Name: マウスにおける乾燥粉末製剤の気管内投与 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: 学ぶマウスにおける乾燥粉末製剤の気管内投与方法。非侵襲的な挿管技術を用いて、呼吸器疾患治療薬の前臨床評価を安全かつ正確に実施します。粉末の分散条件最適化と生体応答評価の手法を解説します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者らは、レイ・リー氏、HCリョン氏、ウォレス氏に対し、光源と粉末のインスフレーターを作る際の親切な支援に感謝したいと考えている。動物イメージングの支援のための教員コア施設。研究助成金協議会(17300319)によって支援されました。

本研究で行われた実験は、香港大学の生きた動物の教育研究用使用委員会(CULATR)によって承認されています。ルシファーゼメッセンジャーRNA(mRNA)の0.5%を含む噴霧凍結乾燥(SFD)によって調製された乾燥粉末製剤は、5%合成ペプチドPEG12KL4および94.5%のマンニトール(w/w)を肺16におけるmRNA発現を実証するために本研究で使用される。SFD粉末の質量中央値空気力学直径(MMAD)は2.4μmです。噴霧乾燥(SD)マンニトール粉末は、粉末分散液16に用いられる空気量の影響を調べるため使用される。SD粉末のMMADは1.5μmです。
1. 乾燥粉末インスフレーターの製造と乾燥粉末のローディング
<ol><li>(オプション)乾燥粉末(バイアル内)の静電荷と200 μLノンフィルター丸いゲルローディングピペットチップを中和します。メーカーの指示に従って、帯電防止銃または脱イオン機能を備えたバランスを使用してください。</li>
	<li>約4cm x 4cmのサイズの計量用紙を用意します。紙を斜めに半分に折り、折り返します。</li>
	<li>計量紙に1〜2mgの乾燥粉末を計量する。</li>
	<li>ゲルローディングピペットチップに、チップの広い開口部を通して粉末を充填します。粉末が先端の狭い端付近に緩い凝集体を形成するまで粉末を軽くたたきます(図1A)。粉末の分散を妨げる可能性があるため、粉末をしっかりと詰め込むのは避けてください。</li>
	<li>パウダーロードされたチップを3方向のストップコックを通して1 mLのシリンジに接続します(図1B)。シリンジのサイズは、粉末を分散させるために使用される空気の量に応じて変更することができます。取り付け時にチップとシリンジを垂直に持ち、粉がこぼれないようにします。投与がすぐに行われない場合は、パラフィルムを使用して先端の開口部を密封し、投与するまで適当な状態で一時的に保管する。</li>
</ol>2. 挿管装置の製造
<ol><li>光源(図2)<ol>
<li>発光ダイオード(LED)トーチと直径0.8~1mmのフレキシブル光ファイバを使用して、カスタムメイドの光源を用意します。</li>
		<li>LEDトーチのクリアレンズに、光ファイバが通り過ぎるのがやっとになるように、ハンドドリルまたはドリルビットで中央のオリフィスを作ります。</li>
		<li>オリフィスを通して光ファイバを挿入します。LEDトーチのスイッチを入れ、光ファイバのもう一方の端で最大の明るさを得るために、位置と挿入深度を調整します。</li>
		<li>透明エポキシ接着剤で光ファイバを位置に貼り付ける。</li>
	</ol>
</li>
	<li>導くカニューレ(図3)<ol>
<li>1 mLプラスチック製のパスツールピペット(図3A)を取り、両端にピペットを持ちなさい。</li>
		<li>アルコールランプ(またはブンゼンバーナーなどの実験室の他の熱源)を使用して、ピペットの真ん中を火炎の上に5〜10cmに置いて加熱する(図3B)。ピペットを回転させて、均一に加熱します。</li>
		<li>プラスチックが柔らかく変形可能になったら、ピペットを炎から離し、ピペットを軽く伸ばします。</li>
