Name: 母親と乳児の精神疾患に対する翻訳的に関連するパラダイムとしての妊娠における心理社会的ストレスのマウスモデルの使用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: 学ぶ妊娠中のマウスを用いた慢性心理社会的ストレスモデルによる母親と子の神経内分泌・行動変化の評価方法。このモデルは周産期精神疾患のメカニズム解明に有用です。

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著者らは、国立一般医学研究所T32 GM063483-14助成金とシンシナティ小児研究財団からの支援を認めたい。2019年、ズーボフスキーらから適応したデータについては、クリエイティブ・コモン・ライセンスは、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/。

記載されているすべての動物実験は、シンシナティ小児医療センターの動物ケアと使用委員会によって承認され、国立衛生研究所のガイドラインに従っていました。標準的なげっ歯類のチョウと水への アドリビタム アクセスは、CGSパラダイム中を含むマウスに常に提供された。マウスは、特に指定されていない限り、14時間/10時間の明暗サイクル(06:00時間のライト)で収容された(すなわち、夜間の光への暴露)。
1. 時取り合いの準備
<ol><li>タイミング付き交配を設定する少なくとも2週間前に、成人雌マウスを標準的なマウスケージ(18.4cm x 29.2 cm x 12.7 cm)に一緒に収容し、ケージあたり4匹のマウスを収容する。各メスのマウスに、イヤータグを使用して特定のID番号を付けます。 注:C57BL6雌マウスは妊娠前おらず、3〜6ヶ月の間にこのプロトコルに使用されました。</li>
	<li>タイミング付き交配を設定する少なくとも1週間前に、交配に使用する成人雄マウスを個別に収容する。</li>
</ol>2. 時間指定の交配を設定する
<ol><li>時間指定の交配を 18:00 時間に設定します。2匹の雌マウスを取り、個別に収容された雄のマウスを保持するケージの中に置きます。翌朝の08:00までに時間の交配を分けます。</li>
</ol>3. 妊娠日 0.5 (G0.5) として指定された交付プラグを確認します。
<ol><li>時差交配を分離した直後に、雌マウスに交尾プラグが存在することを確認します。交付プラグの存在はG0.5をマークします。マウスがケージの内側にワイヤーグリッドを保持し、尾部でそっと持ち上げて膣の開口部を視覚化します。 注:交付プラグの存在は、性行為が起こったことを示しますが、妊娠を保証するものではありません。必要な実験マウスの数を計算しようとすると、マウスの50%が時間の交配から差し込まれ、妊娠が60%-70%の発生率を差し込むことが期待されます。</li>
	<li>簡単な目視検査を使用して、交点プラグ(膣開口部の内側またはわずかに突き出た不透明な白っぽい硬化塊)の存在を特定します。簡単な目視検査で交付プラグが容易に識別されない場合は、膣の開口部に鈍い端プローブをそっと挿入します。プローブ挿入の抵抗によって膣内にさらに戻って配置されたプラグを識別します。</li>
	<li>標準的なマウスケージで、交付プラグとグループハウスで雌のマウスを分離します, ケージあたり3〜4マウス.</li>
</ol>4. CGS パラダイムの準備
<ol><li>G5.5の制御およびCGSグループの2つのグループに、交付プラグを備えた雌マウスを収容するケージをランダムに割り当てる。ケージをランダム化して、グループごとにほぼ同じ数のマウスを持つことを試みます。マウスを移動して標準的なマウスケージをきれいにし、「邪魔しない」サインでラベルを付けます。これらのケージを、各ストレッサーの最後にマウスを配置するための「ホームケージ」として指定します。</li>
	<li>CGS パラダイムを実行するために、マウス機能内の別の部屋を指定します。G6.5からG17.5まで続く11日間のストレッサーレジメンを設計し、7日間のストレッサー(異物(大理石またはレゴへの暴露)、捕食者の臭い暴露(汚れたラット寝具)、30°ケージチルト、頻繁な寝具の変更、寝具の除去、3つの夜のストレッサーの動きを1日2回利用し、3つの夜のストレスを利用します(一晩で消灯します)。 ケージメイトの変更、濡れた寝具への暴露)ランダムな方法で一晩。以下に説明するサンプルスケジュールと実験の概略については、 図1を参照してください。 注:毎日ストレッサーは、マウスの光サイクル(06:00 h-20:00 hのライト)内に入り、最後の2時間、ストレッサーの間に少なくとも2時間の休憩を取る必要があります。毎晩のストレッサーは、暗いサイクルの開始時(20:00のライトオフ)に設定し、ライトサイクルの開始時(06:00のライト)で分離する必要があります。</li>
