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方法論記事

マウスにおける経胸壁ドブタミンストレス心エコー法による心機能の微妙な変化の解明

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DOI:

10.3791/62019

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2021年2月13日

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この記事について

サマリー

左心室機能障害は、多くの心臓疾患の最終的な共通経路を構成しています。ここでは、心疾患のマウスモデルの左心室機能の包括的な評価と心臓表現型のための経胸壁ドブタミンストレス心エコー検査アプローチの詳細なプロトコルを提供します。

要約

左心室(LV)機能障害は、多数の心臓疾患の最終的な経路を開きます。ヒトにおける非侵襲的な高周波経胸壁ドブタミンストレス心エコー法により、心機能の微妙な変化を明らかにする還元主義的な調査アプローチが可能になりました。ここでは、この手法をマウスで使用するためのプロトコルを提供し、生理学および病理学におけるLVアーキテクチャと機能の拡張分析を促進し、ストレスのない心臓に隠された心臓病のモデルの変化の観察を可能にします。この調査は、1匹の同じ動物で実施でき、基礎的および薬理学的にストレス誘発性の測定の両方が可能です。適切な麻酔、画像ベースのLV分析、観察者内および観察者間の変動性の考慮、およびドブタミンの腹腔内注射後にマウスで達成できる正の強心反応を得るための詳細な基準を概説します。小動物モデルにおけるヒトの生理学と疾患の特性を再現するために、評価における重大な落とし穴、例えばマウスにおける顕著なバウディッチ効果を強調します。トランスレーショナルの目的をさらに達成するために、ヒトとマウスにおけるストレス誘発効果を比較します。トランスレーショナルスタディに用いる際には、マウスとヒトの生理学的な違いに注意を払う必要があります。実験の厳密さから、マウスモデルでは空間的および時間的解像度の制限により、患者で評価された一部のパラメータは注意してしか使用できないことが示されています。

概要

ヒトの多くの心臓病の特徴は、左心室(LV)の収縮期および/または拡張期の機能障害です。構造異常の検出、診断、収縮期心不全の管理、および心不全の症状のある患者の拡張期機能の評価には、心エコー検査が基本的な評価方法として使用されます。

症状は非特異的であり、心不全の臨床症候群の患者の3分の1以上が実際の心不全に苦しんでいない可能性があるため、患者の臨床症状1に対して客観的な心エコー図の相関を見つけることが重要です。さらに、休息状態または静止状態では潜在性であるいくつかの症状は、活動またはストレスの条件下で発生する可能性があります。冠動脈疾患の患者では、冠動脈灌流のすでにわずかな変化が局所壁運動異常につながる可能性があります。しかし、これらの微妙な変化は、ストレスのない心臓に心疾患の変化が隠れている可能性があるため、従来の心エコー検査では評価できません。心臓の生理病理学をより深く理解するために、ストレス心エコー検査は、運動または薬理学的に誘発されたストレスの条件下での心筋の構造と機能の動的評価を提供し、症状と心臓所見を一致させることができます2。また、小動物では、この方法は非侵襲的で信頼性の高い生体内ツール3,4,5

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プロトコル

すべての方法と手順は、関連するすべての規制(「実験およびその他の科学的目的で使用される脊椎動物の保護に関する欧州条約」(指令2010/63/EU))に従って実施され、動物の飼育は施設のガイドラインに従って行われました。ヒト被験者からのデータは、人間の福祉に関するすべての機関、国内、および国際的なガイドラインに準拠して分析され、地方倫理委員会(20-9218-BO)によって承認されました。すべての実験は、12週齢の雄C57BL/6JRjで行われました。

1. 資機材の準備

注: 図1 は、小動物の超音波検査作業場の例を示しています。

  1. 調光可能な照明を備えた静かで制御された環境で操作してください。
  2. 超音波ゲルを予熱します(例:ゲルウォーマーを使用して)。ゲルを37°Cまで温めます。 これには時間がかかる場合があります。
  3. プラットフォームを含むすべての器具を消毒用ワイプで清掃します。
  4. 電源を入れ、プラットフォームを37°Cに予熱します。
  5. 超音波装置の電源を入れます。動物IDとプロトコルID、およびその他の関連情報を入力します。体重が約30 gのマウスには、中心透過が30 MHzの高周波超音波トランスデューサを使用します。
  6. アクティブガス排出システ....

