ApoEにおける後肢虚血の改変外科モデル^-/- ミニチュア切開を用いたマウス

我々が今日導入したものは、ApoEマウスで後肢虚血を確立するための簡略化された改変および外科的に効率的な方法である。この方法は、任意の動物施設で実装することができます。滑液法の主な利点は、低侵襲性、5ミリメートル未満の切開を使用することです。

この方法には学習のホフがあります。したがって、最終的な分析に含まれる動物に取り組む前に、微小外科モデルに関する練習をすることをお勧めします。この方法は、医学博士で私の研究室の学生であるKaixuan Yanによって実証されます。

まず、手術に必要な器具と道具を準備します。マウスに麻酔を投与した後、その軟膏を目に当て、乾燥を防ぐ。その後、熱パッドの上にマウスを置き、コア体温を約37°Cに保ちます。

綿棒と脱毛クリームを使用して、右側の後肢の皮膚から慎重に髪を取り除きます。マウスを、解剖顕微鏡の下の加熱パッドの仰向けの位置に置きます。アルコールを使用して皮膚を消毒し、切開の植物側から離れた綿で拭きます。

尖った鉗子および外科用はさみを使用して、インギナル領域の真ん中に約3〜4ミリメートルの切開を行う。慎重に近位大腿神経血管束を露出する細かい尖った鉗子の助けを借りて皮下脂肪組織を除去する。生理食動物で湿らせた綿棒を使用して、大腿動脈を大腿神経と大腿静脈から慎重に移動させる。

その後、7.0縫合の先端を使用して、大腿鞘の膜を慎重に貫通する。その後、近位大腿動脈を通して7-0吸収性縫合糸に渡し、スプリングハサミを使用して二重結び目を作ります。その後、2つの結びの間の大腿動脈を横断する。

6-0吸収性縫合糸を切開の下端に通し、後肢の膝の右側の領域に切開を静かにドラッグして遠位大腿動脈を露出させる。慎重に神経血管束を露出させるために皮下組織を脇に移動します.大腿静脈と大腿神経から大腿動脈を解剖し、綿を使って神経を保護する。

その後、7.0縫合の先端を使用して、大腿鞘の膜を突き刺す。遠位大腿動脈を通して2つの7-0吸収可能な縫合糸を渡し、2つのネクタイ間の大腿動脈をトランセクトするためにスプリングハサミを使用して二重結び目を作ります。その後、6-0吸収性縫合糸を使用して切開をステッチします。

きれいなケージの暖房パッドの上にマウスを置き、回復するまでその重要なパラメータを監視し続けます。翌日MRIを介して大腿動脈またはDLFAの二重結紮の成功を決定する。DLFA処置の前に、マウスの重みは29.6から38.0グラムの範囲であった。

DLFA手術の7日後、体重は26.5グラムから34.1グラムの範囲で、DLFA前の体重よりも有意に低かった。右FAの近位および遠位領域は灌流を示さなかった。タールロフスケールの結果は、手術の翌日に有意に減少した。

彼らは次の日にゆっくりと増加しましたが、7日目までベースラインよりも低かった。7匹のマウスの虚血性後肢の足は、対側側と比較して自然に伸びることができなかった。また、4匹のマウスは、対側側に比べて足のわずかな変色を示した。

右GM筋肉のH&E染色は、増殖する衛星細胞が壊死性筋線維を置き換え、塊または定期的な分散液で分布していた不規則な虚血性壊死を示す筋線維を明らかにした。多核化マクロファージによる炎症性浸潤を示す筋繊維は、通常の形態学的特徴を失い、再生筋繊維はほとんど存在していなかった。これらの再生された筋繊維の横断部は丸かった。

細胞質を赤色に染色し、1つの小さな核または複数の核が中心に位置していた。しかし、この種の炎症パターンは左GMでは観察されなかった。CD31抗体染色は、微小血管密度を観察するために行われ、虚血後肢が非虚血側よりも有意に多くの微小血管密度を示したことを示した。最も重要なことは、大腿動脈の解剖です。

オペレータは、微小外科的技術の経験を有するとともに、マウス後肢の解剖学に精通している必要がある。原則として、この方法は、脚の虚血再灌流傷害を研究するためにも使用することができる。これにより、動脈は再灌流を可能にする前に軟部容器クランプで閉塞することができる。