Name: マウスにおける脳卒中のモデリング:光血栓症による焦点性皮質病変 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: 学ぶマウスにおける光血栓症による焦点性皮質脳卒中の標準化プロトコル。Rose Bengal腹腔内投与と561nmレーザー照射により、侵襲を最小限に再現性の高い病変を誘導し、脳卒中後のメカニズムと治療戦略の評価を支援します。

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免疫ストロークコンソーシアム(FOR 2879、免疫細胞から脳卒中回復まで)のすべてのコラボレーションパートナーに、提案と議論に感謝します。この研究は、ドイツのドイツ・フォルシュングスゲマイインシャフト(DFG、ドイツ研究財団)が、ミュンヘン・クラスター・フォー・システム・ニューロロジー(EXC 2145 SyNergy - ID 390857198)の枠組みの下でドイツのエクセレンス戦略に資金を提供し、助成金LI-2534/7-1、LI-2534/7-1およびLL-112/1-1.1の助成金を受けました。

このビデオで報告された実験は、実験動物の使用に関する国家ガイドラインに従って行われ、プロトコルはドイツ政府委員会(ドイツのドイツ、ミュンヘン、ドイツ)によって承認されました。この研究で使用されたマウスは、生後10〜12週の雄C57Bl/6Jマウスで、チャールズ・リバー・ドイツによって派遣された。動物は制御された温度(22 °C±2°C)下に収容され、12時間の明暗サイクル期間とペレット化された食品および水のアドリビタムへのアクセスが行われました。
1. 材料・器具の準備
<ol><li>ローズベンガルを0.9%生理液に溶解し、10mg/mLの最終濃度に到達します。ヒートブランケットを接続して操作領域を暖かく保ち、麻酔中のマウス体温を37°Cに保ちます。</li>
	<li>はさみ、鉗子、綿片、デプサンテノール眼軟膏、縫合材を準備します。水分補給された操作領域を維持するために、(針なし)塩水溶液でシリンジを準備します。麻酔ガス(100%O2+イソフルラン)を準備します。</li>
</ol>2. 動物の準備
<ol><li>手術前に30分に鎮痛薬を注入する(4mg/kgカルプロフェンと0.1mg/kgブプレノルフィン)。</li>
	<li>注射するローズベンガルの用量を調整するためにマウスの体重を記録します(10 μL/g、100 μg/g)。</li>
	<li>イソフルランの流量が4%の誘導室にマウスを置き、身体とビブリッサエの自発的な動きが止まるまで麻酔します。</li>
	<li>マウスを立体的なフレームに移し、鼻を入れた状態で麻酔マスクに入れる。動物を固定し、イオブルラン濃度を4%で1分間維持します。その後、イオブルラン濃度を2%に減らして維持する。</li>
	<li>直腸プローブを静かに挿入して、外科的処置全体の温度を監視します。マウスの体温を37°Cに保つには、関連するフィードバック制御加熱パッドをセットします。</li>
	<li>両方の目にデブサンテノール眼軟膏を塗布し、消毒剤で皮膚と周囲の毛皮をきれいにします。</li>
</ol>3. フォトトロンボシスモデル
<ol><li>2.0〜2.5センチの縦切開を行い、頭蓋骨を露出させるために引き込む。創傷の合併症を避けるために、1回の切り傷で頭蓋骨の露出を行います。</li>
	<li>綿で骨膜を優しく取り除き、冠状縫合糸を特定します。</li>
	<li>保護メガネを着用し、561 nmレーザーのスイッチを入れ、ブレグマ+3 mmを左にマークします。</li>
	<li>レーザーのスイッチを切り、上記の印の座標に直径4mmの穴を貼ったステッカーを貼ります。</li>
	<li>腹腔内にベンガルローズ(10μL/g)をマウスに注入します。頭蓋骨から4〜5cmのレーザービームを置き、561 nmレーザーのスイッチを入れ、頭蓋骨を20分間照らします。</li>
	<li>頭蓋骨に0.9%の生理食塩水を2滴塗布して水分補給し、創傷を縫合し、37°Cの回復室に動物を置いて麻酔から回復する。1時間後、マウスを温度制御された部屋のケージに戻します。</li>
	<li>手術後3日間、12時間ごとに鎮痛薬を注入する(4mg/kgカルプロフェンおよび0.1mg/kgブプレノルフィン)。</li>
</ol>4. シャム操作
<ol><li>手順 4.1.1 および 4.1.2 で説明されているように、Sham 操作の 2 つの異なる手順を実行します。<ol>
<li>上記の操作と同じ手順をすべて実行します。レーザーのスイッチを入れずにローズベンガルを注入します。麻酔下で20分後、動物がケージに戻される前に、回復室に1時間滞在することを許可します。</li>
		<li>レーザーをオンにして、上記の操作と同じ手順をすべて実行します。ローズベンガルを注入しないでください。レーザー照明の20分後、動物が彼らのケージに戻される前に、麻酔から回復するために1時間回復室に滞在することができます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. レーザースペックル
<ol><li>加熱された毛布を接続して操作領域を暖かく保ち、麻酔中のマウス体温を37°Cに保ちます。</li>
	<li>イソフルランの流量が4%の誘導室にマウスを入れて、身体とビブリッサの自発的な動きが止まるまで麻酔し、マウスを立体性フレームに移します。</li>
