Name: マウスモデルにおける心筋梗塞後のMSC負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: 学ぶマウスモデルにおける心筋梗塞後のMSC負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植法。ゼラチンヒドロゲルを用いて移植細胞の保持と生存率を向上させ、心臓組織修復と再生医療の新たな治療戦略を開拓する革新的アプローチです。

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本研究は、文部省が出資する韓国国立研究財団(NRF)を通じて基礎科学研究プログラム(NRF-2018R1D1A1A0202049346)の支援を受けています。

すべての動物研究手順は、実験動物福祉法、実験動物のケアと使用のためのガイド、および韓国カトリック大学医学部の施設動物ケアおよび使用委員会(IACUC)が提供するげっ歯類実験のガイドラインと方針に従って提供されました。
1. MSCおよび注射ゼラチンハイドロゲルの調製
<ol><li>37°Cと5%CO2で100mm培養皿で培養MSC.CSの成長が80%の合流に達したら、DPBSで皿を2回洗い、37°Cでトリプシン置換の1 mLを3分間加えます。 注:MSCは、従来の手順16に従ってマウス骨髄から単離され、10%のウシ胎児血清(FBS)および1%抗生物質抗ミコティック溶液を含むダルベッコの修飾ワシ培地(DMEM)で培養され、この研究のために7\u20129の通過間に使用された。</li>
	<li>培地と遠心分離機を500xgで9mL3分間加えます。次に、得られた上清を捨て、細胞をPBSの1mLで再懸濁し、細胞懸濁液を氷上に維持する。</li>
	<li>10 μLのトリパンブルーで10 μLの細胞懸濁液を希釈し、自動化されたセルカウンターを使用して細胞濃度を得る。</li>
	<li>1 x 107 細胞/mLの密度で1mLチューブに再中断し、MCを移します。</li>
	<li>PBSでGHコンジュゲート溶液の6.25重量%を調製し、2バイアルに分離します。次に、GH溶液をHRP(GH溶液A)の6μg/mLまたはH2O2(GH溶液B)の0.07重量%と混合します。 注:ゼラチン-ヒドロキシフェニルプロピオン酸(GH)のコンジュゲートを公開されたプロトコル12、15に従って準備します。<ol>
<li>HRP(GH溶液A)とGH共役溶液に対するGHコンジュゲート溶液の9:1体積比をH2O2(GH溶液B)にそれぞれ保持する。</li>
	</ol>
</li>
	<li>GH溶液AとMSCを混合する前に、細胞懸濁液を1,000xgで短時間遠心分離し、得られた上清を慎重に吸引する。続いて、MCsを含むペレットをGH溶液Aと混合する。</li>
</ol>2. SIU MSCローディングと3次元インビトロ培養
<ol><li>GH溶液A(MSCを含む)とGH溶液Bを二重シリンジの両側にロードする。5 x 106 細胞/mLの最終的な密度のMSCとの結合されたGHの解決の300 μLを8ウェルの部屋のスライドに置く。</li>
	<li>酵素架橋によるシトゥーヒドロゲル形成とその後のMSCカプセル化の後、10%FBSおよび1%抗生物質抗ミコティック溶液を含むDMEMの700 μLを加える。</li>
	<li>スライドを37°Cおよび5%CO2でインキュベートし、2\u20123日ごとに培地を交換します。</li>
</ol>3. GHヒドロゲル内のインビトロ増殖とMSCの生存の確認
<ol><li>GHヒドロゲル内の3D培養MCの生存率を決定するには、所定のインキュベーション時間後に生きた/死細胞染色アッセイを使用してください。</li>
	<li>3、5、7または14日間のGHヒドロゲル中のカプセル化されたMSCのインキュベーションに続き、培地を吸引し、PBSで2回洗浄した。</li>
	<li>カルセインAM 5 μL、エチジウムホモジマー-1(EthD-1)を10 mLのDPBSで含む染色液を調製します。</li>
	<li>200 μLの染色液をウェルに加え、室温で暗闇の中で30分間インキュベートします。</li>
	<li>染色液を吸引し、PBSで2回洗浄します。</li>
	<li>慎重にスライドからチャンバーを分離し、GHヒドロゲルの上に完全なカバースリップを置きます。コンフォーカル顕微鏡を使用して、カプセル化されたMSCの増殖および形態学的変化の程度を可視化する。 注:蛍光画像は200倍倍の下で取得され、カルセインの場合は470/540 nm、EthD-1では516/607nmの励起/発光波長で画像化されました。</li>
