Name: 哺乳類精子細胞の原形質膜を横切る電流の記録 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 学ぶパッチクランプ法による哺乳類精子細胞の電気生理学的記録技術。CatSperカルシウムチャネルなどのイオンチャネル活性を測定し、精子運動や男性不妊症の分子メカニズム解明に貢献する方法です。

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<table><tbody><tr><td>DIC光学機器を搭載したIX71</td><td>オリンパス社</td><td>IX71</td><td>Nikon TiU顕微鏡も使えます</td></tr><tr><td>UplanSApo 60x</td><td>オリンパス社</td><td></td><td>水没の目的</td></tr><tr><td>振動減衰エアテーブル</td><td>ニューポート社</td><td></td><td>TMCエアテーブルなどが使えます</td></tr><tr><td>アクソパッチ&トレード;200Bアンプ</td><td>Axon&trade;&nbsp;/分子デバイス</td><td></td><td>Sutter IPA&reg;/ダブルIPA&reg;統合パッチクランプシステムも優れたアンプ</EMです></td></tr><tr><td>Axon Digidata アナログからデジタルへの変換器</td><td>Axon&trade;&nbsp;/分子デバイス</td><td>1440年または1550年</td><td>も使えます</td></tr><tr><td>蒸気圧浸透圧計</td><td>ウェスコール</td><td>モデル5600</td><td></td></tr><tr><td>MPC 385 マイクロマニピュレーター</td><td>サター・インスツルメンツ、ノバト(カリフォルニア州)</td><td>MPC 385</td><td>エッペンドルフのマイクロマニピュレーター「トランスファーマン」シリーズも使用可能です</td></tr><tr><td>マイクロピペットプラー</td><td>サター・インスツルメンツ、ノバト(カリフォルニア州)</td><td>P1000</td><td>P97は使用可能です</td></tr><tr><td>マイクロフォージ</td><td>成重</td><td>MF-830</td><td><>にはNikon MPlan 100/0.80 ELWD 210/0 objective</emを装備してください></td></tr><tr><td>ファラデーケージ</td><td>自家製</td><td></td><td><エム>環境の電気的干渉から環境を遮蔽するために</td></tr><tr><td>&nbsp;5mmガラスカバースリップ</td><td>WPI</td><td>&nbsp;#502040</td><td></td></tr><tr><td>灌流室</td><td>ワーナー・インストゥルメンツ社</td><td>&nbsp;RC-24E</td><td></td></tr><tr><td>ホウケイ酸ガラス毛管</td><td>サター・インスツルメンツ、ノバト(カリフォルニア州)</td><td>BF 150-85-7.5</td><td><外径>1.5mm、内径0.86mm、内側フィラメント</td></tr><tr><td>テフロンマニホールド MP-8</td><td>ワーナー・インストゥルメンツ社</td><td>64-0211</td><td>テフロン8ポジションパーフュージョンマニホールド</td></tr><tr><td>ナンク4ウェルプレート</td><td>ナンク</td><td>#179820</td><td></td></tr><tr><td>1×HTFバッファ</td><td>エンブリオマックス</td><td>MR-070-D</td><td>容量ソリューション</td></tr><tr><td>SA-Oly/2段アダプター</td><td>ワーナー・インストゥルメンツ社</td><td>シリーズ20プラットフォーム向け</td><td>オリンパス顕微鏡専用</td></tr><tr><td>磁気加熱プラットフォーム</td><td>ワーナー・インストゥルメンツ社</td><td>PM-1または類似シリーズ</td><td>RC-24Eチャンバーを保持</td></tr><tr><td>MAG-1磁気クランプ</td><td>ワーナー・インストゥルメンツ社</td><td>#64-0358</td><td></td></tr><tr><td>2mm Ag/AgClペレットを搭載したマイクロ電極ホルダー</td><td>WPI</td><td>MEH3F4515</td><td></td></tr><tr><td>ルアーと関係のあるストップコック;4ウェイ;オスロック</td><td>コール・パーマー社</td><td>EW-30600&ndash;09</td><td></td></tr><tr><td>メスルアーホースバーブアダプター、1/16インチ</td><td>コール・パーマー社</td><td>EW-45508&ndash;00</td><td></td></tr><tr><td>ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)灌流管</td><td>コール・パーマー社</td><td>EW-06417&ndash;21</td><td><>(マイクロボアPTFEチューブ、0.022インチ)識別・時間;0.042インチOD)</td></tr><tr><td>シリコーンコネクターチューブ(プラチナ硬化シリコーンチューブ、1/32インチ)識別・時間;3/32インチOD)</td><td>コール・パーマー社</td><td>EW-95802&ndash;01</td><td></td></tr><tr><td>マニホールドコネクターチューブ(PTFEチューブ、1/32インチ)識別・時間;1/16インチOD)</td><td>コール・パーマー社</td><td>EW-06407&ndash;41</td><td></td></tr><tr><td>オス・ルアーシリーズバーブアダプター、1/16インチ</td><td>コール・パーマー社</td><td>45518&ndash;00</td><td></td></tr><tr><td>オス・ルアー一体型ロックアダプター 1/8インチ</td><td>コール・パーマー社</td><td>45-503-04</td><td></td></tr><tr><td>シリコーンコネクターチューブ</td><td>ダウ・シリコーン社;&nbsp;ミ</td><td>#508-008</td><td></td></tr><tr><td>注射器</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック、またはVWR</td><td>エアタイト、ノーム・ジェクト・ルアー</td><td><1 mL、3 mL、20 mL></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>60216</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 x 7.H2O</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 x 2.H2O</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>21097</td><td></td></tr><tr><td>ヘペス</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>H7523-250G</td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>乳酸ナトリウム(60%水/水)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>L7900</td><td></td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>BCBG2421V</td><td></td></tr><tr><td>CSMeso3</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>C1426</td><td><エム>セシウムメタンスルホン酸</エム></td></tr><tr><td>KCl</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>BCBF5871V</td><td></td></tr><tr><td>トリスHCl</td><td>クオリティ・バイオロジカル</td><td>315-006-721</td><td>1 M溶液の類似</td></tr><tr><td>ナオ</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>221465</td><td></td></tr><tr><td>CSOH</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>胚瘤ヒト卵管液培地:</td><td>ミリポール</td><td>MR-070-D</td><td><マウス精子細胞の>キャパシテーション培地</td></tr><tr><td>(エンブリオマックス-HTF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><ストロング>アニマルズ</ストロング></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>オスのウィスターネズミ</td><td>ウィスター</td><td>ハーラン・ラボラトリーズ(カリフォルニア州リバモア)</td><td><>成体のラット</エム></td></tr><tr><td>オスのC57BL/6マウス</td><td>C57BL/6マウス</td><td>ハーラン・ラボラトリーズ(カリフォルニア州リバモア)</td><td><3〜6ヶ月>の赤ちゃん</td></tr></tbody></table>

