Name: ゼブラフィッシュ初期期における蛍光マイクロプラスチックの蓄積と分布 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 学ぶ ゼブラフィッシュ初期発生段階における蛍光マイクロプラスチックの蓄積と分布の視覚的定量法。卵殻、卵黄嚢、心膜、消化管での蓄積パターンを蛍光顕微鏡で解析し、水生生物への生態毒性評価に活用できます。

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この研究は、中国国立自然科学財団(21777145、22076170)、長江学者と大学の革新的研究チームのためのプログラム(IRT_17R97)によって資金提供されました。

成虫ゼブラフィッシュは、中国ゼブラフィッシュ資源センター(中国武漢)から生まれました。実験は、国家ガイド「動物福祉の倫理的見直しのための実験動物ガイドライン(GB/T35892-2018)」に準拠して実施されました。
1. 胚コレクション
<ol><li>14:10時間の光の光の上に一定の温度(28±0.5 °C)で再循環炭水システム(pH7.0 ±0.2)を持つ20のLガラスタンクで魚を維持する:暗い。</li>
	<li>アルテミア・ナウプリイで魚を1日2回食べさせる。1日あたり最大3%の魚の体重で食べ物を与え、14時間ごとに5分以内に食べるべきであることをお勧めします。</li>
	<li>よく発達した成体のゼブラフィッシュ(体長3~4cm)を、繁殖前夜に1匹の雄から2匹のメスの比率で産卵槽に移します。 注:翌朝、魚は光サイクルの発症後に産卵し始めます。</li>
	<li>パスツールピペットを使用して卵を収集します。ハンクの溶液を10%で数回リンスし、顕微鏡で受精をチェックします。受精卵は約2時間後の受精後に切断期間(hpf)を受け、15を明確に同定することができる。</li>
	<li>28°Cで消毒するために1%メチレンブルーの1%メチレンブルーと10%のハンクの溶液の200 mLを含む500 mLビーカーに受精胚をインキュベートします。 1胚/2 mL溶液の負荷率を超えないようにしてください。 注:10%ハンクのソリューションは137 mM NaCl、5.4 mM KCl、0.25 mM Na2HPO 4、0.44 mM KH2PO4、1.3mM CaCl2、1.0mM MgSO4および4.2 mM NaHCO3で構成されています。</li>
</ol>2. マイクロプラスチック懸濁液の調製
<ol><li>緑色蛍光標識ポリスチレンビーズ(10 mg/mL)のストック溶液を、公称直径500nm(励起/放出:460/500nm)で10分間超音波処理します。</li>
	<li>10%ハンク溶液でストック溶液を希釈し、必要な露出溶液(0.1、1、および10 mg/L)を生成します。</li>
	<li>常に、マイクロプラスチックの露光液を調製してから、露光する前に準備してください。 注:マイクロプラスチックの毒性効果を評価する際には注意が必要です, 例えば、アジドナトリウムのような防腐剤の存在, 市販の粒子製剤中, 異なる生物に有毒であることができるので注意してください 16.したがって、これらの添加剤は、毒性実験を行う前に、コントロール内で除去または考慮する必要があります。</li>
</ol>3. マイクロプラスチック露光
<ol><li>新たに受精した胚6個(4hpf)をランダムに選択し、5 mLのマイクロプラスチック溶液を含む6ウェルプレートの各ウェルに異なる濃度で移す。10%Hankの溶液を含むコントロールグループを含めます。<ol>
<li>各治療に三重井戸(合計18個の胚)を使用してください。</li>
	</ol>
</li>
	<li>同じ光の下で胚をインキュベート:暗いサイクルと大人と温度(1.2を参照)、12時間ごとに観察します。すぐに死者を取り除きます。</li>
	<li>マイクロプラスチックソリューションを24時間ごとに90%更新します。暴露期間中、魚は餌を与えられていない。 注:一般的に、胚の孵化は48 hpfで始まり、約72 hpfで完了する。</li>
</ol>マイクロプラスチック分布の評価
<ol><li>受精後24、48、72、96、および120時間で、胚/幼虫(3つの複製のそれぞれから1つ)をランダムに選択し、10%ハンクの溶液ですすいでください。</li>
	<li>幼虫をペトリ皿に移し、麻酔のために0.016%トリカインにさらします。<ol>
<li>トリケーヌのストック溶液を調製:トリケーヌ粉末の4mgを100mLの二重蒸留水に溶解し、Tris-HCl(pH 9.0)でpHを7.0に調整します。ストックソリューションを冷凍庫に保管します。</li>
		<li>作業ソリューションを準備します。ストック溶液を所望の濃度に希釈する(0.016%)室温14で10%ハンクの溶液で.</li>
	</ol>
</li>
	<li>胚/幼虫を配置し、観察の準備をします。</li>
	<li>蛍光顕微鏡で魚を観察し、画像化ソフトウェアで画像を観察します。</li>
	<li>ImageJ で魚の蛍光強度を定量化します。</li>
</ol>