</ol>4. マウスの心筋梗塞の誘導
<ol><li>7週齢の雄C57BL/6マウス(20\u201222 g)を、ゾレチル(30mg/kg)とロンプン(10mg/kg)の混合物を生理膜内注射して生理学します。</li>
	<li>手術前に、脱毛クリームを使用してマウスの胸部を脱毛し、ヨウ素で皮膚を殺菌します。</li>
	<li>手術台の上にマウスを置き、カテーテルを気管に挿入して、機械的換気を介して補足的な酸素を提供します。</li>
	<li>手術用ハサミを使って皮膚をそっと切り抜け、肋間筋をマイクロハサミで貫通する。5-0シルク縫合糸を使用して2番目と3番目の左肋骨を分離し、開いた胸腔を維持します。</li>
	<li>8-0の針ホルダーを使用して、左前前下降(LAD)冠状動脈を慎重にリゲートするポリプロピレン縫合糸を電気焼き液を用いて縫合糸を切断する。</li>
	<li>左心室前壁の色の変化を観察します。</li>
</ol>5. MSC負荷GHヒドロゲルの心筋内移植
<ol><li>LADライゲーションにより心筋梗塞を誘発した後、26G針を装着したデュアルシリンジを用いて、梗塞境界領域(合計:2 x 105 MSC/20 μL)の2つの異なる点に10μLのMSC負荷GH溶液を注入します。<ol>
<li>ステップ1で説明したのと同じ手順に従って、MSC-LOADING GH溶液を二重シリンジに準備し、移します。 注:梗塞領域内のMSC負荷GHヒドロゲルの生着を評価するために、MSCおよびGHコンジュゲートは、それぞれPHK26およびフルオレセインイソチオシアネート(FITC)で事前に標識しました。</li>
	</ol>
</li>
	<li>開いた胸腔を復元し、5-0縫合を使用して筋肉と皮膚を閉じます。 注意:胸を閉める前に、カテーテルの注射器を使用して空気を取り除きます。</li>
	<li>気管チューブを取り外し、回復中に赤外線ランプの下のケージにマウスを置きます。</li>
	<li>術後鎮痛の場合、皮下ケトプロフェン注射剤(1日5mg/kg)を最低72時間投与する。すべてのマウスは、外科的処置と適切な疼痛治療の後に適切な回復を確実にするために適切な時間を注意深く監視する必要があります。</li>
</ol>6. 心エコー検査
<ol><li>移植後4週間、最初に5%のイオブルランでマウスを麻酔し、イオブルラン濃度を1%に調整する。</li>
	<li>脱毛クリームを使用して胸を脱退し、加熱パッドの上にマウスを置きます。胸部に超音波トランスデューサーゲルを適用します。</li>
	<li>2次元の準船骨短軸ビューを取得し、乳頭筋のレベルでMモードトレースを記録します。 注: 左寄尾線に線形配列トランスデューサ(7\u201215 MHz)を配置し、解剖構造を表示します。</li>
	<li>LVAW、LVID、LVPWの対応するラインを測定して、心臓壁の厚さ、チャンバー寸法、および分数短縮を得ます。 注:同じ解剖学的位置で適切な評価を確実にするために、乳頭筋のレベルで、排出分率(EF)、分数短縮(FS)、および末収縮期容積(ESV)を含む心機能を比較してください。</li>
</ol>7. 組織学的評価
<ol><li>MSC負荷GHヒドロゲルを梗塞した心臓に移植した後の所定の時間に、マウスをCO2チャンバーに安楽死させ、組織学的分析用の心臓を集める。</li>
	<li>ヘマトキシリンとエオシン(H&E)とマッソンのトリクローム(MT)染色の場合、解剖した心臓組織を4%パラホルムアルデヒド(PFA)に固定し、パラフィンに埋め込みます。次に、パラフィン埋め込み心臓ブロックをミクロトームを用いて4μmシリアルセクションに切断し、標準プロトコル17に従ってMT染色でセクションを染色する。</li>
	<li>20倍の倍率でスライドスキャナ上の画像を取得し、治療群の梗塞サイズを計算します。 梗塞サイズ(%)=全梗塞周周/総LV周回×100</li>
	<li>正中長の測定で両方の円周を計算します。LV中線周周では、心内膜面と心外膜表面の中心線の長さを測定します。中線梗塞の円周の場合、心筋18の全厚さの50%以上を含む梗塞の長さを測定する。 注:すべての画像解析は、ImageJ ソフトウェアを使用して実行されました。</li>
	<li>乳頭筋レベルでの瘢痕の壁の厚さを測定します。</li>
	<li>コラーゲン領域の分数を計算します。 コラーゲン領域(%)=間質線維化/筋細胞領域の総面積 x 100</li>
</ol>