		<li>中央に伸ばしたピペットを、はさみでパートAとパートB(図3C-E)に切ります。細かいチップピペットとしてパーツAを使用し、ガイドカニューレとしてパートBを使用します。導くカニューレで挿管が成功する可能性を高めるために、パートBの終わりにベベル(動物を傷つけやすいリスクを高める可能性のある鋭すぎない)を作ります(図3F)。200 μLのゲルローディングピペットチップ(粉末ローディング用)を導くカニューレに挿入すると、カニューレを1~2mm突き出す必要があります。 注:挿管のための適切な次元(内径および外径)を有する導くカニューレ(パートB)は、17ゲージ針の中に収まる一方で、その中に21ゲージの針を収めることができます。適切な寸法を達成するためにピペットを伸ばすに複数の試みが必要な場合があります。</li>
		<li>(オプション):導くカニューレの広い端にある小さな開口部を切り取り、光ファイバを保持しやすくするために、より柔軟にします(図3F)。この開口部はまた液体エアロゾルの管理のためのマイクロスプレイヤーの付属品を可能にする。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 挿管
<ol><li>腹腔内注射によりケタミン(100mg/kg)およびキシラジン(10mg/kg)でマウス(BALB/c、7-9週)を麻酔します。</li>
	<li>プレキシガラス製のプラットフォームを準備し、クランプ付きスタンドに取り付けます(図4A)。麻酔マウスをプラットフォーム上(約60°の傾き)に置きます。プラットフォームの高さと傾斜角度は、スタンドのクランプの位置によって調整できます。</li>
	<li>ナイロンフロスに切歯を掛けてマウスを吊り下げます(図4B)。テープまたはゴムバンドでマウスの位置を固定します。</li>
	<li>誘導カニューレの開口部を持つファイバーレベルの先端を使用して挿管前に誘導カニューレに光ファイバを挿入します。LEDトーチをオンにして点灯します。</li>
	<li>マウスの舌を一対の鉗子で軽く突き出して気管を露出させる。</li>
	<li>もう一方の手を使用して、内部の光ファイバーと導くカニューレを保持します。口腔を通してそれらを挿入します。光ファイバからの照明により、気管の開口部を声帯間のオリフィスとして可視化することができます。</li>
	<li>ガイドカニューレのベベルを開口部の中線に向かって位置合わせします(図5A)。気管開口部でカニューレの最高級先端を狙って、光ファイバーで導くカニューレを気管にそっと挿管します。</li>
	<li>挿管時に、光ファイバを素早く取り外し、導くカニューレを気管の中に残します(図5B)。正常な呼吸を観察する必要があります。</li>
	<li>導くカニューレの開口部に細かい先端ピペット(パートA)を持ち、マウスの肺に空気の小さなパフ(約0.2 mL)を注入します。マウスの胸部にわずかなインフレが適切な挿管を示す。粉末投与前に細かいチップピペットを取り除きます。</li>
</ol>4. 粉末管理
<ol><li>ステップ 1.5 で説明したように、シリンジに接続されている粉末のチップを保持します。シリンジとチップの間の気流が切断されていることを確認します。</li>
	<li>0.6 mLの空気を引き出すために、シリンジプランジャーを後方に引っ張ります。 注:粉末を分散させるために使用される空気の量は、粉末の特性と粉末の積み込みの量に依存します。これは、結果のセクションで詳しく説明します。</li>
	<li>三方向ストップコックのバルブを回して、シリンジと粉末を積んだ先端の間の気流を接続します。</li>
	<li>粉末を装填したチップを、マウスの気管に既に入れられていた導きカニューレに挿入します(図5C)。導くカニューレを保持し、肺にエアロゾルとして粉末を分散させる1つの連続的なアクションで注射器プランジャーを強引に押します。 メモ:デバイスの前方運動は、動物が傷つくことを避けるために最小限に抑える必要があります。</li>
	<li>先端を取り出し、先端の中の粉が空になっているかどうかを確認します。ない場合は、ステップ 4.1 から 4.4 を繰り返します。 メモ:過度のタッピングのために粉末がしっかりと詰め込みすぎると、適切に分散していない可能性があります。</li>
	<li>投与が完了したら、導くカニューレを気管から取り出します。</li>
	<li>マウスは、気道の封鎖を避けるために、舌を半分突き出した後、縦方向に縦方向に配置して回復させます。</li>
</ol>

