Name: 天然物の生物調節特性を測定するプラナリアン運動性アッセイ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 学ぶプラナリア運動性アッセイによる天然物の生物調節効果評価法。プラナリアを用いた行動データ収集で、脊椎動物応答の前臨床的知見を得る信頼性の高い神経科学・行動生物学研究手法です。

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著者らは、この研究を支援するための出版助成金のための制度的進歩のオフィスとモリスビル大学財団、およびSUNYモリスビル大学の学部研究の継続的な支援と支援のためのSUNYモリスビル大学科学技術エントリープログラム(CSTEP)を認めたいと考えています。また、ソフィア・ハッチェンスに関する有益なコメントに感謝したいと思います。

1. プラナリアンの夫
<ol><li>必要に応じて、生物学的供給会社から購入したプラナリアンや野生捕獲を使用します。このプロトコルで使用されるプラナリアンは、供給リストに記載されているドゥゲシア・ティグリナです。この種はジラルディア・ティグリナ31とも呼ばれる。他の水生プラナリアン種も22,3を3受け入れられます。 注: 記載されているプロトコルは、生物供給会社から購入した動物を対象にしています。このアッセイシステムは、野生捕獲されたプラナリアンでテストされていません。しかし、野生のプラナリアンを使用する場合は、実験で使用される水と、使用前の少なくとも1週間は実験室環境に慣れすることをお勧めします。</li>
	<li>到着時に、きれいな湧水を含むプラスチック製の食品貯蔵容器にプラナリアンを転送し、蓋をアジャールに保ちます。</li>
	<li>暗い環境でプラナリアンを維持する。</li>
	<li>新しい環境で24-36時間後に新しく配達されたプラナリアンにフィードします。</li>
	<li>プラナリアンが実験の少なくとも1週間前に実験室に順応することを許可する。</li>
	<li>週に2回のスケジュールでプラナリアンにフィードします。<ol>
<li>プラナリアンが刻んだ有機ゆで卵またはブレンドした有機牛肉の肝臓に1〜2時間アドリビタムを与えることを許可します。</li>
		<li>餌を与えた後、きれいな容器に供給されたプラナリアンを置きます。<ol>
<li>プラナリアンから汚れた水を取り除きます。</li>
			<li>小さな平らな水彩絵筆(3~6番)を使って、プラナリアンの周りから容器に付着した食品の破片やスライムをペーパータオルに移します。</li>
			<li>新鮮な湧き水と穏やかな渦巻きや攪拌で、プラナリアンを取り除き、きれいな容器に注ぎます。</li>
			<li>容器に付着した平面は、丸い水彩絵筆(番号3~6)を使用して移管するか、広いボアでピペットを移管することができます。</li>
			<li>転写水をデカントします。</li>
			<li>平坦な湧水でプラナリアンを覆います。</li>
			<li>24時間後、上記のようにきれいな容器に移すことによって、排出された食品廃棄物からプラナリアンを取り除きます(ステップ1.6.2.1-1.6.2.6)。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>プラナリアンの夫に使用される容器や調理器具をきれいにするために、石鹸や洗剤を使用しないでください。きれいな水(水道水は許容範囲)できれいに洗い流し、清潔な布やペーパータオルで乾燥させて、これらのアイテムをきれいにしてください。</li>
</ol>2. 実験のためのプラナリアンの準備
<ol><li>新しく納入されたプラナリアンが実験の少なくとも1週間前に環境に順応することを許可する。</li>
	<li>実験の前に5〜10日間、プラナリアンを飢える。</li>
	<li>飢餓期間中に少なくとも1倍の培養水を変更します。</li>
</ol>3. 平坦な運動速度(pLmV)試験:覚醒剤の挙動
<ol><li>実験の前に、完全で色素沈着した頭と尾で、飢えたプラナリアンが完全に形成されていることを確認してください。</li>
	<li>実験を開始する前に、ガラスまたはプラスチック10cmペトリ皿とpLmVテスト用の習慣容器を準備します。<ol>
<li>プリラミネートグリッドペーパー(0.5cm角)上のpLmV試験に使用する、直径10cmのペトリ皿を清潔にしてください。</li>
		<li>pLmV試験に使用する直径10cmのペトリ皿に、制御用の20mLの非大人定湧水、または試験される天然物の適切な濃度を含む湧水を加えます。</li>
		<li>実験中にグリッドペーパー上の平面運動性を記録するために、調製された直径10cmのペトリ皿の上にカメラ(例えば、携帯電話または高解像度カメラ)を配置します。リングスタンドは、10 cmのペトリ皿とグリッドラインの全体のビューを記録できる距離にカメラを配置するための便利な方法です。</li>