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</ol>

著者は、この作品で宣言する利益相反はありません。

注射可能なGHヒドロゲルは、多様な治療薬をその一体的にその中に組み込む能力のために、インビボアプリケーションに大きな可能性を秘めています。さらに、それらの物理的および生化学的特性は、疾患に依存する要件に基づいて容易に操作することができる。この点で、注射ヒドロゲルは、負傷した心臓19,20における生存不良および細胞保持(すなわち、<24時間以内に10%)の細胞保持によって妨げられる現在の心臓幹細胞療法における主要な制限に対処するために提案されている。この悪い結果を克服するために、本明細書に記載されているプロトコルは、心筋移植後にその中で架橋することができるGHヒドロゲルを使用して細胞の保持および生存を改善する簡単で実現可能な方法を提供し、これはマウスMIモデルにおける心臓構造および機能に好ましい影響を示している。
この技術の主な利点は、あらゆるタイプの細胞および生体分子との広いin vivoの適用性であり、注射前にプレゲルGH溶液と混合するだけでロードできる。さらに、...

心臓幹細胞療法は、心筋修復および再生1,2の潜在的アプローチとして出現した。動物モデルおよび臨床試験における最近の肯定的な結果にもかかわらず、心筋修復のための幹細胞ベース療法の適用は、梗塞した心臓組織3、4における注入された細胞の低い保持および生存不良のために制限される。その結果、細胞系組織工学の使用は、注射可能な生体材料5、心臓パッチ6、および細胞シート7を含む、宿主心筋内の細胞の保持および統合を改善するために集中的に研究されてきた。
生体工学的心臓組織修復に対する様々な潜在的アプローチの中で、間葉系幹細胞(MSC)、胚性幹細胞(ESC)、および人工多能性幹細胞(iPSC)などの適切な細胞タイプと組み合わせた注射可能なヒドロゲルは、心筋領域8,9に細胞を効果的に送達するための魅力的な選択肢である。ゼラチンは、よく知られている天然ポリマーであり、生物医学用途で使用される幅広い生体材料と比較して、その優れた生体適合性、かなりの生分解性、および免疫原性の低下により、注射可能なマトリックスとして使用することができます。ゼラチンベースの注入プラットフォームは大きな可能性を秘めていますが、生体内での適用性は、低い機械的剛性と生理学的環境における容易な劣化性に基づいて制限されたままです。
これらの制限を克服するために、インビボ用途に対してヒドロキシフェニルプロピオン酸からなるゼラチン系ヒドロゲルの新規かつシンプルな設計が提案されている。ゼラチンヒドロキシフェニルプロピオン酸(GH)コンジュゲートは、酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)の存在下でその時に架橋することができ、その後、様々な薬物、生体分子、またはヒドロゲル内の細胞を封入し、組織工学アプリケーション10、11、12、13、14に大きな可能性を示唆している。さらに、我々は最近、カプセル化されたMSCを含むGHヒドロゲルの治療効果を調査し、マウスモデル15におけるMI後の心臓修復および再生に成功した心臓修復および再生におけるそれらの使用を実証した。本プロトコルでは、GHヒドロゲル内のMCのカプセル化およびインビトロ3次元(3D)増殖に関する簡単な手法について述べた。また、梗塞した心臓へのMSC負荷GHヒドロゲルの冠動脈結紮および筋膜内移植を介してマウスMIモデルを生成するように設計された外科的処置を導入する。