<ol><li>Newman, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+the+lungs%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Delivery%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to the lungs: challenges and opportunities.</a> Therapeutic Delivery. 8 (8), 647-661 (2017).</li>
<li>Setter, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+dry+powder+insulin+for+the+treatment+of+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Inhaled dry powder insulin for the treatment of diabetes mellitus.</a> Clinical Therapeutics. 29 (5), 795-813 (2007).</li>
<li>Muralidharan, P., Hayes, D., Mansour, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+inhalers+in+COPD%2C+lung+inflammation+and+pulmonary+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Dry powder inhalers in COPD, lung inflammation and pulmonary infections.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 12 (6), 947-962 (2015).</li>
<li>de Boer, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+inhalation%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Dry powder inhalation: past, present and future.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 14 (4), 499-512 (2017).</li>
<li>Das, S., Tucker, I., Stewart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+dry+powder+formulations+for+treating+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Inhaled dry powder formulations for treating tuberculosis.</a> Current Drug Delivery. 12 (1), 26-39 (2015).</li>
<li>Okamoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+chitosan-pDNA+complex+powder+prepared+by+supercritical+carbon+dioxide+process%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Stability of chitosan-pDNA complex powder prepared by supercritical carbon dioxide process.</a> International Journal of Pharmaceutics. 290 (1-2), 73-81 (2005).</li>
<li>He, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+inhaled+recombinant+human+insulin+dry+powders%3A+pharmacokinetics%2C+pharmacodynamics+and+14-day+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of inhaled recombinant human insulin dry powders: pharmacokinetics, pharmacodynamics and 14-day inhalation.</a> Journal of Pharmacy and Pharmacology. 71 (2), 176-184 (2019).</li>
<li>Durham, P. G., Young, E. F., Braunstein, M. S., Welch, J. T., Hickey, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dry+powder+combination+of+pyrazinoic+acid+and+its+n-propyl+ester+for+aerosol+administration+to+animals%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">A dry powder combination of pyrazinoic acid and its n-propyl ester for aerosol administration to animals.</a> International Journal of Pharmaceutics. 514 (2), 384-391 (2016).</li>
<li>Phillips, J. E., Zhang, X., Johnston, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+and+nebulized+aerosol+inhalation+of+pharmaceuticals+delivered+to+mice+using+a+nose-only+exposure+system%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+%28Journal+of+Visualized+Experiments%29%22%5BJournal%5D)">Dry powder and nebulized aerosol inhalation of pharmaceuticals delivered to mice using a nose-only exposure system.</a> JoVE (Journal of Visualized Experiments). (122), e55454(2017).</li>
<li>Nahar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro%2C+in+vivo+and+ex+vivo+models+for+studying+particle+deposition+and+drug+absorption+of+inhaled+pharmaceuticals%29%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">In vitro, in vivo and ex vivo models for studying particle deposition and drug absorption of inhaled pharmaceuticals).</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 49 (5), 805-818 (2013).</li>
<li>Price, D. N., Muttil, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+Therapeutics+to+the+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Delivery of Therapeutics to the Lung.</a> Methods in Molecular Biology. 1809, 415-429 (2018).</li>
<li>Chang, R. Y. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proof-of-Principle+Study+in+a+Murine+Lung+Infection+Model+of+Antipseudomonal+Activity+of+Phage+PEV20+in+a+Dry-Powder+Formulation%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Proof-of-Principle Study in a Murine Lung Infection Model of Antipseudomonal Activity of Phage PEV20 in a Dry-Powder Formulation.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 62 (2), (2018).</li>