</ol>5. CGS パラダイムの実行
<ol><li>CGSパラダイム用に指定された部屋に、フィルターされたトップと水筒を備えた標準的な静的ケージに特定のストレータを設定します。ランダム化中に CGS を受けるマウスケージの数に応じて、実験に必要な静的ケージの数を準備します。各ストレータを開始する前に、ハウジングルームからCGS室にCGSグループのマウスケージを移します。 注:マウスのハンドリング/移し、ホームケージから実験ケージに、そしてラミナーフローフードに戻ります。</li>
	<li>あらかじめ設計されたレジメンに従って以下のストレッサーを適用します(ステップ4.2を参照)。<ol>
<li>異物(大理石またはレゴ)への暴露:マウスの巣を含めずに、マウスの寝具できれいな静的ケージにランダムに分散された6つの大理石(直径14mm)または6つのレゴ(高さ4cmを超えないように)をランダムに配置します。マウスをホームケージの対応するマウスと一緒に、異物と一緒に静的ケージに2時間置きます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。 メモ:使用後に異物を清掃してください。</li>
		<li>捕食者の臭い暴露(汚れたラットの寝具):マウスの巣を含まずに、マウスの寝具のないきれいな静的なケージに雌のラットからの新鮮な汚れたラットの寝具の深さで1cmを置きます。マウスを自宅のケージの対応するマウスと一緒に、2時間汚れたラット寝具で静的ケージに入れます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。</li>
		<li>30°ケージチルト:マウスの巣を含めずに、ホームケージの対応するマウスを、マウスの寝具付きのきれいな静電気ケージに入れます。ケージを壁に対して30°で2時間傾けます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。</li>
		<li>寝具の頻繁な変更:マウスの巣を含めずに、ホームケージの対応するマウスを、マウスの寝具付きのきれいな静的ケージに入れます。マウス寝具を10分ごとに清潔なマウス寝具で2時間置き換えてください。マウス寝具の変更時には、マウスを別のクリーンケージにそっと置き、マウスとの直接接触を避けます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。</li>
		<li>寝具の取り外し:マウスを自宅のケージの対応するマウスと一緒に、空のきれいな静的ケージ(マウス寝具やネストレットなし)に2時間置きます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。</li>
		<li>シェーカー上の動き:マウスの巣を含めずに、ホームケージの対応するマウスを、マウスの寝具付きのきれいな静的ケージに入れます。静的ケージを、2時間分あたり140ストロークに設定した往復ラボシェーカーの上に置きます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。</li>
		<li>ライトへの一晩の露出:マウスの巣を含めずに、ホームケージの対応するマウスを、マウスの寝具付きのきれいな静的ケージに入れます。暗いサイクルを妨げるために、一晩(20:00 h-06:00 h)のライトをオンに保ちます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。</li>
		<li>ケージメイトの変更:2匹の雌マウス(無傷の雌は治療または対照群の一部ではない)によって収容されているマウス寝具できれいな静的ケージにマウスを移す。一晩で見慣れないケージの仲間と静的なケージにマウスを保ちます。ストレータの終わりに、特定のホームケージの対応するホームケージにマウスを戻します。</li>
		<li>ぬれた寝具への露出:寝具が水で飽和するまで24°Cで保たれたきれいな水で、静的なケージをマウスの寝具で満たします。一晩濡れた寝具で静的なケージに彼らのホームケージの対応と一緒にマウスを置きます。ストレータの終わりに同じ相手と自宅のケージにマウスを返します。</li>
	</ol></li>
	<li>CGSパラダイムの間、コントロールマウスをハウジングルーム内の自宅のケージに邪魔さないようにしてください。</li>
	<li>使用済みホームケージをG10.5の新しいホームケージに交換します。G17.5では、一晩のストルメンサの終わりに、全ての実験マウスを単一ハウスで、分娩および下流機能評価の準備をする。</li>
</ol>6. CGSパラダイム中の実験マウスのモニタリング