	<li>マウスを鼻を入れた状態で麻酔マスクに入れる。動物を固定し、イオブルラン濃度を4%で1分間維持し、T鶏は2%で減らして維持します。</li>
	<li>直腸プローブを静かに挿入して、外科的処置全体の温度を監視します。関連するフィードバック制御加熱パッドを設定して、マウスの体温を37°Cに維持し、両方の目にデプサンテノール眼軟膏を適用します。消毒剤で皮膚と周囲の毛皮をきれいにしてください。</li>
	<li>2.0〜2.5センチの縦切開を行い、頭蓋骨を露出させるために引き込む。創傷の合併症を避けるために、1回の切り傷で頭蓋骨の露出を行います。</li>
	<li>レーザースペックルの下にステロタクティブフレームを置き、高さを調整して鮮明な画像を得ます。レーザースペックル灌流イメージング(LSI)カメラを頭蓋ウィンドウに焦点を当てます。前述の15のように、高解像度レーザースペックルイメージング(LSI)カメラシステムを設定します。</li>
	<li>785 nmの波長と80 mWレーザーを用いて、1cm×1cmの視野から1cmの動作距離で1cmの動作距離で21枚の画像/sのレーザーを使用して、1cm x 1cmの視野からデータを取得します。</li>
	<li>イメージング後、頭蓋骨に0.9%の生理食塩水を2滴塗布して水分補給し、創傷を縫合し、37°Cの回復室に動物を入れて麻酔から1時間回復する。1時間後、マウスを温度制御された部屋のケージに戻します。</li>
</ol>6. ニューロスコア
注:神経学的欠陥分析のために、1997年にエッケンシュタインらによって発表された修飾された神経学的スケールは15を使用する。
<ol><li>一般的な動物をスコア付けする (表 1) と焦点の赤字 (表 2) 。この複合スケールは、0 (赤字なし) から 46 (重度の障害) の範囲です。</li>
	<li>毎日同じ時間にニューロスコアを実行し、中性の匂いを保つために外科服を使用しています。</li>
	<li>テストの前に開いたケージで部屋の30分間マウスを習慣化し、30 sの各項目を観察することができます。</li>
</ol>7. 灌流
<ol><li>PBS-ヘパリン(2 U/mL)を含む20 mLシリンジを準備し、ベンチの上に1m置いて重力駆動の灌流を容易/確実にします。</li>
	<li>腹腔内100μLのケタミンとキシラジン(それぞれ120/16mg/kg体重)を注入します。5分間待ち、自発的な身体運動とビブリッサエの停止を裏付ける。</li>
	<li>動物を圧着位置に固定し、腹部の体表面を100%エタノールで消毒します。腹部に3センチの長い切開を行います。ダイヤフラムと肋骨を切って心臓を完全に視覚化します。</li>
	<li>右心房に小さな切開を行い、左心室に輸液カニューレを挿入し、20 mL PBS-ヘパリンを使用します。</li>
	<li>灌流した後、動物の首を切り落とし、脳を取り除き、ドライアイスを使って凍結し、さらに使用するまで-80°Cで保存します。</li>
</ol>8. 梗塞容積測定
<ol><li>クライオセクション:120μmごとに20μmの厚いセクションにクライオスタットで脳を連続的にカットし、スライドにマウントします。スライドは、さらに処理されるまで-80°Cで保管してください。</li>
	<li>クレシルバイオレット(CV)染色<ol>
<li>染色液を調製するには、500mLのH2Oで0.5gのCVアセテートを混ぜ、熱(60°C)を結晶が溶解するまで加熱します。溶液を冷却し、暗いボトルに保存することができます。使用する前に60°Cに再加熱し、フィルター(ペーパーフィルター)します。</li>
		<li>スライドを室温で30分間乾燥させます。95%エタノールに15分間、続いて1分間70%エタノール、その後50%エタノールで1分間入れる。</li>
		<li>スライドを蒸留水に2分間入れ、蒸留水をリフレッシュし、スライドを再び水に入れます。次いで、スライドを60°Cで10分間予熱染色液に入れる。 スライドを蒸留水で2回1分間洗います。</li>
		<li>スライドを95%エタノールに2分間入れる。その後、5分間100%エタノールに入れ、100%エタノールをリフレッシュし、100%エタノールに再び2分間置きます。その後、スライドを取り付け媒体で覆います。</li>
		<li>分析:スライドをスキャンし、スワンソン法16 によって間接梗塞体積を分析して浮腫を補正する:虚血領域=(虚血領域)(((二側半球)-(対角半球))。</li>
	</ol>
</li>
</ol>9. チューンル染色 (インシチュ アポトーシス検出キット)
<ol><li>スライドを乾燥し、PBSで4%パラホルムアルデヒド(ph 7.4)で10〜20分間の後固定、PBSで10〜20分間洗浄し、予冷エタノールでの後固定:酢酸2:1〜-20°Cで5分間。</li>
	<li>PBSで洗浄し、平衡バッファー(RTで最大60分まで10 s)を適用し、働力TdT酵素(加湿チャンバで37°Cで1時間)を適用します。</li>
	<li>作業強度停止/洗浄酵素(RTで10分)を適用し、PBSで洗浄し、温めた(RT)作用力抗ジゴキシゲニン共役(暗闇の中でRTで30分)を適用する</li>
	<li>PBSで洗浄し、RTで5分間DAPIでインキュベートし、フッ素マウントメディアでスライドをマウントします。</li>
</ol>