<li>Ito, T., Okuda, T., Takayama, R., Okamoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+Evaluation+Method+for+Gene+Silencing+by+Serial+Pulmonary+Administration+of+siRNA+and+pDNA+Powders%3A+Naked+siRNA+Inhalation+Powder+Suppresses+Luciferase+Gene+Expression+in+the+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pharmaceutical+sciences%22%5BJournal%5D)">Establishment of an Evaluation Method for Gene Silencing by Serial Pulmonary Administration of siRNA and pDNA Powders: Naked siRNA Inhalation Powder Suppresses Luciferase Gene Expression in the Lung.</a> Journal of pharmaceutical sciences. 108 (8), 2661-2667 (2019).</li>
<li>Patil, J. S., Sarasija, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+drug+delivery+strategies%3A+A+concise%2C+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+India%22%5BJournal%5D)">Pulmonary drug delivery strategies: A concise, systematic review.</a> Lung India. 29 (1), 44-49 (2012).</li>
<li>Ihara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+Quantification+of+Gene+Silencing+by+Intratracheal+Administration+of+Dry+Powdered+Small-Interfering+RNA%2FChitosan+Complexes+in+the+Murine+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Histological Quantification of Gene Silencing by Intratracheal Administration of Dry Powdered Small-Interfering RNA/Chitosan Complexes in the Murine Lung.</a> Pharmaceutical Research. 32 (12), 3877-3885 (2015).</li>
<li>Qiu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+mRNA+pulmonary+delivery+by+dry+powder+formulation+of+PEGylated+synthetic+KL4+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Effective mRNA pulmonary delivery by dry powder formulation of PEGylated synthetic KL4 peptide.</a> Journal of Controlled Release. 314, 102-115 (2019).</li>
<li>Pfeifer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+powder+aerosols+of+polyethylenimine+%28PEI%29-based+gene+vectors+mediate+efficient+gene+delivery+to+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Dry powder aerosols of polyethylenimine (PEI)-based gene vectors mediate efficient gene delivery to the lung.</a> Journal of Controlled Release. 154 (1), 69-76 (2011).</li>
<li>Kim, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-loaded+highly+porous+large+PLGA+microparticles+as+a+sustained-+release+inhalation+system+for+the+treatment+of+metastatic+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-loaded highly porous large PLGA microparticles as a sustained- release inhalation system for the treatment of metastatic lung cancer.</a> Biomaterials. 33 (22), 5574-5583 (2012).</li>
<li>Tonnis, W. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+aerosol+generator+for+homogenous+distribution+of+powder+over+the+lungs+after+pulmonary+administration+to+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">A novel aerosol generator for homogenous distribution of powder over the lungs after pulmonary administration to small laboratory animals.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 88 (3), 1056-1063 (2014).</li>
<li>Hoppentocht, M., Hoste, C., Hagedoorn, P., Frijlink, H. W., de Boer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+the+DP-4M+PennCentury+insufflator%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of the DP-4M PennCentury insufflator.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 88 (1), 153-159 (2014).</li>
<li>Liao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+and+highly+dispersible+voriconazole+dry+powders+produced+by+spray+freeze+drying+for+pulmonary+delivery+with+efficient+lung+deposition%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Porous and highly dispersible voriconazole dry powders produced by spray freeze drying for pulmonary delivery with efficient lung deposition.</a> International Journal of Pharmaceutics. 560, 144-154 (2019).</li>
<li>Ito, T., Okuda, T., Takashima, Y., Okamoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naked+pDNA+Inhalation+Powder+Composed+of+Hyaluronic+Acid+Exhibits+High+Gene+Expression+in+the+Lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Naked pDNA Inhalation Powder Composed of Hyaluronic Acid Exhibits High Gene Expression in the Lungs.</a> Molecular Pharmaceutics. 16 (2), 489-497 (2019).</li>
<li>Chaurasiya, B., Zhou, M., Tu, J., Sun, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+validation+of+a+simple+device+for+insufflation+of+dry+powders+in+a+mice+model%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Design and validation of a simple device for insufflation of dry powders in a mice model.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 123, 495-501 (2018).</li>
</ol>

