Name: 胎児および成人神経幹細胞由来オリゴデンドロビテ前駆細胞培養の高含有スクリーニング分化と成熟解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: 学ぶ神経幹細胞由来オリゴデンドロビテ前駆細胞の高含有スクリーニング分化と成熟解析。胎児および成人マウス由来細胞を用いた混合培養モデルで、脱髄性疾患治療薬のスクリーニングに応用可能な手法を解説します。

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実験的な作品を主催してくれたIRET財団に感謝します。

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<li>Fernández, M., Baldassarro, V. A., Sivilia, S., Giardino, L., Calzà, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+severely+alters+thyroid+hormone+signaling+in+the+central+nervous+system+during+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+rat%3A+direct+impact+on+OPCs+differentiation+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Inflammation severely alters thyroid hormone signaling in the central nervous system during experimental allergic encephalomyelitis in rat: direct impact on OPCs differentiation failure.</a> Glia. 64, 1573-1589 (2016).</li>
<li>Baldassarro, V. A., Marchesini, A., Giardino, L., Calzà, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+glucose+deprivation+on+the+survival+of+fetal+versus+adult+neural+stem+cells-derived+Oligodendrocyte+Precursor+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Differential effects of glucose deprivation on the survival of fetal versus adult neural stem cells-derived Oligodendrocyte Precursor Cells.</a> Glia. , 23750(2019).</li>
<li>Merrill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+pharmacological+models+to+assess+demyelination+and+remyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo pharmacological models to assess demyelination and remyelination.</a> Neuropsychopharmacology. 34, 55-73 (2009).</li>
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<li>Dincman, T. A., Beare, J. E., Ohri, S. S., Whittemore, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cortical+mouse+oligodendrocyte+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation of cortical mouse oligodendrocyte precursor cells.</a> Journal of Neuroscience Methods. 209, 219-226 (2012).</li>
<li>Fancy, S. P. J., Chan, J. R., Baranzini, S. E., Franklin, R. J. M., Rowitch, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+regeneration%3A+a+recapitulation+of+development%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Myelin regeneration: a recapitulation of development.</a> Annual Review of Neuroscience. 34, 21-43 (2011).</li>
<li>Franklin, R. J. M., Ffrench-Constant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+CNS+Myelin+-+from+mechanisms+to+experimental+medicines%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Regenerating CNS Myelin - from mechanisms to experimental medicines.</a> Nature Reviews Neuroscience. 18, 753-769 (2017).</li>
<li>Baldassarro, V. A., Marchesini, A., Giardino, L., Calzà, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PARP+activity+and+inhibition+in+fetal+and+adult+Oligodendrocyte+Precursor+Cells%3A+effect+on+cell+survival+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">PARP activity and inhibition in fetal and adult Oligodendrocyte Precursor Cells: effect on cell survival and differentiation.</a> Stem Cell Research. 22, 54-60 (2017).</li>
<li>Leong, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+Progenitor+Cells+%28OPCs%29+from+adult+human+brain+expressed+distinct+microRNAs+compared+to+OPCs+in+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte Progenitor Cells (OPCs) from adult human brain expressed distinct microRNAs compared to OPCs in development.</a> Neurology. 82, (2014).</li>
<li>Bribián, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+heterogeneity+of+mouse+and+human+brain+OPCs%3A+relevance+for+preclinical+studies+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Functional heterogeneity of mouse and human brain OPCs: relevance for preclinical studies in multiple sclerosis.</a> Journal of Clinical Medicine. 9, 1681(2020).</li>
<li>Jäkel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+Human+Oligodendrocyte+Heterogeneity+In+Multiple+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Altered Human Oligodendrocyte Heterogeneity In Multiple Sclerosis.</a> Nature. 566, 543-547 (2019).</li>
<li>Medina-Rodríguez, E. M., Arenzana, F. J., Bribián, A., de Castro, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+isolate+a+large+amount+of+functional+oligodendrocyte+precursor+cells+from+the+cerebral+cortex+of+adult+mice+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Protocol to isolate a large amount of functional oligodendrocyte precursor cells from the cerebral cortex of adult mice and humans.</a> PloS One. 8, 81620(2013).</li>
<li>Baldassarro, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+pure-neuronal+and+neuron-astrocyte+mixed+primary+culture+subjected+to+oxygen-glucose+deprivation%3A+the+contribution+of+poly%28ADP-Ribose%29+polymerases+and+caspases%5BTitle%5D)+AND+%22Microchemical+Journal%22%5BJournal%5D)">Cell death in pure-neuronal and neuron-astrocyte mixed primary culture subjected to oxygen-glucose deprivation: the contribution of poly(ADP-Ribose) polymerases and caspases.</a> Microchemical Journal. 136, 215-222 (2018).</li>
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著者らは開示するものは何もない。