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<li>Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hardware+and+methodology+for+targeting+single+brain+arterioles+for+photothrombotic+stroke+on+an+upright+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope.</a> Journal of Neuroscience Methods. 170 (1), 35-44 (2008).</li>
</ol>

著者らは開示する競合する利益を持っていません。

提示されたプロトコルは、ローズベンガルの以前の腹腔内注射で、561 nmレーザーで無傷の頭蓋骨を照らすことによってフォトトロンボシスの実験的なストロークモデルを記述する。最近まで、このモデルの使用は低く、着実に増加しています。
このモデルにおける脳卒中誘導時の死亡率は存在しない。麻酔合併症または排除基準を満たした後の犠牲のために、手術中に5%未満の全体的な死亡率が生じる。このモデルの低いばらつきとその再現性を保証するために、次の除外基準が推奨されます: 1) 30分より長い操作時間;2)縫合糸の感染;3)咬傷;4)PT後24時間で梗塞や予め非対称性がない。
広く使用されている実験的なストロークモデルは、MCAの過渡閉塞であり、シリコンコーティングされた先端がMCAの起源を妨げるまで頸動脈内に導入される縫合フィラメントを用いる。このモデルはフィラメントを除去して再灌流を可能にし、ヒト臨床シナリオを模倣し、そこでは塞栓18,19<sup class="xref"...