著者らは開示する利益相反を持っていません。

本論文では乾燥粉末の浸潤と気管内挿管用のカスタムメイドの装置を紹介する。粉末ローディングステップでは、乾燥粉末を200 μLのゲルローディングピペットチップに積み込みます。先端の狭い端で粉の緩いパッキングを可能にするために、先端を軽くタップすることが重要です。ただし、粉末が固く詰めすぎると、先端に詰まり、適切に分散することはできません。特に低密度で相対湿度の低い粉末に対して、粉末の負荷を容易にするために、粉末とピペットチップの静電荷を中和することをお勧めします。導くカニューレは、デバイスの重要なコンポーネントです。これは、マウスの気管に粉末をロードしたピペットチップの挿管を容易にするために使用されます。導くカニューレの直径は広すぎないようにしてください。そうしないと気管に挿入するのが難しくなり、マウスを傷つける可能性があります。導くカニューレの直径は、光ファイバーと粉末を積んだピペットチップに合うほどの幅にする必要があり、ピペット先端は約1〜2mmの導管を突き出す必要があります。
管切開を可視化する能力は挿管プロセスにおいて非常に重要であり、導くカニューレを正しく挿入することができ...

肺投与経路は、局所的および全身的な行動の両方の治療薬を提供する上で様々な利点を提供する。肺疾患の治療のために、高い局所薬物濃度は肺分娩によって達成され、それにより必要な用量を減少させ、全身的な副作用の発生率を低下させる。さらに、肺における比較的低い酵素活動は、早期薬物代謝を減少させることができる。肺はまた、大きく、よく浸透した表面積、極めて薄い上皮細胞層および肺毛細血管における高血中量による全身作用のための薬物吸収のために有効である1。
吸入乾燥粉末製剤は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、糖尿病および肺ワクチン接種2、3、4などの様々な疾患の予防および治療のために広く検討されている。固体状態の薬物は、一般的に液体の形態よりも安定しており、乾燥粉末吸入器はネブライザー5、6よりも携帯性と使いやすさである。吸入乾燥粉末製剤の開発において、安全性、薬物動態プロファイルおよび治療効果は、肺投与7に続く前臨床動物モデルにおいて評価される必要がある。乾燥粉末を積極的に吸い込むことができる人間とは異なり、乾燥粉末を小動物に肺分娩することは困難である。動物の肺に乾燥粉末を送達する効率的なプロトコルを確立する必要があります。
マウスは経済的で繁殖性が高いため、研究動物モデルとして広く使用されています。彼らはまた、扱いやすく、多くの疾患モデルが確立されています。マウスの肺に乾燥粉末を投与する2つの主要なアプローチがあります: 吸入と気管内投与.吸入のために、マウスは乾燥粉末がエアロゾル化され、動物がセデレーション8、9なしでエアロゾルで呼吸する全身または鼻のみのチャンバーに置かれる。高価な機器が必要であり、薬物送達効率が低い。全身室は技術的にはそれほど難しいかもしれませんが、鼻のみの暴露室は身体表面への薬物の暴露を最小限に抑えることができます。いずれにせよ、肺に送達される用量を正確に制御し、決定することは依然として困難である。乾燥粉末は主に、粘液性クリアランスが顕著である鼻咽頭領域に堆積する10.また、チャンバー内のマウスは、食糧および水供給11を制約し、奪われるため、投与プロセス中に大きなストレスを受けている。気管内投与の場合、一般的に気管内に直接物質を導入することをいう。これを達成するための2つの異なる技術があります:気管切開術と口内挿管。前者は、侵襲的で粉末投与にめったに使用されない気管の切開を行う外科的処置を必要とする。ここでは、2 番目のテクニックのみを説明します。吸入方法と比較して、気管内投与は、薬物損失を最小限に抑える12,13の高い送達効率のためにマウスでの肺送達のためにより一般的に使用される方法である。これは、マウスに数ミリグラム以内の粉末を正確に少量を提供する簡単で迅速な方法です。マウスはヒトに対して解剖学的および生理的に区別され、挿管過程では麻酔が必要であるが、気管内投与は上気道をバイパスし、肺吸収、生体利用能および治療効果14、15などの乾燥粉末製剤の生物学的活性を評価するより効果的な方法を提供する。
乾燥粉末を気管内に投与するには、マウスを挿管する必要があり、これは困難である可能性があります。本論文では、カスタムメイドのドライパウダーインスフレーターと挿管装置の製造について説明する。マウスの肺における乾燥粉末の挿管および浸潤の手順が実証されている。

