Name: 共同培養実験のためのオリゴデンドロサイト及びオリゴデンドロサイト条件培地の生成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: 学ぶオリゴデンドロサイトの効率的な精製法と条件培地の作製法。振とう技術を用いて高収量で細胞を得られ、神経細胞との共培養や脱髄鞘疾患における再髄鞘化メカニズムの研究に応用できます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者らは、レミ・ロンツァーノの原稿編集における賢明なアドバイスに感謝したいと思います。この作品は、ICM、INSERM、NSFへのARSEP財団助成金、ブーヴェ・ラブリュイエールの価格によって資金提供されました。

この実験におけるラットのケアと使用は、制度的な方針とガイドライン(UPMC、INSERM、および欧州共同体理事会指令86/609/EEC)に準拠しています。次のプロトコルは、12個の子犬の標準的なごみのために確立されています。
1. フラスコの調製(約5分)
注:滅菌状態の場合、層流フードで解剖の前日に次の手順を実行します。
<ol><li>ポリエチレンミンの5 mL(PEI、100 mg/L、補足ファイル1のプロトコルを参照)を使用して、フィルターキャップ(2つの子犬のための1フラスコ)で150 cm2フラスコ(T150)をコーティングします。</li>
	<li>フラスコを一晩4°Cで保管してください。</li>
	<li>解剖の日に滅菌蒸留水で3回コーティングされたフラスコをすすすります。</li>
</ol>2. メディアの準備(約10分)
注:無菌状態の場合は、層流フードの手順を実行します。
<ol><li>500 mLの培養培地を調製し、10%の胎児子牛血清(FCS)およびペニシリンストレプトマイシン(100 IU/mL)を添加したダルベッコの変性イーグル培地(DMEM)からなる。</li>
	<li>50 mLのチューブに酵素消化液20.6mLを調製し、20mLのDMEM、200μLのDNase(50μg/mL)、パパイン200μL(30U/mL)、200μLのLシステイン(0.24mg/mL)からなる。</li>
	<li>0.22 μm フィルターを使用して、メディアをフィルター滅菌します。</li>
	<li>層流フードのメディアは、解剖されるまで室温(RT)に保ちます。</li>
</ol>3. 解剖の準備(約10分)
注:無菌状態の場合は、層流フードの手順を実行します。
<ol><li>カルシウムとマグネシウム(PBS;1x)を使用せずに100 mLのリン酸緩衝生理食塩水を調製する。0.22 μm フィルターを使用してフィルター滅菌します。</li>
	<li>45%グルコースの750 μLを補った氷冷1x PBS溶液の50 mLを調製します。0.22 μm フィルターを使用してフィルター滅菌します。</li>
	<li>100 mm ペトリ皿にクリーニング器具用の PBS 1x とティッシュ収穫用の氷冷 PBS-グルコースを使った 60 mm ペトリ皿 3 個を充填します。切除されるまでシャーレを氷の上に置きます。</li>
</ol>4. 解剖
注:解剖は、出生後の日(P)2で雄および雌のウィスターラットの子犬から行われます。
<ol><li>滅菌環境を提供するために、100%エタノールでベンチをきれいにしてください。100%エタノールですべての外科用具を殺菌する。</li>
	<li>子犬の首に70%エタノールをやさしくスプレーします。</li>
	<li>大きな手術用はさみを使用して動物を切断し、氷冷PBSグルコースを含む100mmのペトリ皿に頭を置きます。</li>
	<li>湾曲した鉗子を使用して、動物の頭を目の高さに維持します。小さな手術用はさみを使用して、頭蓋骨の基部に小さな切開を行い、脳の正中線に続いて頭蓋骨を切断します。</li>
	<li>鉗子を使用して、正線から頭蓋骨の2つの部分を穏やかに剥がします。</li>
	<li>小さな外科用スプーンを使用して、頭腔から脳を取り除きます。氷冷PBSグルコースを氷の上に含む60mmペトリ皿に脳を入れます。</li>
	<li>ステロ顕微鏡下で見ると、細かい鉗子を使って小脳、脳幹、嗅球を大脳半球から取り除きます。</li>
	<li>2つの大脳半球を分離するために細かい鉗子を使用してください。細かい鉗子を使って髄を剥がしてください。氷の上の60ミリメートルシャーレに大脳皮質を入れます。 注:氷冷PBSは、正しいメンリング除去のために重要です。</li>
</ol>5. 組織解離
注:無菌状態の場合は、層流フードの手順を実行します。
<ol><li>鋭いメスを使って大脳皮質を細かく刻みます。ミンチ組織を酵素消化媒体を含む50mLチューブに移す。</li>
	<li>5%CO2の下で37°Cの加湿インキュベーターで30分間インキュベートする。</li>
	<li>p1000マイクロピペットを使用して酵素消化媒体を穏やかに除去し、皮質組織が50mLチューブの底に残っていることを確認します。</li>
	<li>p1000マイクロピペットを使用して1 mLのDMEM-10%FCSを加え、組織を軽くトリチュレートします。</li>
	<li>70 μm フィルターと 1 mL シリンジのピストンを使用して、皮質組織を 50 mL チューブにフィルターします。 注:DMEM-10%FCSを使用すると、内管壁の残留組織を数回すすることができます。</li>
	<li>50 mL チューブを DMEM-10%FCS で満たします。RTで423 x gで5分間遠心分離し、慎重に上清を取り除き、2 mLのDMEM-10%FCSで細胞ペレットを再栓します。</li>
	<li>p1000マイクロピペットで細胞ペレットを軽くトリチュレートし、p200マイクロピペットで軽くトリフラテレートします。細胞懸濁液を適切な量のDMEM-10%FCSで希釈します。 注: 2 つの頭脳 = 1 つの T150 = 5 mL の DMEM-10%FCS。</li>
	<li>T150上の細胞懸濁液のプレート5 mLを1 x 105セル/cm2の密度で。各 T150 に 20 mL の暖かい DMEM-10%FCS を追加します。5%CO2の下で37°Cの加湿インキュベーターでインキュベートする。</li>