<ol><li>SAPEA (Science Advice for Policy by European Academies). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22A+Scientific+Perspective+on+Microplastics+in+Nature+and+Society%22">A Scientific Perspective on Microplastics in Nature and Society</a>. , SAPEA. Berlin. (2019).</li>
<li>Plastics Europe. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Plastics-the+facts+2019%22">Plastics-the facts 2019</a>. , Plastics Europe. Brussels. (2019).</li>
<li>Andrady, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the marine environment.</a> Marine Pollution Bulletin. 62, 1596-1605 (2011).</li>
<li>Arthur, C., Baker, J., Bamford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proceedings+of+the+International+Research+Workshop+on+the+Occurrence%2C+Effects+and+Fate+of+Microplastic+Marine+Debris%5BTitle%5D)+AND+%22National+Oceanic+and+Atmospheric+Administration+Technical+Memorandum%22%5BJournal%5D)">Proceedings of the International Research Workshop on the Occurrence, Effects and Fate of Microplastic Marine Debris.</a> National Oceanic and Atmospheric Administration Technical Memorandum. , (2009).</li>
<li>Ivleva, N. P., Wiesheu, A. C., Niessner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastic+in+aquatic+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Microplastic in aquatic ecosystems.</a> Angewandte Chemie International Edition. 56, 1720-1739 (2017).</li>
<li>Lu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pollutant+toxicology+with+respect+to+microalgae+and+cyanobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Pollutant toxicology with respect to microalgae and cyanobacteria.</a> Journal of Environmental Sciences. 99, 175-186 (2021).</li>
<li>Huang, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+microplastics+impairs+digestive+performance%2C+stimulates+immune+response+and+induces+microbiota+dysbiosis+in+the+gut+of+juvenile+guppy+%28Poecilia+reticulata%29%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Exposure to microplastics impairs digestive performance, stimulates immune response and induces microbiota dysbiosis in the gut of juvenile guppy (Poecilia reticulata).</a> Science of the Total Environment. 733, 138929(2020).</li>
<li>Prüst, M., Meijer, J., Westerink, R. H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plastic+brain%3A+neurotoxicity+of+micro-+and+nanoplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+and+Fibre+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The plastic brain: neurotoxicity of micro- and nanoplastics.</a> Particle and Fibre Toxicology. 17, 24(2020).</li>
<li>Jakubowska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chronic+exposure+to+microplastics+of+different+polymer+types+on+early+life+stages+of+sea+trout+Salmo+trutta%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Effects of chronic exposure to microplastics of different polymer types on early life stages of sea trout Salmo trutta.</a> Science of the Total Environment. 740, 139922(2020).</li>
<li>Qiang, L., Cheng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+polystyrene+microplastics+impairs+gonads+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Exposure to polystyrene microplastics impairs gonads of zebrafish (Danio rerio).</a> Chemosphere. 263, 128161(2021).</li>
<li>Hamed, M., Soliman, H. A. M., Osman, A. G. M., Sayed, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidants+and+molecular+damage+in+Nile+Tilapia+%28Oreochromis+niloticus%29+after+exposure+to+microplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+and+Pollution+Research%22%5BJournal%5D)">Antioxidants and molecular damage in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) after exposure to microplastics.</a> Environmental Science and Pollution Research. 27, 14581-14588 (2020).</li>
<li>Burns, E. E., Boxall, A. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+aquatic+environment%3A+Evidence+for+or+against+adverse+impacts+and+major+knowledge+gaps%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the aquatic environment: Evidence for or against adverse impacts and major knowledge gaps.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37, 2776-2796 (2018).</li>
<li>Ma, H., Pu, S., Liu, S., Bai, Y., Mandal, S., Xing, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+aquatic+environments%3A+Toxicity+to+trigger+ecological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastics in aquatic environments: Toxicity to trigger ecological consequences.</a> Environmental Pollution. 261, 114089(2020).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+reio%29.+4th+ed%22">The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio reio). 4th ed</a>. , University of Oregon Press. Eugene. (2000).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Pikuda, O., Xu, E. G., Berk, D., Tufenkji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+assessments+of+micro-+and+nanoplastics+can+be+confounded+by+preservatives+in+commercial+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology+Letters%22%5BJournal%5D)">Toxicity assessments of micro- and nanoplastics can be confounded by preservatives in commercial formulations.</a> Environmental Science & Technology Letters. 6, 21-25 (2019).</li>
<li>Lidster, K., Readman, G. D., Prescott, M. J., Owen, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+survey+on+the+use+and+welfare+of+zebrafish+Danio+rerio+in+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fish+Biology%22%5BJournal%5D)">International survey on the use and welfare of zebrafish Danio rerio in research.</a> Journal of Fish Biology. 90, 1891-1905 (2017).</li>
<li>Pitt, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+tissue+distribution%2C+and+toxicity+of+polystyrene+nanoparticles+in+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Uptake, tissue distribution, and toxicity of polystyrene nanoparticles in developing zebrafish (Danio rerio).</a> Aquatic Toxicology. 194, 185-194 (2018).</li>
<li>Lin, S. J., Zhao, Y., Nel, A. E., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+An+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: An in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9, 1608-1618 (2013).</li>
</ol>