<table><tbody><tr><td>4 % パラホルムアルデヒド (PFA)</td><td>イントロン</td><td>IBS-BP031-2</td><td></td></tr><tr><td>5-0 シルク縫合</td>糸 <td>AILEE</td><td>SK534</td><td></td></tr><tr><td>8-0 ポリプロピレン縫合</td>糸 <td>ETHICON</td><td>M8732H</td><td></td></tr><tr><td>8 ウェルチャンバースライド</td><td>Nunc LAB-TEK</td><td>154534</td><td></td></tr><tr><td>Angiocath Plus (22GA) カテーテル</td><td>BD Angiocath Plus</td><td>REF382423</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質-抗筋ココ</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>GYROGEN</td><td>1582MGR</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>Zeiss</td><td>LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td>MARIENFELD</td><td>101242</td><td></td></tr><tr><td>Deluxe High Temperature Cautery kit</td><td>Bovie</td><td>QTY1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14040-133</td><td></td></tr><tr><td>デュアルシリンジ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EOSIN</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td></td><td></td></tr> HT110116 <tr><td>エタノール</td><td>EMSURE</td><td>K49350783 739</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Fechtner 結膜鉗子 チタン</td><td>WORLD PRECISISON INSTRUMENTS</td><td>WP1820</td><td></td></tr><tr><td>フルオレセインイソチオシアネート異性体I(FITC)</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>F7250</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>HEBU</td><td>HB0458</td><td></td></tr><tr><td>脱毛クリーム</td><td>イルドン製薬</td><td></td><td></td></tr><tr><td>加熱パッド</td><td>ストールティング</td><td>50300</td><td>ホメオサーミック・ブランケット・システム</td></tr><tr><td></td><td></td><td>50301</td><td>50300 (10×12.5cm)用交換用加熱パッド</td></tr> ヘ<tr><td>マトキシリン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>HHS80</td><td></td></tr><tr><td>西洋わさび過酸化物 (HRP; 250-330 U/mg)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P8375</td><td></td></tr><tr><td>過酸化水素 (H2O2; 30 wt % in H2O)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>216763</td><td></td></tr><tr><td>ヨウ素</td><td>グリーン製薬</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD 細胞染色キット</td><td>サーモフィッシャー</td><td>R37601</td><td></td></tr><tr><td>機械式ベンチレーター</td><td>ハーバード装置</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心分離機</td><td>ハニル</td><td>マイクロ12</td><td></td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー</td><td>KASCO</td><td>37-1452</td><td></td></tr><tr><td>マイクロハサミ</td><td>HEBU</td><td>HB7381</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>MT 染色キット</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>HT1079-1SET</td><td>ヴァイゲルト&RSQUO;鉄ヘマトキシリン溶液</td></tr><tr><td></td><td></td><td>HT15-1KT</td><td>トリクローム染色 (マッソン) キット</td></tr><tr><td>パラフィン</td><td>LK LABKOREA</td><td>H06-660-107</td><td></td></tr><tr><td>PBS バッファー</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>PHK26 染色キット</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>スライドスキャナー</td><td>ライカ</td><td>SCN400</td><td></td></tr><tr><td>手術用ハサミ</td><td>HEBU</td><td>HB7454</td><td></td></tr><tr><td>サージカルテープ</td><td>3M micopore</td><td>1530-1</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュカセット</td><td>Scilab Korea</td><td>Cas3003</td><td></td></tr><tr><td>トランスデューサーゲル</td><td>SUNGHEUNG</td><td>SH102</td><td></td></tr><tr><td>トラウトバラカーニードルホルダー湾曲</td><td>KASCO</td><td>50-3710c</td><td></td></tr><tr><td>超音波システム</td><td>フィリップ</td><td>スアフィニティ 50</td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>JUNSEI</td><td>25175-0430</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスモデルにおける心筋梗塞後のmsc負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植