<ol><li>一晩のストレッサーの間を除いて、ストレッサー塗布中に1時間ごとにマウスを監視する。</li>
	<li>創傷、無気力、または任意の物理的な異常を含む苦痛の徴候を示すマウスを実験から除外する。必要に応じて、獣医のスタッフに連絡してください。</li>
</ol>7. 実験マウスにおける妊娠中の体重増加率の測定(オプション)
<ol><li>G6.5では、ストレータに曝される前にマウスの重さを個別に測定します。G17.5では、一晩のストレータの終わりに、マウスを個別に計量する。同等の妊娠時にコントロールマウスの重量を量る。</li>
	<li>CGSパラダイム(G6.5)の初日の体重を100%に設定して、妊娠中の体重増加率を測定します。</li>
</ol>8. 実験マウスにおける産後相対副腎重量の測定(任意)
<ol><li>産後2日目(PP2)では、制御とCGSダムを個別に計量します。二酸化炭素吸入によってダムを安楽死させ、続いてヒュームフードに子宮頸部脱臼を行う。</li>
	<li>マウスを解剖プレートに置き、70%エタノールで腹部を殺菌し、ハサミを使って腹腔を開いて垂直カットを行います。腎臓の前極に隣接する副腎を鉗子で両側に分離する。慎重に解剖顕微鏡の下に副腎を囲む脂肪組織を解剖.</li>
	<li>両側副腎を個別に秤量する。グラムあたりのミリグラムで相対的な副腎の重量を計算します (右と左副腎/体重の総重量).</li>
</ol>9. 実験マウスにおける分娩後視床下部下垂体副腎(HPA)軸活性の測定(任意)
<ol><li>HPA軸測定に備えて、分娩後0日目(PP0)にごみを1リットル当たり6匹の子犬に安楽死させます。二酸化炭素吸入を使用し、続いて安楽死の二次的な方法として外科用ハサミで切断する。</li>
	<li>産後2日目(PP2)では、換気の良い50 mLポリプロピレンコンピカルチューブ内の制御とCGSダムを20分間個別に抑制します。拘束応力の直後に、円錐管からマウスを取り出し、肩の上に緩い皮膚を保持し、耳の後部を保持して下顎の緊張の上に皮膚を持たせます。</li>
	<li>下顎静脈を下顎骨の少し後ろにランセットで穿刺するが、外耳道の前部。血清分離器チューブに最大100μLの母体血液を採取します。サンプル採取後、ガーゼで穏やかな圧力を穿刺部位に加えて出血を止める。出血が止まったら、ダムをホームケージに戻します。</li>
	<li>21,130 x g で血清分離器チューブを6分間遠心し、慎重に血清を取り除きます。血清は-20°Cで保存し、後で使用してください。メーカーのプロトコルに従ってELISAキットで血清コルチコステロン濃度を測定します。</li>
</ol>実験マウスの産後行動変化の測定(オプション)
<ol><li>行動分析の準備として、PP0上のごみ1匹につき6匹の子犬にごみをカリングする。</li>
	<li>PP2からPP5までの母体ケア断片化の分析を行う。毎日、光サイクル中に、30分間の母親の行動をビデオ撮影する前に、5分間の習慣化期間のためにダムを試験室に公開します。<ol>
<li>個々の舐め/グルーミングバウトの平均長さとダム19によって行われたバウトの総数を測定することによって、母親のケアの断片化を評価します。 注:舐め/グルーミングの動作は、ダムが彼女の舌で子犬の体と接触しているか、子犬が彼女の前足でダムによって処理されている動作として定義されます。バウトは、ダムが彼女の子犬の舐め/グルーミングに従事している中断のない期間として定義されます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>PP0からPP6までのスクロース選好性試験(SPT)を介してアンヘドニアの分析を行う。ダムを100mLのきれいな水のボトル1本と、ホームケージ内の4%スクロース溶液の1本の100 mLボトルに浸します。毎日の水量とスクロースの消費量(mL)を測定します。ホームケージのボトル配置を交換します。過去4日間の平均を使用してスクロースの好みを計算する:好み%=[スクロース消費量/スクロース+水消費量)x 100]。</li>
	<li>PP8上で上昇ゼロ迷路(EZM)を介して不安のような行動の分析を行います。2つの閉じた象限と床から高い2つの開いた象限からなるEZM装置にダムを個別に置きます。ダムが5分間邪魔されずに迷路を探索できるようにします。開いている象限で費やした時間と、開いている象限へのエントリ数を定量化します。</li>
</ol>11. 出生後の子孫体重変化の測定(オプション)
<ol><li>子孫の体重分析の準備として、出生日(出生後0日目、PN0)にごみ1匹あたり6匹の子犬にゴミをカリングします。</li>
	<li>PN0上の子犬の体重と出生後の期間(PN2、7、15、21)の異なる時点での体重を記録します。</li>
</ol>