<table><tbody><tr><td>BALB/cマウス</td><td></td><td></td><td>メス; 7-9週齢;体重 20-25 g</td></tr><tr><td>CleanCap ホタル ルシフェラーゼ mRNA</td><td>TriLink バイオテクノロジー</td><td>L-7602</td><td></td></tr><tr><td>乾燥粉末 吸気器</td><td>PennCentury</td><td>モデル DP-4M</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン 10%</td><td>Alfasan International B.V.</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>発光ダイオード (LED) トーチ</td><td>Unilite Internation</td><td>PS-K1</td><td></td></tr><tr><td>Mannitol (Pearlitol 160C)</td><td>Roquette</td><td>450001</td><td></td></tr><tr><td>ノンフィルターラウンドゲルローディングピペットチップ (200 & micro;L)</td><td>Labcon</td><td>1034-800-000</td><td></td></tr><tr><td>ナイロンフロ</td>ス <td>リーチ</td><td>30017050</td><td></td></tr><tr><td>針なし1ミリリットルシリンジ</td><td>テルモ</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>光ファイバー</td><td>データ</td><td>OMPF1000</td><td></td></tr><tr><td>PEG12KL4ペプチド</td><td>EZバイオラボ</td><td></td><td>(PEG12)-KLLLLLLLLLLLKLLLLLLL-NH2</td></tr><tr><td>プラスチックパスツール細チップピペット</td><td>アルファLabotatories</td><td>LW4061</td><td></td></tr><tr><td>三方活栓</td><td>ブラウン</td><td>D201</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン 2%</td><td>Alfasan International B.V.</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>Zerostat 3 帯電防止ガン</td><td>MILTY</td><td>5036694022153</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスにおける乾燥粉末製剤の気管内投与

Intratracheal Administration of Dry Powder Formulation in Mice

吸入可能な乾燥粉末製剤の開発では、前臨床動物モデルにおけるそれらの生物学的活性を評価することが不可欠である。本論文では、マウスにおける乾燥粉末製剤の非侵襲的な方法を紹介する。3方向のストップコックを介して1 mLシリンジに接続された200 μLのゲルローディングピペットチップから成る乾燥粉末ローディング装置が提示されます。少量の乾燥粉末(1〜2mg)をピペットチップに装填し、0.6mLの空気をシリンジに分散させます。ピペットチップは使い捨てで安価であるため、異なる乾燥粉末製剤を事前に異なるチップにロードすることができます。様々な製剤は、デバイスの洗浄および用量補充なしで同じ動物実験で評価することができ、それによって時間を節約し、残留粉末からの交差汚染のリスクを排除する。粉末分散の程度は、ピペットチップに残っている粉末の量によって検査することができる。カスタムメイドの光源と導くカニューレを使用したマウスの挿管のプロトコルが含まれています。適切な挿管は、マウスの深部肺領域への乾燥粉末製剤の気管内送達に影響を与える重要な要因の1つである。

乾燥粉末インスフレーターを使用して動物の肺に粉末エアロゾルを送達する場合、使用される空気の量は、安全性と粉末分散効率に影響を与えるため、非常に重要です。この方法を最適化するために、異なる量の空気(0.3mL、0.6mLおよび1.0mL)を用いて乾燥粉末(1mgの噴霧乾燥マンイトール)を分散させ、マウスの体重を投与後48時間監視した(図6)。0.3 mLおよび0.6 mLの空気の使用は、投与後48時間までのマウスの体重減少を引き起こさなかった。1 mLの空気で粉末を分散させることで、24時間以内の体重減少の5%以上が生じ、48時間後には完全には回収されなかった。このプロトコルでは、7〜9週齢のBALB/cマウスが使用された。動物の種、菌株および年齢、粉末特性(例えば、粒度分布、凝集度および密度)および投与される粉末の質量に応じて、効率的な粉末分散および動物耐性に使用される空気の量は、異なる動物モデルの研究者による最適化を必要とすることがある。
噴霧凍結乾燥(SFD)により調製した乾燥粉末製剤は、上述の方法を用いてマウスに送達...