著者は、競合する利益や財政的利益を宣言しません。

EU指令2010/63/EUのような科学的目的で使用される動物の保護に関するガイドラインによれば、動物倫理許可は、独立した摂食が可能である段階までゼブラフィッシュの初期のライフステージ(受精後5日間)17の実験には必須ではない。しかし、ゼブラフィッシュの使用を最適化するためには最善の福祉実践が重要であり、例えば、麻酔と安楽死の人道的方法が懸念されるべきである。エチル3-アミノ安息香酸メタンスルファ剤(MS-222、またはトリケーヌ)は、最も多くの実験室で日常的に使用される薬剤で、麻酔および安楽死のためにここで使用される。
顕微鏡下で観察する前に、胚と幼虫は、外部表面に吸着されたマイクロプラスチックが結果を妨げる可能性があるため、すすいでください。さらに、胚/幼虫、特に時折報告されている黄身嚢の周りの自己蛍光は問題になる可能性があります。フラビン、ニコチンアミド-アデニンジヌクレオチド(NAD)、芳香族アミノ酸、リポフスチン、高度な糖化末端産物、およびコラージュのような多くの生体高分子の存在は、適切な波長で励起されると発光する。 </p...

1900年代に初めて合成されて以来、プラスチックは様々な分野で広く使用されており、その結果、世界生産1の急速な成長が生まれる。2018年には、世界中で約3億6000万トンのプラスチックが生産されました。自然環境のプラスチックは、化学的、物理的または生物学的プロセスに起因する微粒子に分解する。一般に、微細プラスチック粒子<5mmの大きさは、マイクロプラスチック4と定義される。マイクロプラスチックは、化粧品5からのマイクロビーズなどの特定の用途のために設計されています。ほぼ永久的な汚染物質として、マイクロプラスチックは環境に蓄積され、科学者、政策立案者、一般の人々1、6から注目を集めています。以前の研究では、マイクロプラスチックが、胃腸損傷7、神経毒性8、内分泌破壊9、酸化ストレス10およびDNA損傷11などの魚に悪影響を及ぼす可能性があることを文書化した。しかし、マイクロプラスチックの毒性は、これまでのところ12,13に完全には明らかにされていない。
ゼブラフィッシュ胚は、小型、外受精、光学透過性、大型クラッチなど多くの実験的利点を提供し、初期段階での魚に対する汚染物質の影響を研究する生体にとって理想的なモデル生物と考えられています。また、生物学的応答の評価には限られた量の試験物質しか必要とされない。ここで、ゼブラフィッシュ胚は5日間、マイクロプラスチックの異なる濃度(0.1、1、10mg/L)にさらされ、ゼブラフィッシュ胚/幼虫中のマイクロプラスチックの生物蓄積および分布が評価される。この結果は、魚に対するマイクロプラスチックの毒性に関する我々の理解を進め、ここで説明する方法は、ゼブラフィッシュの初期段階における他の種類の蛍光物質の蓄積と分布を決定するために一般化される可能性がある。

