Name: 腱由来幹細胞の発熱分化を誘導する三次元単軸機械刺激バイオリアクターシステムの適用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 4 s
Description: 学ぶ三次元単軸機械刺激バイオリアクターシステムを用いた腱由来幹細胞の腱形成分化誘導法。腱障害治療への応用可能性を探る再生医療技術です。

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著者が「西オーストラリア大学国際料奨学金と西オーストラリア大学大学院賞」を受けている間に研究が行われました。この研究は中国国立自然科学財団(81802214)によって支援されました。

記載された方法は、西オーストラリア大学動物倫理委員会のガイドラインと規制に従って承認され、実施されました。
1. マウスTDSCの分離
<ol><li>6-8週齢のC57BL/6マウスを子宮頸部脱臼で安楽死させる。</li>
	<li>収穫膝蓋腱24とアキレス腱25.</li>
	<li>I型コラゲザーゼ(3mg/mL)の6mLを持つ腱を3時間消化します。 注:マウスの腱のサイズが小さいので、1つのマウスから収穫されたすべての腱はこのステップで使用する必要があります。</li>
	<li>胎児ウシ血清(FBS)の10%とストレプトマイシンとペニシリン混合物の1%を含む完全な最小必須培地(Α-MEM)で細胞と培養を7日間収集します。</li>
	<li>フローサイトメトリーによる蛍光活性化細胞選別(CD44、CD90、Sca-1を含む細胞表面マーカーの発現、CD34およびCD45の発現の欠如)を用いてTDSCを同定する。</li>
	<li>通過および凍結細胞(通路4細胞は、さらなるステップのために使用されます)。</li>
</ol>2. マウスTDcの培養と拡大
注:無菌バイオセーフティフードですべてのステップを実行してください。
<ol><li>温めた細胞(マウスTDC、100万個の細胞、通過4、37°C)を取る。</li>
	<li>完全な最小必須培地(アルファ-MEM)の余分な4-5 mLをゆっくりと追加します。</li>
	<li>ピペットで15 mL遠心管に混合物を移します。</li>
	<li>ピペットで合計8 mLまでの培地で上に上げます。<ol>
<li>37°Cのオーブンインキュベーター中のプリウォーム培地。</li>
	</ol>
</li>
	<li>チューブを遠心分離機とバランスに入れ。</li>
	<li>遠心分離機およびペレット細胞を347 x gで5分間用くる。</li>
	<li>遠心分離機の後に取り出し、下部のペレットを確認してください。</li>
	<li>凍結培地をデカントし、完全な培地の1〜2mLで細胞を穏やかに再懸濁する(泡が多すぎるのは避ける)。</li>
	<li>再懸濁した細胞をピペットでT-75フラスコに移す。</li>
	<li>ピペットを使用してフラスコに完全なアルファ-MEM培地を追加し、最終的な濃度が13,000セル/cm2の総体積10 mLに達します。</li>
	<li>フラスコをインキュベーターに入れ、培養物を5%CO2で37°Cに入れる。</li>
	<li>3日ごとにメディアを変更します。</li>
	<li>培地を100%合流まで培養するまで、顕微鏡下で細胞を観察し、監視する(約40,000細胞/cm2)。</li>
</ol>細胞シート形成のための刺激培養培地の調製
注:無菌バイオセーフティフードですべてのステップを実行してください。
<ol><li>完全なアルファ-MEM培地の15 mLを15 mLの無菌チューブに注ぎます。</li>
	<li>6 μL のアスコルビン酸 (11 mg/mL) を培地 15 mL に加え、最終濃度は 4.4 μg/mL となります。 注:さらに、刺激培養培地に25ng/mL結合組織成長因子を加えることは、全体の成長および分化プロセスを加速することができる。</li>
	<li>上下に反転してやさしく混ぜます。</li>
</ol>4. 刺激媒体で培養した細胞シート形成
注:無菌バイオセーフティフードですべてのステップを実行してください。
<ol><li>正常な完全なα-MEM培地を慎重に捨て、フラスコの底部に取り付けられた細胞に触れないようにしてください。</li>
	<li>刺激媒体の10 mLをゆっくりと加え、完全にコンフルなコンフルエント細胞に任意の妨害を引き起こさないようにします。</li>
	<li>細胞を刺激培地で9日間培養し(3日毎に培地を変える)、5%CO2で37°Cで細胞シートを2十分に生成する。 注:細胞外マトリックスは、アスコルビン酸によって刺激された後、フラスコの底部から観察すると厚く、存在し、細胞シートが十分に生成されることを意味します。</li>
