Name: 胆管TNBS輸液による慢性膵炎のマウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: 学ぶ胆管TNBS輸液法によるマウス慢性膵炎モデル作成技術。Von Freyモノフィラメントを用いた疼痛評価と組織学的変化の観察により、膵炎の病態と治療法研究に貢献します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、退役軍人省(VA-ORD BLR&DメリットI01BX004536)と国立衛生研究所の助成金#1R01DK105183、DK120394、およびHWにDK118529によってサポートされました。技術経験を共有してくれたホンジュ・ウー博士に感謝します。

すべての手順は、サウスカロライナ医科大学とラルフ・H・ジョンソン医療センターの施設動物ケアおよび使用委員会の承認を得て行われました。C57BL/6J雄マウスは、8〜10週齢の間に、この研究で使用された。マウスは、食物および水へのアドリビタムアクセスを伴う標準的な12光/12暗いサイクルの下に収容された。
1. 注射用TNBS溶液の調製
<ol><li>10%のエタノールを0.9%生理液に調製します。10%エタノールの1mLに7.5 μLを加えて、10%エタノールのストックTNBS( 材料表を参照)を最終濃度7.5mMに溶解します。 注意:TNBSは化学的危険を示します。フュームフードの中に溶液を準備し、手袋、ゴーグル、ラボコートなどの個人用保護具を使用して、TNBSとの直接接触を避けてください。</li>
	<li>0.75%TNBS溶液の50 μLを31ゲージ針でインシュリンシリンジにロードします。50 μLの10%エタノールをサリンにロードし、車両制御と同じサイズのシリンジにします。注射器を氷の上に置き、必要になるまで光から保護します。</li>
</ol>2. マウスの準備と手術
<ol><li>腹部の外科領域から髪を剃ります。</li>
	<li>手術前に鎮痛薬の先制用量(例えば、ブプレノルフィン0.1mg/kg i.p.)を注入する。</li>
	<li>1.5-2%のイオブルランと1 L/分の酸素で全身麻酔下でマウスを誘導し、維持する。足の指をつまんで、反射の欠如のために動物を観察することによって麻酔を確認します。</li>
	<li>手術中に加熱された外科用パッドの上にマウスを置きます。マウスが麻酔下にある場合は、各眼に獣医軟膏を塗布します。</li>
	<li>手術部位を2%ヨウ素で3倍拭き、続いて70%アルコール(材料表)を拭いて外科部位を消毒する。</li>
	<li>マイクロハサミで開腹術を行い、0.5〜1cmの切開を発生させる。</li>
	<li>十二指腸を穏やかに露出し、綿棒を使用して共通の胆管を見つける (材料のテーブル).</li>
	<li>真っ直ぐマイクロヘモクリップ(材料表)を近位共通ダクトの上に置き、TNBSまたは車両溶液が肝臓および胆嚢に流れ込むのを防ぎます(図1A、B)。</li>
	<li>十二指腸をそっと露出し、Vaterの乳頭を通して膵管に針を挿入します。</li>
	<li>針がダクトの中に入ったら、針を囲む十二指腸の上に湾曲したマイクロヘモクリップ(材料表)を置き、針を所定の位置に固定し、注入された溶液が十二指腸に入るのを防ぎます。</li>
	<li>徐々に1分の間に膵管に溶液(TNBSまたは車両)を注入します。 注:TNBSは1分の時間をかけてゆっくりと注入する必要があり、膵臓に5/16インチと31G針のインスリン注射器を灌流すると注入速度を制御しやすくなります。胆管を刺さないように、手をできるだけ安定させておいてください。TNBSが正常に注入された場合、黄色の色が膵臓の内部に見えるかもしれません。</li>
	<li>注入後、肝臓の近くのマイクロクランプを慎重に取り外し、針と十二指腸を保持しているマイクロクランプを取り外します。</li>
	<li>慎重に元の位置に十二指腸を返します。</li>
	<li>閉鎖前に腹腔内に0.5mLの温かい滅菌生理液(36-37°C)を残して、十二指腸が元の位置に戻り、蠕動の回復を助ける。</li>
	<li>5-0ステッチの連続縫合を使用して、筋肉層の切開を閉じます。4-0ステッチで中断された縫合糸を使用して皮膚を閉じます。</li>
	<li>マウスを含むケージを加熱パッドの上に置き、麻酔からの回復を可能にします。</li>
	<li>マウスが暖かく、持ち場に戻す前に自発的な動きができることを確認してください。</li>
	<li>手術後も12時間ごとに鎮痛薬(例えば、ブプレノルフィン0.1mg/kg i.p.)と補助熱を提供し続ける。</li>
</ol>3. マウスの動作を監視する
<ol><li>7日目の手術後に縫合糸を取り除く。</li>
	<li>最初の週の手術後に、マウスの健康と行動を毎日監視します。発声、背中の姿勢、移動の減少などの苦痛の兆候に注意してください。一日おきに体重を測定します。</li>
	<li>フォン・フレイのモノフィラメント(VFF)を使用して、9,14に記載されているように、腹部の機械的過敏症を測定し、手術後2週間、3週間を行います。<ol>
<li>上腹部領域10x 1-2 sに昇順で異なる適用力のVFFを適用します。腹部の上昇、引き込み、または舐め(離脱反応)を肯定的な反応として考えてみましょう。</li>
		<li>肯定的な反応が認められない場合は、より強い刺激を適用し、肯定的な応答が観察された場合は弱い刺激を適用します。引き出しのしきい値は、マウスが50%の時間で応答する力です。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 膵組織の採取と組織学的分析
<ol><li>子宮頸部脱臼により麻酔下でマウスを犠牲にし、腸や他の器官から慎重に膵臓を解剖する。</li>
	<li>膵臓を24時間パラホルムアルデヒド10%に固定し、パラフィンに埋め込み、厚さ5μmの切片を切り取り、ガラススライドに入れて染色します。</li>
	<li>ヘマトキシリン-エオジン、およびマッソンのトリクローム染色を、前述の4に記載した標準的な方法を用いて行う。</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

