Name: ネズミ尾リンパ浮腫モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: 学ぶ マウス尾リンパ浮腫モデルの構築法と組織ナノトランスフェクション技術による遺伝子導入法。リンパ管機能不全のメカニズム解明と治療戦略開発に有用な再現性の高い動物モデルを確立します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、米国形成外科医学術奨学金協会と国防総省W81XWH2110135がAHHに提供する助成金によって支えられた   。美容外科教育研究財団は、CKSに対して、MS. NIH U01DK119099、R01NS042617およびR01DK125835に助成金を与えます。

このプロトコルは、施設の動物研究倫理委員会のガイドラインに従っています。すべての動物実験は、インディアナ大学医学部の施設動物のケアと使用委員会によって承認されました。動物は、食べ物と水のアドリビタムと12時間の明暗サイクルの下で収容されました。
1. マウスの尾リンパ球の外科的破壊
<ol><li>男女分布の8週齢のC57BL/6マウスを使用してください。</li>
	<li>100%酸素中の3-4%のイオブルランを有する誘導室の全身麻酔下にマウスを置き、その後、処置中に1〜3%で維持沈下した。</li>
	<li>0.5 mg/kg 持続放出(SR)ブプレノルフィンを皮下に投与して疼痛制御を行う。 注: ポストオペで投与された追加の鎮痛薬: Carprofen 1回 24 時間ごとに少なくとも 48 時間とブピバカインは、切開が行われた後、または切開を閉じる前に一度, 皮膚の端に滴下することによって適用されます (4 – 6 時間まで続きます).</li>
	<li>マウスをドーサリーに置き、70%イソプロピルアルコールで尾を準備します。</li>
	<li>キャリパーを使用して、尾部のベースから20mmから始まる5mm増分で手順の前に尾の直径を測定します。これらの測定値は、切り捨てられたコーン方程式37を使用して体積を計算するために使用されます。</li>
	<li>ベースから尾部20mmに3mmの円周切除をマークします。</li>
	<li>滅菌外科用ブレード(サイズ15)で細心の3mmの完全な皮膚切除を行い、外科顕微鏡的拡大の下で基礎となるすべての血管構造をそのまま残します。上周マーク(尾部ベースから20mm)を最初に真皮を通し、最初の切開に対して3mmの周縁部の完全な厚さの切開を行います。<ol>
<li>垂直な完全な厚さの垂直切開を行い、2つの切開を接続します。歯付きの細かいピックアップを使用して先端をつかみ、マイクロシザーを使用して、真皮に対する血管面内の深部を慎重に解剖し、静脈の冒険に表面化します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>0.1 mLのイソスルファンブルー(1%)を尾部の先端に皮下近位に注入する。</li>
	<li>手術顕微鏡下で横尾静脈に隣接する2つのリンパ管を特定します。イソスルファン注射のためリンパ球は青色に見えます。まっすぐなマイクロ外科用ハサミを使用してリンパ球をトランスフェクトする。はさみを使用して、横静脈とリンパ管の間の平面を慎重に解剖します。次に、リンパ管と横静脈の間に1つのはさみ刃の先端を渡し、刃を閉じてリンパ管を移す。</li>
	<li>無菌付着透明なドレッシングで尾の傷をドレスアップ。毎日、感染や出血を防ぐために、op後の切開をチェックし、2週間の創傷ケアを提供します。</li>
	<li>動物を1人で収容して、尾にこれ以上の怪我を防ぎ、動物がお互いに噛み合うことを防ぎ、外科的合併症につながる。</li>
</ol>2. レーザースペックルコントラストイメージングによる尾血管評価
<ol><li>ステップ 1.2 のようにマウスを麻酔します。</li>
	<li>レーザースペックルコントラストイメージングを使用して尾部血管を可視化するには、幅を0.8cm、高さを1.8cmに、点密度を高く、フレームレートを44枚の画像/秒、時間を30秒に、カラー写真を1秒あたり1に設定します。</li>
	<li>静脈および動脈灌流を評価して、開血を評価する。定性的に、流れの連続性を視覚化する必要があります。</li>
</ol>3. 近赤外レーザー血管造影による機能性リンパ解析
<ol><li>ステップ 1.2 のように動物を麻酔する</li>
	<li>インドシアニングリーン(ICG)(25mg/10 mL)を再構成し、先端付近の遠位マウス尾部に皮下0.1mLを投与する。</li>
	<li>部屋の明かりを暗くする。近赤外線レーザー血管造影をバッファリング設定に入れ、その後ライブキャプチャを行います。</li>
</ol>4. TNTを用いたマウス尾への核酸貨物のフォーカルデリバリー
<ol><li>ステップ1.2のように動物を麻酔します。</li>
	<li>局所皮膚剥離クリームを使用してマウスの尾を剥離します。</li>
	<li>マウスの尾をコラゲターゼ溶液(10mg/mL)に37°Cで5分間浸します。</li>
	<li>TNT2.0 チップリザーバ35に DNA をロードします。</li>
	<li>TNT2.0 シリコーンチップデバイスを、尾部に接触するナノニードルで尾部に所望の送達部位を置きます。</li>
	<li>正の電気プローブを貯留槽に入れる。負のプローブを30G針に取り付け、針を皮下に尾に入れ、配達現場に挿入します。</li>
	<li>矩波パルス電気刺激(10 x 10 msパルス、250 V、10 mA)を適用します。</li>
</ol>

