Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins

David  J. Speca; Elva Diaz

doi:10.3791/61018

脳膜タンパク質のパルミトイル化定量に関するアシル-PEGyl交換ゲルシフトアッセイ

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Biochemistry

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Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins

脳膜タンパク質のパルミトイル化定量に関するアシル-PEGyl交換ゲルシフトアッセイ

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08:28 min

March 29, 2020

DOI: 10.3791/61018-v

David J. Speca¹, Elva Diaz¹

¹Department of Pharmacology,UC Davis School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

パルミトイル化は、16炭素パルミチン酸部分を、可逆的に標的タンパク質のシステイン残基に取り込む必要があります。ここでは、生化学的アプローチ、アシル-PEGyl交換ゲルシフト(APEGS)アッセイについて、マウス脳ライセートに関心のある任意のタンパク質のパルミトイル化状態を調べる。

この生化学的方法は、適切な抗体が利用可能な脳内で発現される任意の膜タンパク質のパルミトイル化状態の決定を可能にする。この技術の主な利点は、アフィニティー精製を必要とせず、代わりにゲル移動性の変化を利用して、目的のタンパク質の改変数を決定することです。脳を解剖した後、氷上のガラスホモジナイザーで均質化バッファーの10ミリリットルですぐに均質化します。

約12ストロークを使用して、1400倍Gで15分間、摂氏4度の間、ライセートを遠心分離する。上清を氷上の新しいチューブに移します。ペレットを均質化バッファーの 10 ミリリットルに再懸濁します。

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