Name: ヒト乳腺上皮細胞における発癌性転換のインビトロ評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-24T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: 学ぶヒト乳腺上皮細胞の発癌性転換評価法。細胞増殖率、非接着性増能、3D培養における細胞系譜分布を測定するインビトロ手法を解説。がん研究に応用可能。

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AG研究所は、スペイン原子力安全評議会によって資金提供されています。T.A.とA.G.は、 ジェネラリタット・デ・カタルーニャ (2017-SGR-503)が認めた研究グループのメンバーです。MTは、科学財団 アソシアシオン・エスパニョーラ・コントラ・エル・カンセル [AECC-INVES19022TERR]が資金を提供する契約を締結しています。G.F.契約は、セレックス財団からの助成金によって資金提供されています。

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著者らは開示するものは何もない。

本論文に記載された実験プロトコルは、インビトロ培養細胞の発癌性転換を評価するための有用なツールを提供する。各手法は変換プロセスの特定の側面を評価するため、単一の分析から結論を導き出す際には、特別な注意が必要です。成長曲線の構築は、他の目的のために細胞を培養する際に既に利用可能な情報を要求するアプローチです。これにより、この技術は他の細胞増殖アッセイに比べて安価で適用しやすくなります。しかし、有効な結果を得るには、細胞をサブ培養するたびに細胞を数え、播種する際には、特別な注意が必要です。増加した増殖速度は細胞の形質転換1を示すものであるが、抗生物質や抗真菌物質の添加/除去、培養条件の変動(例えば、温度、CO2)などの他の外因性要因も細胞分裂に影響を及ぼす可能性があるため、単独で使用すべきではない。また、薬物による細胞の導入や治療が、今後数日または数週間の増殖速度に影響を与え、長期的な増殖能力の歪んだ見方を与えることも重要です。この点に関しては、適切な制御を実行する必要があります。
基部膜マトリックスの3D培養は、全...

新生物の開発には、複数の連続したイベントが必要です。2011年、ハナハンとワインバーグは、形質転換細胞の成長、生存、普及を可能にする10の機能、いわゆる「がんの特徴」1を説明しました。ここで説明する方法論は、腫瘍細胞の特徴的な特徴のいくつかに焦点を当てることによって、インビトロ細胞変換を評価するための3つの異なるツールをまとめます。これらの技術は、細胞増殖速度、3Dで培養した場合の細胞の挙動、およびアンカレッジ独立性を有するコロニーを形成する能力を評価する。
細胞モデルは、インビトロで仮説をテストするために非常に重要です。癌2,3,4の研究のための細胞変換の実験モデルを生成するために、さまざまなアプローチが開発されている。乳癌は、世界中の女性の間で最も一般的な癌であり、女性5の間で癌死亡の約15%を担っているので、乳腺上皮細胞の適切な細胞モデルを提供することは、さらなる調査のために最も重要である。本稿では、2007年6月6日にInceらの研究チームが最初に説明した乳房一次上皮細胞(BFC)変換の実験モデルを用いて細胞変換を評価する3つの技術の可能性を説明した。この実験モデルは、非形質化されたBFCのゲノムに対する3つの標的遺伝子(SV40 Large Tおよび小さなt抗原をTtag、hTERT、HRASと呼ぶ)の順次変化に基づいています。 さらに、BFC誘導に使用される方法は、乳腺上皮細胞を発光または筋上皮マーカーで維持し、乳腺の生理学的形質の一部を保持する異種細胞培養をもたらす。
乳腺では、乳の生産を担う乳腺上皮細胞は内腔の近くに位置し、筋上皮細胞は発光細胞の周りに配置され、乳首にミルクを導く収縮運動の世話をします。これらの細胞系統間の適切な組織の喪失は、3D細胞培養における特徴的な系統マーカーの免疫蛍光検出後にインビトロで評価することができる腫瘍形変換8 の特徴である。腫瘍細胞のもう一つの主要な特徴は、他の細胞および細胞外マトリックス1に付着することなく増殖する能力である。健康な細胞が懸濁液で増殖することを余儀なくされると、 アノイキス \u2012のようなメカニズムは、細胞外マトリックスからの剥離に応答して誘発される細胞死の一種である\u2012が活性化される9。細胞死の回避は癌の特徴的な特徴の一つであり、したがって、形質転換細胞はア ノイキス を不活性化し、アンカーに依存しない方法で生き残ることができる。この容量は、軟寒天を用いたアンカレッジ非依存アッセイを用いてインビトロで評価することができる。さらに、腫瘍組織の固有の特徴は、その持続的な増殖シグナル伝達能力であり、懸濁アッセイだけでなく、単層接着培養物の増殖速度を監視することによって、時間に沿って細胞数の増加を測定することによって、インビトロ条件下で容易に監視することができる。
腫瘍発生の可能性をテストする最良のモデルは、マウスモデルにおける腫瘍細胞の接種およびその領域における腫瘍の発達の評価であるにもかかわらず、実験手順で使用される動物の数を可能な限り最小限に抑えることが重要である。従って、インビトロでの変換を評価するための適切な試験を有することが最優先事項である。ここでは、細胞変換モデルに作用するほとんどの研究室で容易に実施できる部分的かつ完全に形質転換された乳房上皮細胞の腫瘍発生性を評価するための一連のツールを提供する。