<ol><li>Kataru, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+secondary+lymphedema%3A+chicken+or+egg%5BTitle%5D)+AND+%22Translation+Research%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and secondary lymphedema: chicken or egg.</a> Translation Research. 209, 68-76 (2019).</li>
<li>Brayton, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+prevalence+and+treatment+benefits+in+cancer%3A+impact+of+a+therapeutic+intervention+on+health+outcomes+and+costs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphedema prevalence and treatment benefits in cancer: impact of a therapeutic intervention on health outcomes and costs.</a> PLoS One. 9 (12), 114597(2014).</li>
<li>Mendoza, N., Li, A., Gill, A., Tyring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filariasis%3A+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Filariasis: diagnosis and treatment.</a> Dermatology and Therapy. 22 (6), 475-490 (2009).</li>
<li>Rockson, S. G., Rivera, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+population+burden+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Estimating the population burden of lymphedema.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 147-154 (2008).</li>
<li>Soran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-related+lymphedema--what+are+the+significant+predictors+and+how+they+affect+the+severity+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Journal%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-related lymphedema--what are the significant predictors and how they affect the severity of lymphedema.</a> Breast Journal. 12 (6), 536-543 (2006).</li>
<li>Hayes, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper-body+morbidity+after+breast+cancer%3A+incidence+and+evidence+for+evaluation%2C+prevention%2C+and+management+within+a+prospective+surveillance+model+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Upper-body morbidity after breast cancer: incidence and evidence for evaluation, prevention, and management within a prospective surveillance model of care.</a> Cancer. 118, 8 Suppl 2237-2249 (2012).</li>
<li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li>
<li>Garza, R., Skoracki, R., Hock, K., Povoski, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+overview+on+the+surgical+management+of+secondary+lymphedema+of+the+upper+and+lower+extremities+related+to+prior+oncologic+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A comprehensive overview on the surgical management of secondary lymphedema of the upper and lower extremities related to prior oncologic therapies.</a> BMC Cancer. 17 (1), 468(2017).</li>
<li>Hassanein, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+Inferior+Epigastric+Artery+Vascularized+Lymph+Node+Transfer%3A+A+Simple+and+Safe+Option+for+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plastic%2C+Reconstructive%2C+Aesthetic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Deep Inferior Epigastric Artery Vascularized Lymph Node Transfer: A Simple and Safe Option for Lymphedema.</a> Journal of Plastic, Reconstructive, Aesthetic Surgery. 73 (10), 1897-1916 (2020).</li>
<li>Hassanein, A. H., Sacks, J. M., Cooney, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+perioperative+lymphatic-venous+anastomosis+localization+using+transcutaneous+vein+illumination%2C+isosulfan+blue%2C+and+indocyanine+green+lymphangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Optimizing perioperative lymphatic-venous anastomosis localization using transcutaneous vein illumination, isosulfan blue, and indocyanine green lymphangiography.</a> Microsurgery. 37 (8), 956-957 (2017).</li>
<li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%3A+Surgical+and+Medical+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138, 3 Suppl 209-218 (2016).</li>
<li>Gould, D. J., Mehrara, B. J., Neligan, P., Cheng, M. H., Patel, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+transplantation+for+the+treatment+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Lymph node transplantation for the treatment of lymphedema.</a> Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 736-742 (2018).</li>