Intramyocardial Transplantation of MSC-Loading Injectable Hydrogels after Myocardial Infarction in a Murine Model

梗塞後の心不全を予防するための現在の心臓幹細胞療法が直面している主要な問題の1つは、負傷した心筋内の移植細胞の低い保持率と生存率であり、治療効果を制限する。近年、スキャフォールディング生体材料の使用は、幹細胞治療の改善と最大化に注目されています。このプロトコルの目的は、注射用ヒドロキシフェニルプロピオン酸(GH)ヒドロゲルを使用して骨髄由来間葉系幹細胞(MCC)を移植するための簡単で簡単な技術を導入することです。ヒドロゲルは、その場で架橋され、高い生体適合性を持つ能力のために、心臓組織工学アプリケーション用の細胞送達プラットフォームとして好ましい。MSC負荷GHヒドロゲル(MSC/ヒドロゲル)を製造し、その生存と増殖を3次元(3D)インビトロ培養で評価する簡単な方法を紹介します。また、マウスにおけるMSC/ヒドロゲルの心筋内移植の手法を示し、左前下降(LAD)冠動脈結紮術とその後のMSC/ヒドロゲル移植を介して心筋梗塞(MI)を誘導する外科的処置を説明する。

梗塞心筋にMCを効果的に送達するために、 図1 に記載されたシンチクロスリンク可能なヒドロゲル中のMSC負荷をこのプロトコルで使用した。インビボ移植の前に、GHヒドロゲル中のMCの増殖および生存は、3Dインビトロ生きている/死細胞染色アッセイ(生:緑;死んだ:赤)によって確認された。 図2に示すように、代表的な画像は十分なMSC増殖を示し、GHヒドロゲル内の分岐ネットワークを示した。さらに、14日目にMSCの広範な多細胞3D構造が明確に観察され、GHヒドロゲルが封入された細胞に適切な微小環境を提供できることを示した。
LADライゲーションによるMIの誘導後、MSC負荷GHヒドロゲルを梗塞周部に心内移植した(図3A)。図3Bに示すように、MSCおよびゲルは梗塞領域内で適切に持続した。PHK26(赤)で染色されたMSCは、GHヒドロゲルにうまく組み込...

幹細胞ベースの治療は、心筋梗塞後に負傷した心臓組織を修復するための効率的な戦略として浮上している。酵素的に架橋できるゼラチンハイドロゲルを用いた幹細胞移植に最適なインビボアプリケーションを提供します。

マウスモデルにおける心筋梗塞後のMSC負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植

One of the major issues facing current cardiac stem cell therapies for preventing postinfarct heart failure is the low retention and survival rates of ...

