Name: in vitro疾患モデリングのためのヒト初代弁細胞の単離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-16T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: 学ぶヒト初代弁細胞の単離法。大動脈弁から内皮細胞と間質細胞をコラゲナーゼ処理で分離し、生存率40%を61時間維持。石灰化性大動脈弁疾患の病態研究に有用なin vitroモデルを構築する手法です。

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この原稿の洞察に満ちた議論と批判的な読書をしてくれたジェイソン・ドビンズに感謝します。臓器回復教育センターの支援と支援に感謝し、この研究を可能にしてくれた組織提供者とその家族に感謝します。すべての患者サンプルは、ヘルシンキ宣言に従ってピッツバーグ大学の治験審査委員会によって承認された研究に登録された個人から収集されます。臓器回復教育センター(CORE)を介して得られた死体組織は、故人が関与する研究および臨床訓練の監視のためのピッツバーグ大学委員会(CORID)によって承認されました。
Biorender.com で作成されたいくつかの図。
CSHは、National Heart, Lung, and Blood Institute K22 HL117917およびR01 HL142932、American Heart Association 20IPA35260111によってサポートされています。

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</ol>

ISは、AtricureとMedtronicから機関研究支援を受けており、Medtronic Vascularのコンサルタントを務めています。これらの競合はいずれもこの作業とは関係ありません。他のすべての著者は開示するものは何もありません。

ヒトから対照組織および疾患組織を取得することは、in vitroおよびex vivo疾患モデリングにとって重要です。しかし、ベンチとベッドサイドの間のギャップを埋めることの課題についてよく話しますが、手術室からベンチへの逆の順序は、多くの場合、同じように気が遠くなるようなギャップです。基礎科学者が一次ヒト組織標本を入手するために不可欠なのは、看護師、外科技術者、医師助手、医学生と研修医、および患者を登録して同意し、参加して支援できる臨床プロトコルマネージャーのチームを持つ投資された外科医科学者とのコラボレーションです切除された組織の適切な取り扱い、および組織ピックアップに必要なロジスティクスを調整します。切除から細胞分離までの時間を短縮するための関係者全員の最大限の努力がなければ、重要な細胞物質とそれに含まれる情報は取り返しのつかないほど変更または失われます。
組織標本の生存率を維持するために重要なのは、冷蔵液の使用です。これは、UPMCや他の移植医療センターの臓器移植チームが使用しているのと同じソリューションです。手術室からより迅速に得られたが冷たいPBSに保たれた組織よりも、何...