<li>Cook, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+Lymphatic+Reconstruction+after+Axillary+Lymphadenectomy%3A+A+Single-Institution+Early+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immediate Lymphatic Reconstruction after Axillary Lymphadenectomy: A Single-Institution Early Experience.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Cook, J. A., Hassanein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASO+Author+Reflections%3A+Immediate+Lymphatic+Reconstruction%3A+A+Proactive+Approach+to+Breast+Cancer-Related+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">ASO Author Reflections: Immediate Lymphatic Reconstruction: A Proactive Approach to Breast Cancer-Related Lymphedema.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Johansson, K., Branje, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arm+lymphoedema+in+a+cohort+of+breast+cancer+survivors+10+years+after+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncologica%22%5BJournal%5D)">Arm lymphoedema in a cohort of breast cancer survivors 10 years after diagnosis.</a> Acta Oncologica. 49 (2), 166-173 (2010).</li>
<li>Johnson, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+Incidence+After+Axillary+Lymph+Node+Dissection%3A+Quantifying+the+Impact+of+Radiation+and+the+Lymphatic+Microsurgical+Preventive+Healing+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema Incidence After Axillary Lymph Node Dissection: Quantifying the Impact of Radiation and the Lymphatic Microsurgical Preventive Healing Approach.</a> Annals of Plastic Surgery. 82, 4S Suppl 3 234-241 (2019).</li>
<li>Gartner, R., Mejdahl, M. K., Andersen, K. G., Ewertz, M., Kroman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+in+self-reported+arm-lymphedema+in+Danish+women+treated+for+early-stage+breast+cancer+in+2005+and+2006--a+nationwide+follow-up+study%5BTitle%5D)+AND+%22Breast%22%5BJournal%5D)">Development in self-reported arm-lymphedema in Danish women treated for early-stage breast cancer in 2005 and 2006--a nationwide follow-up study.</a> Breast. 23 (4), 445-452 (2014).</li>
<li>Shin, W. S., Rockson, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+the+molecular+and+mechanistic+study+of+lymphatic+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal models for the molecular and mechanistic study of lymphatic biology and disease.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 50-74 (2008).</li>
<li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li>
<li>Olszewski, W., Machowski, Z., Sokolowski, J., Nielubowicz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+lymphedema+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental lymphedema in dogs.</a> Journal of Cardiovascular Surgery. 9 (2), 178-183 (1968).</li>
<li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail%3A+Lymphatic+hyperplasia%2C+VEGF-C+upregulation%2C+and+the+protective+role+of+MMP-9%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li>
<li>Tabibiazar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+manifestations+of+experimental+lymphatic+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inflammatory manifestations of experimental lymphatic insufficiency.</a> PLoS Medicine. 3 (7), 254(2006).</li>
<li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+deficiency+worsens+inflammation+and+lymphedema+after+lymphatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor deficiency worsens inflammation and lymphedema after lymphatic injury.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 302 (4), 709-719 (2012).</li>
<li>Gardenier, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+toxin-mediated+ablation+of+lymphatic+endothelial+cells+results+in+progressive+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Diphtheria toxin-mediated ablation of lymphatic endothelial cells results in progressive lymphedema.</a> JCI Insight. 1 (15), 84095(2016).</li>
<li>Weiler, M. J., Cribb, M. T., Nepiyushchikh, Z., Nelson, T. S., Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+tail+lymphedema+model+for+observing+lymphatic+pump+failure+during+lymphedema+development%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A novel mouse tail lymphedema model for observing lymphatic pump failure during lymphedema development.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10405(2019).</li>
<li>Avraham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2+differentiation+is+necessary+for+soft+tissue+fibrosis+and+lymphatic+dysfunction+resulting+from+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Th2 differentiation is necessary for soft tissue fibrosis and lymphatic dysfunction resulting from lymphedema.</a> FASEB J. 27 (3), 1114-1126 (2013).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29+cells+regulate+fibrosis+and+lymphangiogenesis+in+response+to+lymphatic+fluid+stasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD4(+) cells regulate fibrosis and lymphangiogenesis in response to lymphatic fluid stasis.</a> PLoS One. 7 (11), 49940(2012).</li>