21世紀 の先進国における虚血性脳卒中は依然として死亡の主な原因であり、成人障害を取得し、2017年には世界で約270万人が死亡した1。科学界の膨大な努力があっても、利用可能な治療法はほとんどありません。さらに、このような高い除外基準では、これらの既に限られた選択肢は多くの患者にアクセスできないので、脳卒中後の機能的回復を改善するための新しい治療法が緊急に必要になります。
脳の複雑な相互作用を再現する インビトロ モデルの能力を考慮すると、動物モデルは前臨床脳卒中研究に不可欠です。マウスは脳卒中研究分野で最も頻繁に使用される動物モデルです。これらのマウスモデルの大部分は、ヒト脳卒中病変の大部分がMCA領域2に位置しているため、中大脳動脈(MCA)内の血流を遮断することによって梗塞を誘発することを目的としている。これらのモデルは、より良い人間の脳卒中病変を再現するが、それらは高梗塞体積変動を伴う痙攣手術を伴う。
1977年3月にローゼンブラムとエル・サブバンがフォトトロンボミックモデルを提案して以来、後にワトソンら4匹のラットにこのモデルを適用して、虚血性脳卒中研究5,6で広く使用されるようになった。フォトトロンボミックストロークモデルは、以前に血流に注入された光感受性色素の光活性化の結果として、局所的かつ定義された皮質梗塞を誘導する。これは、光にさらされた領域の血管の局所血栓症を引き起こす。簡単に言えば、注入された感光性色素からの光への暴露時に、内皮細胞膜の局所的な酸化傷害が誘発され、血小板凝集および血栓形成につながり、続いて脳血流の局所的な破壊を引き起こした7。
この技術の主な利点は、その実行のシンプルさと病変を所望の領域に向ける可能性にあります。他の実験的な脳卒中モデルとは異なり、病変が無傷の頭蓋骨の照明によって誘発されるため、光血栓性脳卒中モデルを実行するには、軽度の外科的専門知識が必要である。また、十分に区切られた境界(図2Aおよび図5B)および特定の脳領域に病変を誘導する柔軟性は、虚血性または無傷皮質領域8内の細胞応答の研究を容易にすることができる。これらの理由から、このアプローチは、皮質可塑性の細胞および分子機構の研究に適している。
過去数十年の間に、研究グループ間の再現性の欠如に対する懸念の高まりは、いわゆる複製危機9を作り上げてきた。2015年10年に初の前臨床無作為化対照多施設試験研究の調整後、前臨床研究11、12、13を改善するためのツールが提案され、独立した実験室からの前臨床試験間の再現性が低下する原因の1つは、実験ストロークモデルおよび結果パラメータ14の十分な標準化の欠如であったことが確認された。そこで、脳卒中回復の機構原理の根底にある脳免疫相互作用を理解することを目的とした連携である「ImmunoStrokeコンソーシアム(https://immunostroke.de/)」が設立された際には、各研究グループの実験ストロークモデルの標準化が不可欠であった。
ここで説明した、上記の研究コンソーシアムで使用されるフォトトロンボティックモデルの誘導のための標準化された手順である。簡単に言えば、動物は麻酔薬を受け、腹腔内にローズベンガル注射(10μL/g)を受け、ブレグマから3mm残された無傷の頭蓋骨を、561nmレーザーで20分間すぐに照射した(図1)。さらに、このモデルでの脳卒中の結果を分析するための関連する組織学的および行動的方法が報告される。すべての方法は実験室で開発され、使用される標準的な操作手順に基づいている。