石灰化大動脈弁疾患(CAVD)は、大動脈弁尖の炎症、線維症、および肉眼石灰化を特徴とする慢性病理です。リーフレットの進行性のリモデリングと石灰化(大動脈硬化症と呼ばれる)は、血流の閉塞(大動脈弁狭窄症)を引き起こし、脳卒中の一因となり、心不全を引き起こす可能性があります。現在、CAVDの唯一の治療法は、外科的または経カテーテル的大動脈弁置換術(それぞれSAVRおよびTAVR)です。CAVDの進行を停止または逆転させる非外科的選択肢はなく、弁置換術を行わないと、死亡率は2〜3年以内に50%に近づきます1,2,3。この病態を駆動する根本的なメカニズムを定義することで、潜在的な新しい治療アプローチが特定されます。
健康な成人では、大動脈弁尖の厚さは約1ミリメートルであり、その主な機能は左心室4からの一方向の血流を維持することです。3つのリーフレットのそれぞれは、リーフレットの外面を裏打ちし、バリアとして機能する弁内皮細胞(VEC)の層で構成されています。VECは、透過性、炎症性細胞接着、およびパラクリンシグナル伝達を調節することにより、弁の恒常性を維持します5,6,7。弁間質細胞(VIC)は、弁尖8内の細胞の大部分を構成する。VICは、リーフレットの3つの特徴的な層に配置されています。これらの層は、心室、海綿状筋、および線維症として知られています9。心室は左心室に面しており、コラーゲンとエラスチン繊維を含んでいます。中間層である海綿状菌には、心周期中にせん断の柔軟性を提供する高いプロテオグリカン含有量が含まれています。外側の線維層は大動脈側の流出面の近くに位置し、拡張期10,11,12の間に共離力を維持する強度を提供するI型およびIII型繊維状コラーゲンが豊富です。VICは静止状態にありますが、炎症、細胞外マトリックス(ECM)のリモデリング、機械的ストレスなどの要因により、VICの恒常性が破壊される可能性があります8、9、13、14、15、16。恒常性が失われると、VICは細胞外ミリエウをリモデリングするタンパク質の増殖、収縮、分泌が可能な筋線維芽細胞様表現型を活性化して獲得します17。活性化されたVICは、間葉系幹細胞(MSC)の骨芽細胞への分化を連想させる石灰化細胞に移行することができる15、17、18、19、20、21、22、23、24、25。
石灰化は、VECとVICの両方の寄与からコラーゲンに富む線維症層で開始されるように見えますが、リーフレット8の他の層を拡大して侵入します。したがって、VECとVICの両方が骨形成遺伝子の発現をアップレギュレートする刺激に応答することは明らかですが、骨形成遺伝子の活性化を引き起こす正確なイベント、および細胞とリーフレットの細胞外マトリックスとの間の複雑な相互作用は、明確に定義されていないままです。マウスはCAVD de novo26,27を発症しないため、マウスモデルはCAVD病因の非遺伝的ドライバーを研究するための理想的な情報源ではなく、したがって、初代ヒト組織およびこれらの組織から分離された初代細胞株の使用が必要である。特に、3D細胞培養やオルガノイドモデリングの分野が拡大しており、マウスモデルに代わるex vivoヒトベースの代替となる可能性が高いため、これらの細胞を大量かつ高品質で取得することが不可欠です。
本手法の目的は、ヒトドナーから外科的に除去された弁から得られたVECおよびVICを効率的に分離および成長させるための条件を確立したワークフローを共有することである。以前の研究では、ブタ28およびマウス弁29からのVECおよびVICの分離に成功したことが示されており、我々の知る限り、これはヒト組織におけるこれらの細胞の単離を説明する最初のものである。ここで説明するプロトコルは、ヒト切除弁に適用可能であり、切除された組織の細胞を大幅に安定化させる臓器移植で臨床的に利用される緩衝液である低温保存溶液の利用を導入することにより、組織切除と実験室処理の間のしばしば長い調達時間によって引き起こされる損傷を大幅に回避および改善します。ここで説明するプロトコルは、細胞表現型を決定し、細胞交差汚染を最小限に抑えて細胞生存の高効率を保証する方法も示しています。