<table><tbody><tr><td></td><td>ニコン</td><td>日本 エクリプス 緑色蛍光</td><td></td></tr><tr><td>標識ポリスチレンビーズ</td><td>Phosphorex, USA</td><td>2103A</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>A5040</td><td></td></tr></tbody></table>

ゼブラフィッシュ初期期における蛍光マイクロプラスチックの蓄積と分布

Accumulation and Distribution of Fluorescent Microplastics in the Early Life Stages of Zebrafish

新しいタイプの環境汚染物質として、マイクロプラスチックは水生環境で広く発見され、水生生物に高い脅威を与えています。マイクロプラスチックの生体蓄積は、その毒性作用において重要な役割を果たす。しかし、粒子状として、その生物蓄積は他の多くの汚染物質とは異なります。ここで説明する、ゼブラフィッシュ胚または幼虫におけるマイクロプラスチックの蓄積および分布を蛍光マイクロプラスチックを用いて視覚的に決定する方法である。胚は、120時間の直径500 nmの蛍光マイクロプラスチックの異なる濃度(0.1、1、および10 mg/L)に曝露される。マイクロプラスチックは、濃度依存的な方法でゼブラフィッシュ胚/幼虫に生物蓄積できることを結果に示した。孵化する前に、強い蛍光は胚絨毛の周りに見られる;ゼブラフィッシュの幼虫では、黄身嚢、心膜、消化管がマイクロプラスチックの主な蓄積部位です。この結果は、初期の段階でのゼブラフィッシュのマイクロプラスチックの取り込みと内在化を示し、マイクロプラスチックが水生動物に及ぼす影響をよりよく理解するための基礎となる。

蛍光マイクロプラスチックの分布と蓄積を図1および表1に示す。未露光群(対照)では可視蛍光は認められない。しかし、異なる濃度のマイクロプラスチック(24 hpf)に曝露した後、絨毛膜を取り囲む蛍光の蓄積が見られる。緑色蛍光は幼虫でも検出され、蛍光レベルは濃度依存的および時間依存的に増加するように見える。黄身嚢、心膜、および胃腸管は、マイクロプラスチックの主な蓄積部位である(図2)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62117/62117fig01.jpg"> 図1:ゼブラフィッシュの胚/幼虫における蛍光ポリスチレンマイクロプラスチックの分布(40×魚は対照群からサンプリングされるか、ま...

ゼブラフィッシュ胚/幼虫は外部に発達し、光学的に透明である。初期段階における魚のマイクロプラスチックの生物蓄積は、蛍光標識されたマイクロビーズで容易に評価される。

As a new type of environmental pollutant, microplastic has been widely found in the aquatic environment and poses a high threat to aquatic organisms. The ...