	<li>6日間インビトロ(DIV)の後に培養培地の半分を温かいDMEM-10%FCSで更新します。</li>
</ol>6. 振る準備
<ol><li>滅菌条件下で層流フードで揺れる前日に振盪準備を行ってください。</li>
	<li>フラスコに新鮮な温かい培養培地を加えて半分の培養培地を更新し、5%CO2の下で37°Cでインキュベートする。</li>
</ol>7. 揺れ
<ol><li>PEIで3つの100mmペトリ料理をコーティングします。一晩4°Cで保管してください。</li>
	<li>フラスコキャップをパラフィンフィルムで覆い、フラスコをビニール袋に入れます。グリア細胞を含むフラスコを37°Cで250rpmで一晩振る。 注: 最初の揺れは 8 DIV で実行され、1 つは最大 3 つの異なる揺れを実行できます(タイミングについては図 1を参照)。</li>
</ol>8. OL系統細胞の採取と培養
注:これらのステップは、無菌条件下で層流フードで実行する必要があります。
<ol><li>振盪の翌日に、表1に従ってボッテンシュタイン・サト(BS)培地を準備する。</li>
	<li>無菌蒸留水でペトリ皿を3回塗り付けた洗い流し。</li>
	<li>収穫フラスコの上清は、主にOL系統細胞だけでなく、いくつかのミクログリア細胞を含み、非コーティングされた100mmペトリ皿にそれをプレートする。 注:このステップは皿表面の差動速付着によってミクログリア細胞の除去を可能にする。</li>
	<li>5%CO2の下で37 °Cの加湿インキュベーターで15分間ペトリ皿をインキュベートします。</li>
	<li>各T150フラスコに25mLの温かい培養液を充填し、2回目の振とれまで5%CO2の下で37°Cの加湿インキュベーターにインキュベートします。</li>
	<li>ペトリ皿から上清を新しい非コーティングされた100mmペトリ皿に移し、残留ミクログリア細胞の接着を可能にする。</li>
	<li>5%CO2の下で37 °Cの加湿インキュベーターで15分間ペトリ皿をインキュベートします。</li>
	<li>非付着性OL系統細胞を含む上清を取り除き、50mLチューブ(50mLチューブの2ペトリ皿から上清)に移します。ミクログリアでメッキされたペトリ皿を捨てます。</li>
	<li>423 x gで5分間上清を遠心分離します。慎重に上清を除去し、BS培地の1 mLで細胞ペレットを再サスペンドします。すべてのペレットを一般的な50 mLチューブにプールし、BS培地で10 mLに調整します。</li>
	<li>顕微鏡で細胞密度計数細胞を決定します。 注: 3 x 10 5 /mL と5x 105/mL の間のセル密度を取得する必要があります。</li>
	<li>セル密度が 4 x 105/mL 以上の場合は 20 mL の BS を追加して最終体積を 30 mL にし、セル密度が 4 x 105/mL 未満の場合は 10 mL の BS のみを追加して、最終体積を 20 mL にします。</li>
	<li>10 mLの細胞懸濁液を備えた2つか3つのプレコーティングされた100 mmペトリ皿を皿に盛る。5%CO2の下で37°Cの加湿インキュベーターでインキュベートする。</li>
	<li>後でBS培地2時間のすべてをリフレッシュすることにより、ペトリ皿から破片をクリアします。 注:クリアの前後に顕微鏡で培養を調べ、細胞密度と破片除去の効率を確認します。</li>
	<li>5%CO2の下で37°Cの加湿インキュベーターでBS培地で2日間インキュベートする。 注:顕微鏡下で培養を調べます。合流率は70%〜80%でなければなりません。</li>
</ol>9. OCM生産
注:滅菌条件下で層流フードでこれらの手順を実行します。
<ol><li>表2に従ってNB-B27low培地を準備する。</li>
	<li>温かいNB-B27低培地を10mLで培養液を更新します。5%CO2の下で37°Cで加湿インキュベーターで2日間インキュベートする。</li>
	<li>OCMを収穫し、すなわち、OL分泌因子を含む上清を有する。0.22 μm フィルタを使用して OCM をフィルター滅菌します。 注:OCMは4°Cで最大2ヶ月間保存してください。</li>
</ol>10. OCM追加
注:ステップは、滅菌条件下で層流フードで行う必要があります。OCMは、以下のプロトコル14に従って調製した精製された海馬ニューロン培養物に加えることができ、そして、24時間を加えて得た、ウリジンおよび5-フルオロデオキシウリジン(5μM)を36時間添加した。
<ol><li>3 DIVで、抗有糸剤を含むすべてのニューロン培養培地を取り除き、500μLの新鮮な温かいOCMを加えます。</li>
	<li>作りたての温かいNB-B27で3日ごとに半分の培地を更新します。 注: このようなカルチャは、最大 21 の DIV を維持できます。</li>
</ol>11. 精製された海馬ニューロン培養へのOLの添加
注:滅菌条件下で層流フードで次の手順を実行します。ALは、上記と同様に得られた精製された海馬培養物に添加することができる。
<ol><li>表3に従って共培養培地を準備する。</li>
	<li>70% ~ 80% の合流率で OL 培養を取得します。温かい1x PBSの2 mLでリンス。</li>
	<li>細胞を取り外すには、100mmペトリ皿に0.25%トリプシンの2 mLを加えます。</li>
	<li>5%CO2の下で37°Cの加湿インキュベーターで5分間インキュベートする。</li>
	<li>酵素反応をブロックするためにDMEM-10%FCSの2 mLを加えます。OL系統細胞を含む上清を収穫する。</li>
	<li>RTで423 x gで5分間の遠心分離器を慎重に除去し、温かい共培養培地で細胞ペレットを再懸濁し、1.25 x 105細胞/mLの濃度を得た。</li>
	<li>200 μLのニューロン培養液を除去し、24ウェルプレートの細胞懸濁液1ウェルあたり200μL(2.5 x 104細胞/ウェル)を加えることによって、精製された海馬ニューロン培養にOLを加える。</li>
	<li>2~3日ごとに共培養培地の半分をリフレッシュします。 注: 共カルチャは、最大 24 の DIV を維持できます。</li>
</ol>