<li>Arruda, G., Ariga, S., de Lima, T. M., Souza, H. P., Andrade, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+mouse-tail+lymphedema+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lymphology%22%5BJournal%5D)">A modified mouse-tail lymphedema model.</a> Lymphology. 53 (1), 29-37 (2020).</li>
<li>Jun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Mouse+Models+of+Chronic+Secondary+Lymphedema%3A+Tail+and+Hind+Limb+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Modified Mouse Models of Chronic Secondary Lymphedema: Tail and Hind Limb Models.</a> Annals of Vascular Surgery. 43, 288-295 (2017).</li>
<li>Karkkainen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+gene+therapy+of+human+hereditary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for gene therapy of human hereditary lymphedema.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (22), 12677-12682 (2001).</li>
<li>Yoon, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-C+gene+therapy+augments+postnatal+lymphangiogenesis+and+ameliorates+secondary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">VEGF-C gene therapy augments postnatal lymphangiogenesis and ameliorates secondary lymphedema.</a> Journal of Clinical Investigation. 111 (5), 717-725 (2003).</li>
<li>Gallego-Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+tissue+nano-transfection+mediates+non-viral+stroma+reprogramming+and+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Topical tissue nano-transfection mediates non-viral stroma reprogramming and rescue.</a> Nature Nanotechnology. 12 (10), 974-979 (2017).</li>
<li>Moore, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanochannel-Based+Poration+Drives+Benign+and+Effective+Nonviral+Gene+Delivery+to+Peripheral+Nerve+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Biosystems%22%5BJournal%5D)">Nanochannel-Based Poration Drives Benign and Effective Nonviral Gene Delivery to Peripheral Nerve Tissue.</a> Advanced Biosystems. , 2000157(2020).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-Mediated+Crosstalk+between+Keratinocytes+and+Macrophages+in+Cutaneous+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Exosome-Mediated Crosstalk between Keratinocytes and Macrophages in Cutaneous Wound Healing.</a> ACS Nano. 14 (10), 12732-12748 (2020).</li>
<li>Roy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenic+tissue+nanotransfection+in+the+management+of+cutaneous+diabetic+polyneuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Neurogenic tissue nanotransfection in the management of cutaneous diabetic polyneuropathy.</a> Nanomedicine. 28, 102220(2020).</li>
<li>Sitzia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+measurement+in+lymphoedema+treatment%3A+examination+of+formulae%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer+Care%22%5BJournal%5D)">Volume measurement in lymphoedema treatment: examination of formulae.</a> European Journal of Cancer Care. 4 (1), 11-16 (1995).</li>
<li>Smeltzer, D. M., Stickler, G. B., Schirger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+lymphedema+in+children+and+adolescents%3A+a+follow-up+study+and+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Primary lymphedema in children and adolescents: a follow-up study and review.</a> Pediatrics. 76 (2), 206-218 (1985).</li>
<li>Maclellan, R. A., Greene, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema.</a> Seminars in Pediatric Surgery. 23 (4), 191-197 (2014).</li>
<li>Clavin, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta1+is+a+negative+regulator+of+lymphatic+regeneration+during+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">TGF-beta1 is a negative regulator of lymphatic regeneration during wound repair.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 295 (5), 2113-2127 (2008).</li>
<li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retooling+Laser+Speckle+Contrast+Analysis+Algorithm+to+Enhance+Non-Invasive+High+Resolution+Laser+Speckle+Functional+Imaging+of+Cutaneous+Microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Retooling Laser Speckle Contrast Analysis Algorithm to Enhance Non-Invasive High Resolution Laser Speckle Functional Imaging of Cutaneous Microcirculation.</a> Scientific Reports. 7, 41048(2017).</li>
</ol>