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著者らは開示する利益相反はない。

妊娠中のマウスを新しいストレッサーに対するHPA軸応答を含む産後の母親の神経内分泌機能をCGS摂動に曝露し、周産期気分および不安障害に関連する様々な行動異常に関連している。このモデルが環境危険因子の利用を採用していることを考えると、遺伝モデル22で他の方法で観察されるよりも高い形素変異が予想される。しかし、結果を混乱させる可能性のある変数を最小限に抑えるために注意を払えば、CGSパラダイムの適用から得られた結果は、研究機関全体で一貫して得ることができます。
このプロトコルの重要なステップには、CGSマウスとは別の住宅制御マウスを含む一般的な畜産慣行に関連するステップと、タイミング交配ステップが含まれる。共同ハウジング制御およびCGSマウスは、それ自体が対照群にとってストレスの多い刺激であり、したがって神経内分泌または行動結果23,24を混乱させる。同様に、サプライヤーから出荷された妊娠中のマウスで実験を始めないことをお...

分娩期の母親の悪影響を受けた母親および乳児の神経精神疾患に対する感受性の増加の根底にあるメカニズムはほとんど知られていない。実質的な母親の生理学的変化は、妊娠中および産後期への移行中に起こり、健康な子孫の神経発達のためだけでなく、母親の精神的健康を維持するためにも重要であると仮定されるいくつかの神経内分泌適応を含む1、2。母体視床下部下垂体副腎(HPA)軸のレベルでは、日周HPA軸活性のより平坦なリズムおよび急性ストレッサー3、4、5に対するHPA軸応答を減衰させることを含む、グルココルチコイド放出の概日およびストレス誘発レベルの両方での適応が観察される。HPA軸活性の増強は、循環性グルココルチコイドのレベルの増加を含む、産後の摂動性調節不変性の女性のサブセットで報告され、負のフィードバックを阻害した6、7、8を考えると、産後ストレス反応性の増加をもたらし、母親のHPA軸適応を防ぐストレッサーへの暴露は、神経精神障害に対する感受性を高めると考えられている。
母親および乳児の情動調節不整合に対するストレスの影響を解明するために、分隔期のストレスの幾つかのげっ歯類モデルが生成された。これらのモデルの大部分は、ダム生理学的状態9における恒常的な課題および変化をもたらす物理的ストレッサーの適用によって特徴付けられるが、例えば、妊娠11、または産後ショック暴露12の間に慢性的な拘束ストレス10および水泳ストレスのような。これらのパラダイムは、母体ケア10、11、12における産後うつ病のような行動や変化の出現をもたらすことが示されているが、人間の母親が一般的に経験するストリスターの心理社会的性質を正確に捉えることができないという制限がある。これは、経期における慢性ストレスの神経内分泌の結果を明らかにしようとする際に特に重要となり、異なるタイプのストレッサーの処理がHPA軸活性化9を調整するニューラルネットワークの変化によって媒介されると考えられることを考えると。
この制限を克服するために、いくつかのグループは、心理社会的侮辱または身体的および心理社会的ストリッサーの組み合わせを採用したストレスパラダイムを設計している。産後13日、14日に1日に数時間ダムが子犬から分離される母親分離モデルと、15,16のごみの存在下でダムが男性の侵入者にさらされる慢性社会的ストレスモデルは、身体的ストレスの妄想に関連する母親のケアとうつ病のような表現型の異常の出現を再現することができました。妊娠中の雌マウスがケージチルトや夜間照明を含む様々な心理社会的侮辱にさらされる慢性超軽度ストレスパラダイム、拘束ストレスや食物制限などの実質的な生理学的侮辱は、母親の攻撃性の障害を含む母親の行動の異常をもたらすストレッサーの混合性質への暴露をさらに明らかにしました。 HPA軸17,18の概日活動における調節不整レーションと同様に。これらの結果と一致して、妊娠中の交互拘束応力および過密モデルは、産後母体概日コルチコステロンレベルの上昇および母親のケアにおける変化をもたらすが、新しい急性侮辱への産後暴露後のHPA軸再活動では違いは認められない。
この研究の拡大は、予測不可能な方法で提示された複数の心理社会的侮辱を採用し、生理学的ストレッサーの使用を最小限に抑える妊娠ストレスパラダイムを生成する。研究は、以前にこの慢性心理社会的ストレスパラダイム(CGS)が母体HPA軸機能障害の発症をもたらし、産後初期期19におけるストレス反応性の亢進を含む結果を示している。これらの変化は、子犬が受ける母親のケアの質の変化、およびアンヘドニックおよび不安様行動19の出現を含む母親の行動における異常と関連しており、周産期気分および不安障害20,21と一致する特徴である。さらに、子孫の体重増加は、CGS19への子宮内暴露後の出生後の期間に減少し、CGSが将来の世代で持続的な陰性プログラミング効果を有する可能性があることを示唆している。
CGSパラダイムの開発における目標は、主に臨床的に関連するストレッサーを利用し、神経内分泌調節障害および周産期気分および不安障害の発症にしばしば関連する侮辱の種類、強度、頻度を正確に捉えるものであった。ここでは、この研究は、妊娠中の雌マウスをCGSに服従させる方法の詳細なプロトコルと、モデルの有効性をテストするために使用できる下流評価を提供する。