</ol>5. 3次元腱幹細胞構築物の調製
注:無菌バイオセーフティフードですべてのステップを実行してください。
<ol><li>インキュベーターからフラスコを取り出します。</li>
	<li>刺激媒体を完全に捨てます。</li>
	<li>フラスコを旋回してリン酸緩衝塩(PBS)で単層細胞シートを洗浄する。</li>
	<li>PBS を完全に破棄します。</li>
	<li>ピペットを使用して、フラスコの隅に0.25%トリプシンの1 mLを加えます。</li>
	<li>フラスコの角をタップして、単層セルシートの角がフラスコの底部から外れるまで、単層セルシートを取り付け解除します。</li>
	<li>すぐに完全なアルファ-MEM培地の9 mLを加えて、トリプシンを止めます。</li>
	<li>フラスコを旋回し、単層細胞シートを完全に剥がします。</li>
	<li>取り付け解除されたセルシートの合計をペトリ皿に媒体で注ぎます。</li>
	<li>滅菌用のツイーザーを使用してセルシートの片隅を拾い上げ、時計回りに15回回転させます。</li>
	<li>細胞シートの別の端をピックアップし、抗時計回りの方向に10回回転させて腱様インビトロコンストラクトをしっかりと生成します(図1A)。</li>
</ol>6. ユニークな設計されたバイオリアクターにおける単軸伸縮機械刺激複合体の組み立て
注:無菌バイオセーフティフードですべてのステップを実行してください。
<ol><li>接続器でフックを接続し、2つのフック間の所望の距離(2cm)に調整します。</li>
	<li>組み立てられたフックの3D TDSCコンストラクトを各フックに3回軽く巻きます(図1B)。</li>
	<li>両端のネジを締めて、細胞コンストラクトをバイオリアクターのチャンバーに固定します。 注:ねじやフックを含むチャンバー全体は無菌(134°Cで1.5時間オートクレーブ、紫外線(UV)は使用前に24時間露出します)。チャンバの金属ホルダーの場合、UVライトは使用前に48時間露出します。</li>
	<li>チャンバーを完全なアルファ-MEM培地で満たします。</li>
	<li>アクチュエータをケーブルで培養チャンバーに接続します。</li>
	<li>無菌はさみでフックコネクターをカットします。</li>
	<li>電源と対応するチャネルコントローラの電源を入れ、機械的刺激を開始します。</li>
	<li>蓋をチャンバーに置きます。</li>
	<li>インジケータライトを確認し、バイオリアクターが正常に機能できることを確認してください。</li>
	<li>インキュベーターにバイオリアクターを入れ、3D細胞構築物を機械的ストレッチに6日間(6%延伸、0.25Hz、8時間、続いて16時間休む)を施します。</li>
</ol>7. 機械的刺激体のインビトロ腱様組織の評価
<ol><li>ドライバーでねじを緩め、慎重にアセンブリを取り外します。</li>
	<li>腱状組織を4%パラホルムアルデヒドに入れて15分間固定します。</li>
	<li>固定腱様組織を生検フォームパッド付きの生検カセットに入れる。</li>
	<li>試料を脱水し、最終的にH&E組織染色によって評価するプロセス。</li>
	<li>定量PCR(qPCR)によるテノジェニックマーカーの発現を評価するために、プロトコル全体を繰り返し、腱様組織からRNAを抽出します。選択した遺伝子のプライマーを表1に示します。 注: ヒストロジープロトコルと qPCR プロトコルは標準であり、前の研究21に従います。</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

腱は、メカノイ感受性線維性結合組織である。以前の研究によると、過剰な機械的負荷は腱幹細胞の骨形成分化につながる可能性があり、一方、不十分な負荷は腱分化中にコラーゲン線維構造の乱れにつながる。
一般的な見解は、理想的なバイオリアクターの鍵は、生体内の細胞が受けるインビトロ細胞微小環境をシミュレートする能力であるということです。したがって、インビボ正常応力環境をインビトロで模倣することは、TDCの単一系統分化を腱細胞に刺激する鍵となる。本プロトコルでは、TDSC構成体の幅は2cmであり、フックの移動範囲は0.12cmであり、これは、歪みは0.12/2(%)であった。結論として、TDcは、本プロトコルにおいて6日間(6%、0.25Hz、8時間、続いて16時間の休息)のバイオリアクターにおいて機械的に刺激された。評価後、このプロトコルで使用される機械的負荷パラメータは、TDCが腱様組織を生成するように誘導することが証明されています。なお、バイオリアクターパラメータは、対応するストレッチングシステムの種類と特異的に一致すべきである。例えば、単層...