この方法は、梗塞性心臓の移植細胞の保持と生存率が低いことへの適用性が低いなど、現在の悪化した心臓治療の主要な問題に対処するのに役立ちます。この問題に対処するために、この方法は、マウスモデルで注射可能なハイドロゲルを使用して幹細胞による心筋内心筋移植を研究するための信頼性の高い技術を提供でき、心筋梗塞後の心臓組織の修復と再生を調査するために使用する優れたプラットフォームです。この技術の主な利点は、in-situ架橋カバー注射可能なハイドロゲルを使用して、心筋内移植後の移植幹細胞の保持と生存を改善するための実行可能な方法であることです。これらのハイドロゲルは、幹細胞だけでなく、成長因子、遺伝物質、薬物も送達して、梗塞性心組織の治療効果を最大化するなど、心臓組織工学に多様な機会を提供します。invitro実験の手順を実演するのは、私の研究室の研究員であるEunmi Leeです。Eun-Hye ParkとEunhwa Seongの研究技術者が、生体内実験の手順を実演します。間葉系幹細胞(MSC)を100mmの培養皿で、摂氏37度、二酸化炭素5%で培養します。細胞が80%のコンフルエントに達したら、皿をDPBSで2回洗い、摂氏37度で1ミリリットルのトリプシン代替品と3分間インキュベートします。次に、9ミリリットルの培地を細胞に加え、Gの500倍で3分間遠心分離します。得られた上清を破棄します。細胞を1ミリリットルのPBSに再懸濁し、細胞懸濁液を氷上に保持します。10マイクロリットルの細胞懸濁液を10マイクロリットルのトリパンブルーで希釈し、自動セルカウンターを使用して細胞濃度を測定します。MSCを1ミリリットルあたり7番目の細胞の1×10の密度に再懸濁し、それらを1ミリリットルのチューブに移します。PBSで6.25%GHのコンジュゲート溶液を調製し、2つのバイアルに分離します。次に、GH溶液をHRP1ミリリットルあたり6マイクログラムまたは0.07%過酸化水素と混合します。細胞懸濁液をGの1000倍で短時間遠心分離し、得られた上清を慎重に吸引します。次に、セルペレットをGH溶液Aと混合し、GH溶液AとGH溶液BのMSCをデュアルシリンジの両側にロードします。GH溶液とMSCを組み合わせた300マイクロリットルを、最終密度500万細胞/ミリリットルで8ウェルチャンバースライドにプレートします。in situハイドロゲル形成とその後の酵素架橋によるMSCカプセル化の後、10%FBSと1%の抗生物質抗真菌溶液を含む700マイクロリットルのDMEMを添加します。スライドを摂氏37度と二酸化炭素5%でインキュベートし、2〜3日ごとに培地を交換します。手術前に、脱毛クリームを使用してマウスの胸部を剥離し、ヨウ素で皮膚を滅菌します。マウスを手術台に置き、カテーテルを気管に挿入して挿管し、機械換気によって酸素を補給します。手術用ハサミで皮膚をやさしく切ります。次に、マイクロハサミで肋間筋を貫通します。5-Oシルク縫合糸を使用して左肋骨の2番目と3番目の肋骨を分離し、胸腔を開いた状態に保ちます。左前下行冠状動脈を、8-0のニードルホルダーを使用して慎重に結紮します。ポリプロピレン製縫合糸を縫合し、電気焼灼を使用して縫合糸を切断します。左前心室壁の即時の色の変化を観察します。心筋梗塞を誘発した後、10マイクロリットルのMSCローディングGH溶液を梗塞境界ゾーンの2つの異なるポイントに注入します。開いた胸腔を修復し、5-0縫合糸を使用して筋肉と皮膚を閉じます。気管チューブを取り外し、回復中はマウスを赤外線ランプの下のケージに入れます。心エコー検査を実施し、左室前壁、左室内壁、左室後壁の対応する線を測定して、心臓壁の厚さ、チャンバーの寸法、および分数短縮を取得します。in vivo移植に先立ち、GHヒドラゲル中のMSCの増殖と生存は、3D in vitro生死細胞染色アッセイによって確認されました。代表的な画像は、GHハイドロゲル内の分岐ネットワークを示す十分なMSC増殖を示しました。MSCの広範な多細胞3D構造が14日目に明確に観察され、GHハイドロゲルがカプセル化された細胞に適切な微小環境を提供できることが示されました。心筋梗塞の誘発後、MSCローディングGHハイドロゲルを心筋内梗塞領域に移植した。MSCとゲルは梗塞領域内で適切に維持されました。MSCはGHハイドロゲルに良好に統合されていました。MSCローディングGHハイドロゲルの治療効果を検証するために、移植後28日目に心エコー検査と組織学的分析により心機能および心機能の変化を評価し、異なる治療群間で比較しました。代表的な心エコー検査では、MSCゲル治療群のフラクショナル短縮、駆出率、収縮期末容積などの心機能の改善が示されました。さらに、組織学的分析では、MSCゲル治療群では、他の群よりも線維化が少なく、梗塞壁が厚く、梗塞サイズが小さいことが示され、このプロトコルがLVリモデリングを大幅に減衰させたことを示しています。この技術により、マウスモデルにおいて、心筋梗塞後の幹細胞の長期化と増殖を達成し、心筋梗塞後の心臓の構造と機能の大幅な改善をもたらしました。この技術は、大動物での使用や、心臓組織の修復と再生を提供することにより、梗塞後心不全を予防するための新しい戦略としての臨床応用に拡張できます。