すべての著者は、利益相反を持っていないと宣言しています。

慢性膵炎を誘発するTNBSの胆管注入は、マウスでは技術的に困難であり、マウスの最大22.5%が薬物注入10の3〜4日以内に死ぬ可能性がある。ここでは、この報告書は、以前の研究に基づいて手順を洗練し、早期マウス死亡率を<10%に減少させた。例えば、薬物量の増加(35μLから50μL)は、薬物が膵臓全体に到達することを保証することができる。インスリン注射器と小さい針サイズ(31G)を使用すると、膵管への潜在的な損傷と胆嚢または腹部への胆汁の漏出を減少させ、手術後数日以内にマウスの死を引き起こす可能性が最も高い。胆管の両端をクランプすると、TNBSが胆嚢や腸に漏れるのを防ぎ、死亡を引き起こす可能性があります。ヘモクリップは、注入された膵臓内のTNBSを抑制し、他の組織への損傷を減らしながら有効性を改善する。また、TNBSは0°C以上の温度では安定していません。 そこで、作製したTNBSを用いることで、CP誘導は安定した結果を達成した。
このプロトコルは、生後8〜12週で雄C57BL/6JマウスのCPを効果的に誘導し、体重減少、膵臓萎縮、線維...

慢性膵炎(CP)は、膵臓の萎縮、線維症、腹痛、および外分泌および内分泌機能の両方の最終的な喪失を特徴とする慢性炎症性疾患である。現在の医学的および外科的治療は治癒的ではありませんが、難治性腹痛、内分泌および外分泌機能不全という疾患の結果である症状を緩和するために行われている。したがって、より効果的な治療が緊急に必要とされる2.動物モデルは、病気のより良い理解を開発し、潜在的な治療薬を調査するための不可欠なツールを提供します3.CP用の複数のマウスモデルが開発されており、その中でセルリンやアルコールモデルが一般的に使用されています。セレルミンは、膵臓分泌を刺激するオリゴペプチドであり、膵萎縮、線維症、とりわけ4を特徴とするCPモデルを再現的に誘導することが示されている。別の一般的なモデルは、L-アルギニンの連続注射を使用します, 人間の患者で観察されたものと同様の外分泌不全を生成します 5.CPはまた、完全または部分的な膵管結紮、ならびに膵管高血圧6、7によって誘発され得る。CPで利用可能な様々な動物モデルにもかかわらず、これらのモデルのどれも効果的にCP患者8によって経験した腹痛を再現しません。
これまでの研究では、2,4,6-トリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)の局所膵臓注射は、CP患者9、10、11が経験した持続的な痛みを複製することを示した。TNBS処置マウスは、腹部過敏症および疼痛関連行動の増加ならびに痛みを伴う刺激に対する「一般化過敏症」を示し、CP患者10において観察されている現象である。TNBSモデルは、CP疼痛を正確に模倣することに加えて、線維症、単核細胞浸潤、および脂肪組織10、12との共生細胞の置換などのヒト状態の他の病理学的特徴を複製する。しかし、胆管を介したTNBS注入は、死を引き起こす可能性のあるマウスでは技術的に困難な手順である。私たちの知る限りでは、胆管注入がどのように行われるかを示す視覚的なプロトコルはありません。本稿では、CPマウスモデルを生成するTNBSの胆管注入の手順を示す。この手順は、CPおよび他の膵臓疾患の研究のための貴重な動物モデルを生成するのに役立ち、膵臓13に他の材料(例えば、ウイルス、細胞)を注入するために使用することができる。