髄鞘化/再髄化プロセスと脱髄事象の複雑な性質により、インビトロシステムの予測開発は非常に困難です。最も広く使用されているインビトロ薬物スクリーニングシステムは、主にヒト細胞株または一次純粋なOL培養物であり、より複雑な共培養またはorganotypicシステム15の使用が増加している。そのようなシステムが高いコンテンツ技術と結合されていても、純粋なOL培養はスクリーニングプラットフォーム16を開発する際の選択の方法であり続ける。
ここで説明する自発的混合培養は、生理学的T3媒介OPC分化、プロセスに対する病理学的干渉、他の細胞成分、および年齢関連の違いなど、すべての主要な変数を考慮に入れている有用なインビトロ系を表す。この手順には、細胞の起源(動物の年齢)と回転楕円体の形成と操作から派生する変数が数多く含まれています。実際、重要なステップは、組織からの分離後に播種するNSCの細胞密度であり、最適な状態では単一の球体が単一の増殖細胞から派生する必要があるためである。孤立したNSCは凝集する...

中枢神経系(CNS)では、ミエリン形成細胞(オリゴデンドロサイト、OLs)およびその前駆体(オリゴデンドロサイト前駆細胞、OPC)が発達性髄鞘形成、出生前後の期間に起こるプロセス、および成人期におけるミエリンの代謝および修復(remyelieli)を担う。これらの細胞は高度に特殊化されており、他のすべてのグリアおよび神経細胞成分と解剖学的かつ機能的に相互作用し、CNSの構造と機能の基本的な部分を占めています。
脱髄事象は、異なるCNS傷害および疾患2に関与し、主に発達中および成人期の両方の多因子メカニズムを用いてOPCおよびOLsに作用する。未分化前駆体は、主に甲状腺ホルモン(TH)の分化因子によって駆動され、OPCが増殖を誘発する特定の刺激を認識して応答し、非髄系軸索への移行、および成熟したOLへの分化を導く同期プロセス3 において、ミエリン鞘4を発症する。これらのプロセスはすべて細かく制御され、複雑な環境で発生します。
髄鞘化、再髄鞘化、脱髄イベントの複雑な性質により、基底のメカニズムを研究し、新しい治療戦略を開発するための簡単で信頼性の高いin vitro方法が非常に必要です。
in vitroシステムが信頼できるように、細胞環境の複雑さ、細胞内の細胞内の違い、生理学的TH媒介分化、病理学的メカニズム、およびデータの堅牢性を考慮する必要があります。実際、現場でのアンメットニーズは、生体内状態の複雑さを模倣するモデルであり、単離された純粋なOPC培養物の使用によって達成されない。また、脱髄事象の2つの主要成分である炎症および低酸素/虚血(HI)は、APCの生理的分化および成熟に間接的に影響を及ぼす可能性のある他の細胞成分を直接関与し、体外モデルでは過度に単純化できない側面である。
高度な予測型の文化システムから始めて、その後のより一般的な課題は、堅牢で信頼性の高いデータの生成です。この文脈において、細胞系高含有スクリーニング(HCS)は最も適した技術7であり、我々の目的は、まず、自動ワークフローで培養全体を分析し、代表分野を選択する偏りを回避し、第2に、イメージングベースの高コンテンツデータ8の自動かつ同時生成を得ることを目的としている。
インビトロ簡略化と生体内模倣の複雑さの間で最良のバランスを達成することが主な必要性であることを考えると、ここでは胎児前脳と成体心室領域(SVZ)から分離された神経幹細胞(NSC)に由来するOPCを得るための非常に再現可能な方法を提示する。このインビトロモデルは、多能性NSCから成熟/髄形成OLまで、生理学的TH依存的な方法で、OPC分化プロセス全体を包含する。結果として生じる培養は、主に分化するOPCとアストロサイトからなる自発的な共培養を生じ、ニューロンの割合が低い、動的に分化/交配するシステムである。この一次培養は、生体内環境における複合体をよりよく模倣し、その幹細胞誘導により、必要な細胞系統の濃縮を得るための単純な操作を可能にする。
細胞株または一次性APCの純粋な培養物を用いた他の薬物スクリーニング戦略とは対照的に、ここで説明する方法は、所望の細胞タイプに焦点を失うことなく、複雑な環境における病理学的干渉または治療分子の効果の研究を可能にする。HCSワークフローは、細胞生存率と系統仕様の分析、ならびに系統特異的細胞死および形態学的パラメータの分析を可能にする。