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このビデオでは、心筋虚血のpathobiologicalと病態生理学的プロセスを研究するために高速で信頼性の高いモデルを使用する方法を示します。...

LAD -ライゲーション：心筋梗塞のマウスモデル

例えば、高血圧または心筋梗塞などの心血管疾患のマウスモデルにおける心筋細胞送達は、回生広く研究において、異なる細胞型の治療可能性を試験するために使用される。そのため、詳細な説明およびこの外科処置の明確な可視化は、小型げっ歯類の心血管細胞治療の分析の限界と利点を定義するのに役立ちます。...

心筋内細胞送達：マウスハーツの観測

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マウスにおける超音波ガイド下経胸壁心筋内注射

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ヒドロゲルは、構築し、マウス心筋梗塞モデルにおける治療薬を送達するためのフィブリンベースの接着剤のアプローチ。

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実験的炎症性腸病気のマウスモデルで使用するため、腸管へのホーミングを増加するヒト間葉系幹細胞の超音波ガイド下心臓内注射

このプロトコルでは、ヒト誘導多能性幹細胞を心筋細胞の分化および精製に使用する方法をデモンストレーションし、さらに、Rho関連タンパク質キナーゼ阻害剤による移植効率を改善する方法について説明します。マウス心筋梗塞モデルにおける前処理。...

Rhoキナーゼ活性の一過性阻害によるヒト誘導多能性幹細胞由来心筋細胞の増着増強

左屈折性動脈閉塞と急速なペーシングによって引き起こされる心不全の豚モデルを確立し、細胞ベースの治療法に対する幹細胞の筋膜内投与の効果と安全性をテストすることを目的とした。...

幹細胞治療のための心筋梗塞後心不全の豚モデルの確立

幹細胞は、心筋損傷を有する個人の潜在的な治療法として継続的に調査されるが、損傷した組織内での生存率および保持率の低下は、長期的な有効性に影響を与える可能性がある。本稿では虚血再灌流傷害のマウスモデルにおける幹細胞送達の代替方法を述べる。...

マウスモデルにおける虚血再灌流損傷後の幹細胞の筋内内出産の遅延

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心筋梗塞のマウスモデルにおける3次元バイオプリントパッチの移植

マウスの心筋梗塞部位周辺の超音波ガイド下細胞送達は、安全で効果的で便利な細胞移植方法です。...

心筋梗塞マウスにおける超音波ガイド下多能性幹細胞由来心筋細胞移植術

この記事では、29 G x 88 mm の針を使用した心筋梗塞のラット モデルにおける心エコー検査ガイド下心筋内注射の最適化されたプロトコルについて詳しく説明します。この技術により、堅牢で正確かつ再現性のある治療薬が梗塞周囲ゾーンに直接送達されることが保証されます。...

心筋梗塞のラットモデルにおける標的で信頼性の高い心筋内幹細胞送達のための心エコーガイド下注射

学ぶマウスモデルにおける心筋梗塞後のMSC負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植法。ゼラチンヒドロゲルを用いて移植細胞の保持と生存率を向上させ、心臓組織修復と再生医療の新たな治療戦略を開拓する革新的アプローチです。

マウスモデルにおける心筋梗塞後のMSC負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植

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