腱障害は、一般的なスポーツ傷害の一つです。それは主に痛みによって現れます, 局所腫れ, 患部の筋肉の緊張の低下, 機能不全.腱障害の発生率は高い。アキレス腱症の存在は、中長距離ランナー(最大29%)に最も一般的であり、膝蓋腱症の存在はバレーボール(45%)、バスケットボール(32%)、陸上競技(23%)、ハンドボール(15%)、サッカー(13%)1、2、3、4、5の選手でも高い。1,2,3,4,5しかし、腱の自己治癒能力が限られているため、効果的な治療が不足しているため、腱症は依然として患者の生活に負の66,77に影響を及ぼす。さらに、腱障害の病因は不明のままである。その病因について多くの調査が行われてきましたが、主に「炎症理論」、「変性理論」、「使い過ぎ理論」など8.現在、多くの研究者は、腱障害は、腱の経験99、1010の過度の機械的負荷によって引き起こされる微小傷害への自己修復の失敗によるものだと考えていた。
腱由来幹細胞(TDSC)は、腱細胞の原発前細胞として、腱障害11、12、13後の腱障害および機能および構造的回復の両方の発達において重要な11,役割を13果たす。機械的ストレス刺激は、骨細胞、骨芽細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞、間葉系幹細胞および他の力感受性細胞14、15、16、17、1814,15,16,17,18の増殖および分化を引き起こす可能性があると報告された。従って、TDcSCは、メカノイ感受性および多能性細胞の一つとして、機械的負荷19、20,20によって同様に分化するように刺激することができる。
しかし、異なる機械的負荷パラメータ(荷重強度、積載頻度、積載タイプおよびローディング期間)は、TDCが異なるセル21に分化するように誘導する可能性がある。したがって、効果的かつ有効な機械的負荷のレジームは、テノジェネシスにとって非常に重要です。さらに、TDCに機械的負荷を提供するために現在使用されている刺激システムとして、バイオリアクターの種類が異なります。バイオリアクターの各種類の原理は異なるので、異なるバイオリアクターに対応する機械的負荷パラメータも異なります。したがって、バイオリアクターの種類、対応する刺激媒体、および機械的負荷体制を含む、簡便で経済的で再現可能な刺激プロトコルが要求されている。
本稿では、TDSCを刺激して腱様組織に分化する三次元(3D)単軸ストレッチシステムに基づく方法について説明する。プロトコルには、マウスTDSCの単離、マウスTDSCの培養および拡大、細胞シート形成のための刺激培養培地の調製、刺激媒体中の培養による細胞シート形成、3D腱幹細胞構築物の調製、単軸伸張機械的刺激複合体の組立、および機械的刺激体型腱様組織の評価の7段階がある。全体の手順は、いくつかの既存の方法22、23,23よりもはるかに少ない3D細胞構造を得るために3週間未満かかります。本プロトコルは、TDSCを腱組織に分化するように誘導できることが証明されており、現在一般的に使用されている2次元(2D)延伸システム21よりも信頼性が高い。有効性は、ヒストロジーによって実証された。要するに、本プロトコルは、シンプルで経済的で、再現性があり、有効である。