著者らは競合する利益相反を持っていません。

リンパ浮腫は、原発(先天性)または二次(気中原性リンパ)傷害38、39に分類される。二次リンパ浮腫は、症例の99%を含む39.二次リンパ浮腫は、最も一般的に感染(フィラリア症)またはリンパ節切術または放射線による事後の治療によって引き起こされる4,39.翻訳動物モデルは、リンパ12次16>と放射線で治療された動物の70%がリンパ浮腫2,16を獲得しないので、二次性リンパ浮腫には挑戦的である。また、現象性リンパ浮腫は、遅発性発症(1年)後リンパ損傷を呈する。リンパ浮腫のマウス尾モデルは、これらの障害を克服し、焦点尾リンパ切除術を受けているすべてのマウスは、処置21,23<su...

リンパ浮腫はリンパ機能障害によって引き起こされる四肢腫脹である。影響を受けた四肢は、体液、脂肪、線維症の蓄積のために拡大する。リンパ浮腫は、世界中で2億5000万人の人々に影響を与えます2,3,4.乳癌、黒色腫、婦人科/泌尿器腫瘍、肉腫などの固形悪性腫瘍の治療を受ける患者の20〜40%がリンパ浮腫2、4、5を発症すると推定される。リンパ浮腫による罹患率は、再発性感染、疼痛、および変形6を含む。この進行性の生涯にわたる病気の治療法はありません。現在の治療法はvariaby有効7であり、理学療法士による完全な鬱血療法、切除処置、および血管導入リンパ節移移およびリンパバイパス7、8、9、10、11、12、13、14を含む微小手術を含む。リンパ浮腫の理想的な治療法はまだ発見されていません。
リンパ浮腫のメカニズムと治療の研究は限られています。リンパ傷害15、16の後に1年の平均遅延発症があり、放射線および手術で気球原性侮辱を経験するほとんどの個人はリンパ浮腫4、6、17を発症しない。イヌ、ヒツジ、ブタなどの大型動物モデルは18、19、20と記載されていますが、マウステールモデルは容易さ、コスト、再現性のために最も広く適用されています。リンパ浮腫を調査するためのマウスモデルは、尾型モデル、ジプテリア毒素媒介性リンパ切除、腋窩または亜素リンパ節解剖21、22、23、24、25、26を含む。ほとんどのテールモデルは、尾部22の基部付近で行われるリンパ管切り抜きを伴う焦点的な完全な皮膚切除を使用し、ヒトリンパ浮腫24、27、28、29に似た尾の腫脹および組織学的特徴をもたらす。しかし、標準的なマウステールモデルは、通常、わずか20日で自発的に解決し、周期的尾壊死30を伴う。リンパ浮腫マウスの尾モデルは、15週間を超えて持続的なリンパ浮腫を拡張し、確認された動脈および静脈開存を示し、機能的リンパ機能障害評価を可能にする。
リンパ浮腫のマウステールモデルは、リンパ浮腫を治療するための新しい治療法の評価を可能にする。遺伝子ベースの戦略は、ウイルスベクター31、32によって媒介されるマウスモデルにおいて使用されてきた。また、新しい組織ナノトランスフェクション技術(TNT)を用いて、リンパ浮腫マウス尾部への遺伝貨物輸送にも使用しています。TNTは急速に焦点を合った電界33、34、35、36のナノチャネルを備えたチップを使用して、直接的な、経皮的な遺伝子の送達を促進する。このモデルは、マウス尾部35のリンパ損傷部位への潜在的な遺伝子ベースの治療薬の焦点遺伝子送達を可能にするTNT2.0を用いることを含む。

