の位置に配置して分析します。サンプル トレイ内の各サンプルを分析する解析シーケンスを作成します。

マスハンターのホーム画面で、メニューバーのシーケンスを選択し、ドロップダウンメニューからシーケンスをロードします。空のシーケンス表が表示され、適切な情報保管を完了シーケンス表として挿入することにより、すべてのブランクおよびサンプルのシーケンス表が完成します。シーケンステーブルの正確な情報は、テーブルの実験室のフォーマットに依存します。

最小情報には、通常、サンプルタイプのサンプル名、ファイルの場所、数値分析方法、データファイルの場所、および将来のデータ処理のサンプル名と一致するデータファイル名の名前割り当てが含まれます。解析中に、その他のサンプルをシーケンスに追加できます。メニューバーからシーケンスを選択してシーケンスを実行し、シーケンスを実行します。

分析後、できるだけ早く冷凍庫にサンプルを返しました。なお、サンプルを再分析することができるかもしれない。しかし、いくつかの揮発性成分は、最初の分析中に完全に抽出された可能性があり、いくつかの化合物は摂氏40度で熱および細菌分解を受けた可能性があります。

したがって、クロマトグラムの結果は、元の香りのマーキングを十分に表さない場合があります。初期データ分析には、クロマトグラムの統合が含まれ、保持時間とピークエリアデータを取得し、カムステーションソフトウェアとネスト質量スペクトルデータベースを使用してピークの仮識別を行います。データ分析は、手動で行うか、半自動方式で行うことができます。

半自動方式を使用する場合、仮の識別を検証するために、ある程度の手動データ分析を行う方が有益な場合があります。データ分析を開始するには、左側のナビゲーション バーで該当するファイルをクリックしてデータ ファイルを開きます。全イオンクロマトグラムTICがデータ分析画面の上部ウィンドウに表示されます。

RTEインテグレーターを使用してTICを統合するには、まずメニューバーからクロマトグラムを選択し、ポップアップメニューからインテグレータを選択して、ポップアップメニューを開いてRTEインテグレータを選択します。クロマトグラムメニューに戻り、統合を選択します。積分パラメータを調整して、ベースラインノイズのピークまたは3倍以上の値を統合するには、メニューバーからクロマトグラムを選択し、ドロップダウンメニューからMS Signal統合パラメータを選択します。

ポップアップ ボックスで、最小ピーク領域を適切な 1.0 に調整すると、この例では許容可能な結果が得られます。ピークを識別して概要レポートを生成するには、メニューバーからレポートをエクスポートし、XLSにレポートをライブラリ化します。なお、表示するライブラリ一致の数と一緒に検索するスペクトルライブラリは、ライブラリ検索を行う前にソフトウェア内で事前設定する必要があります。

結果のスプレッドシート レポートには、各ピークの統合データと、ID を割り当てる一時的なスペクトル ライブラリの一致が含まれます。一般的に、ライブラリの品質またはライブラリの一致は、仮の識別を受け入れる 80 より大きい必要があります。スプレッドシートを保存します。

TIC から直接ピークを識別するには、対象のピークを選択します。ピークが小さいズームインの場合は、ピークの周囲にボックスを描画して、マウスの左ボタンを押したままにしてボックスをピーク上に伸ばし、マウスボタンを離します。ピークの最高点または直後になるようにカーソル行を配置します。

ダブルクリックすると、マウスの右ボタンとピークのマススペクトルがデータ分析画面の低いウィンドウに表示されます。スペクトルライブラリを検索するには、スペクトルウィンドウ内の任意の場所にカーソルを移動し、ライブラリ検索結果が新しいウィンドウに表示されるマウスの右ボタンをダブルクリックします。最初に関心のあるスペクトルからバックグラウンドノイズを削除するには、対象のピークの右マウスボタンをダブルクリックし、メニューリボンの減算ボタンをクリックするか、メニューバーのクロマトグラムを選択して、ドロップダウンメニューからスペクトルを減算します。

減算されたスペクトルは、データ分析画面の下部ウィンドウに表示され、ウィンドウヘッダーのスキャンデータの横にダッシュが表示されます。このプロトコルに従って、赤いラフキツネザルによってフィルター紙に自発的に放出された14の性器香りマークの分析から合計32の揮発性化学化合物を暫定的に同定し、臭気プロファイルを炭化水素、テルペン、ターピンアルコールおよびケトンなどの天然に発生する揮発性化合物の特徴と比較し、これらのプロファイル内に存在し、以前にセックスホルモンとして作用することが判明した化合物を含む他の動物種で。仮に同定された化合物を表1に示します。

代表的なクロマトグラムは、コントロールから1つとリマの香りマークから1つを図1に示す。成分の数と相対的な存在量は、異なる研究対象間でサンプルからサンプルまで変化した。しかしながら、クロマトグラム上にA〜Fと標識した6つの化合物が全てのサンプルに存在していた。

これらの化合物は、それぞれEの島1六元パラクリスタル6パラメンタ2 8染料12パイネン4とペントデカンに高さまで曲がった。この研究の結果は、赤いラフキツネザルが社会性的コミュニケーションの役割を果たす無性器マーキングを持つ性別と女性の年齢に関する情報を伝えるために送信マーキングを使用することを示唆した。このプロトコルの使用に続くもう一つの代表的な結果は、女性のオリーブヒヒによる不妊治療広告の研究でした。

395個の雌ヒヒ膣臭サンプルの分析から、合計74個の揮発性化合物を同定した。これらには、ケトン、アルコール、アルデヒド、テルペン、揮発性脂肪酸、炭化水素などの天然臭気揮発性化合物の範囲が含まれていました。典型的なクロマトグラムは、肥沃な期間と非肥沃な期間からのブランクトロールと雌ヒヒ膣臭サンプルを比較するために使用する図2に示されている。

膣の臭いプロファイルと女性ヒヒの性的受容性との関係を調べる。我々の結果は、膣臭の総量が生殖能力と異なっていることを示し、臭いが女性のヒヒの生殖能力を知らせる役割を果たす可能性を示唆した。また、グループタイプ間の膣臭の違いも見つかりましたが、グループ組成、女性の年齢の不平等の影響を区別できませんでした。

GCMSのサンプリングと使用の利点を組み合わせたものです。したがって、ヘッドスペース固相マイクロ抽出を使用することで、GCMSを用いて幅広い異なるサンプルを分析することができます。これらの複雑なマーキングのコンポーネントを分離し、質量分析計を使用して個々のコンポーネントを識別することができます。

そして、全体の組み合わせ技術は非常に強力であり、私たちにこれらの香りのマーキングに関する多くの情報を与え、過去には結果を得るために必要なサンプル調製抽出が多かったでしょう。