<ol><li>Zalc, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acquisition+of+myelin%3A+a+success+story%5BTitle%5D)+AND+%22Novartis+Foundation+Symposium%22%5BJournal%5D)">The acquisition of myelin: a success story.</a> Novartis Foundation Symposium. 276, 15-21 (2006).</li>
<li>Habermacher, C., Angulo, M. C., Benamer, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+versus+GABA+in+neuron-oligodendroglia+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Glutamate versus GABA in neuron-oligodendroglia communication.</a> Glia. 67 (11), 2092-2106 (2019).</li>
<li>Sherman, D. L., Brophy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+axon+ensheathment+and+myelin+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of axon ensheathment and myelin growth.</a> Nature Reviews. Neuroscience. 6 (9), 683-690 (2005).</li>
<li>Freeman, S. A., Desmazières, A., Fricker, D., Lubetzki, C., Sol-Foulon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+sodium+channel+clustering+and+its+influence+on+axonal+impulse+conduction%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+molecular+life+sciences%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of sodium channel clustering and its influence on axonal impulse conduction.</a> Cellular and molecular life sciences: CMLS. 73 (4), 723-735 (2016).</li>
<li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendroglia+metabolically+support+axons+and+contribute+to+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Oligodendroglia metabolically support axons and contribute to neurodegeneration.</a> Nature. 487 (7408), 443-448 (2012).</li>
<li>Nave, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+and+the+trophic+support+of+long+axons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Myelination and the trophic support of long axons.</a> Nature Reviews. Neuroscience. 11 (4), 275-283 (2010).</li>
<li>Monje, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+Plasticity+and+Nervous+System+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Myelin Plasticity and Nervous System Function.</a> Annual Review of Neuroscience. 41, 61-76 (2018).</li>
<li>Birey, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+Stress-Induced+Loss+of+NG2+Glia+Triggers+Emergence+of+Depressive-like+Behaviors+through+Reduced+Secretion+of+FGF2%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic and Stress-Induced Loss of NG2 Glia Triggers Emergence of Depressive-like Behaviors through Reduced Secretion of FGF2.</a> Neuron. 88 (5), 941-956 (2015).</li>
<li>Frühbeis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitter-triggered+transfer+of+exosomes+mediates+oligodendrocyte-neuron+communication%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitter-triggered transfer of exosomes mediates oligodendrocyte-neuron communication.</a> PLoS Biology. 11 (7), e1001604(2013).</li>
<li>Jang, M., Gould, E., Xu, J., Kim, E. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocytes+regulate+presynaptic+properties+and+neurotransmission+through+BDNF+signaling+in+the+mouse+brainstem%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocytes regulate presynaptic properties and neurotransmission through BDNF signaling in the mouse brainstem.</a> eLife. 8, (2019).</li>
<li>Sakry, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+precursor+cells+modulate+the+neuronal+network+by+activity-dependent+ectodomain+cleavage+of+glial+NG2%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte precursor cells modulate the neuronal network by activity-dependent ectodomain cleavage of glial NG2.</a> PLoS Biology. 12 (11), e1001993(2014).</li>
<li>Sakry, D., Yigit, H., Dimou, L., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+precursor+cells+synthesize+neuromodulatory+factors%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte precursor cells synthesize neuromodulatory factors.</a> PloS One. 10 (5), e0127222(2015).</li>
<li>Stadelmann, C., Timmler, S., Barrantes-Freer, A., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+in+the+Central+Nervous+System%3A+Structure%2C+Function%2C+and+Pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Myelin in the Central Nervous System: Structure, Function, and Pathology.</a> Physiological Reviews. 99 (3), 1381-1431 (2019).</li>
<li>Freeman, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+conduction+velocity+linked+to+clustering+of+nodal+components+precedes+myelination%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Acceleration of conduction velocity linked to clustering of nodal components precedes myelination.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (3), E321-E328 (2015).</li>
<li>Baumann, N., Pham-Dinh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+oligodendrocyte+and+myelin+in+the+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Biology of oligodendrocyte and myelin in the mammalian central nervous system.</a> Physiological Reviews. 81 (2), 871-927 (2001).</li>
<li>McCarthy, K. D., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> The Journal of Cell Biology. 85 (3), 890-902 (1980).</li>
<li>Dean, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+differences+in+perinatal+rodent+oligodendrocyte+lineage+progression+and+its+correlation+with+human%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human.</a> Developmental Neuroscience. 33 (3-4), 251-260 (2011).</li>
<li>Domingues, H. S., Portugal, C. C., Socodato, R., Relvas, J. B., Astrocyte, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte%2C+Astrocyte%2C+and+Microglia+Crosstalk+in+Myelin+Development%2C+Damage%2C+and+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte, Astrocyte, and Microglia Crosstalk in Myelin Development, Damage, and Repair.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 71(2016).</li>
<li>Klinghoffer, R. A., Hamilton, T. G., Hoch, R., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+allelic+series+at+the+PDGFalphaR+locus+indicates+unequal+contributions+of+distinct+signaling+pathways+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">An allelic series at the PDGFalphaR locus indicates unequal contributions of distinct signaling pathways during development.</a> Developmental Cell. 2 (1), 103-113 (2002).</li>
<li>Spassky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+early+steps+of+oligodendrogenesis%3A+insights+from+the+study+of+the+plp+lineage+in+the+brain+of+chicks+and+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The early steps of oligodendrogenesis: insights from the study of the plp lineage in the brain of chicks and rodents.</a> Developmental Neuroscience. 23 (4-5), 318-326 (2001).</li>
<li>Moyon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demyelination+Causes+Adult+CNS+Progenitors+to+Revert+to+an+Immature+State+and+Express+Immune+Cues+That+Support+Their+Migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Demyelination Causes Adult CNS Progenitors to Revert to an Immature State and Express Immune Cues That Support Their Migration.</a> Journal of Neuroscience. 35 (1), 4-20 (2015).</li>
<li>Gardner, A., Jukkola, P., Gu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+of+rodent+hippocampal+neurons+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Myelination of rodent hippocampal neurons in culture.</a> Nature Protocols. 7 (10), 1774-1782 (2012).</li>
<li>Thetiot, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+mechanism+of+early+nodal+clustering+and+myelination+onset+in+GABAergic+neurons+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">An alternative mechanism of early nodal clustering and myelination onset in GABAergic neurons of the central nervous system.</a> bioRxiv. , 763573(2019).</li>
<li>Dubessy, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+a+Contactin+multi-molecular+complex+secreted+by+oligodendrocytes+in+nodal+protein+clustering+in+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Role of a Contactin multi-molecular complex secreted by oligodendrocytes in nodal protein clustering in the CNS.</a> Glia. 67 (12), 2248-2263 (2019).</li>
<li>Barateiro, A., Fernandes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+oligodendrocyte+lineage+progression%3A+in+vitro+models+of+proliferation%2C+differentiation+and+myelination%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+Et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Temporal oligodendrocyte lineage progression: in vitro models of proliferation, differentiation and myelination.</a> Biochimica Et Biophysica Acta. 1843 (9), 1917-1929 (2014).</li>
<li>Thetiot, M., Ronzano, R., Aigrot, M. S., Lubetzki, C., Desmazières, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+Immunostaining+of+Myelinating+Organotypic+Cerebellar+Slice+Cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (145), (2019).</li>
<li>Mannioui, A., Zalc, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+Demyelination+and+Remyelination+in+a+Transgenic+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology+%28Clifton%2C+N.J.%29%22%5BJournal%5D)">Conditional Demyelination and Remyelination in a Transgenic Xenopus laevis.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 1936, 239-248 (2019).</li>
</ol>