		<li>5~10 mLの無水湧水(コントロール)、または試験対象の天然物の適切な濃度を含む湧水を用いて、慣れ歯液を用意します。シンチレーションバイアルまたは小さい5cmペトリ皿に類似した容器が適当である。</li>
	</ol>
</li>
	<li>小さくて清潔で平らな、丸い水彩絵筆を使用して、平水を備えたストックコンテナから、試験中の天然物を含む5〜10mLの耐用容器にプラナリアンを優しく移します。 注: pLmV アッセイのプラナリアンを操作する場合は、小さくて清潔で平らな水彩画の絵筆(3~6番)を使用してください。プラナリアンを動かす場合、ブラシは動物の下に置いてそっと持ち上げる必要があります。ブラシを使用する際にプラナリアンが損傷しないように、ブラシの毛は動物の下で吹き飛ばされるべきではありません。毛の毛から広がると、ブラシの繊維の間に挟まれば、プラナリアンに害を与える可能性があります。 注:広いボア転送ピペットは、清潔で乾燥した習慣化容器にプラナリアンを移すためにも使用できます。<ol>
<li>ピペットを使用する場合は、移管ピペットを使用して習慣化容器からプラナリアンと一緒に移動した余分な水を除去する。</li>
		<li>プラナリアンを含む習慣容器に習慣化液(すなわち、試験される天然物の濃度を含む制御用の湧水または湧水)を慎重に加える。</li>
	</ol>
</li>
	<li>習慣的期間は、試験される天然物について評価される刺激ダイナミクスに依存する。2分の習慣時間は、この仕事1で刺激を検出することが許容可能であることが判明した。</li>
	<li>2分慣れ期間に続いて、水彩絵筆を使用して、pLmV刺激実験のために準備された10cmのペトリ皿の中央にプラナリアンを穏やかに移します。</li>
	<li>プラナリアンの動きを記録するためにカメラを起動します。ビデオの10-11分を記録します。</li>
	<li>各プラナリアンのための新鮮なソリューションでpLmV実験のための習慣化容器と10センチペトリ皿を準備します。</li>
	<li>実験中に誤ってプラナリアンを間違った溶液に露出させないように、試験中の天然物の実験濃度ごとに専用のピペット、皿、容器、およびペイントブラシを使用してください。</li>
	<li>プラナリアンは学習した行動を示すため、各プラナリアン(制御またはテスト)は21、22,22回1回しか使用できません。</li>
</ol>4. 平坦な運動速度(pLmV)テスト:離脱行動
<ol><li>実験の前に、完全で色素沈着した頭と尾で、飢えたプラナリアンが完全に形成されていることを確認してください。</li>
	<li>pLmV実験用に10cmのペトリ皿(ガラスまたはプラスチック)、プラナリアンの後の習慣をすすくうための5cmのペトリ皿(ガラスまたはプラスチック)、および実験を開始する前に習慣化容器を準備する。<ol>
<li>0.5 cmの正方形のプリラミネートグリッドペーパー上のpLmV実験に使用されるきれいな10 cm直径のペトリ皿を置く)。</li>
		<li>pLmV実験に使用する直径10cmのペトリ皿に20mLの無帯水を加えます。</li>
		<li>実験中にグリッドペーパー上の平面運動性を記録するために、ステップ3.2.3のように準備された直径10cmのペトリ皿の上にカメラを置いて、グリッドペーパーの上にプラナリアンの運動性を記録します。</li>
		<li>5cmペトリ皿に5mLの湧水を一人で加えて、プラナリアンリンス容器を用意します。</li>
		<li>5~10 mLの大人げない湧水(コントロール)または試験中の天然物を含む湧水を使用して、慣れ歯を作ります。シンチレーションバイアルまたは小さい5cmペトリ皿(ガラスまたはプラスチック)に類似した容器が適当である。</li>
	</ol>
</li>
	<li>小さくて清潔で平らな水彩画の絵筆を使用して、平水から5~10mLの未集水(コントロール)または試験対象の天然物を含む湧水を備えた調理済みの習慣容器にプラナリアンを移します。動物をストックコンテナから習慣容器にそっと動かします。ブラシでプラナリアンが破損していないことを確認します。 注: pLmV アッセイのプラナリアンを操作する場合は、小さくて清潔で平らな水彩画の絵筆(3~6番)を使用してください。プラナリアンを動かす場合、ブラシは動物の下に置いてそっと持ち上げる必要があります。ブラシを使用する際にプラナリアンが損傷しないように、ブラシの毛は動物の下で吹き飛ばされるべきではありません。毛の毛から広がると、ブラシの繊維の間に挟まれば、プラナリアンに害を与える可能性があります。 注:広いボア転送ピペットは、清潔で乾燥した習慣化容器にプラナリアンを転送するために使用することができます。<ol>
<li>ピペットを使用する場合、プラナリアンと一緒に移動した余分な水は、移管ピペットを使用して習慣容器から取り除く必要があります。</li>
		<li>プラナリアンを含む習慣容器に習慣化液(すなわち、試験中の天然物を含む制御用の大人げない湧水または湧水)を慎重に加える。</li>
	</ol>
</li>