<table><tbody><tr><td>動物ランセット</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>GR4MM</td><td></td></tr><tr><td>鈍い端の調査</td><td>の細部の科学用用具</td><td>10088-15</td><td></td></tr><tr>SPT<td>のBraintreeの科学的なInc.</td>のための交尾の<td>プラグのびん</td>の点検に使用<td>WTRBTL S-BL</td><td>100 mLガラス製ウォーターボトル、ストッパーとシッパーボールポイントチューブ付き、1 mLずつグラデーション。</td></tr><tr><td>コニカルチューブ(50mL)</td><td>コーニング株式会社</td><td>352098</td><td>急性ストレスに対するHPA軸応答を測定するためにマウスを拘束するために使用されます。円錐形のチューブの端に換気用の小さな開口部があることを確認してください。</td></tr><tr><td>レゴス</td><td>アマゾン</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>マーブルアマゾン</td><td></td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>マウスコルチコステロンELISAキット</td><td>バイオベンダー</td><td>RTC002R</td><td></td></tr><tr><td>マウスEZM</td><td>TSEシステム</td><td>ズ-</td><td></td></tr><tr><td>相互実験用シェーカー</td><td>ラブネットインターナショナル</td><td>S2030-RC-B</td><td></td></tr><tr><td>血清セパレーターチューブベ</td><td>クトンディキンソン</td><td>365967</td><td></td></tr><tr><td>静的ケージ底</td><td>部 Alternative Design Manufacturing and Supply Inc.</td><td>RC71D-PC</td><td></td></tr><tr><td>静的ケージ - フィルター付きベンチレーテッドトップ</td><td>Alternative Design Manufacturing and Supply Inc.</td><td>FT71H-パソコン</td><td></td></tr></tbody></table>

母親と乳児の精神疾患に対する翻訳的に関連するパラダイムとしての妊娠における心理社会的ストレスのマウスモデルの使用

Using a Murine Model of Psychosocial Stress in Pregnancy as a Translationally Relevant Paradigm for Psychiatric Disorders in Mothers and Infants