<table><tbody><tr><td>10% 中性緩衝ホルマリン v/v</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>アルコール調製パッド、滅菌</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>動物麻酔システム</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>ブプレノルフィン塩酸塩、注射</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離チューブ、15 mL</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>エタノール、絶対 (200プルーフ)、分子生物学グレード</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック・サイエンティフィック <td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>極細マイクロ解剖ハサミ 4インチ ストレートシャープ</td><td>ロボズ サージカルインストゥルメント株式会社</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Graefe鉗子4 "超繊細な先端</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>加熱パッドAmazon</td><td></td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Hegar-Baumgartnerニードルホルダー5.25インチ</td><td>ロボズ手術器具株式会社</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>インスリン注射器、31ゲージ針付き</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>ヨウ素準備パッド</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>ピラマル クリティカルケア</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>マイクロクリップ 鉗子を適用する 5.5インチ</td><td>ロボズ手術器具株式会社</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>マイクロクリップ、まっすぐで強く湾曲した1x6mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>マイクロクリップ、ストレート、クリップ幅0.75mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>ピクリルスルホン酸溶液、TNBS、1M in H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>ポリプロピレン縫合糸 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>ポリプロピレン縫合糸 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム、0.9% 静脈内溶液</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>外科用ドレープ、滅菌済み</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>組織カセット</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>Von Freyフィラメント</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

胆管tnbs輸液による慢性膵炎のマウスモデル

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

慢性膵炎(CP)は、膵炎や線維症、腺萎縮、腹痛および他の症状を含む複雑な疾患である。CPを研究するためにいくつかのげっ歯類モデルが開発されており、そのうち胆管2,4,6 -トリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)注入モデルは、CPに見られる神経因性疼痛の特徴を再現しています。しかし、マウスの胆管薬物注入は技術的に困難です。このプロトコルは、CPマウスモデルの生成のための胆管TNBS注入の手順を示す。TNBSは十二指腸のヴァーターのアンフィラを通して膵臓に注入された。このプロトコルは、処置中に薬物容積、外科技術および薬物処理を最大限に活用した。TNBS治療マウスは、体重および膵臓の体重減少、疼痛関連行動の変化、および異常な膵形態によって反映されるCPの特徴を示した。これらの改善により、TNBS注射に伴う死亡率は最小限であった。この手順は、膵臓疾患モデルを生成する上で重要であるだけでなく、局所的な膵薬の送達にも有用である。

胆管注入手順は、この手順10に関連するマウスの死亡率を減少させるために最適化された。TNBSは、最初に35μLまたは50μLの総体積で与えられた。50 μLの容積でTNBSを注入すると、膵臓全体に達し、より均質な疾患表現型を誘導する可能性がある(図1B)。さらに、31G針を用いたインスリン注射器を使用したTNBSの注射は、通常の注射器および針のサイズに対する注入速度をより良く制御することができる。氷の上に貯蔵され、薬物製剤の1時間以内に使用された新鮮な準備されたTNBSはまた、1時間以上調製されたTNBSと比較してより良い結果をもたらした。これらの改善により、受給者の死亡率は制御され、10%以下にとどまった。
体重減少は、コントロール群のマウスが手術後3日間に元の体重の約6%を失い、その後徐々に回復した(21日目の元の体重の104.6%)の特性の1つである(図1C)。対照的に、TNBSを受けているマウスは、最初の5日...