<table><tbody><tr><td>テガダームフィルム</td><td></td><td>1626W</td><td></td></tr><tr><td>手術用顕微鏡</td><td>ライカ、ウェッツラー、ドイツ</td><td>MSV266</td><td></td></tr>付着<tr><td>性ドレッシング(テガダーム)</td><td>3M、セントポール、ミネソタ州。</td><td>1626W</td><td></td></tr><tr><td>レーザー スペックル (Pericam PSI System )</td> <td>Perimed AB, Stockholm, Sweden)</td><td>PSIZ</td><td></td></tr><tr><td>近赤外線レーザー (LUNA)</td><td>Stryker (旧 Novadaq Technologies, Toronto, Canada)</td><td>LU3000</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Jackson Laboratories</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Forceps - 1x2 Teeth</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>11019-12</td><td></td></tr><tr><td>V-Hook</td><td>ファインサイエンスツールズ(USA)Inc.</td><td>18052-12</td><td></td></tr><tr><td>メス SS NO15</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>29556</td><td></td></tr><tr><td>使い捨て針 30GX1</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>305128</td><td></td></tr><tr><td>手術用ハサミ</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>12-460-796</td><td></td></tr><tr><td>Surgi-Or ジュエラーズ鉗子、Sklar 4-1/2 in</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>50-118-4255</td><td></td></tr><tr><td>スプリングはさみ - ストレート/シャープ-シャープ/8mmカッティングエッジ</td><td>ファインサイエンスツールズ(USA)Inc.</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>カーディオグリーン</td><td>シグマ</td><td>I2633-25MG</td><td></td></tr><tr><td>イソスルファンブルー (リンパズリン)&nbsp; 50 mg/5ml</td><td>マイラン</td><td>67457-220-05</td><td></td></tr></tbody></table>

ネズミ尾リンパ浮腫モデル

A Murine Tail Lymphedema Model

リンパ浮腫はリンパ機能障害によって引き起こされる四肢腫脹である。影響を受けた四肢は、体液、脂肪、線維症の蓄積のために拡大する。この病気の治療法はありません。尾のベース付近での皮膚の焦点全体の切除を用いたマウステールモデルは、尾の腫脹をもたらし、リンパ浮腫を研究するために使用されてきた。しかし、このモデルは、血管を含み、結果的に尾壊死および早期の尾の腫脹分解能をもたらし、その臨床的翻訳性を制限する。慢性マウス尾リンパ浮腫モデルは、15週間にわたって持続的なリンパ浮腫と尾部への信頼性の高い灌流を誘発する。従来のマウス尾リンパ浮腫モデルの強化には、1)外科顕微鏡を用いた正確な全厚切除およびリンパ切開、2)高分解能レーザースペックルを用いた術後動脈および静脈灌流の確認、および3)インドシアニングリーン近赤外レーザーリンパ管造影を用いた機能評価が含まれる。また、新しい非ウイルス、経皮的、マウス尾脈管構造への遺伝的貨物の焦点送達のために組織ナノトランスフェクション技術(TNT)を使用しています。

持続的なリンパ浮腫のマウス尾モデルの技術を 図1に示す。この図は、マウスの尾型モデルの関連する解剖学を示しています。 図2 は、リンパ浮腫誘導後のマウス尾部における進行性の腫脹および持続性持続性リンパ浮腫を示す。マウスの尾部の体積は、切り捨てられたコーン方程式で計算されるように、第4週でピークを迎え、第6週に続いて第15週まで徐々に改善される。尾容積は、モデルにおけるリンパ浮腫に対する治療介入の効果を評価する転帰変数として使用することができる。 図3では、尾脈管構造の開口の評価のための高解像度レーザースペックルが観察できる。これは、ウェルディングが静脈損傷ではなくリンパ機能不全に二次的であることを保証するために、モデルに厳しさを追加します。介入の効果は、潜在的に大きな自信を持ってリンパ浮腫治療に変換することができます. 図4 は、近赤外...