	<li>撤退のための習慣期間は、試験されている天然物のために評価される刺激ダイナミクスに依存します;2-5分は十分に証明されています。</li>
	<li>慣れ継ぎ期間に続いて、水彩画の絵筆を使用して、平水を含む準備された5cmのペトリ皿にプラナリアンを穏やかに移し、習慣化容器から天然物を洗い流します。ブラシでプラナリアンが破損していないことを確認します。</li>
	<li>pLmV離脱実験のために、すぐに水を含む調製された10cmペトリ皿の中央にプラナリアンを移します。ブラシでプラナリアンが破損していないことを確認します。</li>
	<li>プラナリアンの動きを記録するためにカメラを起動します。ビデオの10-11分を記録します。</li>
	<li>各プラナリアンのための新鮮なソリューションを用いて、習慣化容器、すすい容器、およびpLmV実験のための10 cmペトリ皿を準備します。</li>
	<li>実験中に誤ってプラナリアンを間違った溶液に露出させないように、試験中の天然物の実験濃度ごとに専用のピペット、皿、容器、およびペイントブラシを使用してください。</li>
	<li>プラナリアンは学習した行動を示すため、各プラナリアン(制御またはテスト)は26、27,27回のみ使用します。</li>
</ol>5. データ分析
<ol><li>pLmV の実行中に毎分交差するグリッド線の数として、平面の動作と運動性を文書化するデータ収集テーブルを準備します。この表では、平坦化によって交差する 1 分あたりの累積行数も文書化できる必要があります。「放浪」や「停止」など、実験期間中の行動の観察を集計するためのノートの行と定義の表を含めます( 説明を参照)。</li>
	<li>ビデオを使用して、1 分間に 1 分間に planarian が交差するグリッド線の数を 10 分間カウントし、その数をデータ テーブルに記録します。標準的な平面の動作は、連続速度、順方向、水平移動、周期的な回転、および停止なしで構成されます。<ol>
<li>プラナリアンが10cmのペトリ皿に移すために使用される絵筆から移動した時点で実験を開始します。この開始時刻を記録します。</li>
		<li>動物が完全なグリッド正方形を横切るタイミングを決定するには、頭に焦点を合わせ、頭が正方形を完全に横切るときに1行を獲得します。</li>
		<li>ワームが皿の端の周りを移動したときに完全なグリッドを獲得するには、皿の余白から伸びる線を参照して0.5cmの距離を視覚化します。プラナリアンがボックスの角を横切る場合は、2 番目の線を参照して 1 本のグリッドラインをスコア付けします。繰り返しますが、頭に焦点を当ててこれらの決定を行います。</li>
		<li>データを記録するには、毎分経過してビデオを停止します。</li>
		<li>ビデオを再起動して次の分をカウントする際に、ビデオが停止したときにワームの頭部がグリッドラインの間にあった場合は、最初の線を完全なボックスとして記録します。</li>
		<li>10分間交差するグリッド線の数をスコア。</li>
	</ol>
</li>
	<li>動物がpLmVテスト中に動きを止め、10分の記録時間中にグリッドラインを横切らなくなった場合は、行動チャート(例えば、「さまよう」または「停止」)でプラナリアンの動作を文書化します。pLmVアッセイ中に前方追跡を停止する動物は、代わりに注意し、データは、その試薬濃度にさらされた動物の総数の頻度として提示する必要があります。習慣期の前進の動きを妨げるコイル化または痙攣行動(C挙動と呼ばれる)は、pLmVアッセイが運動性に基づいているため、天然物の濃度がpLmVアッセイでの使用に適していないことを示している。C 型の動作は、異なるタイプの分析を使用して分析できます (「 ディスカッション」を参照)。</li>
	<li>可能であれば、試薬がプラナリアン生理学に及ぼす全体的な影響を決定する場合は、少なくとも9〜12のワームを使用して、1日の異なる日と異なる時間に天然物の複数の実験濃度をテストします。しかし、研究者が概日リズムによる変動を減らそうであれば、時間指定の明暗サイクルで培養され、給餌時間を設定するワームを使用して、一定の時間に一定の照明で実験を行うことができます。プロジェクトに少なくとも 2 人の実験者を参加させ、1 つの個別レコード データを持つオプションを選択できるようにし、2 番目の個人はグリッド線をデータ収集に使用される条件に 「ブラインド」とカウントします。データ収集に関与する個人が異なるだけでなく、統計計算や分析も、可能なバイアスを減らします。</li>
	<li>各日の自然製品濃度ごとのグリッド線数を、毎分の制御カウントに対する相対的な値として計算し、異なる日、時間、および実験者のデータを組み合わせることができます。これらのデータは、学生のT検定を使用して平均化し、分析することができます。各試験のP値は、対照と比較して、試薬濃度の間で毎分評価することができる。異なる実験濃度から得られたデータセットを用いたANOVA評価は、さらなる分析方法を提供します。</li>
</ol>