<table><tbody><tr><td>0.45 μ;m フィルター</td><td>Thermo Scientific</td><td>7211345</td><td>コラーゲンコーティングを施したプレート</td></tr>の準備 <tr><td>10 cm 細胞培養プレート</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664160</td><td>細胞培養/細胞株拡大</td></tr><tr><td>10 mL 血清学的ピペット</td><td>フィッシャー</td><td>14955234</td><td>VEC/VIC 単離、細胞培養、細胞株拡大</td></tr><tr><td>1000 &mu;L フィルターチップ</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td>細胞培養/細胞株拡大</td></tr><tr><td>10XL フィルターチップ</td><td>VWR</td><td>76322-132</td><td>細胞培養/細胞株拡大</td></tr><tr><td>15 mL コニカルチューブ</td><td>Thermo Scientific</td><td>339650</td><td>組織保存、VIC / VEC分離</td></tr><tr><td>16%パラホルムアルデヒド水溶液</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>15710S</td><td>組織および細胞固定剤</td></tr><tr><td>190プルーフエタノール</td><td>Decon</td><td>2801</td><td></td></tr>消毒<tr><td>1x DPBS:カルシウムなし、マグネシウム</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td>生理食塩水なし。VIC / VECアイソレーション</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>フィッシャー</td><td>BP2944100</td><td>生理食塩水。組織調製、VIC / VEC分離20</td></tr><tr><td>&mu;Lフィルターチップ</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td>細胞培養/細胞株拡大</td></tr><tr><td>200プルーフエタノール</td><td>デコン</td><td>2701</td><td>脱パラフィン組織サンプル</td></tr><tr><td>2-プロパノール</td><td>フィッシャー</td><td>A416P 4 コラーゲン</td><td>コーティングプレートの作成</td></tr><tr><td>5 mL 血清ピペット</td><td>フィッシャー</td><td>14955233</td><td>VEC/VIC 分離、細胞培養、細胞株拡大</td></tr><tr><td>50 mL コニカルチューブ</td><td>サーモ科学</td><td>339652</td><td>組織保存、VIC / VEC分離</td></tr><tr><td>60 mmディッシュ</td><td>GenClone</td><td>25-260</td><td>VEC分離</td></tr><tr><td>6ウェル細胞培養プレート</td><td>Corning</td><td>3516</td><td>細胞培養/細胞株増殖</td></tr><tr><td>酢酸、氷河</td><td>フィッシャー</td><td>BP2401 500</td><td>コラーゲンコーティングプレートの作成</td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 ファロイジン</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>蛍光f-アクチンカウンターステイン</td></tr><tr><td>Belzer UW 冷蔵移植液</td><td>Bridge to Life</td><td>BUW0011L</td><td>組織保存液</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン、フラクション V - 脂肪酸フリー 25g</td><td>Bioworld</td><td>220700233</td><td>VEC 確認 CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>Calponin 1 抗体&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab46794</td><td>一次抗体 (VIC 陽性染色)</td></tr><tr><td>CD31 (PECAM-1) (89C2)</td><td>Cell Signaling</td><td>3528</td><td>一次抗体 (VEC 陽性染色)</td></tr><tr><td>CD31+ Dynabeads</td><td>Invitrogen</td><td>11155D</td><td>VEC confirm with CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>CDH5</td><td>Cell Signaling</td><td>2500</td><td>Primary antibody (VEC positive stain)</td></tr><tr><td>Cell strainer with 0.70 &mu;m孔</td><td>コーニング</td><td>431751</td><td>VIC分離</td></tr><tr><td>コラーゲン1、ラットテールタンパク質</td><td>ギブコ</td><td>A1048301</td><td>コラーゲンコーティングプレートの作成</td></tr><tr><td>コラゲナーゼII</td><td>ワージントンバイオケミカルコーポレーション</td><td>LS004176</td><td>組織消化。組織調製、VIC / VEC分離</td></tr><tr><td>Conflikt すぐに使用できる消毒スプレー</td><td>Decon</td><td>4101</td><td>消毒</td></tr><tr><td>Countess II 自動セルカウンター</td><td>Invitrogen</td><td>A27977</td><td>自動セルカウンター</td></tr><tr><td>Countess II 再利用可能なスライドカバースリップ</td><td>Invitrogen</td><td>2026h</td><td>自動セルカウンターが必要なスライドカバー</td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td>フィッシャー</td><td>125485E</td><td>取り付けバルブサンプル</td></tr><tr><td>極低温バイアル</td><td>オリンパスプラスチック</td><td>24-202</td><td>細胞/組織サンプルの凍結</td></tr><tr><td>CLOROMAXによる漂白剤の消毒 - 濃縮フォーミュラ&nbsp;</td><td>Clorox</td><td>N/A</td><td>Disinfection</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>10569044</td><td>Growth培地。