<table><tbody><tr><td>96 ウェルプレート - 未処理</td><td>の NUNC</td><td>267313</td><td></td></tr><tr><td>B27 サプリメント (100x)</td><td>GIBCO</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>塩基性線維芽細胞成長因子 (bFGF)</td><td>GIBCO</td><td>PHG0024</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>毛様体神経向性因子 (CNTF)</td><td>GIBCO</td><td>PHC7015</td><td></td></tr><tr><td>DMEM w/o グルコース</td><td>GIBCO</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 GlutaMAX</td><td>GIBCO</td><td>31331-028</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025-150KU</td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>GIBCO</td><td>14155-048</td><td></td></tr><tr><td>上皮成長因子(EGF)</td><td>GIBCO</td><td>PHG6045</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>GIBCO</td><td>14170-088</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>GIBCO</td><td>15630-056</td><td></td></tr><tr><td>ヒアルロニダーゼ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3884</td><td></td></tr><tr><td>IFN-&γ;</td><td>Origene</td><td>TP721239</td><td></td></tr><tr><td>IL-17A</td><td>Origene</td><td>TP723199</td><td></td></tr><tr><td>IL-1&beta;</td><td>Origene</td><td>TP723210</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>Origene</td><td>TP723240</td><td></td></tr><tr><td>ラミニン</td><td>GIBCO</td><td>23017-051</td><td></td></tr><tr><td>N-アセチル-L-システイン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>N2 supplement (50x)</td><td>GIBCO</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>非酵素的解離バッファー</td><td>GIBCO</td><td>13150-016</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO</td><td>70011-036</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>血小板由来成長因子 (PDGF-AA)</td><td>GIBCO</td><td>PHG0035</td><td></td></tr><tr><td>poly-D,L-ornitine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4957</td><td></td></tr><tr><td>TGF-&beta;1</td><td>Origene</td><td>TP720760</td><td></td></tr><tr><td>TNF-&alpha;</td><td>Origene</td><td>TP723451</td><td></td></tr><tr><td>トリヨードチロニン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2752-1G</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1426</td><td></td></tr></tbody></table>

胎児および成人神経幹細胞由来オリゴデンドロビテ前駆細胞培養の高含有スクリーニング分化と成熟解析

High-Content Screening Differentiation and Maturation Analysis of Fetal and Adult Neural Stem Cell-Derived Oligodendrocyte Precursor Cell Cultures