著者の誰も競合する利益や相反する利益を持っていません。

ここでは、混合グリア培養物から高度に濃縮されたオリゴデンドログリア系細胞培養物を得るための詳細なプロトコルを提供し、先に公表した方法16から適応し、その後のOL条件培地の製造を行う。この振れ技術は高価ではないが、3回繰り返し、また、PDGFαを含むボッテンシュタイン・サト(BS)培地で培養した細胞が増殖するように、高量の精製オールを得るのに最適である。グリア細胞は、P2におけるウィスターラットの大脳皮質を用いて調製され、オリゴデンドログリア系細胞の大部分がNG2およびO415を発現するオリゴデンドロサイト前である時点である。注目すべきは、OL系統成熟はマウスとラットのP2でも同様であり、このプロトコルは、マウスプリオリゴデンドロサイト17を単離するためにも使用することができる。
混合グリア細胞培養液を振った後、切り離された細胞は主にオリゴデンドログリア系細胞からなるが、一部のミクログリア細胞と少数のアストロサイトも含まれる。ミクログリア細胞...

オリゴデンドロサイト(OLs)は、軸索の周りにミエリンを包む中枢神経系(CNS)のグリア細胞です。OLsは、オリゴデンドロビ細胞前駆体細胞(OPC)に由来し、胚性CNSの心室領域内で増殖し、完全に成熟したOL(すなわちミエリン形成細胞)1に移行して分化する。初期の発達中には多くのオペックが豊富であるが、成人の脳にも持続し、そこで主要な増殖細胞集団2を表す。単一のOLは、非興奮性セクション(すなわち、ノード間)で複数の軸索を包み込み、各ミエリンループの端は、ミエリン1、3の絶縁特性にとって重要である副線ドメインを形成する軸索に付着する。パラノードの間には、ランヴィエのノードと呼ばれる小さな髄を持たしない隙間があります。これらのノードは電圧ゲート付きナトリウムチャネル(Nav)が豊富で、塩基伝導4を介した作用電位の再生と急速な伝播を可能にする。この緊密な相互作用はまた、AL5、6からの乳酸の神経の取り込みを通じて軸索エネルギーサポートを可能にする。
オリゴデンドログリア系統細胞の成熟と髄鞘形成プロセスは、ニューロン7との相互作用によって厳しく調節される。実際、NG2細胞とも呼ばれるOLsおよびOPCは、神経伝達物質の受容体の配列を発現し、興奮性および抑制性ニューロンからの入力を受け取ることができ、ミエリネーション細胞への増殖および/または分化を引き起こす可能性のあるニューロン活性を感知することができる2。次に、OPC/ORLsは、単独または相乗的に神経調節および神経保護機能8、9、10、11、12を仲介する細胞外空間に微小胞およびタンパク質を分泌する。しかし、オリゴデンドロアリエンス系統細胞とニューロンとの間の相互作用の複数のモードを制御する分子メカニズムはまだ完全に解読されていません。
さらに、いくつかのCNS病理学的状態では、OLsは主に影響を受け、ニューロンとの相互作用を妨げる。例えば、多発性硬化症(MS)では、神経機能障害は、CNSの焦点脱髄によって引き起こされ、軸索損傷および関連する障害蓄積につながる可能性のあるAL喪失に二次的である。ほとんどの場合、13が不十分ですが、再髄鞘化が行われる可能性があります。過去10年間の進歩は、免疫療法の発達のために、再発率を低下させたが、再髄鞘化を促進することは、満たされていないニーズに残っている。そのため、幅広いCNS条件に対する新しい治療法の開発に特に関心のある、ロール、機能、影響についての理解が深まります。
ここでは、OLsの精製と培養の方法について説明します。これにより、その開発と生物学を調節する本質的なメカニズムを正確に調べられます。さらに、このような高度に富んだOLs培養は、オリゴデンドロサイトコンディショナリ培地(OCM)の産生を可能にし、精製ニューロン培養物に加えて、OLs分泌因子が神経細胞生理学および接続性に及ぼす影響を洞察することができる。さらに、精製されたオリゴデンドロサイトとニューロンを組み合わせて、髄鞘形成(re)形成を調節するメカニズムに対処できるインビトロ共培養システムを実装する方法について説明する。

<table><tbody><tr><td>5-フルオロデオキシウリジン</td><td></td><td>Sigma F0503</td><td></td></tr><tr><td>B27 サプリメント</td><td>サーモフィッシャー</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-グルコース溶液</td><td>Sigma</td><td>G8769</td><td></td></tr><tr><td>DNase (デオキシリボヌクレアーゼ I)</td><td>ワージントン</td><td>LS002139</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのモディファイド イーグル ミディア</td>ム <td>サーモフィッシャー</td><td>31966021</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 100%</td><td>シグマ</td><td>32221-M</td><td></td></tr><tr><td>エタノール70%</td><td>VWR化学薬品</td><td>83801.360</td><td></td></tr><tr><td>胎児子牛血清</td><td>サーモフィッシャー</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>L-システイン</td>シ<td>グマ</td><td>C7352</td><td></td></tr><tr><td>神経基礎</td><td>サーモフィッシャー</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>パパイン</td><td>ワーシントン</td><td>LS003126</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリンストレプトマイシン</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 カルシウムとマグネシウムなし</td><td>サーモフィッシャー</td><td>A1285601</td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレン(PEI)</td><td>シグマ</td><td>P3143</td><td></td></tr><tr><td>四ホウ酸塩十水和物</td><td>シグマ</td><td>B9876</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン</td><td>シグマ</td><td>シグマ</td><td></td></tr><tr><td>ウリジン</td><td>シグマ</td><td>U3750</td><td></td></tr><tr><td>Bottenstein-Sato (BS) media</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>apo-Transferrin human</td><td>Sigma</td><td>T1147</td><td></td></tr><tr><td>BSA (ウシ血清アルブミン)</td><td>Σ</td><td>A4161</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコ修正イーグル 培地</td><td>サーモフィッシャー</td><td>31966021</td><td></td></tr><tr><td>インスリン</td><td>Σ</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>PDGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-13A</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>プロゲステロン</td><td>Σ</td><td>P8783</td><td></td></tr><tr><td>プトレシン二塩酸塩</td><td>Σ</td><td>P5780</td><td></td></tr><tr><td>亜セレン酸ナトリウム</td><td></td><td>Σ S5261</td><td></td></tr><tr><td>T3 (3,3',5-トリヨード-L-チロニンナトリウム塩)</td><td>Σ</td><td>T6397</td><td></td></tr><tr><td>T4 (L-チロキシン)</td><td>Σ</td><td>T1775</td><td></td></tr><tr><td><強>共培養培地</強></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アポトランスフェリンヒト</td><td></td><td>Σ T1147</td><td></td></tr><tr><td>B27 サプリメント</td><td>サーモフィッシャー</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>ビオチン</td><td>Σ</td><td>B4639</td><td></td></tr><tr><td>BSA(ウシ血清アルブミン)</td><td>Σ</td><td>A4161</td><td></td></tr><tr><td>セルロプラスミン</td><td>シグマ</td><td>239799</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのモディファイドイーグルミディアム</td><td>サーモフィッシャー</td><td>31966021</td><td></td></tr><tr><td>ヒドロコルチゾン</td><td></td><td>Σ H4001</td><td></td></tr><tr><td>インスリン</td><td></td><td>Σ I5500</td><td></td></tr><tr><td>N-アセチル-L-システイン</td><td></td><td>Σ A8199</td><td></td></tr><tr><td>ニューロベース</td><td>サーモフィッシャー</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>プロゲステロン</td><td>シグマ</td><td>P8783</td><td></td></tr>プ<tr><td>トレシン</td><td>シグマ</td><td>P5780</td><td></td></tr>組<tr><td>換えヒトCNTF</td><td>シグマ</td><td>450-13</td><td></td></tr>亜<tr><td>セレン酸ナトリウム</td><td>シグマ</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>T3(3,3',5-トリヨード-L-チロニンナトリウム塩)</td><td>シグマ</td><td>T6397</td><td></td></tr><tr><td>ビタミンB12</td><td>Sigma</td><td>V6629</td><td></td></tr><tr><td>Tools</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.22 &micro;m フィルター</td><td>ザルトリウス</td><td>514-7010</td><td></td></tr><tr><td>1 mL シリンジ</td><td>テルモ</td><td>1611127</td><td></td></tr><tr><td>100 mm ペトリ皿</td><td>ダッチャー</td><td>193100</td><td></td></tr><tr><td>15 mL チューブ</td><td>コーニング ライフサイエンス</td><td>734-1867</td><td></td></tr><tr><td>50 mL チューブ</td><td>コーニング ライフサイエンス</td><td>734-1869</td><td></td></tr><tr><td>60 mm ペトリディッシュ</td><td>ダッチャー</td><td>067003</td><td></td></tr><tr><td>70 &マイクロ;mフィルター</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-823</td><td></td></tr><tr><td>双眼顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>SZX7</td><td></td></tr><tr><td>湾曲した鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>ファイン</td><td>サイエンス ツール</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>大型手術用ハサミ</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>14008-14</td><td></td></tr><tr><td>メス</td><td>スワン・モートン</td><td>233-5528</td><td></td></tr><tr><td>シェー</td><td>カーInforsHT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>小型外科用はさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>小型外科用スプーン</td><td>Bar Naor Ltd</td><td>BN2706</td><td></td></tr><tr><td>T150 cm2フィルターキャップ付きフラスコ</td><td>Dutscher</td><td>190151</td><td></td></tr><tr><td>Animal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2Wistarラット</td><td>Janvier</td><td>RjHAn:WI</td><td></td></tr></tbody></table>