分娩期は、母親の暴露が神経精神疾患の発症を含む母親と子孫の両方に長期的な悪影響を及ぼす可能性のある敏感な期間と考えられている。母子ダイアドにおける情動性調節不整合の出現に関連する危険因子が広範囲に研究されている。妊娠中の心理社会的ストレスへの暴露は、一貫して最も強い予測変数の一つとして浮上している。この関連付けを探索するために、いくつかのげっ歯類モデルが作成されました。しかし、これらのモデルは、女性が経験するストレッサーの種類、強度、頻度を正確に捉えていない、繰り返しの方法で提示される物理的ストレッサーまたは限られた数の心理社会的ストレッサーの使用に依存しています。これらの限界を克服するために、予測不可能な方法で提示された異なる強度の様々な心理社会的侮辱を採用する慢性心理社会的ストレス(CGS)パラダイムが生成されました。この原稿は、妊娠6.5日目から17.5日目までの妊娠中の雌マウスが日中および一晩で様々なストレッサーにさらされるこの新しいCGSパラダイムを記述しています。日のストレッサーは、2時間の休憩で区切られた1日あたり2つ、異物や捕食者の臭いへの暴露から寝具の頻繁な変化、寝具の除去、およびケージの傾きまで多岐にわたります。夜間ストリッサーには、連続光暴露、ケージメイトの変化、または濡れた寝具が含まれます。我々は以前、CGSへの暴露は、ストレス反応性の増加、断片化した母親のケアパターンの出現、アンヘドニア、および不安関連行動、周産期気分および不安障害に苦しむ女性のコア機能を含む母親の神経内分泌および行動異常の発症を引き起こすことを示した。したがって、このCGSモデルは、母体の情動調節不整合の根底にある分子欠陥を解明するユニークなツールとなり、胎児の神経発達に影響を与え、子孫に長期的な行動に悪影響をもたらす胎盤間メカニズムを解明することができます。

妊娠した雌マウスをCGSに曝露すると、妊娠期の体重増加の減少(図2A)および産後初期における副腎体重の増加を含む慢性ストレス関連パラメータの変化をもたらす(図2B)19。重要なことに、CGSへの暴露は、母親の神経内分泌機能における産後異常をもたらす。CGSダムは、新規急性侮辱の適用に続く血清コルチコステロンレベルの上昇によって証明されるように多動性HPA軸を示す(図3)19。
妊娠中の雌マウスをCGSにさらすと、さらに、うつ病のような表現型の出現を反映しているように見える産後初期の行動異常が生じる。CGSダムは、子犬が受け取る母親の信号の断片化の程度の増加によって反映されるように、母親のケアの変化を表示します。舐め/グルーミングの平均持続時間が短縮され、CGSに続く平均発作数の増加に関連しており、育成行動の多数...

慢性心理社会的ストレス(CGS)パラダイムは、母親と乳児の精神疾患をモデル化するために、マウスで妊娠中に臨床的に関連するストレータを採用しています。ここでは、このモデルを検証するためにCGSパラダイムとダウンストリーム評価を適用するステップバイステップの手順を提供します。

The peripartum period is considered a sensitive period where adverse maternal exposures can result in long-term negative consequences for both mother and ...