吸入用の乾燥粉末製剤は、呼吸器疾患の治療に大きな可能性を秘めています。ヒト研究に入る前に、前臨床試験における乾燥粉末製剤の有効性を評価する必要がある。気管内経路を介したマウスにおける乾燥粉末の投与の簡便かつ非侵襲的な方法が提示される。

In the development of inhalable dry powder formulations, it is essential to evaluate their biological activities in preclinical animal models. This paper ...

乾燥粉末の気管内投与は、前臨床動物モデルにおける肺吸収、バイオアベイラビリティ、治療効果など、吸入粉末製剤の性能と生物学的活性を評価するために不可欠です。挿管プロセスは非侵襲的であり、粉末製剤をマウスに安全かつ正確に送達できます。カスタムメイドの乾燥粉末吸入器は、使い捨てで安価で、粉末製剤の散布に効率的です。この吸入器は、同じ実験で複数のマウスで異なる製剤を評価する際に使用でき、残留粉末による相互汚染のリスクはありません。挿管プロセスは、経験の浅い研究者にとっては困難です。カニューレの最も細い先端を気管の開口部に視覚化して狙いを定める能力は、ガイドカニューレを正しく挿入するために重要です。この手法には、不適切な挿入を最小限に抑えるための練習が必要です。ポスドクのキャロルと博士課程の学生レイチェルが、準備と挿管の手順を実演します。まず、乾燥粉末と200マイクロリットルのノンフィルターラウンドゲルローディングピペットチップの静電荷を、帯電防止ガンまたは脱イオン機能付き天びんを使用して中和します。約4 x 4センチメートルのサイズの計量用紙を準備します。紙を斜めに半分に折り、広げます。次に、それを使用して1〜2ミリグラムの乾燥粉末を量ります。ゲルローディングピペットチップの幅の広い開口部から粉末を充填し、チップの狭い端近くに緩い凝集が形成されるまで、軽くたたいて粉末を詰めます。粉体をきつく詰めすぎると、分散が妨げられる可能性があるため、避けてください。粉末を充填した先端を1ミリリットルのシリンジに、接続時に先端とシリンジを垂直に保持する三方活栓を介して接続し、粉末のこぼれを防ぎます。シリンジのサイズは、粉末を分散させるために使用される空気の量に応じて変更できます。投与がすぐに行わない場合は、パラフィルムを使用して先端の開口部を密閉し、投与まで適切な条件下で一時的に保管してください。7〜9週齢のBALB / cマウスにケタミンとキシラジンで麻酔をかけた後、スタンドに取り付けられたプレキシガラスプラットフォームに置きます。マウスの切歯をナイロン製のフロスに引っ掛けてマウスを吊り下げ、テープまたは輪ゴムでその位置を固定します。プラットフォームの高さと角度を調整します。光ファイバーをガイディングカニューレに挿入し、ファイバーの先端をカニューレの開口部と同じ高さにします。次に、LEDトーチをオンにして点灯させます。マウスの舌を一対の鉗子でそっと突き出して、気管を露出させます。もう一方の手でガイドカニューレを光ファイバーで保持し、口腔に挿入します。光ファイバーからの照明により、気管の開口部を声帯の間の開口部として視覚化できます。ガイドカニューレの斜角を開口部の正中線に合わせ、カニューレの最も細い先端を気管開口部に向けることにより、光ファイバーで気管にそっと挿管します。挿管後、

intratracheal-administration-of-dry-powder-formulation-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

気管内点滴は直接肺に溶質を提供します。この手順では、肺の遠位領域にinstillateの配信をターゲットとし、従って多くの場合、肺胞の勉強を目的とした研究に組み込まれています。我々は、マウスで気管内点滴を行うための詳細な生存のプロトコルを提供しています。...