<table><tbody><tr><td>1 ml 血清学ピペット</td><td>ラボクリニック PLC91001</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml エッペンドルフ</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>3451</td><td>ダークエッペンドルフは、MTT 長期保存に適しています</td></tr><tr><td>10 &mu;l ピペットチップ フィルターなし</td><td>Biologix</td><td>20-0010</td><td></td></tr><tr><td>100 ml ガラス瓶</td><td></td><td></td><td>キャップ付き、オートクレーブ可能</td></tr><tr><td>1000 &mu;l ピペットチップ フィルター付き</td><td>Labclinics</td><td>LAB1000ULFNL</td><td></td></tr><tr><td>1000 &mu;l ピペットチップ フィルターなし</td><td>Biologix</td><td>20-1000</td><td></td></tr><tr><td>15 ml コニカルチューブ</td><td>VWR</td><td>525-0400</td><td></td></tr><tr><td>2 ml 血清ピペット</td><td>Labclinics</td><td>PLC91002</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu;l ピペットチップ フィルター付き</td><td>Labclinics</td><td>FTR200-96</td><td></td></tr><tr><td>5 ml 血清ピペット</td><td>Labclinics</td><td>PLC91005</td><td></td></tr><tr><td>50 ml コニカルチューブ</td><td>VWR</td><td>525-0304</td><td></td></tr><tr><td>アセトン</td><td>PanReac AppliChem</td><td>211007</td><td>免疫蛍光標識前の 3D 構造固定に使用</td></tr><tr><td>寒天</td><td>培地 Sigma-Aldrich</td><td>A1296</td><td>アンカレッジアッセイに使用</td></tr><tr><td>抗クローディン4抗体</td><td>アブカム</td><td>15104、 RRID:AB_301650</td><td>使用希釈率 1:100、宿主:ウサギ</td></tr><tr><td>抗サイトケラチン 14 [RCK107] 抗体</td><td>アブカム</td><td>9220、 RRID:AB_307087</td><td>使用希釈倍率 1:100、宿主:マウス</td></tr><tr><td>抗マウス シアニン Cy3 抗体</td><td>Jackson ImmunoResearch Inc.</td><td>115-165-146、RRID:AB_2338690</td><td>作業希釈率 1:500、宿主:ヤギ</td></tr><tr><td>抗ウサギ Alexa Fluor 488 抗体</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A-11034、RRID:AB_2576217</td><td>作業希釈率 1:500、宿主:ヤギ</td></tr><tr><td>オートクレーブ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BioVoxxel Toolbox</td><td></td><td>RRID:SCR_015825</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養 24 ウェル プレート</td><td>ラボクリニック</td><td>PLC30024</td><td>Matrigelの3D培養に使用されます。フラットボトム</td></tr><tr><td>細胞培養 6ウェルプレート</td><td>ラボクリニック</td><td>PLC30006</td><td>アンカレッジアッセイに使用</td></tr><tr><td>セルインキュベーター(37 & ordm;Cおよび5%CO2)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>細胞ストレーナー</td><td>フィッシャーブランド</td><td>11587522</td><td>メッシュサイズ:40 &mu;m</td></tr><tr><td>CellSenseソフトウェア</td><td>オリンパス</td><td></td> 画像<td>取得に使用</td></tr><tr><td>遠心分離</td><td></td><td></td><td></td></tr>機 <tr><td>コレラ菌由来の毒素</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8052</td><td>細胞培養培地の補充に使用</td></tr><tr><td>クラスII 生物学的安全キャビネット</td><td>ヘラセーフ</td><td>ヘレウス HS12</td><td></td></tr><tr><td>共焦点倒立顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>TCS SP5</td><td></td></tr><tr><td>カバーガラス</td><td>Witeg Labortechnik GmbH</td><td>4600122</td><td>22 X 22 mm、厚さ0.13 - 0.17 mm</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td></td><td>2-(4-アミジノフェニル)-1H -インドール-6-カルボキサミジン</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td>トリプシン作用を不活性化するために使用される</td></tr><tr><td>フィジーソフトウェア(ImageJ)</td><td>国立衛生研究所</td><td>RRID:SCR_002285</td><td>無料ダウンロード、ライセンス不要</td></tr><tr><td>ガラスパスツールピペット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>スライドガラス</td><td>フィッシャーブランド</td><td>11844782</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>バイオウエスト</td><td>S2000</td><td>3D構造の免疫蛍光に使用</td></tr><tr><td>耐熱手袋</td><td></td><td></td><td>オートクレーブ後の寒天操作に使用</td></tr><tr><td>ヒーターバス(37 &ordm;C)</td><td></td><td></td><td>細胞継代培養の前に溶液をテンパリングするために使用されます</td></tr><tr><td>ヒーターバス(42 & ordm;C)</td><td></td><td></td><td>寒天を保温するために使用</td></tr><tr><td>加熱プレート</td><td></td><td></td><td>マトリゲルの脱水に使用</td></tr><tr><td>湿潤チャンバー</td><td></td><td></td><td>免疫蛍光法中の抗体のインキュベーションに使用</td></tr><tr><td>マトリゲルマニピュレーションに使用</td><td>氷</td><td></td><td></td></tr> アイス<tr><td>ボックス</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>倒立光学顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>マトリゲルマトリックス</td><td>ベクトンディキンソン</td><td></td><td>354234-20&ordmでストア。Cを使用し、使用中は冷やしてください。基底膜マトリックス</td></tr>と呼ばれる <tr><td>メタノール</td><td>PanReac AppliChem</td><td>131091</td><td>免疫蛍光標識前の3D構造固定に使用</td></tr><tr><td>マイクロピペット</td><td></td><td></td><td>p1000、p200、p10</td></tr><tr><td>Microsoft Office Excel</td><td>Microsoft</td><td>RRID:SCR_016137</td><td>人口倍増の計算と成長率方程式の取得に使用されます</td></tr><tr><td>MilliQ水</td><td></td><td></td><td>超純水</td></tr><tr><td>マニキュア</td><td></td><td></td><td></td></tr>と呼ばれる <tr><td>Parafilm M</td><td>Bemis</td><td>PM-999</td> イン<td>キュベーション中に抗体溶液を覆うために使用されます インキュベーション</td></tr><tr><td>PBS pH 7.4 (カルシウムとマグネシウムなし)</td><td>Gibco</td><td>10010-056</td><td>滅菌済み。細胞継代培養に使用</td></tr><tr><td>PBS錠剤</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td>ミリQ水で希釈します。無菌性は必要ありません。免疫蛍光に使用</td></tr><tr><td>ピペットエイド</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Primaria T25フラスコ</td><td>コーニング</td><td>353808</td><td>BPEC培養に使用</td></tr><tr><td>セプター 自動セルカウンター</td><td>ミリポア</td><td>PHCC20060</td><td>あるいは、血球計算盤を使用してください</td></tr><tr>は<td>さみ</td><td></td><td></td><td>ピペットチップとパラフィルムの切断に使用</td></tr><tr><td>滅菌フィルター 0.22 &mu;m</td><td>ミリポア</td><td>SLGP033RS</td><td>MTT 溶液をろ過するために使用されます</td></tr><tr><td>チアゾリル ブルー 臭化テトラゾリウム (MTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2128</td><td>-20 &ordm で保管します。C</td></tr><tr><td>トリトン X-100</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>T8787</td><td>3D構造の免疫蛍光に使用</td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA 10X</td><td>バイオウエスト</td><td>X0930</td><td>PBSで希釈して3倍溶液を得る</td></tr><tr><td>ベクタシールド 退色防止 マウント メディウム</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>WIT-P-NC 培養培地</td><td>ステムジェント</td><td>00-0051</td><td>一次BPEC培養に使用</td></tr><tr><td>WIT-T培地</td><td>Stemgent</td><td>00-0047</td><td>形質転換BPEC培養に使用</td></tr></tbody></table>

