微生物叢研究のための商業ラインからの無菌急成長ブロイラーの生産

これまで無菌鳥類の生産は、研究用の動物種に限られていました。ここでは、市販の動物でもそれが可能であることを示します。この技術により、農場の鳥の遺伝的背景を使用して微生物叢の影響の研究を行うことが可能になります。

このプロトコルを試みるときは、選択した種の繁殖を標準条件で制御し、アイソレーターでの作業に関する深い知識を持つことが重要です。まず、50ミリリットルのチューブ、プラスチックピペット、照射飼料、オートクレーブ水、滅菌密閉プラスチック容器を正圧下の硬質絶縁体にセットします。トランスファー殺菌トラップに2%四次アンモニウム溶液を充填し、ホルムアルデヒド蒸気でアイソレーターを3回滅菌し、各滅菌間でアイソレーター内の材料を移動させて、すべての接触面の消毒を確実にします。

卵を導入する少なくとも2日前に、アイソレーターの温度を摂氏37度に設定してください。導入日は、比重計を相対湿度の65〜70%に設定してください。清潔で完璧な卵を選んだ後、すぐに卵の表面を1.5%過酢酸溶液に5分間浸して除染し、ホルムアルデヒド蒸気で除染したボックスを使用して卵を実験施設に輸送します。

卵を摂氏14度で24時間保存し、1.5%過酢酸で滅菌を繰り返し、卵を孵化インキュベーターに19日間入れます。19日目に、無菌条件下で軽い卵キャンドラーを使用して、胚の受精力、生存率、および発生を確認します。生きた胚卵子を選択し、1.5%過酢酸溶液を30秒間、または各卵の表面全体が覆われるまで噴霧して除染します。

卵を滅菌孵化アイソレーターに移し、滅菌脱塩水ですすいでから孵化スペースに入れます。孵化後、動物は無菌アイソレーターで飼育され、ガンマ線照射で滅菌された市販の飼料を自由に与えられ、オートクレーブされた水道水で水をやります。孵化の1日後、さまざまなひよこの直腸から直接糞便サンプルを採取し、滅菌したガラス管にプールします。

1ミリリットルの便を9ミリリットルのチオグリコール酸ブロスとレサズリンを加え、残りのサンプルを9ミリリットルのブレインハートインフュージョンまたはBHIブロスに加えます。.チューブを摂氏37度で18〜48時間振とうせずにインキュベートします。18時間後、成長培地に変化がないかチューブを目視で検査します。

48時間後、BHIの糞便ブロス培地から一滴を取り出し、スライドガラスに置き、顕微鏡で観察します。細菌の存在が疑われる場合は、BHI培養物からサンプルを採取し、BHI寒天プレートに播種し、プレートを37度で18〜48時間インキュベートします。コロニーが現れた場合は、MALDI-TOF質量分析などのハイスループット技術を使用して細菌を同定します。

無菌雛の作製は、フランスの2つの異なる農場から採取したROSS PM3の卵を用いて6回実施しました。合計853個の卵子が採取され、2回の除染ステップと19日間の孵化の後、86.40%が生存可能になりました。生存可能な卵のうち、490個が3回目の除染ステップを受け、さまざまな孵化アイソレーターに導入され、平均孵化率は79.80%で、これは最初に収集された卵の数と比較して68.94%の孵化率に相当します。

孵化の結果は、採集された卵の数と比較して、生存可能な雛の41.67%から88.16%まで大きく異なります。この影響は、高齢の雌鶏から生まれた卵が生存率が低い産卵鶏の年齢と直接相関していました。6回のランは、4つの異なるハッチングアイソレーターを使用して行われました。

細菌学的防除後、16個のアイソレーターのうち14個の動物が無菌であることが確認され、成功率は86.5%でしたこの手順の重要なポイントは、アイソレーターの無菌性を維持することです。これには、消毒手順の遵守、そして何よりも、液体エアロックを介した要素の導入を制御する必要があります。この手順により、動物は微生物叢が鳥の生理機能と健康に与える影響を測定できます。

卵がアクセス可能な場合は、他の養殖鳥や野生生物の微生物叢を研究するために適応して使用できます。