VIC拡張</td></tr><tr><td>EBM - 内皮細胞培地、基礎培地、フェノールレッドフリー500</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC3129</td><td>成長培地。VEC拡張</td></tr><tr><td>EGM-2内皮細胞培地-2-1キットSingleQuotキット</td><td>ロンザウォーカーズビル</td><td>CC4176</td><td>成長培地サプリメント。VEC拡張</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL顕微鏡</td><td>Life Technologies</td><td>型番AME3300</td><td>蛍光イメージング</td></tr><tr><td>EVOS XL Microscope</td><td>Life Technologies</td><td>AMEX1000</td><td>細胞株拡大中の細胞の可視化</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 - プレミアムセレクト</td><td>R&D Systems</td><td>S11550</td><td>VIC拡張</td></tr><tr><td>ファインハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14088-10</td><td>組織調製、VIC / VEC分離</td></tr><tr><td>フィッシャーブランドセルスクレーパー</td><td>フィッシャー</td><td>08-100-241</td><td>VIC拡張</td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Gibco</td><td>15290-026</td><td>抗真菌:組織調製、VIC / VEC分離</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td>抗生物質:組織調製、VIC / VEC分離</td></tr><tr><td>ガラススライド</td><td>グローブサイエンティフィックインク</td><td>1358L</td><td>取り付けバルブサンプルヤ</td></tr><tr><td>ギ抗マウス488</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td>蛍光二次抗体ヤ</td></tr><tr><td>ギ抗マウス594</td><td>Invitrogen</td><td>A11005</td>蛍光<td>二次抗体</td></tr>ヤ<tr><td>ギ抗ウサギ488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>蛍光二次抗体</td></tr><tr><td>ヤギ 抗ウサギ 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td>蛍光二次抗体</td></tr><tr><td>Invitrogen Countess II FL 再利用可能なスライド</td><td>Invitrogen</td><td>A25750</td><td>自動セルカウンターが必要なスライド</td></tr><tr><td>Invitrogen NucBlue Fixed Cell ReadyProbes 試薬 (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>R37606</td><td>蛍光核対比染色</td></tr><tr><td>LM-HyCryo-STEM - 2X 凍結保存培地幹細胞用</td><td>HyClone Laboratories, Inc.</td><td>SR30002</td><td>凍結細胞の保管</td></tr><tr><td>マウンティング メディウム</td><td>フィッシャーケミカル パーマウント</td><td>SP15-100</td><td>マウンティングバルブサンプル</td></tr><tr><td>Mr. Frosty 凍結容器</td><td>Nalgene</td><td>51000001</td><td>制御されたサンプル凍結用容器</td></tr><tr><td>マイコプラズマ-ExS スプレー</td><td>PromoCell</td><td>PK-CC91-5051</td><td>消毒</td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Gibco</td><td>15140163</td><td>抗生物質。VIC拡張</td></tr><tr><td>Plasmocin</td><td>Invivogen</td><td>ANTMPT</td><td>抗マイコプラズマ。VIC / VEC分離および拡張</td></tr><tr><td>SM22a抗体</td><td>Abcamab14106</td><td>一次抗体(VIC陽性染色)</td><td></td></tr><tr><td>標準パターンはさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14001-14</td><td>組織調製、VIC / VEC分離</td></tr>滅菌<tr><td>綿棒</td><td>ピューリタン</td><td>25806 10WC</td><td>VEC分離</td></tr><tr><td>スイングゼットヒト組織カセット</td><td>インポートサイエンティフィック</td><td>M515-2</td><td>組織包埋容器</td></tr><tr><td>テイラー鉗子 (17cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11016-17</td><td>組織調製、VIC / VEC分離</td></tr><tr><td>トリパンブルー溶液、0.4%</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>細胞計数溶液</td></tr><tr><td>TrypLE Express 酵素</td><td>Gibco</td><td>12604021</td><td>Splitting VIC/VECs</td></tr><tr><td>Von Kossa kit</td><td>Polysciences</td><td>246331</td><td>組織のパラフィン切片の染色石灰化</td></tr><tr><td>フォンWillebrand因子抗体</td><td>アブカム</td><td>ab68545</td><td>一次抗体(VEC陽性染色)</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>フィッシャーケミカル</td><td>X3S-4</td><td>脱パラフィン組織サンプル</td></tr><tr><td>&α;SMA抗体</td><td>アブカム</td><td>ab7817</td><td>一次抗体(VIC陽性染色)</td></tr></tbody></table>