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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

天然物の覚醒剤と離脱効果を決定するために、簡単でアクセス可能なプラナリアン運動アッセイが記載されています。行動モデルとして、異なる実験者間で観測を標準化するために、動きを採点するための厳格なプロトコルと、あらゆる行動の明確な定義が必要です。提示されたアイデアは、これを達成する方法のデモンストレーションを提供します。このプロトコルを使用する各研究室は、テストされる特定の製品の効果に合わせて提示された情報を適応させる必要があります。研究に関与する各調査員が一貫した条件でテストを行えるようにワークスペースを慎重に設定することをお勧めします (図 1)。標準化された記録シートをコンパイルして、正確な記録保持と、運動性と動作に関するデータ収集を支援することができます(図2および図3B)。
運動性テストは、可能であれば、プラナリアンの異なるバッチを使用して、固有の概日活動を発散するために、一日の様々な時間に行われるべ...

記載されたプロトコルは、自然物質の生体調節効果を評価する手段を提供するためにプラナリアン運動性を使用しています。これらの物質が覚醒剤として機能するかどうか、そしてそれらが測定可能な離脱行動1に関連していたかどうかを判断するために具体的に適応された。このアッセイは、プラナリアン・ロコモーター速度(pLmV)試験として知られており、まず、既知の薬理学的薬剤22,3を試験するために用いられた。このプラナリアン運動性に基づくアッセイの適用は、その後人気が高まり、天然物以外の物質に興味を持つ異なる研究所で採用されています4,5.このアッセイのために、プラナリアンは、溶解したバイオモジュレーターを含む湧水または湧水を含むペトリ皿に置かれる。皿自体はグラフ紙に載せているので、容器のまわりに動物が交差するグリッド線の数は、各条件の移動速度を決定するために使用することができる。ライト/ダークテストは、条件付き場所優先試験(CPP)と呼ばれる、平面運動性を監視するテーマの別のバリエーションであり、動物が暗い環境にどれだけ速く反応し、暗くなった環境に移行するかを評価する66,7。7プラナリアンの動きのビデオ追跡は、コンピュータプログラムと質量の中心(COM)追跡898、9、10、1110,11を使用して分析することもできます。,
このような研究のための動物モデルとしてプラナリアンを使用すると、実験者が簡単にアッセイ環境を制御することができるという点で、他の動物よりもいくつかの利点を提供しています。具体的には、実験前にプラナリアンを飢えさせることで、結果を混乱させる可能性のある他の栄養学的または薬理学的薬剤への暴露を防ぐことができ、調査中の特定のバイオモジュレーターは、培養水に直接添加するだけでプラナリアンに導入され、それによって暴露を標準化することができる。プラナリアンは「高次」動物を連想させる神経系および神経伝達物質を有するため、これらの動物の神経筋刺激に対する生理学的および実験的反応は、他の生物12、13、14、15、16に生物学的に関連すると考えられている。12,13,14,15,16また、プラナリアンは比較的安価で実験室での維持が簡単であるため、多くの研究者にアクセス可能な生物学的モデルを提供します。