ヒト乳腺上皮細胞における発癌性転換のインビトロ評価

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

腫瘍形成は、細胞が敵対的な条件下で増殖、生存、および普及を可能にする能力を獲得する多段階のプロセスである。異なるテストは、癌細胞のこれらの特徴を同定し、定量化しようとします。しかし、彼らはしばしば細胞の変換の単一の側面に焦点を当て、実際には、それらの適切な特性評価のために複数のテストが必要です。本研究の目的は、広い視野から細胞の形質転換を評価するための一連のツールを研究者に提供し、それによって健全な結論を導き出すことを可能にすることです。
持続的な増殖シグナル伝達活性化は、腫瘍組織の主要な特徴であり、時間の経過とともに達成される倍増する集団数を計算することによって、インビトロ条件下で容易に監視することができる。また、3D培養における細胞の増殖は、生体内で起こることに似た周囲の細胞との相互作用を可能にする。これにより、細胞凝集の評価と、特徴的な細胞マーカーの免疫蛍光標識と共に、腫瘍変態の別の関連する特徴、すなわち適切な組織の喪失に関する情報を得ることが可能になる。形質転換細胞のもう一つの顕著な特徴は、他の細胞および細胞外マトリックスに付着することなく増殖する能力であり、これは、アンカレッジアッセイで評価することができる。
細胞増殖率を評価する詳細な実験手順、3D培養における細胞系分担マーカーの免疫蛍光標識を行う、および軟寒天におけるアンカレッジ非依存性細胞増殖を試験する実験手順が提供される。これらの方法論は乳癌の関連性のために乳癌原発性上皮細胞(BPEC)のために最適化される;ただし、いくつかの調整後に、プロシージャを他のセルの種類に適用できます。

BFCに3つの遺伝子要素を導入した細胞変換の実験モデルが、発癌性変換6、7の代表的な結果を生成するために選択された(図3)。非形質化されたBFC(N)は、Inceと同僚6によって記載されているように疾患のない乳房組織に由来し、ここで示すプロトコルに従って培養した。STASIS(ストレスまたは異常シグナル伝達誘発老化、細胞培養開始後約4週間後に克服されるインビトロの乳腺上皮細胞で一般的に観察される現象)を克服した後、細胞はレンチウイルス粒子pRRL-CMV-Ttag-IRES-eGFPおよびpRRL-CMV-TTAG-IRES-eGFPとpRRL-CMV-TERT-IREF-F-Cell-Cell-を連続してトランスフォームされたD).ウイルス性Ttagの発現はp53およびレチノ芽腫機能を阻害し、...

このプロトコルは、ヒト乳腺細胞の形質転換を評価するための実験的なインビトロツールを提供する。細胞増殖率、アンカレッジ非依存性増殖能、基基膜マトリックスを用いた3D培養における細胞系統の分布をフォローアップするための詳細なステップについて説明する。

