マウスにおける完全なトランセクション型脊髄損傷の誘導

このプロトコルは、正確な外科的に制御された傷害を提供し、再現性が高く、生存率が非常に高いマウスで完全な脊髄切除を誘導する。骨損傷に対する細かいドリルを使用することで、周囲の組織への損傷を最小限に抑え、より正確にモデル化する傷害および治療応答を可能にする。ラミネクトミーを行うために、8〜10週齢の雌C57黒6マウスでペダル反射への応答の欠如を確認した後、背中の毛皮を剃って背背骨の上に外科領域を露出させ、ポビドーゼ防腐液と外科精神に浸した無菌綿棒で剃った領域を殺菌する。

メスを使用して、T10椎骨レベルで垂直正中線切開を行い、ストレート鉗子を使用して下層筋膜から皮膚を持ち上げてレトラクタの配置を容易にします。T9の脊椎をT11椎骨に露出するには、メスの鈍い縁を使用して皮下組織と下層筋膜に小さな正中線切開を行い、細かい先端の非鋭利な鉗子を使用して鈍い解剖を行い、筋膜を反射する。ラミネートを露出するには、メスの鈍い先端を使用して、T9の脊椎に沿って背部幹と麻痺性筋肉をT11椎骨を通して分割し、鈍い細かい先端鉗子を使用して層の筋肉を鈍く解剖して椎骨の層のラミネートを露出させます。

同じ鉗子を使用してT10椎骨の横プロセスの周りに小さなポケットを作り、作成されたポケット内の横方向のプロセスの下で湾曲した鉗子の前部を引っ掛け、T10椎体を安定させます。T10ラミネートを温かい生理食い物で十分に洗い流し、綿棒を使って骨表面をきれいに静かに拭き取り、筋肉や靭帯の付着物が両側表面に残らないよう注意してください。ラミネートを両側で壊すためには、直径0.55ミリメートル、長さ7ミリメートルのドリルビットチップを使用して、T9/T10椎間スペースからT10/T11間の垂直経路をドリルオフでT10/T11椎間空間にトレースします。

パスがトレースされたら、ドリルをオンにし、ゆっくりと慎重に椎骨を安定させるために湾曲した鉗子を使用して、T10椎骨の右層に垂直トレンチを作ります。薄層の左側のプロセスを繰り返した後、残りの骨片を洗い流すために暖かい生理布で組織を灌漑します。片手で背骨のグリップを良好に保つ方法は、このステップに不可欠です。

また、ドリルを使用して快適で自信を持って行くことも重要です。次に、角度付きの細かい先端鉗子を使用して、スピナスプロセスを握り、二国間掘削によって分離された層状層全体を除去する。次いで、必要に応じて灌漑し、綿棒を用いて、ラミテ切除窓内の脊髄を明確に可視化する。

露出した臍帯内で脊髄損傷を誘発するには、狭い丸い切断刃を使用して、ラミネ切除窓の中央でコードをスライスし、脊柱の横凹部を掃引して完全な横断損傷を誘発するように注意する。トランセクション損傷の完全性を確認するには、鈍い細かい先端鉗子を使用して、セクションサイトの残りの接続を取り除きます。横断部位で止まりが達成されたら、T10椎骨の湾曲した鉗れのグリップを解放し、解剖された筋肉の端を正線に沿って一緒に持って来て、良好なアポジションを達成する。

5/0ポリグラクチン910吸収性縫合糸を使用して、筋肉を層で縫合し、背骨の自然な湾曲が縫合線で緊張を引き起こさないようにしたり、縫合糸を開いたりしないようにします。その後、5/0非吸収性シルク縫合糸を使用して皮下組織および皮膚を閉じ、閉鎖前に皮膚の下に出血、血栓、または破片が残っていないように注意する。マウスにおけるトランセクション型脊髄損傷を誘発するこの方法が再現性と一貫性があるかどうかを評価するために、損傷した脊髄を免疫組織化学によって分析することができ、行動検査をマウス上で行うことができる。

アストロサイトマーカーに対する免疫標識は、グリア線維性酸性タンパク質、インタクト脊髄の境界の境界を促進する。この縦断面では、位置する傷害部位は、予想通りコード切り株の間で視覚化することができる。一貫したサイズの欠陥は550.4、プラスマイナス17.3マイクロメートルの平均最小距離の横断部の場所で誘発することができる。

オープンフィールドテストのバッソマウススケールを展開する行動データは、負傷したマウスが怪我の後に後肢の動きを示さないことを示しています。したがって、このプロトコルは完全で信頼性の高いセクション型傷害を生じ、麻痺の自発的な逆転を招かない傷害レベル以下の機能を完全に失う結果となる。それは誤って掘削された後、ラミネクトミーの窓を修復することは非常にトリッキーなことができますので、安定した手で直線にドリルするように注意してください。

脊髄損傷誘導後、薬物送達や細胞移植など、脊髄損傷回復を改善する潜在的な治療法を特定するなど、さまざまな治療オプションを適用することができます。