実験動物として、プラナリアンは幅広い研究に適している。例えば、我々のグループは、他の研究者と同様に、プラナリアンを使用して、腫瘍形成17、18、1918,19を研究する。17また、プラナリアンは、化学、熱、重力、電気、写真、磁気刺激など、他のアッセイシステムの基礎を形成する多くの応答挙動を示しています。これらの効果のいくつかは、これらの動物の学習と記憶を研究するために使用されています20, 21,,22,,2123,,24,,25,26, 27.,27現在の文献におけるプラナリアンモデルの主な使用は、ネオブラストと呼ばれるプラナリアン多能性幹細胞の活性と、再生28、29、3029,30におけるそれらの役割に焦点を当てている。28したがって、ここで説明するモデルを採用することで、他のプラナリアンベースのアッセイを使用して、天然物やその他のバイオモジュレーターが生物にどのような影響を与えるかをより広く理解することができます。

<table><tbody><tr><td>ボトル入り飲料水 - 1ガロン</td><td>ポーランドスプリング</td><td>N / A</td><td>プラナリア文化のための湧き水と解決策</td></tr><tr><td>ブラウンプラナリア(Dugesia tigrina)</td><td>カロライナバイオロジカルサプライカンパニー</td><td>132954</td><td>ブラウンプラナリアリビング(他の種は許容されます)</td></tr><tr><td>フラットペイントブラシ</td><td>ロイヤルクラフターズチョイス</td><td>9159</td><td>プラナリア文化容器ガラスペトリ皿を洗浄するためのフラット水彩絵筆</td></tr><tr><td>- 10センチ</td>メートル<td>キマックス</td><td>N/A</td><td>直径10cm(ガラス) pLmVアッセイ用シャーレ</td></tr><tr><td>ガラスシャーレ - 5cm</td><td>Kimax</td><td>N/A</td><td>5 cmおよびペトリ皿 離脱実験中のプラナリアのすすぎおよび覚醒剤の馴化のための</td></tr><tr><td>グリッドペーパー</td><td>任意</td><td>N/A</td><td>pLmVアッセイ用標準0.5cmグリッドペーパー</td></tr><tr><td>iPEVO Visualizer(ソフトウェア)</td><td>iPEVO</td><td>https://www.ipevo.com/software/visualizer</td><td>ビデオキャプチャと録画のためのドキュメントカメラソフトウェア</td></tr><tr><td>サポートスタンドとレトルトリング付き金属製品セット</td><td>任意の</td><td>N/A</td><td>携帯電話のカメラを保持するための標準的な化学ラボリングスタンド</td></tr><tr><td>有機卵</td> 任意の<td></td><td>N/A</td><td>プラナラインを供給するための有機卵または牛レバー</td></tr><tr><td>ポリカーボネートボトル(ねじ込み式キャップ付き) - 10 mL</td><td>ベックマン</td><td>N/A</td><td>覚醒剤の慣れのために5〜10mLの容量を保持するプラスチックバイアル</td></tr><tr><td>丸型保存容器 - 10 cm</td><td>ジップロック</td><td>N/A</td><td>10 cm 約90プラナリア以下の丸型食品保存容器</td></tr><tr><td>丸型水上ペイントブラシ</td><td>LOEW-Cornell</td><td>N/A</td><td>小型丸型水彩絵の具ブラシ(3番から6番) - ソフト</td></tr><tr><td>トランスファーピペット</td><td>任意</td><td>N/A</td><td>ワイドボア(5mL) プラナリア移動用プラスチック転写ピペット</td></tr><tr><td>USB書画カメラ</td><td>iPEVO</td><td>CDVU-06IP</td><td>書画カメラ(または他のカメラや携帯電話のカメラ)</td></tr></tbody></table>