共同培養実験のためのオリゴデンドロサイト及びオリゴデンドロサイト条件培地の生成

Generation of Oligodendrocytes and Oligodendrocyte-Conditioned Medium for Co-Culture Experiments

中枢神経系では、オリゴデンドロサイトは軸索髄鞘の役割でよく知られており、塩基伝導を通じて作用電位の伝播を促進する。さらに、オリゴデンドロサイトが髄鞘を越えて、特に可溶性因子の分泌を通じてニューロンと相互作用することを示唆する報告が増えている。ここでは、アストロサイトやミクログリア細胞も含むグリア細胞培養物からオリゴデンドロイアル系統細胞を精製できる詳細なプロトコルを紹介する。この方法は、37°Cでの一晩の揺れに依存しており、上にあるオリゴデンドロア細胞とミクログリア細胞の選択的剥離、および微分接着によるミクログリアの排除を可能にする。次に、オリゴデンドロサイトの培養とオリゴデンドロサイトコンディショ化物(OCM)の生成について説明する。また、共同培養実験で精製された海馬ニューロンに加えてOCM治療またはオリゴデンドロサイトの動態を提供し、オリゴデンドロサイトとニューロンの相互作用を研究する。

このプロトコルでは、OL系統細胞は、アストロサイトおよびミクログリアを振り払うことによってグリア培養物から精製される。OL培養物の純度および風変わりに関する検査は、グリアマーカー15による免疫染色によって評価することができる。異なるマーカーの発現の分析は、OL培養が主にO4+細胞の90%±4%、85%±7%NG2+細胞、およびPLP+細胞の4.7%±2.1%のプレオールであり、7.2%±2.5%の細胞がGFAP+アストロサイト(平均±S.D.、n= 3;)図 2を参照してください。また、4.6%±0.7%の細胞はCD11b+ミクログリア細胞であった(平均±S.D.、図示しない)。
このような培養物から産生されるOCMは、精製された海馬ニュ...

本明細書では、共培養実験に使用できるオリゴデンドロサイトの精製およびオリゴデンドロサイト条件培地の製造のための効率的な方法を示す。

In the central nervous system, oligodendrocytes are well-known for their role in axon myelination, that accelerates the propagation of action potentials ...