慢性膵炎(CP)は、しばしば難治性腹痛に関連する膵臓の炎症および線維症を特徴とする疾患である。本稿では、2,4,6-トリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)を用いた胆管注入を介してCPのマウスモデルを生成する技術を改良することに焦点を当てています。

胆管TNBS輸液による慢性膵炎のマウスモデル

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

慢性膵炎は、膵炎、線維症、腹痛、その他の症状を伴う複雑な疾患です。胆管TNBS注入モデルは慢性膵炎患者で観察される神経因性疼痛を複製する。この胆管TNBS注入プロトコルは、マウスの慢性膵炎モデルの生成を誘導するために最適化されています。マウスの胆管薬物融合は技術的に困難であるため、その視覚化は、この方法に新しい研究者に役立ちます。手術の前と2週間と3週間後に、フォン・フレイのモノフィラメントを使用して、生後8〜10週のC57ブラックシックスマウスの上腹部に異なるレベルの力を加え、1回1〜2秒間10回適用します。肯定的な応答として腹部の退位または舐めを上げることを検討してください。次に、新たに調製した0.75%TNBS溶液の50マイクロリットルを備えた31ゲージ針を装備したインスリン注射器をロードする。車両制御として生理食塩水に50マイクロリットルのエタノールを含む2番目の注射器をロードし、両方の注射器を光から保護された氷の上に置きます。ペダル反射に対する応答の欠如を確認した後、剃毛または脱毛クリームを塗布することによって麻酔マウスの腹部領域から毛髪を取り除き、解剖顕微鏡の下で加熱された外科パッドの上にマウスを置きます。各眼に獣医軟膏を塗布し、3つの連続した2%のヨウ素と3つの70パーセントのエタノールワイプで外科部位を消毒し、マイクロハサミを使用して1回の連続運動で0.5〜1センチメートルの切開を行い、綿棒を使用して十二指腸を穏やかに露出させ、共通の胆管を見つけます。肝臓と胆嚢への治療の流れを防ぐために、顕微鏡を使用して近位共通の管の上にまっすぐなマイクロヘモクリップを配置し、TNBSに装填された注射器の針を膵管にバターの乳頭を通して挿入する。湾曲したマイクロヘモクリップを使用して針を固定し、1分間にわたって溶液を膵管に注入します。すべての溶液が届いた時、慎重にマイクロクランプを取り外し、十二指腸が元の位置に戻っていることを確認します。腹腔の閉鎖前に、十二指腸が元の位置に戻るのを助け、蠕動の回復を助けるために36〜37°Cの無菌生理食塩水の500マイクロリットルを加える。5-Oステッチで連続縫合糸を使用して筋肉層の切開を閉じ、4-Oステッチで中断された縫合糸を使用して皮膚を閉じます。その後、完全な再実行まで監視と加熱パッド上の回復ケージにマウスを置きます。手術後の最初の週にマウスの健康と行動を毎日監視し、発声、腰の姿勢、移動を減らし、1日おきに体重を測定するなど、苦痛の兆候を確認します。観察されるように、50マイクロリットルのインクの注入が示されるように、膵臓全体の浸潤をもたらし、より均質な疾患表現型の誘導を可能にする。この代表的な分析では、手術後の最初の3日間で、対照群のマウスは元の体重の約6%を失い、21日目までに徐々に回復し、元の体重の100%以上を得た。対照的に、TNBSを受けたマウスは、手術後の最初の5日間に元の体重の約15%を失い、21日目までに元の体重の100%弱を取り戻しました。対照マウスと比較して、TNBS注射動物は手術後2週目と3週目に腹部の機械的過敏症の増加を示した。膵臓の体重当たりの大きさおよび重量は、対照動物から採取された膵臓と比較してTNBSマウスで有意に減少した、重篤で長期にわたる慢性膵炎を有するヒトにおける知見と一致するTNBS処置動物における顕著な膵萎縮を示唆した。対照エタノール処理マウスからの膵組織切片の組織学的分析は正常な形態を示し、TNBS処置マウスの組織切片は脂肪細胞浸潤および線維化に置き換えられたアシナル細胞の大量喪失で空虚な実現を示した。注射されたTNBSがgal膀胱に入るのを防ぐことは、TNBSが組織に有害な影響を及ぼすので重要である。注入中は、その胆管の穿刺作用を避けるために、手をできるだけ安定に保ちます。慢性膵炎の発症を誘発することに加えて、この胆管注入マウスは、他の膵病モデルの開発に使用することができる。このTNBS慢性膵炎マウスモデルは、慢性膵炎の病態と治療、ならびに他の膵臓疾患の両方を研究するために使用することができる。