<table><tbody><tr><td>アスコルビン酸</td><td>Sigma-aldrich</td><td>PHR1008-2G</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (FBS)</td><td>Gibco&sol; by Life Technologies</td><td>1908361</td><td></td></tr><tr><td>Histology processor</td><td>Leica</td><td>TP 1020</td><td></td></tr><tr><td>Minimal Essential Medium (Alpha-MEM)</td><td>Gibco&auml; by Life Technologies</td><td>2003802</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Tendon Derived Stem Cell</td><td></td><td></td><td>6〜8週齢のC57BL/6マウスのアキレス腱から単離。その後、I型コラゲナーゼ(3 mg / ml;MilliporeSigma, Burlington, MA, USA)を3時間放置し、70 mmセルのストレーナーを通過して単一細胞懸濁液を得ました。</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Sigma-aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>ストレプトマイシンとペニシリンの混合物</td><td>Gibco&auml; by Life Technologies</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Three-dimensional Uniaxial Mechanical Stimulation Bioreactor System</td><td>Centre of Orthopaedic Translational Research, University of Western Australia</td><td></td><td>リクエストに応じて、対応する著者から入手できます。または、私たちのデザインに従ってそれを作る* *Wang T、Lin Z、Day REなど。プログラム可能な機械的刺激は、バイオリアクターシステムにおける腱の恒常性に影響を与えます。バイオテクノルバイオエンジニアリング。2013;110(5):1495&ndash;1507。doi:10.1002/bit.24809</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco&auml; by Life Technologies</td><td>1858331</td><td></td></tr></tbody></table>

腱由来幹細胞の発熱分化を誘導する三次元単軸機械刺激バイオリアクターシステムの適用

Applying a Three-dimensional Uniaxial Mechanical Stimulation Bioreactor System to Induce Tenogenic Differentiation of Tendon-Derived Stem Cells

腱障害は、整形外科領域における炎症および変性に関連する一般的な慢性腱疾患である。高い罹患率、限られた自己修復能力、そして最も重要なことは、決定的な治療法がない、腱症は依然として患者の生活の質に悪影響を及ぼさない。腱由来幹細胞(TDSC)は、腱細胞の原発前細胞として、腱障害の発症と腱障害後の機能および構造的回復の両方において重要な役割を果たす。従って、インビトロでTDcSCの腱細胞への分化を模倣できる方法が有用であろう。ここで、本プロトコルは、TDSCを刺激して腱様組織に分化する三次元(3D)単軸ストレッチシステムに基づく方法を説明する。本プロトコルの7つの段階があります:マウスTDSCの単離、マウスTDSCの培養および拡大、細胞シート形成のための刺激培養培地の調製、刺激媒体中の培養による細胞シート形成、3D腱幹細胞構築物の調製、単軸伸張機械的刺激複合体の組立、および機械的刺激体型腱様組織の評価。有効性は、ヒストロジーによって実証された。全体の手順は3週間未満かかります。細胞外マトリックス沈着を促進するために、4.4mg/mLアスコルビン酸を刺激培養培地に使用した。線形モーターが付いている分離された部屋は正確な機械負荷を提供し、携帯用および容易に調節されるバイオリアクターのために適用される。本プロトコルにおける負荷レジームは、6%の株、0.25 Hz、8 h、続いて6日間16時間休息であった。このプロトコルは腱の細胞分化を模倣することができ、腱障害の病理学的プロセスの調査に有用である。さらに、腱様組織は、設計された自家移植片として腱損傷における腱治癒を促進するために使用される可能性がある。要約すると、現在のプロトコルはシンプルで経済的で、再現性があり、有効です。

機械的刺激の前に、TDSCは完全な媒体で100%合流まで成長し、組織化されていない超構造形態を示した(図2A)。機械的ローディングの6日間の単軸ストレッチの後、細胞外マトリックス(ECM)および細胞の配向が良好に配向された(図2B)。細胞は、機械的な負荷の後にECMによく入り込み、よく包まれました。細胞形態は伸長するように提示され、伸張しないものに比べて通常の腱細胞に類似していた(図2C)。ローディングを伴うセル構成体の細胞密度は、ローディングなしのものよりも高かった。QPCRの結果は、本方法が、Scleraxis、Mohawk、テノモジュリン、およびCOL1A1(図3)を含むテノジェニックマーカーの発現を、静的培養によって処理されたものと比較して増加することを示した。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_uploa...

三次元単軸的な機械的刺激バイオリアクターシステムは、腱由来幹細胞の形質特異的分化およびネオ腱形成のための理想的なバイオリアクターである。

Tendinopathy is a common chronic tendon disease relating to inflammation and degeneration in an orthopaedic area. With high morbidity, limited ...