マウス肺への溶質の直接気管点眼

このビデオでは、実験薬を左右の遠位肺に選択的に投与する気管支内アプローチについて説明しています。注目のプロトコルでは、ブレオマイシンをマウスに気管支内投与して、肺線維症のより良いモデルを取得します。...

気管支内送達:実験薬を選択的にマウスの肺に投与する技術

出典: Venuprasad、K.、 et al。気道炎症を研究するためのマウスモデルにおけるイン フルエンザ菌 の気管内投与。 J. Vis. 経験。...

マウスモデルにおける気管内細菌送達の実施

このビデオでは、薬物エアロゾルの生成と、エアロゾル発生器を備えた吸入ユニットを使用して、これらのエアロゾルをマウスにターゲットを絞って鼻のみに送達する方法を示します。マウスは鼻専用の拘束具に拘束され、吸入ユニットに接続され、マウスの鼻腔に直接薬物を送達します。その後、薬物は気管を通過して肺に入ります。...

薬物エアロゾルを生成してマウスの肺に直接送達する技術

試薬の挿管媒介気管内（IMIT）点滴は、呼吸器疾患を研究するための優れた、非侵襲的な方法だけでな​​く、肺に直接治療薬を浸透させるための方法である。これは前臨床試験のために適して迅速かつ高度に再現可能な方法である。...

挿管媒介気管内（IMIT）点眼：非侵襲的、肺特異的送達システム

この記事では、挿管を経由して、マウスの気管に直接ブレオマイシンを投与するための迅速かつ簡単な方法を提示します。この方法の主な利点は、習得が容易で、それは非常に再現可能であることであり、特殊な装置または長い回復時間を必要としません。...

マウスの気管の迅速な挿管のための改善された方法

本明細書に記載の吸入器は、生成する特徴付けのためのサンプル、及び均一げっ歯類の肺における薬物エアロゾルを堆積させることができます。これは、肺に沈着薬物用量の有効性および安全性の前臨床決意を可能にします。臨床吸入薬の開発を可能にする重要なデータ。...

乾燥粉末および医薬品の霧状エアロゾルを吸入すると、鼻のみの露光装置を用いてマウスに配信します

マウスにおける実験剤の気管内(IT)投与は、しばしば遠位肺への非対称的な送達をもたらす。 本報告では、生きているマウスの各肺を非手術的にカニューレする直接気管支内(IB)アプローチについて述べた。...

マウス肺内の選択的剤沈着を改善するための直接気管支内投与

ここでは、非侵襲的中咽頭気管内挿管 を介した 気管内リポ多糖(LPS)送達のプロトコルを提案します。この方法は、動物の外科的処置の外傷を最小限に抑え、LPSを気管、次に肺に正確に送達します。...

マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴

医薬品の乾燥粉末の開発には、信頼性の高い in vivo...

マウスへの乾燥粉末送達を目的としたディスポーザブルドセーター

ここでは、気管 を通じて 投与されたエアロゾル化されたブレオマイシンを用いてマウスの肺線維症をモデル化するプロトコルを紹介します。この最適化された方法は、手術的切開を行わずに均一で定量的かつ正確な投与を可能にし、ブレオマイシン誘発性線維症の再現性と信頼性を高めています。...

肺線維症の再現可能かつ低侵襲マウスモデルのための洗練されたエアロゾルを用いた気管内ブレオマイシン投与法

学ぶマウスにおける乾燥粉末製剤の気管内投与方法。非侵襲的な挿管技術を用いて、呼吸器疾患治療薬の前臨床評価を安全かつ正確に実施します。粉末の分散条件最適化と生体応答評価の手法を解説します。

マウスにおける乾燥粉末製剤の気管内投与

さらに動画を探す