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

この方法論では、さまざまな指標の統合を使用して、細胞モデルの形質転換の程度を評価します。この手法は、研究者に、in vitroでの細胞形質転換を評価するための、時間がかかるが使いやすい一連のツールを提供します。これにより、この分析法はほとんどの研究室で使用することができます。この手順を実演するのは、私の研究室のポスドク研究員であるテレサ・アングラダと顕微鏡専門家のジョアン・レプルスです。乳房初代上皮細胞培養が90%のコンフルエントに達したら、培養フラスコから上清を2ミリリットルのウシ胎児血清を含む15ミリリットルのチューブに移し、細胞をPBSで洗浄します。細胞を1ミリリットルのトリプシンで摂氏37度で5分間処理します。細胞が分離したら、予約した培地でトリプシンを不活性化し、遠心分離により細胞を回収します。チューブをフリックしてペレットを再懸濁し、カウントのために1〜2ミリリットルの新鮮な培地を追加します。細胞濃度を決定した後、新しいチューブに300, 000個の細胞を追加し、追加の新鮮な培地で最終容量を5ミリリットルにします。新しいT25フラスコに細胞を播種し、細胞を細胞培養インキュベーターに戻します。次に、数式を使用して、累積人口倍増の数を計算します。細胞の増殖速度を評価するには、特定の時間間隔における集団倍増の累積数をプロットします。傾きが大きくなると、細胞増殖速度が増加することを示します。3D細胞培養をセットアップするには、冷間滅菌PBSで1.9平方センチメートルの表面積でウェルをすすぎ、各ウェルの底を100マイクロリットルの基底膜マトリックスでコーティングします。次に、プレートを細胞培養インキュベーターに約20分間置き、マトリックスを固化させます。その間に、今示したように乳腺細胞を採取し、細胞を中濃度のミリリットルあたり400, 000細胞に希釈します。細胞を、8%基底膜マトリックスを添加した新鮮な培地と1対1の比率で混合し、固化したマトリックスの各ウェルに500マイクロリットルの細胞を追加します。細胞を摂氏37度で数分間インキュベートし、次に4%基底膜マトリックスを添加した500マイクロリットルの培地を各ウェルに加えます。細胞を細胞培養インキュベーターに14日間置きます。播種された細胞はグループ化され、アシニ様構造を形成する増殖します。3D培養乳腺細胞の免疫蛍光タンパク質検出には、カットオフP200ピペットチップを使用して各ウェルから基底膜マトリックスを取り出し、各ウェルから約50マイクロリットルの分離マトリックスを個々のスライドガラスに塗ります。サンプルが完全に乾いたら、細胞を1対1のメタノール-アセトン溶液で摂氏マイナス20度で30分間固定します。固定後、ブロッキング溶液でサンプルを室温で2時間ブロックします。インキュベーションの最後に、目的の一次抗体ワーキングソリューション30 μLを追加し、スライドを実験室用ラッピングフィルムで覆い、湿度の高いチャンバー内で摂氏4度で一晩インキュベーションします。翌朝、スライドをPBSで3回、1回の洗浄につき1時間洗浄し、先ほど示したように適切な二次抗体溶液でサンプルを標識します。インキュベーションの終了時には、サンプルをPBSで2回、1回の洗浄につき2時間洗浄した後、退色防止封入剤で希釈したDAPIで対比染色し、各スライドをカバースリップで覆います。次に、共焦点顕微鏡で各房房の蛍光シグナル分布を分析します。アンカレッジに依存しないアッセイを行うには、まず、6ウェルプレートの適切な数のウェルの底を1.5ミリリットルの0.6%寒天培地溶液で覆い、寒天を室温で固化させます。次に、実証されているように1ミリリットルあたり10〜4個の細胞溶液を5回調製し、40ミクロンのストレーナーを介して細胞を滅菌50ミリリットルチューブにろ過します。チューブを45度の角度で保持し、チューブの壁に0.6%寒天培地溶液を等量加えます。そして、十分に混合した後、寒天懸濁液中の細胞の1ミリリットルを、事前に調製した6ウェルプレートの各ウェルに層状にします。倒立顕微鏡を使用して、細胞が寒天全体に均一に分散していることを確認します。寒天が完全に固まったら、寒天を乱さずに各ウェルに1ミリリットルのリフレッシュ培地を慎重に加え、細胞を3週間インキュベートし、週に2回培地を交換します。コロニー形成期間の終わりに、培地をウェルあたり1ミリグラムMTTの1ミリリットルと交換し、細胞培養インキュベーターで24時間インキュベートします。翌日、各ウェルからMTTを取り外し、倒立顕微鏡で各ウェルの画像を取得します。すべての画像を取得したら、ImageJで画像を開き、image、adjust、threshold、applyをクリックして、元の画像のしきい値処理によるバイナリマスクを取得します。明確に区切られたコロニーが得られたら、プラグインとbiovoxxelを選択して拡張粒子アナライザーを起動し、MTT陽性コロニーを特定します。特定の時間間隔で、部分的および完全に形質転換された細胞は、形質転換されていない細胞と比較して、より多くの集団倍増を達成し、形質転換プロセスとともに細胞分裂速度が増加することを示しています。2週間の3D細胞培養期間にわたって、細胞は凝集して増殖し、腺房サイズが増加します。各房房の適切な分極は、共焦点顕微鏡による三次元シグナル位置と組み合わせたタンパク質免疫蛍光検出を使用して正確に評価できます。形質転換されていない乳房細胞によって形成されたすべての腺房は適切に組織化されていますが、部分的および完全に形質転換された細胞によって形成された腺房では分極の喪失が観察されます。3週間の包埋寒天培養後、足場に依存しない増殖能を持つ細胞は、複数の細胞からなるコロニーを生じます。代謝活性のある細胞のみがテトラゾリウムMTT環を切断することができ、24時間後には紫色のMTTホルマザン結晶が得られます。自動画像解析によるコロニー径の測定により、増殖率の低いコロニーや個々の細胞をフィルタリングすることができます。形質転換されていない細胞によって形成されるコロニーの数は、部分的および完全に形質転換された細胞からのコロニーと比較して無視できる程度です。コロニーサイズは、形質転換の程度が異なる細胞を区別するためにも使用できます。これらのアッセイは、in vitroで陽性と判定された細胞株のみをマウスに接種する必要があるため、接種前に細胞株をスクリーニングするために使用できます。

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Cancer Research

がん研究

このレポートでは、我々はマウス乳腺から分離し、培養ドナー細胞にシステムのデモンストレーションを、と同所間質分析するためにレシピエントマウスにこれらの細胞を移植：乳腺腫瘍の開発中に上皮との相互作用を。...