異なる機械的負荷パラメータは、異なる細胞に分化された腱由来のSTEM細胞を誘導する可能性があります。腱由来のSTEM細胞の発熱性分化を誘導するために、この三次元単軸機械的刺激バイオリアクターシステムを適用する詳細なプロセスを紹介する。腱障害は、整形外科で一般的なスポーツ傷害の一つです。アキレス腱症の存在は、中長距離ランナーの場合は最大29%で最も一般的ですが、バレーボール、バスケットボール、陸上競技、ハンドボール、サッカーのアスリートでも膝蓋腱症の存在が高いです。しかし、腱の自己治癒能力が限られており、効果的な治療が欠如しているため、腱障害は依然として患者の生活の質に重大な悪影響を及ぼす。腱細胞の重要な前駆細胞としてTDCとして知られている腱由来のSTEM細胞は、腱障害の発症だけでなく、腱障害後の機能および構造修復において重要な役割を果たす。ただし、荷重応力、荷重頻度、荷重タイプ、ローディング期間など、機械的荷重パラメータとは異なり、TDSC が異なるセルに分化される可能性があります。したがって、効果的かつ有効な機械的負荷のレジームは腱の起源にとって非常に重要である。本プロトコルの7段階は、マウスTDSCの単離、マウスTDSCの培養および拡大、細胞シート形成のための刺激培養培地の調製、刺激媒体中での培養による細胞シート形成、3D腱幹細胞構築の調製、機械的刺激を伸ばす単軸細胞の組立、および機械的刺激体腱様組織の評価を含む。マウスの分離 TDC. 子宮頸部脱臼により生後6~8週齢のマウスで使用される。収穫膝蓋腱とアキレス腱。6ミリリットル1型コラゲターゼで3時間消化腱。細胞を収集し、7日間FBSの10%とストレプトマイシンとペニシリン混合物の1%を含む完全なアルファMEMでそれを培養します。フローサイトメトリーによる蛍光活性化細胞選別、CD44、CD90、およびSca-1を含む細胞表面マーカーの発現を使用してTDSCを識別する。CD34 と CD45 の表現が不足しています。通過し、細胞を凍結します。通路セルは、さらなるステップのために使用されます。マウスTDSCの培養と拡大。温めたマウス腱幹細胞を採取する。ゆっくりと完全なアルファMEMの余分な4〜5ミリリットルを追加します。ピペットで15ミリリットルの遠心分離管に混合物を移す。ピペットで合計8ミリリットルに培地でトップアップ。チューブを遠心分離機にバランスよく入れ、遠心分離細胞は347gで5分間行う。遠心分離機からチューブを取り出します。下部のペレットを確認します。フリーメディアをデカントします。1~2ミリリットルの完全培地で細胞を穏やかに再中断する。あまりにも多くの泡を作ることを避けてください。再懸濁した細胞をピペットでT75フラスコに移す。ピペットを使用してフラスコに完全なアルファMEM培地を加え、1平方センチメートルあたり13,000細胞の最終濃度で10ミリリットルの総体積に達します。フラスコをインキュベーターに入れ、5%の二酸化炭素で37度で培養します。3 日ごとにメディアを変更します。培地を100%合流まで培養するまで、顕微鏡下で細胞を観察し、監視します。細胞シート形成のための刺激培養培地の調製。15ミリリットルの無菌チューブに15ミリリットルの完全なアルファMEM培地を注ぎます。15ミリリットルの培地に6マイクロリットルのアスコルビン酸を加え、1ミリリットル当たり4.4マイクログラムの最終濃度にします。上下に反転してやさしく混ぜます。刺激媒体で培養することにより細胞シート形成する。非正規の完全なアルファMEM媒体を慎重に廃棄してください。フラスコの底部に付着した細胞に触れないようにしてください。10ミリリットルの刺激媒体をゆっくりと加えます。完全にコンフルな細胞に任意の妨害を引き起こすのを避けます.細胞を刺激培地で9日間培養し、3日ごとに培地を変えて、5%の二酸化炭素で37度の細胞シートを十分に生成した。3D腱幹細胞構築物の調製インキュベーターからフラスコを取り出します。刺激媒体を完全に廃棄する。フラスコを渦巻いて単層セルシートをPBSで洗浄する。PBS を完全に破棄します。ピペットを使用して、フラスコの隅に1ミリリットル、0.25%トリプシンを加えます。フラスコの角をタップして、単層セルシートの角がフラスコの底面から打ち出されるまで、単層セルシートを取り外します。