ゼブラフィッシュの初期段階における蛍光マイクロプラスチックの蓄積と分布紹介。マイクロプラスチックの生体蓄積は、その毒性作用において重要な役割を果たす。しかし、粒子状として、その生物蓄積は他の多くの汚染物質とは異なります。ここで説明する、ゼブラフィッシュ胚または幼虫におけるマイクロプラスチックの蓄積および分布を蛍光マイクロプラスチックを用いて視覚的に決定する方法である。実験は、動物福祉の倫理的見直しのための国立ガイドライン実験動物ガイドラインに従って行われました。1つは、胚コレクションです。成虫のゼブラフィッシュは、中国ゼブラフィッシュリソースセンターから生まれました。魚は、14時間と10時間、明暗の光周期で、一定の温度、すなわち28°Cの度で炭濾過された水道水システムを再循環させる20リットルのガラスタンクに維持されます。魚はアルテミアナウプリイと一日2回供給されます。1日あたり最大3%の魚の体重で食べ物を与え、毎回5分以内に食べるべきであることをお勧めします。よく発達した成虫ゼブラフィッシュは、繁殖前夜に1匹の雄と2匹のメスの比率で産卵タンクに移されます。翌朝、魚は光サイクルの発症後に産卵し始めます。卵はパスツールピペットを使用して採取し、10%Hankの溶液を数回リンスし、顕微鏡で受精をチェックします。受精卵は約2時間後の切断期間を経て、明確に同定することができる。受精胚は、200ミリリットルのハンク溶液を含む500ミリリットルのビーカーで、1%メチレンブルーで28°Cの度で消毒する。積載速度は、各2ミリリットル溶液において1つの胚を超えていない。2つは、マイクロプラスチック懸濁液の調製。500ナノメートルの名目直径を持つ緑色の蛍光標識ポリスチレンビーズのストック溶液は10分間超音波処理されます。10%ハンクの溶液でストック溶液を希釈し、必要な露出溶液、すなわち0.1、1、10ミリグラム/リットルを生成します。マイクロプラスチックの露光液は、常に露光前に新たに調製されます。3つの、マイクロプラスチック暴露。6つの新しく受精した胚を無作為に選択し、その後、異なる濃度のマイクロプラスチック溶液の5ミリリットルを含む6つのウェルプレートの各ウェルに移管される。10%Hankの溶液を含む対照群が含まれています。3重化井戸は、合計18個の胚を有し、各治療に使用される。胚は成人と同じ明暗サイクルと温度でインキュベートされ、12時間ごとに観察される。死者はすぐに取り除かれます。マイクロプラスチックソリューションは、24時間ごとに90%更新されます。暴露期間中、魚は餌を与えられていない。一般的に、胚の孵化は受精後48時間から始まり、受精後約72時間で完了する。4つは、マイクロプラスチック分布の評価。24-48-72-96-および120時間の受精後に、3つの複製のそれぞれから1つずつ、胚および幼虫が無作為に選択され、10%ハンクの溶液ですすがされる。胚と幼虫は、観察のために配置され、準備されています。幼虫はペトリ皿に移され、麻酔のために0.016%トリカインにさらされます。この魚は蛍光顕微鏡で観察され、イメージングソフトウェアでイメージングされます。魚の蛍光強度は、さらにImageJ NIHで定量化されます。代表結果。マイクロプラスチックは、濃度依存的な方法でゼブラフィッシュ胚および幼虫に生物蓄積できることを結果で示した。孵化前に、強い蛍光が胚絨毛の周りに見られ、シマウマの魚の幼虫では、黄身嚢、心膜、および胃腸管がマイクロプラスチックの主な蓄積部位である。議論。この結果は、魚に対するマイクロプラスチックの毒性に関する我々の理解を進め、ここで説明する方法は、ゼブラフィッシュの初期段階における他の種類の蛍光物質の蓄積と分布を決定するために一般化される可能性がある。絨毛は大きなサイズの粒子に対する効果的なバリアとして機能するので、露出前のデコールリオネーションプロセスが必要になる可能性があります。しかし、絨毛膜をそのままにした胚は、現実世界での暴露の状態を考慮する際に汚染物質の生態毒性を評価するためにより推奨される。ソリューション内のマイクロプラスチックの挙動は、バイオアベイラビリティにも重要です。マイクロプラスチックの物理化学的特性は、暴露期間にわたって追跡する必要があります。

accumulation-distribution-fluorescent-microplastics-early-life-stages

Research

JoVE Journal

Environment

環境

本研究では、標準的な胚マイクロインジェクション装置および実体顕微鏡を用いた、ゼブラフィッシュ幼魚への新しいマイクロガバージュ（経管投与）法を提示します。マイクロガバージュが、多様な物質をゼブラフィッシュ幼魚の腸管腔内へ特異的に、かつ制御された量で投与するための安全で効率的な手法であることを実証します。...