a-mouse-model-for-chronic-pancreatitis-via-bile-duct-tnbs-infusion

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

このビデオでは、タウロコール酸ナトリウムの膵臓注入による急性胆道性膵炎のマウスモデルの生成手順について説明しています。このモデルは、膵臓のタウロコール酸ナトリウムによって誘発される病態生理学的変化を研究するのに役立ちます。...

急性胆道膵炎モデル:膵管注入による急性胆道膵炎マウスモデルの生成方法

重度の急性膵炎の動物モデルは、初期段階での病態生理学的変化の研究を可能にし、炎症事象の進化の観察を促進する。ここでは、麻酔をしたC57BL/6マウスの膵管内へのタウロコレートナトリウムの逆行注入による重症急性胆道膵炎の誘導プロトコルを提供する。...

C57BL/6マウスでタウロコレートナトリウム誘発重篤急性膵炎

重篤な急性膵炎のマウスモデルが本明細書に記載されている。ここで提示された手順は非常に迅速で、単純で、アクセスしやすく、それによって潜在的に急性膵炎における分子メカニズムおよび異なる治療介入を便利な方法で研究することを可能にする。...

ビリオ膵管へのタウロコール酸ナトリウムの逆行性注入を用いたマウス重症急性膵炎モデルの確立

ウイルス誘発性胆道閉鎖症(BA)の肝線維化機構研究に適した動物モデルと、将来のBA治療のプラットフォームを提供する慢性肝線維症のマウスモデルを確立しました。...

胆道閉鎖症研究のための慢性肝線維症のマウスモデル

腹腔内薬物投与は、膵臓損傷を誘発するための安全で効果的な非侵襲的アプローチです。この研究では、マウスに対する5つの異なる腹腔内注射プロトコルを比較して、さまざまな程度の膵臓損傷を誘発し、重度の膵臓損傷のモデルを確立して、重度の急性膵炎(SAP)の病理学的変化と治療戦略を調査しました。...

カエルレインとリポ多糖の腹腔内注射の組み合わせによる重症急性膵炎のマウスモデルの準備

本プロトコルは、膵管の視覚化と膵管の電気凝固による膵管閉塞を引き起こす慢性閉塞性膵炎をモデル化するための新しいアプローチを説明しています。...

電気凝固によって確立された閉塞性慢性膵炎モデル

ワルトン管を介してマウス顎下唾液腺のカニュレーションのためのプロトコルが記述されています。この実験では、トリパンブルー溶液は、この手法が効果的に標的腺に注入を提供する方法を示すこと、および唾液腺の再生のための潜在的な臨床薬/細胞療法としてのこの新しいアプローチの信頼性を示唆するダイアーとして使用されます。...

ワルトン管を経由してマウス顎下唾液腺のカニュレーション

マウスの肝門脈や肝内胆管の3次元構造を可視化し、定量化する方法が記載されている。このレジンキャスト技術は、他の管または血管系に適用し、可能にすることができます...

3次元樹脂鋳造およびマウスの門脈や肝内胆管系の結

ラットにおけるグルコースとイントラリピッドの慢性的な注入のためのプロトコルが記載されている。このモデルは、臓器機能および生理学的パラメータに対する過剰な栄養素の影響を研究するために使用することができる。...

ラットにおける慢性栄養注入のモデル

慢性高眼圧症は、マウスの目に小柱網のレーザー光凝固を使用して誘導される。眼圧（IOP）は、レーザー治療後数ヶ月上昇する。視力と実験動物のコントラスト感度の低下は微細運動テストを使用して監視している。...

ビジュアル欠陥を特徴づけるために慢性高眼圧症のレーザー誘起マウスモデル

学ぶ胆管TNBS輸液法によるマウス慢性膵炎モデル作成技術。Von Freyモノフィラメントを用いた疼痛評価と組織学的変化の観察により、膵炎の病態と治療法研究に貢献します。

胆管TNBS輸液による慢性膵炎のマウスモデル

さらに動画を探す