哺乳類精子細胞の原形質膜を横切る電流の記録

Recording Electrical Currents across the Plasma Membrane of Mammalian Sperm Cells

Recording of the electrical activity from one of the smallest cells of a mammalian organism- a sperm cell- has been a challenging task for ...

recording-electrical-currents-across-plasma-membrane-mammalian-sperm

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

イメージングカルシウムのためのテクニック 2 +人間の精子でシグナリング

細胞内Ca測定<sup&gt; 2 +</sup4つの方法を使用して人間の精子で&gt;変更：従来の蛍光測定、停止フロー蛍光法、フローサイトメトリーおよび単一細胞イメージング

私たちは、ゼブラフィッシュ胚におけるマウスナーニューロンや他の網様体細胞からパッチクランプ記録を経由して電気的活動を記録し、監視するための完全な脳脊髄準備を開発しました。従って、我々は、発生中の胚における主要ニューロンから興奮性と抑制性シナプス電流、電位依存性チャネル活性および活動電位を記録することができる。...

胚ゼブラフィッシュマウスナー細胞からパッチクランプ記録

本発明者らは、ラット尾部精巣上体からの一次解離上皮細胞の電気的特性を測定するために、細胞分離および全細胞パッチクランプ記録を組み合わせたプロトコルを提示する。このプロトコルは、副睾丸の生理的役割をさらに解明するために、初代副睾丸上皮細胞の機能的特性の調査を可能にする。...

精巣上体から分離した一次上皮細胞の全細胞パッチクランプ記録

精子膜の完全性、精子の受精能力に関連付けられている携帯電話の機能を評価する方法論を紹介します。精子の膜の蛍光光度法による評価のための 3 つの技術について述べる:...

蛍光光度法による精子膜評価技術

ここでは、Ca2 +の効果の評価のための 2 つの媒体スループット アッセイ-ひと精子シグナリングと先体反応を示します。これらのアッセイは、迅速かつ容易に大量の Ca2...

Ca2 +の効果の評価のためのスクリーニング アッセイ中スループット-シグナリングおよびひと精子先体反応

マウス精子容量中の糖質および酸化リン酸化のリアルタイム変化を監視する細胞外フラックス分析装置の応用について説明する。...

細胞外フラックス分析装置を用いてマウス精子容量化時の糖質および酸化リン酸化の変化を測定する

ここで説明するAcroSensEマウスモデルおよび生細胞イメージング法は、精子先体細胞の細胞内コンパートメントにおけるカルシウム動態と、それらが膜融合および先体エキソサイトーシスにつながる中間ステップをどのように制御するかを研究するための新しいアプローチを提供します。...

生きたマウス精子における先体カルシウム動態とエキソサイトーシスのリアルタイムイメージング

外部電界が細胞の膜上に電圧を誘導する、誘起膜電位は（ΔΦ）と呼ばれる。電位差染料ジ- 8 - ANEPPSを使用して、それは非侵襲的にΔΦを測定することが可能です。このビデオは、di - 8 -...

ジ- 8 - ANEPPSで誘起膜電位の測定

このプロトコルは、フローサイトメトリーにより細胞質から細胞の形質膜へのGLUT4のトランスロケーションを定量化するために迅速なテクニックを説明します。...

フローサイトメトリーによる細胞膜へのGLUT4転の定量的測定

学ぶパッチクランプ法による哺乳類精子細胞の電気生理学的記録技術。CatSperカルシウムチャネルなどのイオンチャネル活性を測定し、精子運動や男性不妊症の分子メカニズム解明に貢献する方法です。

哺乳類精子細胞の原形質膜を横切る電流の記録

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