私たちのプロトコルは、慢性的なストレス、特に心理社会的ストレスが妊娠結果に及ぼす影響を評価するための新しいパラダイムを表すため、重要です。このプロトコルでは、妊娠中のマウスを予測不可能な方法で異なる強度の様々な心理社会的侮辱にさらす。以前の動物モデルパラダイムは、妊娠中の女性の経験を反映していない、物理的ストレッサーまたは繰り返し投与されるストレッサーの限られた数を採用しました。私たちの慢性的な心理社会的ストレスモデルは、これらの制限を克服します。この方法は、母親の精神的健康や不利な乳児の発達関連研究を含む様々な研究分野に大きな影響を及ぼし、より広く、子宮内有害事象を通じて成人病の発生の起源を理解する。CGSパラダイムで各ストレータを開始する前に、ハウジングルームからCGS用に指定された部屋にCGSグループマウスを持って来てください。妊娠6.5日目から17.5日目まで実行される11日間のストレッサーレジメンに続いて、マウスを異なるストレッサーにさらす。マウスを異物にさらすには、マウスの巣のないマウス寝具で6つのビー玉または異なる形状の6つのレゴをきれいな静的ケージにランダムに配布します。1つのホームケージからのすべてのマウスを異物を持つ静的ケージに2時間置き、マウスを自宅のケージに戻します。マウスを捕食者の臭いに曝露するには、雌のラットから1センチメートルの厚さの汚れた寝具を、マウスの寝具や巣のないきれいな静的ケージに入れます。1つのホームケージからすべてのマウスを汚れたラット寝具で静的ケージに2時間置き、マウスを自宅のケージに戻します。マウスをケージの傾きに当てるには、1つのホームケージからのすべてのマウスを、マウスの巣のないマウス寝具で清潔な静的ケージに入れます。ケージを壁に対して30度の角度で2時間傾け、マウスを自宅のケージに戻します。頻繁な寝具の変更にマウスを公開するには、マウスの巣のないマウスの寝具で、1つのホームケージからすべてのマウスを清潔な静的ケージに入れます。10分ごとに、マウスを別のクリーンケージにゆっくりと移動し、マウスの寝具を交換します。2時間後、マウスを自宅のケージに戻します。マウスを寝具除去にさらすために、1つのホームケージからのすべてのマウスを、マウスの寝具や巣のない空の清潔な静的ケージに2時間置き、マウスを自宅のケージに戻します。シェーカー上でマウスを動かすために、1つのホームケージからすべてのマウスを、マウスの巣のないマウス寝具できれいな静的ケージに入れます。静的ケージを相互ラボシェーカーの上に2時間毎分140ストロークに設定し、マウスを自宅のケージに戻します。マウスを一晩で明るくするには、1つのホームケージからのすべてのマウスを、マウスの巣のないマウス寝具できれいな静的ケージに入れます。暗いサイクルを妨げるために一晩中ライトを点灯してください。翌日、マウスを自宅のケージに戻します。マウスを新しいケージの合体に露出するには、2匹の馴染みのない雌マウスを含むマウス寝具で、マウスを清潔な静的ケージに移します。一晩不慣れなケージの仲間と静的なケージにマウスを残します。翌日、おなじみのケージ仲間と一緒にマウスをホームケージに戻しました。マウスを濡れた寝具にさらすために、24°Cに保たれたきれいな水で静的なケージにマウスの寝具を飽和させる。1つのホームケージからすべてのマウスを、濡れた寝具で静的なケージに入れます。翌日、マウスを自宅のケージに戻します。ステッサーレジメンが妊娠17.5日目に完了した後、単一の家は、分娩および下流の機能評価のために準備するために、すべての実験マウスを収容する。妊娠中の雌マウスをCGSにさらすと、妊娠中の体重増加の減少や産後初期の副腎体重の増加など、慢性的なストレス関連パラメータの変化を引き起こす。重要なことに、CGSダムは、新しい急性侮辱に続く血清コルチコステロンレベルの増加によって証明されるように、産後異常および母親の神経内分泌機能を示す。さらに、CGSダムは、子犬が受け取る母体信号の断片化の程度の増加によって反映されるように、母親のケアの変化を示す。試合の平均回数が増加する一方で、舐め/グルーミングの平均期間が短縮され、育成行動の短いエピソードが数多く示されています。スクロースの好みは、制御ダムと比較するとCGSダムでも落ち込み、アンヘドニアの存在を示唆している。最後に、CGSダムはまた、制御ダムと比較してEZMの開いた象限に費やされた時間の短縮によって測定されるように、不安関連の行動の増加を示す。子孫では、子宮内のCGSへの暴露は出生後7日目から21日目までの出生後の期間に体重増加を減少させるが、出生時に違いはない。体重増加のこの減少は、両方の男女の子孫に存在します。.この手順を試みるとき、時間指定妊娠を取得するためのスケジュールを確立し、一貫してシリーズ全体を実施する、可変予測不可能な心理社会的ストレッサーが重要です。この技術は、母親の心理社会的ストレスが胎盤機能や子孫の脳の発達と行動に性特異的な影響を引き起こす可能性があるなどの興味深い質問に答えるのに役立ちますか?そして、これらの効果は、薬理学的介入や出生後の母親のケアによって逆転または変更できますか?

using-murine-model-psychosocial-stress-pregnancy-as-translationally

Research

JoVE Journal

Behavior

行動

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