天然物の生物調節特性を測定するプラナリアン運動性アッセイ

A Planarian Motility Assay to Gauge the Biomodulating Properties of Natural Products

非寄生プラナリアンを使用する簡単で制御可能な手段、 ドゥゲシアティグリナ、自由に生きている水生扁平虫は、天然物の覚醒剤および離脱特性を研究するために記述されている。プラナリアン生理学のユニークな側面から恩恵を受ける実験的アッセイは、創傷治癒、再生、および腫瘍形成に関する研究に適用されてきた。また、プラナリアンは様々な環境刺激に対する感受性を示し、条件付き応答を学習・開発することができるため、学習や記憶を調べる行動研究にも利用できます。プラナリアンは、基本的な二国間対称性と神経伝達物質システムを使用する中枢神経系を有し、神経筋バイオモジュレーターの効果を調べる研究に適している。その結果、物質中毒や撤退を調べるために、プラナリアンの動きや運動性を監視する実験システムが開発されました。プラナリアン運動は、刺激の影響を監視する敏感で簡単に標準化された運動アッセイシステムの可能性を提供するため、プラナリアン運動速度(pLmV)試験は、時間とともに動物が交差するグリッド線の数を決定することによって、プラナリアンによる刺激と撤退の両方の行動を監視するように適応されました。ここでは、技法とその応用を示し、説明します。

実験を開始する前に、pLmVアッセイを実行するためのワークスペースの設置と準備を行う必要があります。これには、習慣化容器の調製、必要に応じて容器のすき取り(離脱実験用)、層皿を積層グリッド紙、および適切に配置されたカメラを含む(図1)。すべてのビデオを撮影したら、共通のデータシートを使用して、調査員間のデータ収集とプレゼンテーションを標準化することをお勧めします(図2 と 図2補足)。
カメラをセットアップすると、実験の間の動物の進行状況を正確に評価できるように、プラナリアンとグリッドペーパーを明確に表示できる必要があります(図3A と 図3A補足)。データ収集には、交差するグリッド線の数と、実験の1分間に交差する合計線の合計数を含める必要があります(図 3B)。pLmV解析の間...

プラナリアン運動は、湧水単独で動物の動きと比較した場合の天然物の覚醒剤および離脱特性を測定するために使用されます。

A straightforward, controllable means of using the non-parasitic planarian, Dugesia tigrina, a free-living aquatic flatworm, to study the stimulant and ...