リンパ浮腫はリンパ機能障害によって引き起こされる四肢腫脹である。リンパ浮腫の慢性マウステールモデルと、尾部への遺伝的貨物輸送のための組織ナノトランスフェクション技術(TNT)の新しい使用について述べています。

Lymphedema is extremity swelling caused by lymphatic dysfunction. The affected limb enlarges because of accumulation of fluid, adipose, and fibrosis. ...

リンパ浮腫は治療法のない慢性的な状態です。これは、乳癌の治療に腋窩リンパ節手術と放射線を受けた患者の3分の1に影響を与える。有効な動物モデルを持つことは、新しい治療戦略のメカニズムと開発を理解するのに役立ちます。リンパ浮腫のマウス尾モデルは、急速な発症で信頼性が高く、再現性があります。ヒトリンパ浮腫と一致する組織学的変化を示す。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の博士号を取得したガネーシュ・モハン博士です。まず、8週齢の鎮静マウスを厳格に置き、尾に70%イソプロピルアルコールを準備します。キャリパーを使用して、尾の底部から20ミリメートルから始まる5ミリメートル単位で尾径を測定します。ベースから 20 ミリメートルの尾部に 3 ミリメートルの周回切除をマークします。外科的な顕微鏡的拡大の下で、細心の3ミリメートルの完全な厚さの皮膚切除を行い、基礎となるすべての血管構造をそのまま残す。真皮を通って最初に上周縁マークを切開し、その後に最初の切開まで3ミリメートル遠位の周周の完全な厚さの切開を続ける。2つの切開を接続するために垂直な完全な厚さの垂直切開を行い、歯付きの細かいピックアップを使用して先端をつかみ、真皮に血管面内の深部を解剖し、マイクロハサミで静脈の冒険に表面化します。尾の先端に1%イソスルファンブルー皮下近位の0.1ミリリットルを注入する。横尾静脈に隣接する注射により青色に見える2つのリンパ管を特定します。リンパ管を慎重にトランステークトし、まっすぐなマイクロ外科用ハサミで横静脈とリンパ管の間の平面を解剖する。リンパ管と側面静脈の間に1つのはさみ刃の先端を渡し、刃を閉じてリンパ管を移す。終了したら、無菌付着クリアアドレッシングで尾の傷をドレスアップします。インドシアニングリーン0.1ミリリットルを先端付近の遠位マウス尾部に皮下に投与する。部屋のライトを暗くし、近赤外線レーザー血管造影をバッファリング設定に入れて、ライブイメージングを行います。イソスルファンブルーを尾端に投与した後、リンパ球は青色を呈した。隣接する横静脈が保存されている間、リンパ管は破壊された。リンパ浮腫誘導後のマウス尾の進行性の腫脹および持続性の持続性リンパ浮腫をここに示す。切り捨てられたコーン方程式で計算されたマウステール体積は、第4週でピークに達し、第6週に高まり、その後第15週まで徐々に改善された。高分解能レーザースペックルコントラストイメージングは、尾脈管の開血管の評価のために負傷した側面静脈および無傷の側面静脈を示すリンパ浮腫テールモデルにおけるマウス尾灌流を確認するために行われた。近赤外レーザーリンパ組織検査は、術前の無傷のリンパ球および手術後の手術後の手術部位を越えてICGトランジットを示さなかったことを示し、それによって腫脹がリンパ不全によって引き起こされたことを確認した。組織ナノトランスフェクション技術を用いた遺伝貨物送達の効率は、マウスの尾部に標識されたDNAをフルオレセインを送達することによって実証された。マウス尾リンパ浮腫モデルとICG近赤外線レーザー血管造影の適応を使用することは、治療に影響を及ぼす臨床的に翻訳可能でエキサイティングな動物モデルです。