すぐにトリプシン化の反応を停止するために9ミリリットル完全なアルファMEM培地を追加します。フラスコを旋回し、単層細胞シートを完全に剥がします。合計を注ぎ、セルシートをペトリ皿に媒体で取り付けます。滅菌用のツイーザーを使用してセルシートの片隅を拾い上げ、時計回りに15回回転させます。細胞シートの別の端を拾い、腱のようなインビトロ構造を定式化するために10回反時計回りの方向に回転させます。ユニークな設計されたバイオリアクターにおける単軸伸縮機械刺激複合体の組み立て。コネクタでフックを接続し、2つのフックの間に2センチメートル調整します。デモフックの3D TDSCコンストラクトを各フックで3回そっと巻きます。両端のネジを締めて、細胞コンストラクトをバイオリアクターのチャンバーに固定します。完全なアルファMEM媒体でチャンバーを満たします。ケーブルで、アクセラレータを培養チャンバーに接続します。無菌ピンセットでフックのコネクタをカットします。電源とチャネルコントローラの電源を入れ、機械的刺激を開始します。チャンバーに蓋をして、インジケータライトを追跡し、バイオリアクターが正常に機能できることを保証します。インキュベーターにバイオリアクターを入れ、3D細胞構築物を機械的ストレッチに供する。負荷体制は6%株、0.25ヘルツ周波数、8時間、その後6日間16時間の休息です。機械的刺激体のインビトロ腱様組織の評価スクリュードライバーでねじを緩め、慎重にアセンブリを取り外します。腱様組織を4%PFAに入れて15分間固定し、固定された腱様組織をペットからの生検を伴う生検カセットに入れます。サンプルを脱水処理する。そして最後に、HD組織学的立場で評価する。qPCRによるテノゲンマーカーの発現を評価するために、プロトコル全体を繰り返し、腱様組織からRNAを抽出する。機械的刺激の前に、TDSCは完全な媒体で100%合流まで成長し、組織化されていない外向きの構造形態を表示します。6日後、ストレッチ、機械的ローディング、余分な細胞マトリックス、および細胞の配置が十分に向き合いました。細胞は、機械的な負荷の後にECMによく入り込み、よく包まれました。細胞形態は、見つけるために提示され、ストレッチをしていない細胞と比較して正常な腱細胞に似ていた。ローディングを伴うセル構成体の細胞密度は、ローディングなしのものよりも高かった。qPCRの結果は、本件が、記載された培養物と比較して、スクラシス、モヒカン、テノモジュリン、および1型コラーゲンを含むテノジェニックマーカーの発現を増加させたことを示した。機械的刺激バイオリアクターシステムの観点から、線形モータで分離されたチャンバーが本プロトコルに使用された。それは正確な機械負荷を提供することができ、従来の2D細胞シートと二軸ストレッチの方法と比較してポータブルで簡単に調整することができるので、3D細胞構造は腱の実際の形状に似ています。そして、単軸ストレッチは腱細胞の強みの特性に似ています。これは、TDCの分化を刺激するために3D単軸伸伸システムを使用する理論的根拠を提供します。このように、2Dセルシートは最終的に3D細胞構造にルーティングされ、本プロトコルで単軸を受けた。私たちのバイオリアクターシステムによると、私たちの負荷体制は6%株、0.25ヘルツ周波数、8時間、その後6日間16時間の休息です。最後に、プロトコルの有効性は、形態学および形質マーカーの発現レベルによって実証された。全体の操作プロセスは簡単ですが、オペレータは常にTDSCの環境を殺菌保つために注意を払う必要があります。プロトコルには多くのアプリケーションがあります。TDSCを刺激して生体内での分化を模倣するプロセスは、腱障害の病理学的プロセスの調査に役立つ。また、このプロトコルは、TDcの腱様組織への指向的な分化のための再現可能な方法を提供する。そのため、潜在的な設計された腱培養に対して、簡単かつ効果的に使用できます。要約すると、3D単軸の機械的刺激バイオリアクターシステムを適用することは、簡便で経済的で、再現性があり、TDCのテノゲン分化を誘導する有効な方法である。私たちのプロトコルは、詳細に全体のプロセスを提供します。

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