オリゴデンドログリア系系細胞の精製および培養の効率的な方法について述べています。これにより、オリゴデンドロサイト分化を制御する分子メカニズムと、髄鞘化プロセス中のニューロンとの相互作用に対処することができます。この振れ技術は高価ではなく、大量のオリゴデンドロサイトを得るのに最適です。このような培養は、オリゴデンドロサイト調節培地およびニューロンを有するオリゴデンドロサイトの共同培養の生産を可能にする。多発性硬化症は、中枢神経系における焦点脱髄によって引き起こされる疾患であり、オリゴデンドロサイト喪失に対する二次的である。オリゴデンドロサイト文化は、再髄鞘化を促進する方法をよりよく理解するためのツールを提供します。オリデンドログリア細胞培養のみで、オリゴデンドロサイトの開発と生物学を調節する固有のメカニズムに関する洞察を提供できる。ニューロンとの共培養は、神経生理学への影響に関する洞察を得ることを可能にする。まず、湾曲した鉗子を使用して、動物の頭部を目の高さに維持します。小さな外科用ハサミを使用して頭蓋骨の基部に小さな切開を行い、脳の正中線に続く頭蓋骨を切断します。鉗子を使用して、頭蓋骨の2つの部分を中線からそっと剥がします。頭腔から脳を取り除くために小さな外科スプーンを使用してください。氷冷PBSグルコースを含む60ミリメートルのペトリ皿に脳を氷の上に入れます。ステレオ顕微鏡で見て、小脳、脳幹、および大脳半球から嗅球を除去するために微細な鉗子を使用する。2つの大脳半球を分離するために細かい鉗子を使用してください。細かい鉗子を使用して髄を剥がします。大脳皮質を氷の上に60ミリメートルのペトリ皿に入れます。層流フードで、鋭いメスを使用して大脳皮質を細かく刻みます。酵素消化培地を含む50ミリリットルのチューブに細かく刻んだ組織を移す。5%の二酸化炭素の下で摂氏37度の加湿インキュベーターで30分間インキュベートする。その後、ピペットを使用して酵素消化培地を穏やかに除去し、皮質組織がチューブの底に残っていることを確認します。P1000マイクロピペットを使用して、DMEM 10%の胎児の子牛血清を1ミリリットル加え、組織を穏やかに三分性します。70ミクロンのフィルターと1ミリリットルシリンジのピストンを使用して、皮質組織を50ミリリットルチューブにフィルターします。DMEM 10%胎児の子牛の血清で50ミリリットル管の内管壁の残留組織を数回リンスする。50ミリリットルチューブにDMEM 10%の胎児の子牛の血清を充填します。室温で5分間423回gで遠心分離機。上清を慎重に取り除き、DMEM 10%の胎児の子牛の血清の2ミリリットルで細胞のペレットを再懸濁させる。P1000マイクロピペットで細胞ペレットを穏やかにトリチュレートし、次いでP200マイクロピペットでトリチュレートします。DMEM 10%の胎児の子牛の血清の適切な容積で細胞懸濁液を薄くする。T-150フラスコの5ミリリットルの細胞懸濁液を10倍の密度で10倍から5番目の細胞/平方センチメートルでプレートします。各T-150フラスコに20ミリリットルの温かいDMEM 10%胎児の子牛血清を加えます。5%の二酸化炭素の下で摂氏37度の加湿インキュベーターでインキュベート。サンプルを250rpmと摂氏37度で一晩振盪した後、主にオリゴデンドロサイト系統細胞を含むフラスコに上清を収穫するが、いくつかのミクログリア細胞も、非コーティングされた100ミリメートルのペトリ皿に盛り付ける。摂氏37度と炭酸ガス5%の加湿インキュベーターでペトリ料理を15分間インキュベートします。これにより、皿表面上の差動速接着を通してミクログリア細胞を除去することができます。その間、各T-150フラスコに25ミリリットルの温かみ、作りたての培養培地を充填し、2回目の揺れまで5%の二酸化炭素の下で摂氏37度の加湿インキュベーターでインキュベートします。次に、ペトリ皿から新しい非コーティングされた100ミリメートルのペトリ皿に上清を移し、残留ミクログリア細胞の接着を可能にする。5%の二酸化炭素の下で37摂氏で加湿インキュベーターでペトリ料理を15分間インキュベートします。非接着オリゴデンドロビ細胞を含む2つのペトリ皿から上清を取り除き、50ミリリットルのチューブに移します。ミクログリアをメッキしたペトリ皿を捨てます。423回gで5分間チューブを遠心分離する。上清を慎重に取り除き、細胞ペレットを1ミリリットルのボツテンシュタイン・サト培地で再懸濁します。すべてのペレットを一般的な 50 ミリリットルチューブにプールし、ボツテンシュタイン-サト培地で細胞密度に応じて 20 または 30 ミリリットルのボリュームを調整します。プレート2または3は、細胞懸濁液の10ミリリットルと100ミリメートルペトリ皿をコーティングしました。5%の二酸化炭素の下で摂氏37度の加湿インキュベーターでインキュベート。2時間後、ボッテンシュタイン・サト中ミディアムのすべてをリフレッシュして、ペトリ料理から破片を取り除きます。5%の二酸化炭素の下で摂氏37度の加湿インキュベーターで培地に2日間インキュベートする。2日後、顕微鏡で培養を調べる。層流フード内で、滅菌条件下で、培地の中程度の暖かいMPB-27の10ミリリットルで培養培地を更新する。5%の二酸化炭素の下で摂氏37度の加湿インキュベーターで2日間インキュベートする。OCMを収穫するために、オリゴデンドロサイト分泌因子を含む上清を集める。フィルターは0.22ミクロンフィルターを使用してOCMを殺菌する。本プロトコルでは、オリゴデンドロサイト系統細胞を、星状細胞およびミクログリアを振り払ってグリア培養物から精製した。異なるマーカーの発現の分析は、オリゴデンドロサイト培養物が主にO4陽性細胞の90プラスマイナス4%、85プラスマイナス7%NG2陽性細胞、4.7プラスマイナス2.1%のPLP陽性細胞を有するオリゴデンドロサイト前であり、7.2プラスまたはマイナス2.5%の細胞がGFAP陽性細胞であった。このような培養から産生されたOCMは、精製された海馬ニューロン培養物に3日間インビトロで添加した。この治療法は、異性タンパク質のクラスタリングを促進します。海馬ニューロンの髄鞘化は、14日間のインビトロでオリゴデンドロクチを添加して研究した。20日から24日目のインビトロで、ミエリン塩基性タンパク質などのミエリンマーカーの免疫染色により、ランヴィエのミエリンセグメントおよびノードの可視化が可能となった。コアPBSは、髄液除去のために重要です.活発なクリアリングは、オリゴデンドロクチエの生存可能性とピペットで適用される流れの強さを実現するために重要です。オリゴデンドロサイト調節培地をニューロン培養物に加えて、オリゴデンドロキセ分泌因子が神経生理学に及ぼす影響についての洞察を得ることができる。ニューロンとのオリゴデンドロクチオンの共培養も、髄鞘形成過程を研究するために行うことができる。