in vitro疾患モデリングのためのヒト初代弁細胞の単離

Isolation of Human Primary Valve Cells for In vitro Disease Modeling

石灰化大動脈弁疾患(CAVD)は、高齢者人口のほぼ3分の1に存在します。大動脈弁の肥厚、硬化、石灰化は大動脈弁狭窄を引き起こし、心不全や脳卒中の一因となります。疾患の病因は多因子であり、炎症、細胞外マトリックスリモデリング、乱流、機械的ストレスおよびひずみなどのストレスは、弁内皮細胞および弁間質細胞の骨形成分化に寄与する。ただし、健康な細胞の石灰化細胞への骨形成移行を促進する正確な開始因子は完全には定義されていません。さらに、CAVD誘発性大動脈弁狭窄症の唯一の現在の治療法は大動脈弁置換術であり、それによってネイティブ弁が除去されるか(外科的大動脈弁置換術、SAVR)、または完全に折りたたみ可能な置換弁がカテーテルを介して挿入される(経カテーテル大動脈弁置換術、TAVR)。これらの外科的処置は高額で、深刻なリスクが伴います。したがって、創薬のための新しい治療標的を特定することが不可欠です。そのために、本研究では、患者から外科的に除去された組織とドナーの死体組織を使用して、in vitro疾患モデリングのための患者固有の弁膜細胞の一次ラインを作成するワークフローを開発します。このプロトコルでは、臓器移植で一般的に利用される冷蔵ソリューションを利用して、組織切除と実験室処理の間のしばしば長い調達時間によって引き起こされる損傷を軽減し、切除された組織の細胞を大幅に安定化させるという利点をもたらします。本研究の結果は、単離された弁細胞が、ドナーからの弁除去後数日以上の培養において、それらの増殖能力および内皮および間質表現型を保持することを示している。これらの材料を使用すると、コントロール細胞とCAVD細胞の収集が可能になり、そこからコントロール細胞株と疾患細胞株の両方が確立されます。

上記のプロトコルは、ヒト弁膜組織の取り扱い、ならびにこれらの組織からの生存細胞株の単離および確立に必要なステップを概説している。大動脈弁のリーフレットは、パラフィン包埋のために処理され、生化学的または遺伝子分析のために長期保存のためにスナップ凍結され、VECおよびVICの単離のために消化されます(図1)。手術標本は大動脈弁狭窄症の臨床診断を受ける可能性が高く、肉眼で見ることができる石灰化の重い結節を示す可能性がありますが、大動脈弁石灰化はかなりの数の高齢者(&gt;65歳)に存在します32、そしてこの有病率のために、すべての組織(外科的および死体)は、石灰化が存在するかどうかを評価するためにフォンコッサ染色または同様の手順を受けます(図2)。
保冷液を用いると、切除弁組織の細胞が大きく安定化することがわかった。冷蔵液は生体臓器移植に使用されます。それは、ドナーからの除去の前後に臓器を通して洗い流され、氷上での輸送中に...

このプロトコルは、外科的大動脈弁置換術中または死体組織から抽出されたヒト大動脈弁の収集、およびその後の患者特異的一次弁内皮細胞および間質細胞の分離、拡張、および特性評価について説明しています。細胞生存率と表現型特異性を確保するために必要なプロセスに関する重要な詳細が含まれています。

Calcific aortic valve disease (CAVD) is present in nearly a third of the elderly population. Thickening, stiffening, and calcification of the aortic valve ...