ゼブラフィッシュ幼生のMicrogavage

出典: Zhang、X.、 et al.生体材料関連 黄色ブドウ球菌 感染のin vivo可視化と生体内分析のためのゼブラフィッシュはいモデル J. Vis. 経験。 (2019年)このビデオでは、 黄色ブドウ球菌を注射したゼブラフィッシュ胚の蛍光イメージングを示しており、感染の進行と細菌の分布を定量化して、生体材料の微小球が in vivo...

 ゼブラフィッシュ胚における生体材料関連細菌感染の蛍光イメージング

ここで説明するには、ゼブラフィッシュ胚における組織特異的な蛍光の半自動イメージングのためのプロトコルです。...

ゼブラフィッシュ胚における組織特異的蛍光の半自動イメージング

ゼブラフィッシュは、慢性腎臓病（CKD）をモデル化するための一般的なツールである。しかし、それらの小さいサイズは、それが不可能な従来の方法を使用して腎機能を評価することを可能にする。私たちは、CKDにおけるゼブラフィッシュ腎臓機能の定量的な分析を可能にする蛍光色素腎クリアランスアッセイ1を記述する。...

蛍光クリアランスアッセイを用いてゼブラフィッシュ腎臓機能の評価

ゼブラフィッシュは、遺伝学および発生研究のための優れたモデルシステムです。ビーズ移植は、局所的な細胞環境の変化を導入することにより、発生メカニズムを調査するために使用できる貴重な組織操作技術です。このプロトコルでは、ゼブラフィッシュの胚にマイクロビーズ移植を行う方法について説明します。...

ゼブラフィッシュ胚におけるマイクロビーズの移植

ゼブラフィッシュは、食事の脂質処理と代謝性疾患の貴重なモデルとして浮上しています。脂質が豊富な幼虫の飼料のプロトコル、食事性蛍光脂質類似体のライブイメージング、および食物摂取量の定量化について説明します。これらの手法は、さまざまなスクリーニング、イメージング、および仮説主導の調査手法に適用できます。...

幼虫のゼブラフィッシュのためのパラダイムを摂食高脂肪：摂食、ライブイメージング、および食物摂取の定量化

このプロトコルの目的は、高スループット方法でゼブラフィッシュ稚魚の腸を介して蛍光に分類された食物の通過時間を測定することです。...

ゼブラフィッシュ稚魚を用いた消化管通過時間の高スループット測定

ここに、エストロゲンの効果を検出するためのゼブラフィッシュ胚Tg(vtg1:mCherry)を使用するための詳細なプロトコルが存在する。このプロトコルは、魚の伝播と胚の治療をカバーし、内分泌破壊化合物(EDC)によって誘導される蛍光シグナルの検出、ドキュメンテーション、および評価を強調しています。...

Tg(Vtg1:mcherry)ゼブラフィッシュ胚を用いて内分泌破壊化合物のエストロゲン効果を試験する

この論文では、ゼブラフィッシュ幼虫モデルを用いた環境汚染物質の神経行動毒性の評価について、暴露プロセスや神経行動指標の検査を含む詳細な実験プロトコルを提示する。...

ゼブラフィッシュ幼虫に対する環境汚染物質の神経行動効果の研究

私たちは、高速走査型共焦点顕微鏡法を利用して、発生中のゼブラフィッシュの視蓋でミクログリア細胞のライブイメージングを行い、これらの細胞のin...

ゼブラフィッシュ胚におけるミクログリア動態のライブイメージングとキャラクタリゼーション

このプロトコルは、受精後3〜7日のゼブラフィッシュの幼生における薬物スクリーニング手順と、それに続く形態学的評価を説明しています。...

初期ゼブラフィッシュ幼生における低分子スクリーニングと毒性試験

学ぶ ゼブラフィッシュ初期発生段階における蛍光マイクロプラスチックの蓄積と分布の視覚的定量法。卵殻、卵黄嚢、心膜、消化管での蓄積パターンを蛍光顕微鏡で解析し、水生生物への生態毒性評価に活用できます。

ゼブラフィッシュ初期期における蛍光マイクロプラスチックの蓄積と分布

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