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結果

PSLAXで取得した生理学的無負荷心エコー画像を図3に示します。拡張期では、心室壁は均一に現れ(図3A)、ある程度厚くなります(図3B、C)。5 μg/g体重のドブタミンi.p.の注射は、心拍数(正のクロノトロピック効果)12およびLVEF(正の変力効果)の有意な増加をもたらす(図3、図6)。正の変力効果は、拡張期の左室前壁の肥厚 (LVAWd) と、収縮期 (LVAWs) と拡張期および収縮期の左室後壁 (LVPWd;LVPW) (図 3D

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ディスカッション

ストレスによる心機能の評価は、運動試験や薬理学的ストレス試験を用いた臨床現場でヒトに広く用いられている6,7。マウスの運動直後の心エコー検査は鎮静の必要性のために非常に限られているため、ドブタミン誘発性ストレス心エコー検査は、ストレス誘発性心臓生理病理を評価するための最もトランスレーショナルな方法である可能性が高いです。心機能に関する信頼できる情報は、最終アプローチ23におけるリアルタイムの圧力-体積分析を用いて得ることができる。心エコー検査は、長期的な検査に貴重な洞察を追加するため、3Rの原則(交換、削減、改良)の要件をさらに満たします。

患者におけるストレス心エコー検査の最も一般的な使用法は、壁の異常と心筋の生存率の検索、ならびに心臓弁膜症の評価であり、その重要性は最近のガイドライン24,25

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開示事項

著者は何も開示していません。

謝辞

著者らは、以下の資金源を認めています:ドイツ研究財団(UMEAジュニア臨床科学者、シュテファン・セッテルマイヤー;RA 969/12-1、ティエヌシュ・ラサフ;HE 6317/2-1, Ulrike Hendgen-Cotta), Else-Kroener-Fresenius-Stiftung (2014_A216, Tienush Rassaf).

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
活性炭フィルターUNO BV180000140http://www.unobv.com/Rest%20Gas%20Filters.html
Aquasonic 100超音波透過ジェルカー研究所001-02https://www.parkerlabs.com/aquasonic-100.asp
化学脱毛ローション一般供給-
綿スワップ一般供給-
ddH2O一般供給-
ドブタミンカリノファーム71685.00.00
https://www.carinopharm.de/stammsortiment/#103 実験動物麻酔用流量計UNO BVSF3http://www.unobv.com/Flowmeters.html
ガス排気ユニットUNO BVhttp://www.unobv.com/Gas%20Exhaust%20Unit.html
加熱ランプフィリップス誘導
ボックスUNO BV-http://www.unobv.com/Induction%20box.html
医療用鋭利物コンテナBD305626 https://legacy.bd.com/europe/safety/de/products/sharps/
MX400超音波トランスデューサー(20-46 Mhz)VisualSonicsMX400https://www.visualsonics.com/product/transducers/mx-series-transducers
Octenisept消毒剤Schuelke173711https://www.schuelke.com/de-de/produkte/octenisept.php
Omnican F注射針付き1mlB.ブラウン9161502Shttps://www.bbraun.de/de/products/b60/omnican-f.html
ペーパータオル一般供給-
Signacreme電極クリームパーカー研究所017-05https://www.parkerlabs.com/Signacreme.asp
標準ガーゼパッドBeeSana Meditrade4852728
https://www.meditrade.de/de/wundversorgung/verbandstoffe/beesana-mullkompresse/ Thermasonicゲルウォーマーパーカー研究所82-03-20 CEhttps://www.parkerlabs.com/thermasonic_apta_sbp.asp
トランスポアテープ3M1527NP-0https://www.3mdeutschland.de/3M/de_DE/unternehmen-de/produkte/~/3M-Transpore-Fixierpflaster/
気化器 シグマデルタUNOBV-http://www.unobv.com/Vaporizers.html
Vevo 3100 高周波前臨床超音波イメージングシステムVisualSonicsVevo3100https://www.visualsonics.com/product/imaging-systems/vevo-3100 * 必要なソフトウェアパッケージ: 心臓血管パッケージ;Bモード、Mモード、パルス波ドップラーモード
Vevoイメージングステーション、レールシステム、加熱プラットフォーム、生理モニタリングユニット内蔵VisualSonics-https://www.visualsonics.com/product/accessories/imaging-stations
VevoLab解析ソフトウェアVisualSonicsVers. 3.2.5https://www.visualsonics.com/product/software/vevo-lab *必要なソフトウェアパッケージ:Vevo Strain, LV analysis
パー

参考文献

  1. Oh, J. Echocardiography in heart failure: Beyond diagnosis. European Journal of Echocardiography. 8 (1), 4-14 (2007).
  2. Lancellotti, P., et al.

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