複雑な疾患における治療戦略の有効性を評価するための薬物スクリーニング技術の開発における主なハードルは、生体内環境における複雑な簡素化と複雑なインビボ環境の再現と、すべてのスクリーニング戦略によって共有される主な目的とのバランスを取り、堅牢で信頼性の高いデータを得ることです。
脱髄疾患の分野では、薬物スクリーニング戦略の大半は、新生児動物からの単離された原発オリゴデンドロサイト前駆細胞(OpCs)の不死化細胞株または純粋な培養物に基づいており、年齢に関連する差異の欠如および実際の病理学的状態または複雑さによる強い偏見をもたらす。
ここでは、脱髄性疾患に典型的な病理的状態を模倣するために容易に操作できる神経幹細胞(NSC)由来のOpPCの生理的分化/成熟をモデル化することを目的としたin vitroシステムの設定を示す。さらに、この方法には胎児および成人の脳からの分離が含まれており、アストロサイトを含む自発的な共培養において、OPCから成熟したオリゴデンドロサイト(OLs)に動的に分化するシステムを与える。このモデルは、甲状腺ホルモン媒介性骨髄化およびミエリン修復プロセスに生理的に似ており、疾患メカニズムをモデル化する病理学的干渉者の追加を可能にする。脱髄性疾患(低酸素/虚血および炎症)の2つの主要成分を模倣する方法を示し、発達髄鞘化および成人ミエリン修復への影響を再現し、システムのすべての細胞成分を全体に考慮しながら、OpPcの区別に焦点を当てています。
この自発的混合モデルは、細胞ベースの高含有スクリーニング技術と相まって、脱髄に関与する病理学的プロセスとの闘いと再髄化を誘発することを目的とした治療戦略のための堅牢で信頼性の高い薬物スクリーニングシステムの開発を可能にする。

培養の第1段階は、播種密度と球体が胎児または成人起源であるかどうかによって、持続時間が異なる場合がある。さらに、オリゴスフィアは、神経球と比較して倍増する人口の減少を示す(図1B)。さらに、成体組織からの球体の生成は遅く、播種密度に応じて1~2週間かかる胎児と比較して、オリゴ球の生成に2~3週間かかる場合があります。
播種したら、培養物の全分化段階を系統特異的抗体を用いてモニタリングすることができる。このプロトコルの目的は、分化の最終段階を研究することなので、0のDIVでの培養組成は提示されない。しかしながら、第1培養段階では、細胞は依然としてネチン陽性であり、神経前駆体を表し、細胞の大部分もNG2陽性(OPC)11である。プレOL段階に対応するCNPase陽性細胞は、T3媒介分化誘導の3~6日後に検出可能となり、MBP陽性細胞は6~12個のDIV(成熟したOL、分化段階終了時の培養組成については図2C参照)の間に出...

成熟したオリゴデンドロサイトに分化する胎児または成体の神経幹細胞に由来するアストロサイトとオリゴデンドロサイト前駆細胞の混合培養の生成と、有害刺激のインビトロモデリングについて述べています。細胞ベースの高含有スクリーニング技術との結合は信頼でき、強い薬物スクリーニングシステムを造る。

The main hurdle in developing drug screening techniques for assessing the efficacy of therapeutic strategies in complex diseases is striking a balance ...