C57BL/6Jマウスにおける間質細胞と癌細胞の乳腺移植

ヒト乳腺外科廃棄材料を処理する方法が記載されている。オルガノイドの形で処理された組織は、無期限に凍結したり、長期的な成長のための文化に入れ保存することができます。この方法は、実験的な正常なヒト上皮細胞生物学の検査、および外因性の摂動の効果を可能にします。...

細胞培養のための人間の削減乳房形成や乳房切除組織の処理

タイムラプスイメージングは​​、特定の行動のパラメータと異なる遺伝的病変の間に相関があるかどうかを判断するために乳癌リスクの遺伝子改変モデルマウス由来の初代前腫瘍性乳腺上皮細胞の挙動を評価するために使用される。...

乳がんの遺伝子改変マウスモデル由来の初代前癌乳腺上皮細胞のタイムラプスイメージング

フォーカス形成アッセイは、候補癌遺伝子の形質転換能を評価するための簡単​​な方法を提供する。...

フォーカス形成：細胞ベースのアッセイ遺伝子の発癌性を決定するために、

無傷の組織オルガノイドを用いた初代培養細胞は、多細胞のin vivoでの微小環境を模倣するモデル系を提供する。我々は、酵素的組織破壊することなく、形態分化混合細胞培養系統や展示を永続無血清原発性乳房上皮組織培養モデルを開発した。乳オルガノイド&gt;は6ヶ月間生存したまま。...

マンモスフィアの自然発生の事前侵襲乳房病変の非酵素的、無血清組織培養

フローティングマンモスフィアアッセイは、マウスに移植すると懸濁状態で生存し、腫瘍形成が促進される幹様乳がん細胞のサブセットを調査することができます。 このプロトコルは、in vivo腫瘍形成の代理である球形成能力の便利なin...

ヒト乳癌組織および細胞株からマンモスフェア形成アッセイ

このプロトコルは、非接着性/間葉性乳房上皮細胞からの細胞外小胞（EVs）/エキソソームの精製、定量化および特徴づけ方法、ならびにこれらを用いて乳腺上皮細胞に乳腺形成能を転移させる方法を記載する。幹様乳腺上皮細胞に由来するEV /エキソソームは、この細胞特性をEV /エキソソームを摂取する細胞に移入することができる。...

細胞外小胞/エキソソームを介した乳腺上皮細胞と乳房管腔細胞との間の乳腺形成能の伝達

インビトロ細胞侵入アッセイは、タンパク質マトリックスを含む細胞培養インサートを用いて細胞侵入および移動の細胞電位を定量化することにより、癌転移の可能性を測定するために使用される。細胞は、タンパク質マトリックスと多孔質膜を通って、化学集化剤に向かって移動し、光顕微鏡で定量化することに挑戦される。...

腫瘍性細胞行動の尺度としてのインビトロ侵血アッセイにおけるマウス乳腺腫瘍細胞の使用

患者由来異種移植片(PDX)モデルおよび移植可能な遺伝子組み換えマウスモデルは、ヒト疾患を忠実に再現し、基礎的および翻訳的な乳癌研究のための好ましいモデルである。ここで、乳房腫瘍断片を乳腺脂肪パッドに整形移植して腫瘍生物学を研究し、薬物反応を評価する方法について説明する。...

乳癌の前臨床モデルとしての乳房腫瘍の移植性

本プロトコルは、乳頭 を介した...

インビボ 乳腺内注射によるマウス乳腺上皮細胞への遺伝子導入

本研究は、少量の乳腺組織から初代ヒト乳腺上皮細胞(HMEC)を効率的に分離し、増殖するための、より簡単で時間を節約し、経済的なプロトコルを報告しています。このプロトコールは、実験室および臨床アプリケーションの両方で一次HMECを迅速に製造するのに適しています。...

初代ヒト乳腺上皮細胞の単離と培養

学ぶヒト乳腺上皮細胞の発癌性転換評価法。細胞増殖率、非接着性増能、3D培養における細胞系譜分布を測定するインビトロ手法を解説。がん研究に応用可能。

ヒト乳腺上皮細胞における発癌性転換のインビトロ評価

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