generation-oligodendrocytes-oligodendrocyte-conditioned-medium-for-co

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

この記事では、成熟オリゴデンドロサイト（OLS）を生成するために差別化初代培養におけるマウスのオリゴデンドロサイト前駆細胞体（OPC）の豊かな集団を、導出する方法を説明します。さらに、この報告書はマウス後根神経節ニューロン（DRGNs）の神経突起ベッドの上にマウスのOPCを播種によってマウスmyelinating共培養を生成する手法を説明します。...

出生後のマウス組織から培養オリゴデンドロサイトと共培養Myelinatingニューロン/オリゴデンドロサイトエンリッチドの導出

プライマリ、ヒト胎児脳由来、多能性前駆細胞は増殖...

ヒト胎児脳から由来オリゴデンドロサイト前駆細胞培養システム

このビデオは、成体マウスの脳から側脳室壁を分離し、酵素組織の解離を行って単一細胞を得るための詳細なプロトコルを示しています。次に、これらの細胞を特定の培養条件にさらして、神経幹細胞の増殖を選択的に増強し、オリゴデンドロサイトとアストロサイトの共培養への分化を促進します。...

成体マウス神経幹細胞からのオリゴデンドロサイトとアストロサイトの混合培養物の取得

このビデオは、ヒト誘導ニューロン(iN)と誘導オリゴデンドロサイト前駆細胞(iOPC)の共培養の確立を示しています。iNは、共培養でiOPCと混合され、その後、両方のiNがニューロンに、iOPCがオリゴデンドロサイトに成熟するのをサポートするためにインキュベートされます。ニューロンは他のニューロンやオリゴデンドロサイトとシナプス結合を形成し、オリゴデンドロサイトはニューロンの軸索の周りにミエリン鞘を発達させます。...

ニューロン-オリゴデンドロサイト相互作用をモデル化するための共培養法

このビデオは、オリゴデンドロサイト前駆細胞(OPC)をオリゴデンドロサイトに分化させ、後根神経節(DRG)ニューロンとの共培養で髄鞘形成を誘導するためのプロトコルを示しています。OPCは、髄鞘形成を調節するシグナル伝達タンパク質をコードするレンチウイルスベクターで形質導入されます。形質導入されたOPCをDRGニューロンと共培養して、オリゴデンドロサイトへの分化とシグナル伝達タンパク質による髄鞘形成を評価します。...

オリゴデンドロサイト前駆細胞のin vitro形質導入誘導性髄鞘形成アッセイ

このビデオは、オリゴデンドロサイト系統細胞からオリゴデンドロサイトコンディショニング培地(OCM)の生成を、培地への分子放出を促進するためにストレスを与えることによって示しています。成長因子、サイトカイン、その他の生理活性分子が豊富なこの培地をニューロン培養物に添加することで、オリゴデンドロサイト分泌因子がニューロンの生理機能や接続性に及ぼす影響についての知見を得ることができます。...

オリゴデンドロサイト馴化培地の生成方法

このビデオは、マウスの子犬の脳皮質からオリゴデンドロサイト前駆細胞(OPC)を単離し、培養する技術を示しています。...

マウス仔脳皮質からのオリゴデンドロサイト前駆細胞の単離と培養

グロボイド細胞は、現在効果的な長期治療を欠いている白質ジストロフィーであるクラッベ病の決定的な病理学的特徴です。私たちは、活性化ミクログリアの自然生物学的および病原性の可能性と、それらがグロボイド細胞に形質転換するための細胞培養モデルを開発しました。...

アン体外モデル

ここでは、中枢神経系髄鞘形成のin...

生産と選択的に伝達する一次オリゴデンドロサイト前駆細胞へのレンチを使用するためのインビトロ髄鞘形成アッセイ

神経変性におけるニューロンとグリアの相互作用は、ツールや方法が不十分なため、よく理解されていません。ここでは、ヒト多能性幹細胞から誘導されたニューロン、希突起膠細胞前駆細胞、および希突起膠細胞を取得するための最適化されたプロトコルについて説明し、アルツハイマー病における細胞種特異的な寄与を理解する上でのこれらの方法の価値の例を提供します。...

多能性幹細胞からのヒト神経細胞および希突起膠細胞の作製によるニューロン-希突起膠細胞相互作用のモデル化

成熟したオリゴデンドロサイトに分化する胎児または成体の神経幹細胞に由来するアストロサイトとオリゴデンドロサイト前駆細胞の混合培養の生成と、有害刺激のインビトロモデリングについて述べています。細胞ベースの高含有スクリーニング技術との結合は信頼でき、強い薬物スクリーニングシステムを造る。...

胎児および成人神経幹細胞由来オリゴデンドロビテ前駆細胞培養の高含有スクリーニング分化と成熟解析

学ぶオリゴデンドロサイトの効率的な精製法と条件培地の作製法。振とう技術を用いて高収量で細胞を得られ、神経細胞との共培養や脱髄鞘疾患における再髄鞘化メカニズムの研究に応用できます。

共同培養実験のためのオリゴデンドロサイト及びオリゴデンドロサイト条件培地の生成

さらに動画を探す