このプロトコルは、分化オリゴデンドロサイト前駆細胞と星状細胞を含む神経幹細胞由来の自発的混合培養物の年齢特異的分離、病理学的状態を模倣するアッセイ、および堅牢で高含有量の読み出しを組み合わせたものです。これらの特徴は、生理学的および病理学的状態および星状細胞の寄与を考慮した微小環境における発達髄鞘化および成人再髄形成を差異的に研究することを可能にする。胚性13.5日目から14.5日目の胎児前脳からの神経幹細胞分離のために、胚の頭部を氷冷PBSできれいなペトリ皿に入れ、鉗子を使って拡大の下で頭蓋骨から皮膚を取り除く。脳が見え、皮膚から取り除いたら、鉗子を使って頭蓋骨から脳を絞り出し、小脳を取り除きます。鉗子を使用して髄を取り除き、単離した組織を非酵素解離緩衝液に入れる。脳組織のすべてが単離されたら、1.5ミリリットルチューブあたり150マイクロリットルの非酵素解離バッファーで2〜3サンプルを引っ張り、連続的な揺れで摂氏37度で15分間チューブをインキュベートします。インキュベーションの最後に、各チューブとピペットに850マイクロリットルの標準媒体を加えて、懸濁液に塊がなくなるまで混合します。解約されていない組織がまだ見える場合は、サンプルを2分間休ませて、組織がチューブの底に落ち着くようにします。解離が完了すると、T25またはT45フラスコ中の神経圏培地濃度の10〜30ミリリットルで1マイクロリットル当たり10〜50細胞の密度でプレート細胞を、細胞結合を防止するために、細胞培養インキュベーターにフラスコを垂直位置に置いた。生後2.5ヶ月の成体マウスから、4匹から5匹の成体マウスの脳を氷冷HBSSの50ミリリットルチューブに入れ、マイナス20度の一晩冷たい水で満たされた無菌アルミニウム箔で覆われたフラスコの上の1つの脳、腹側を下に置く。カミソリの刃を使用して嗅球を取り除き、皮質から光学チアスマに厚さ1ミリメートルのコロナスライスを2~3個カットします。冷たい表面にスライスを心室の側寄りの位置に置き、コーパス・カロスムと2つの側心室を識別します。倍率を使用して、側心室の壁を分離し、コーパス梁の破片を含めないように注意し、37°Cで15分間の酵素解離バッファーの5〜10ミリリットルに単離された組織を置きます。インキュベーションの終わりに、組織を少なくとも50回ピペットしてから、さらに10分間摂氏37度でサンプルをインキュベートする。インキュベーションの最後に、5ミリリットルの標準的な培養培地でトリプシンを中和し、70ミクロンのフィルターを介して組織懸濁液を濾過する。濾過溶液を400回gで5分間遠心し、2回目の遠心分離のためにスクロース溶液中のペレットを再懸濁した。遠心分離の終わりに、別の遠心分離のためにウシ血清アルブミン洗浄液中のペレットを再中断し、次に、細胞を直立T-25またはT-45フラスコにプレートする標準培養液中のペレットを再中断し、プレートする。一次神経球分化の場合、2日ごとに神経幹細胞培養に基本的な線維芽細胞および内皮成長因子を加える。神経球が直径100~500ミクロンに達すると、標準的なプロトコルに従って機械的解離によって細胞を通過する。オリゴスフィア分化の場合、2日ごとに血小板由来因子AAの基本的な線維芽細胞増殖因子を有する細胞を治療する。オリゴスフィアが直径100~150ミクロンに達したら、標準的なプロトコルに従って機械的解離によって球体を解離し、細胞懸濁液を3000細胞/平方センチメートルの密度でポリDL-オルニチンラミニンコーティングプレートに播種します。3日後、各培養物の上清を同量のオリゴデンドロシテ分化培地に交換する。炎症媒介分化ブロック誘導を行うために、神経圏解離後およびオリゴスフェア産生時に、目的のサイトカインミックスを培養培地に添加する。酸素グルコース欠乏細胞死を誘導するために、マルチウェルプレートに播種した2日後に、上清を各培養物からマルチウェルプレートの個々のウェルに移す。井戸にOGD培地の半分の体積を加え、95%の窒素と5%の二酸化炭素で飽和気密性低酸素室に培養液を移します。チャンバーを細胞培養インキュベーターに入れます。3時間後、チャンバー内の培地を、マルチウェル培養プレートから取り除いた培地に交換します。細胞染色の品質を確認した後、高コンテンツスクリーニングソフトウェアの取得メニューで、固定露光時間とミニスキャンを選択し、1つのウェルあたり10のフィールドと実験条件ごとに2つのウェルを選択して、プレート全体に対してフィールドのサブセット内の分析パラメータを設定できるようにします。ワークフローに従って、アルゴリズム全体を開発します。各チャンネルの[プロセスイメージ]を選択し、[バックグラウンド除去]をクリックして、希望の信号レベルを選択します。核染色によって核を識別して選択するには、「主オブジェクトを識別」をクリックし、しきい値を調整して単一の核を識別し、「プライマリオブジェクトを検証」をクリックして、オブジェクト領域と位置に基づいてしきい値を設定します。特定の系統マーカーに対応する各チャンネルのスポットを識別するをクリックし、リング値の幅を3に、距離をゼロに設定して、細胞プラズマ蛍光を識別できるようにします。分析を構築し、核サイズと核染色強度に基づいて凝縮核の自動カウントを可能にするワークフローの参照レベルを選択し、リングによって識別された細胞プラズマ蛍光に基づく特定のマーカー陽性細胞の、再生をクリックします。培養の第1段階では、神経幹細胞はネスチン発現を維持する。細胞の大部分はNG2陽性でもある。前オリゴデンドロサイトステージに対応するCNPase陽性細胞は、T3媒介分化誘導の3〜6日後に検出可能であり、一方、成熟したMBP陽性オリゴデンドロサイトは、インビトロで6〜12日後に有意な割合で現れる。高含有スクリーニング分析により、核染色および蛍光強度解析を通じて培養中の単一細胞の検出が可能になります。分化段階の終わりに培養物の組成は、T3媒介分化に対する胎児培養の反応が良く、成熟したオリゴデンドロサイトの割合が高い胎児の起源の培養物であるかによって異なる。なお、神経幹細胞由来オリゴデンドロサイト前駆細胞を高密度で播種すると、凝集し、凝集し、凝集したアストロサイトを複製すると、結合細胞層が急速に生成され、成熟したオリゴデンドロサイトの特徴的なクモ正味形状の観察が妨げられることに注意してください。炎症媒介性の分化遮断は、胎児および成人培養の両方でCNPaseおよびMBP染色によって検出される前および成熟したオリゴデンドロサイトの強い減少を誘発する。オリゴデンドロサイト前駆細胞の数の増加は、サイトカイン処理された成体培養においても起こる。胎児および成人オリゴデンドロサイト前駆細胞は炎症性サイトカイン曝露に対して同じことを示しているが、胎児由来の培養物だけが酸素グルコース欠乏毒性に敏感である。この方法は、あらゆる種類のオリゴデンドロシ細胞、分化および成熟妨害プロセスで実施し、髄鞘化または再髄鞘化に影響を及ぼす疾患との闘いを目的とした新しい戦略をテストすることができる。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

