血管形成術治療患者における局所循環単核前駆細胞を用いた切断の予測

血管形成術は重篤な四肢虚血の血流を改善しますが、一部の患者はまだ四肢切断に進行します。従来の危険因子や内因性血管の特徴に基づく予後と比較して、局所的なMPCの数は、内皮機能障害や四肢切断に関する臨床転帰をより予測することができます。局所的なMPCの数は、虚血性、心疾患、下肢虚血などの血管イベントの予後の有望な指標であり、リスク層別化や予防の実施に応用できる可能性があります。

手順を実演するのは、エドゥアルド・ベラ・ゴメス、アレハンドロ・ヘルナンデス・パトリシオ、カロライナ・アランダ・ロドリゲス、フアン・アリエル・グティエレス・ブエンディア、アツィン・スア・ルイス・ヘルナンデス、マリオ・アントニオ・テレス・ゴンザレス、ガブリエル・アレクサンドラ・ドミンゲス・ペレスです。実験代謝と組織再生の研究室の博士号も、Gabrielle Hernandez-De RubinとOscar Antonio Loman-Zunigaです。そして、これらは血管外科部門から来ています。

血管形成術の前後のFMDを決定するには、血管線形トランスデューサーを使用して患者の上腕動脈の直径を測定します。次に、前腕の測定部位の上にある血圧計のカフを装着し、収縮期血圧より50ミリメートルの水銀のカフを5分間膨らませてから収縮期血圧を収縮させます。収縮後60秒以内に、上腕動脈の直径を再度測定し、式を使用してFMDを推定します。

四肢虚血の臨床的重症度を評価するには、ラザフォード分類に従って、選択した鼠径部の血管に18ゲージの針を配置し、針の上にイントロデューサーを配置します。柔軟なガイドワイヤーをイントロデューサーに進め、ガイドを6つのフレンチイントロデューサーと交換します。透視ガイドを使用して、造影剤を注入し、動脈の軌跡と閉塞した血管部位を特定します。

2本の0.014フランス製ナビゲーションガイドワイヤーと2本の0.014フランス製サポートガイドワイヤーを船舶に導入し、ガイドワイヤーをブロックされた場所まで進めます。次に、5本のフレンチカテーテルを1本、次に3本のフレンチカテーテルを1本導入し、血管閉塞に最も近い部位から10ミリリットルの血液を採取します。サンプルを氷の上に置き、ガイドワイヤーを再度進めます。

ガイドワイヤーが所定の位置にあるときは、カテーテルの端にあるインフレータブルバルーンを含む血管形成術用バルーンカテーテルを導入し、血管形成術用バルーンカテーテルを病変部位まで進めます。血管壁にあるブロッキングプラークに対してバルーンを膨らませ、血流の回復を確認します。血管形成術を行ってから30分後、血管ブロックに最も近い部位までカテーテルを前進させ、10ミリリットルの血液を採取します。

次に、すべてのガイドワイヤーを取り外し、適切な術後ケアを提供します。血管形成術の 2 週間後、ラザフォード分類に従って、四肢虚血の臨床的重症度、安静時の痛みの解消、下部虚血、および機能的な足の温存を評価し、好ましくない結果のために大切断が必要な症例を特定します。収集から1時間以内に、収集した各血液サンプルの6ミリリットルを新しい15ミリリットルのチューブに移し、サンプルをPBSで1対1の比率で希釈します。

3つの試験管のそれぞれに2ミリリットルの密度勾配培地を追加し、希釈した血液の等量アリコートを3つ各チューブに追加して、4分の3を超えないようにします。密度勾配遠心分離法で血液細胞を分離し、ピペットを使用して得られた層の界面の細胞を採取します。各サンプルの細胞を1本の15ミリリットルチューブに引き込み、各サンプルを6回、1回の洗浄で2ミリリットルのPBSで洗浄します。

最後の洗浄後、ペレットを含むMPCをサンプルあたり1ミリリットルのPBSに再懸濁してカウントし、チューブあたり6個の細胞に10回1回加えて、サンプルあたり適切な数の5ミリリットルのフローサイトメトリーチューブに添加します。遠心分離により細胞をペレット化し、各細胞サンプルを目的の抗体カクテル100μLに再懸濁し、その後、細胞を摂氏4度で20分間インキュベートし、光から保護します。インキュベーションの終了時に、アイソタイプマッチドコントロール抗体を使用して、分析に適した前方散乱ゲートと側方散乱ゲートを設定し、CD45およびCD34陽性細胞を多数含むチューブを使用してNPCをゲートします。

ダブルポジティブ免疫表現型を選択するには、新しいプロットを作成し、KDR、CD133およびCD184陽性、CD34陽性、CD45陽性の細胞をゲート同定し、ゲートして主要なMPC亜集団を同定します。その後、MPC の数は、ベースラインの FMD 値、FMD の血管形成術後のデルタ、および下肢の大切断が必要な患者の割合と相関させることができます。この代表的な解析では、下肢血管形成術の30日後、CD45陽性、CD34陽性、KDR陽性のMPCのベースライン数はFMDと負の相関を示した。

一方、血管形成術後のCD45陽性、CD34陽性、CD133陽性、CD184陽性のMPCの変化は、FMDの改善と有意に相関していました。MPCのベースライン数の増加は、CD45陽性、CD34陽性、KDR陽性の亜集団、ならびにMPCの血管形成術後の減少と同様に、CD45陽性、CD34陽性、CD133陽性、CD184陽性細胞、四肢切断に進化した患者でも観察され、血管アプローチ中に、血管閉塞に最も近い部位から血液を採取するようにしてください。