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

近赤外蛍光（NIRF）を使用して、最近開発されたイメージング技術は、リンパ系の癌転移、免疫応答、創傷修復、および他のリンパ関連疾患に果たす役割の解明に役立つことがあります。...

マウスのリンパ脈管構造の非侵襲的光イメージング

このビデオでは、マウスモデルの尾静脈からメラノーマ細胞を静脈内注射しています。黒色腫細胞はさらに循環器系を移動し、遠くの微小環境に適応して肺などの臓器に転移を引き起こします。...

実験的転移性黒色腫マウスモデル:肺の黒色腫細胞の転移能を研究するためのプラットフォーム

このビデオでは、間質組織空間に異常な体液が蓄積し、尾の腫れを引き起こすマウス尾部リンパ浮腫をin...

マウス尾部リンパ浮腫モデル:マウス尾部に持続性リンパ浮腫を作製するためのIn vivo技術

このビデオは、マウスモデルからの鼠径部ドレナージリンパ節の外科的分離手順を示しています。腹部を切開すると、鼠径リンパ節へのアクセスが可能になり、これは外科的に採取されます。採取した半透明の鼠径リンパ節は、免疫学的研究に使用できます。...

マウスモデルからの鼠径部ドレナージリンパ節の採取

この動物モデルは、研究者がマウスの後肢で統計的に有意な二次リンパ浮腫を誘導することを可能にし、少なくとも8週間持続する。モデルはリンパ浮腫の病態生理学を研究し、新しい処置の選択を調査するために使用することができる。...

マウスの後肢における二次リンパ浮腫を誘導する改訂方法

尿管性リンパ管の外科的縫合によってリンパの流れを遮断するプロトコルが提示される。...

マウスの不感性リンパ管を縫合することによりリンパ流を遮断する

ここでは、独自に設計された加温/抑制装置を用いたげっ歯類の尾静脈注射に対する効果的かつ効率的な方法を提示します。血管拡張の開始を合理化し、プロセスを抑制することによって、このプロトコルは、最小限の苦痛を伴う動物の大規模なグループの正確かつタイムリーな静脈注射を可能にする。...

マウス真菌敗血症モデルにおける効率的な尾静脈注射のための現代的な温暖化/抑制装置

メラノーマは、すぐに他の臓器に広がる非常に攻撃的な病気です。このプロトコルは、転移性黒色腫のBraf/Ptenマウスモデルにおける鼠径リンパ節の体積を監視するために、3Dレンダリングと組み合わせた超高周波超音波イメージングの適用を説明する。...

メラノーマのBraf/Pten遺伝子操作マウスモデルにおける超高周波超音波イメージングによるリンパ節容積の解析

ここで提示する実験デザインは、リンパ節(LN)転移中の抗原特異的CD8+ T細胞の研究に有用な生殖モデルを提供し、傍観者CD8+...

腫瘍形成中の抗原特異的CD8+ T細胞の動態を評価するためのリンパ節転移モデル

このプロトコルは、導入化学療法に対する反応のダイナミクスに基づいて、急性リンパ芽球性白血病の再発を生成するためのマウスモデルを説明することを目的としています。...

急性リンパ芽球性白血病に対する導入化学療法への白血病再発のマウスモデル

学ぶ マウス尾リンパ浮腫モデルの構築法と組織ナノトランスフェクション技術による遺伝子導入法。リンパ管機能不全のメカニズム解明と治療戦略開発に有用な再現性の高い動物モデルを確立します。

ネズミ尾リンパ浮腫モデル

さらに動画を探す