プラナリアン・ロコモーター速度試験は、運動に影響を与える可能性のある様々な生物学的修飾剤に対する覚醒剤および可能な離脱効果を迅速に評価するための手段である。このエッセイは簡単に制御でき、最も基本的な研究設定でも信頼性の高い行動データを生成するための簡単でアクセス可能な方法を提供します。平坦神経系は、中央集権的な初歩的な脳、二国間対称性および類似性神経伝達物質系を有するため、これらの生物を用いた行動研究は、脊椎動物の応答の可能性に関する前臨床的洞察を提供する。実験は、関連する生物学的メカニズムに関する洞察を提供するために、生理学的経路調節剤、薬物、あるいは遺伝子組み換えプラナリアンによってさらに影響を受ける可能性がある。コンテナ間の転送がストレスを感じないように、ラボメンバー間のグリッド線曲線を標準化するために、プラナリアンを使用することが重要です。この行動エッセイ実験から一貫した結果を得る最善の方法は、経験豊富なユーザーがそれらをどのように実行したかを見ることです。プラナリアン文化を設定した後、刻んだ有機ゆで卵またはブレンド有機牛肉の肝臓の定期的な週2回のスケジュールでワームアドリビタムを1〜2時間供給します。給餌後、容器から汚れた水を取り除き、平らな水彩画ペイントブラシを使用して、容器に付着した食品の破片やスライムをペーパータオルに移します。新鮮な湧き水と穏やかな渦巻きまたは攪拌を使用して、プラナリアンを取り除き、ワームをきれいな容器に入れます。新しい皿への移動を容易にし、慎重に転送水をデカントするために、古い容器に付着した任意のプラナリアンの下にワイドボアピペットチップをスライドさせます。次に、新しい容器のプラナリアンを新鮮な湧水で覆います。プラナリアン・ロコモーター速度テストを実行するには、まず、5〜10日間の飢えたプラナリアンが完全で色素沈着した頭と尾で完全に形成されていることを確認します。プラナリアンが準備ができている場合は、実験群あたり0.5センチメートルの正方形を持つ事前積層格子紙の1つに1つのきれいな10センチメートルの直径ペトリ皿を置き、対照群に20ミリリットルの無添加の湧水または各皿に試験される天然物の適切な濃度を含む湧水の20ミリリットルを加える。準備した運動速度刺激皿の上にカメラを置き、実験化合物の適切な濃度を含む大人げない湧水または湧水を適切なサイズの習慣化容器に5〜10ミリリットル加える。次に、小さなきれいな水彩画のペイントブラシを使用して、1つのプラナリアンを培養容器から調製された習慣化容器に穏やかに移し、プラナリアンが容器内の溶液に2分間慣れられるようにします。研究は、プラナリアンがブラシの上に移動し、慎重にそれらを強制することなく、動物を持ち上げることを可能にします。慣用期間の終わりに、ブラシを使用して、習慣化容器と同じ溶液

a-planarian-motility-assay-to-gauge-biomodulating-properties-natural

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

生きた動物の中で幹細胞の分化を研究するための魅力的なモデルは、プラナリア扁形動物です。再生は簡単に基本的な実験室で行われる単純な切断実験により研究し、薬理学的および遺伝的（に適しているさ...

プラナリアの再生を操作するために薬理学的および機能的遺伝学的アッセイ<emジャポニカ> Dugesia</em

定量の走化性応答の評価方法...

C. elegansの走化性アッセイ

モデル生物Caenorhabditis elegansにおけるミトコンドリア阻害剤の影響のin...

スクリーニング可能<em&gt;インビボ</em&gt;トランスジェニック生物発光を使用したミトコンドリアモジュレーターについてのアッセイ<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

このプロトコルは、一貫して、周囲の組織を乱すことなく、プラナリア目（光学カップ）を切除する方法を示しています。インスリン注射針と注射器を使用して、一方または両方の目のどちらかは、目の再生、視覚的な再生の進化、および光誘起行動の神経基盤を調節するメカニズムの調査を容易にするために、アブレーションさせることができます。...

プラナリアで瞳の再生を研究するための外科切除アッセイ

淡水プラナリアンは、定量的行動分析によって区別できる3つの歩行(滑空、蠕動、およびスクランチ)を示す。我々は、様々な有害刺激、その定量、および蠕動および滑空との区別を用いてスクランチを誘導する方法を記述する。遺伝子ノックダウンを用いて、定量的表現読み出しとしてスクランチングの特異性を実証する。...

有害刺激センシングのための定量的行動読み出しとしてのプラナリアンスクランチング

本研究は、C.エレガン複合体I病ガス-1(fc21)ワーム、すなわちZebraLab(中スループットアッセイ)とWormScan(ハイスループットアッセイ)における2つの半自動運動活動分析アプローチのプロトコルを提示し、ネマトデ挙動と統合神経筋機能を定量化するための広範な研究方法の間で比較分析を提供する。...

ミトコンドリア病の ケノハブディティス・エレガンス モデルにおける動物活動量の定量化に関する実験法の比較分析

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細胞追跡を用いた口腔装置再生中および再生後の ステント の運動性パターンの解析

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筋萎縮性側索硬化症の C.エレガンス モデルにおける運動障害の評価

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実験的急性発作の動物モデルとしてのプラナリア

学ぶプラナリア運動性アッセイによる天然物の生物調節効果評価法。プラナリアを用いた行動データ収集で、脊椎動物応答の前臨床的知見を得る信頼性の高い神経科学・行動生物学研究手法です。

天然物の生物調節特性を測定するプラナリアン運動性アッセイ

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