ヒト一次弁内皮細胞および間質細胞の単離は、石灰化大動脈弁疾患の病因の根底にあるメカニズムを理解するために重要です。弁が天然組織から切除されると、細胞の生存率が低下します。そこで、細胞生存率を延長する方法を特定しました。抽出した弁組織サンプルを受け取った後、大動脈根を抽出し、滅菌すすぎ液を入れた50ミリリットルの円錐管に組織を沈めます。ロッカーのアイスバケットで10分間インキュベートした後、70%エタノールをチューブにスプレーします。滅菌組織培養フードで、組織をペトリ皿に移し、2つの弁尖を切除する。1枚のリーフレットを極低温バイアルに入れ、組織を液体窒素でスナップ凍結して摂氏マイナス80度で保管します。カルシウム含有量染色のために組織を固定するには、2番目のリーフレットを結節からヒンジまで半分に切り、両方の組織片を4%パラホルムアルデヒドに浸したカセットに入れます。次に、セットアップ全体を室温で最低2時間、4時間以内ロッカーに置きます。弁間質細胞を単離するには、氷冷PBSを含む新しい50ミリリットルの円錐管にリーフレットを移し、室温で2分間ロッカーにチューブを置きます。混合後、組織を5〜7ミリリットルの冷たいコラゲナーゼ溶液を含む60ミリメートルの皿に移します。鉗子を使用してリーフレットの両面を溶液に3〜4回浸してから、細胞培養インキュベーター内で組織を摂氏37度で5〜10分間インキュベートし、2分ごとに3〜4回組織を穏やかに揺らします。インキュベーションの終わりに、2ミリリットルの溶液を皿から滅菌15ミリリットルの円錐管に移します。リーフレットの結節に鉗子を配置し、滅菌綿棒を使用して、リーフレットに沿って綿棒を回転させながら、鉗子からヒンジまで組織をスワイプします。スワイプした後、コラゲナーゼ溶液のチューブで綿棒をすすぎ、先ほど示したように組織の反対側を綿棒で拭きます。すすぎ後、組織の両側で綿棒を繰り返し、1ミリリットルのピペットとコラゲナーゼ溶液を使用して、リーフレット表面の両側からディッシュに細胞を取り除きます。すすぎ後、皿から綿棒からの細胞を含むチューブにすべての溶液を移し、残りの弁組織を7ミリリットルの滅菌コラゲナーゼ溶液を含む新しい15ミリリットルの円錐管に入れる。遠心分離によって単離された弁内皮細胞をペレット化し、細胞ペレットを3ミリリットルの血管内皮細胞増殖培地に再懸濁する。2回目の遠心分離後、細胞を計数用の1ミリリットルの新鮮な増殖培地に再懸濁し、コラーゲンコーティングされた6ウェルプレートに5 x 10〜5細胞/平方センチメートルの濃度で細胞を播種し、3〜4日ごとに培地をリフレッシュします。弁内皮細胞パッチがプレートの80%以上を覆っている場合は、増殖速度に応じて、細胞を1平方センチメートルあたり1.3 x 10から4番目の細胞の濃度で分割

isolation-of-human-primary-valve-cells-for-in-vitro-disease-modeling

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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このビデオでは、2段階のコラゲナーゼ手順を使用して成体マウスの心臓から大動脈弁間質細胞を分離し、その後、少量の増殖培地で培養する方法を示します。...

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ここでは、マウスの心臓弁を培養し、弁の生物学の研究を可能にするex...

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このプロトコルでは、分離、カルチャ、および石灰化弁のラット由来間質細胞の石灰性大動脈弁疾患 (CAVD) の高い生理生体外モデルをについて説明します。このモデルラットの搾取は、CAVD...

初代ラットの分離と性状バルブ間質細胞: 大動脈弁石灰化を研究するための新しいモデル

本研究では、石灰化大動脈弁の新鮮なサンプルからのTリンパ球分離のプロセスと、フローサイトメトリー分析を用いた適応性白血球サブセットの特性評価のためのT細胞クローニングの分析ステップについて述べた。...

照射されたバフィーコートからのフィーダー細胞を用いたTリンパ球の分離と培養による大動脈弁石灰化の調査

この記事では、2段階コラゲターゼ法によるマウス大動脈弁細胞の単離について説明します。孤立したマウス弁細胞は、この インビトロ...

マウス間質弁細胞の分離を用いて大動脈弁の石灰化を 研究

本稿では、初代患者特異的なヒト大動脈平滑筋細胞および皮膚線維芽細胞を単離および培養するための外植培養ベースの方法について説明する。さらに、細胞収縮の測定およびその後の分析のための新規な方法が提示され、これはこれらの細胞における患者特異的な差異を研究するために使用することができる。...

原発性患者特異的大動脈平滑筋細胞の単離とインビトロでの半定量的リアルタイム収縮測定

初代肝細胞は、生理学的に関連する実験系の生化学的、分子生物学、代謝機能を評価するための貴重なツールを提供しています。我々は一貫してto1.0×10アップ可能な肝細胞を生成する現場肝灌流、ラットの信頼性の高いプロトコルを記述する...

ラット肝細胞の単離及び初代培養

学ぶヒト初代弁細胞の単離法。大動脈弁から内皮細胞と間質細胞をコラゲナーゼ処理で分離し、生存率40%を61時間維持。石灰化性大動脈弁疾患の病態研究に有用なin vitroモデルを構築する手法です。

in vitro疾患モデリングのためのヒト初代弁細胞の単離

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