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オリゴデンドロサイト前駆体に胚性幹細胞の分化

この記事では、成熟オリゴデンドロサイト（OLS）を生成するために差別化初代培養におけるマウスのオリゴデンドロサイト前駆細胞体（OPC）の豊かな集団を、導出する方法を説明します。さらに、この報告書はマウス後根神経節ニューロン（DRGNs）の神経突起ベッドの上にマウスのOPCを播種によってマウスmyelinating共培養を生成する手法を説明します。...

出生後のマウス組織から培養オリゴデンドロサイトと共培養Myelinatingニューロン/オリゴデンドロサイトエンリッチドの導出

プライマリ、ヒト胎児脳由来、多能性前駆細胞は増殖...

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成体マウス神経幹細胞からのオリゴデンドロサイトとアストロサイトの混合培養物の取得

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ヒト胚性幹細胞のオリゴデンドロサイトへの分化

このビデオは、ヒト誘導ニューロン(iN)と誘導オリゴデンドロサイト前駆細胞(iOPC)の共培養の確立を示しています。iNは、共培養でiOPCと混合され、その後、両方のiNがニューロンに、iOPCがオリゴデンドロサイトに成熟するのをサポートするためにインキュベートされます。ニューロンは他のニューロンやオリゴデンドロサイトとシナプス結合を形成し、オリゴデンドロサイトはニューロンの軸索の周りにミエリン鞘を発達させます。...

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三次元培養、マイクロRNAの分析と推定標的遺伝子上のヒト神経幹細胞株の分化

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デュアル赤外線蛍光スキャンを用いてラットオリゴデンドロサイト前駆細胞培養およびOligodendrogenesisの定量化の準備

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神経変性におけるニューロンとグリアの相互作用は、ツールや方法が不十分なため、よく理解されていません。ここでは、ヒト多能性幹細胞から誘導されたニューロン、希突起膠細胞前駆細胞、および希突起膠細胞を取得するための最適化されたプロトコルについて説明し、アルツハイマー病における細胞種特異的な寄与を理解する上でのこれらの方法の価値の例を提供します。...

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学ぶ神経幹細胞由来オリゴデンドロビテ前駆細胞の高含有スクリーニング分化と成熟解析。胎児および成人マウス由来細胞を用いた混合培養モデルで、脱髄性疾患治療薬のスクリーニングに応用可能な手法を解説します。

胎児および成人神経幹細胞由来オリゴデンドロビテ前駆細胞培養の高含有スクリーニング分化と成熟解析

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