<table><tbody><tr><td>561 nm 波長レーザー</td><td>Solna</td><td>Cobolt HS-03</td><td></td></tr><tr><td>酢酸</td><td>Sigma ライフサイエンス</td><td>695092</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン麻酔システム</td><td>Drager</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ApopTag ペルオキシダーゼ In Situ アポトーシス検出キット</td><td>Millipore</td><td>S7100</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen pomade</td><td>Bayer</td><td>1578681</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6J マウス</td><td>チャールズ川</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>コリメーター</td><td>Thorlabs</td><td>F240APC-A</td><td></td></tr><tr><td>Cotons</td><td>NOBA Verbondmitel Danz</td><td>974116</td><td></td></tr><tr><td>Cresyl violet</td><td>Sigma Life Science</td><td>C5042-10G</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 70%</td><td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td><td>521005</td><td></td></tr><tr><td>エタノール96%</td><td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td><td>522078</td><td></td></tr><tr><td>エタノール99%</td><td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td><td>ETO-5000-99-1</td><td></td></tr><tr><td>濾紙</td><td>Macherey-Nagel</td><td>432018</td><td></td></tr><tr><td>細かいはさみ</td><td>FST</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>FST</td><td>11616-15</td><td></td></tr><tr><td>ヒーティングブランケット</td><td>FHC DC温度調節器</td><td>&nbsp;40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>Abbot</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td>イソペンタン</td><td>フルーカ</td><td>59070</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>Inresa Arzneimittel GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>レーザー スペックル</td><td>Perimed</td><td>PeriCam PSI HR</td><td></td></tr><tr><td>市長はさみ</td><td>FST</td><td>1410-15</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 PH: 7.4</td><td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td><td>P32799</td><td></td></tr><tr><td>保護メガネ</td><td>レーザー 2000</td><td>NIR-ZS2-38</td><td></td></tr><tr><td>ローズ ベンガル</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>198250-5G</td><td></td></tr><tr><td>ロティ-ヒストキット 取り付け 媒体</td><td>ロス</td><td>6638.1</td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td>ブラウン</td><td>131321</td><td></td></tr><tr><td>ステレオミクロスコップ</td><td>ツァイス</td><td>ステミ DV4</td><td></td></tr><tr><td>定位フレーム</td><td>Stoelting</td><td>51500U</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus スライド</td><td>Thermo Scientific</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Xylacine</td><td>Albrecht</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

マウスにおける脳卒中のモデリング:光血栓症による焦点性皮質病変

Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis

脳卒中は先進国における死亡および成人障害の主な原因である。新しい治療戦略の広範な調査にもかかわらず、脳卒中患者のための限られた治療選択肢が残っている。したがって、脳卒中後の炎症、血管新生、神経可塑性、再生などの病態生理学的経路に関するより多くの研究が必要である。イン ビトロ モデルが脳の複雑さを再現できないことから、実験ストロークモデルは、これらのメカニズムの新しい薬物標的の分析とその後の評価に不可欠です。さらに、いわゆるレプリケーションの危機を克服するためには、すべての手順の詳細な標準化されたモデルが緊急に必要とされます。ImmunoStroke研究コンソーシアムにおける取り組みとして、ローズベンガルの腹腔内注射を用いた標準化されたフォトトロンボティックマウスモデルと、561nmレーザーによる無傷の頭蓋骨の照明について説明する。このモデルは、侵襲的な手術なしで脳の任意の皮質領域に割り当てるマウスの脳卒中のパフォーマンスを可能にします。したがって、脳の様々な領域での脳卒中の研究を可能にする。本ビデオでは、組織学的分析と共にフォトトロンボティックモデルにおける脳卒中誘導の外科的方法が示されている。

ここで説明するモデルは、ローズベンガル注入によるフォトトロンボミックストロークモデルと20分間の無傷の頭蓋骨照明で、一定の561 nm波長と25mWの出力電力で繊維で行われます。完全なフォト血栓手術は30分続くが、動物は低麻酔下に保たれ、脳の損傷は中等度である。ケージに移してから約10分、すべての動物が目を覚まし、ケージの中を自由に動き、ゴミを入れ親と相互作用していました。
梗塞容積測定は、脳卒中誘導後24時間のクレシルバイオレット染色された連続コロナ脳部を用いて行った(図2A)。平均梗塞容積は29.3mm3で、1つの脳半球の23%を占めていた。さらに、このストロークモデルの変動性は、標準偏差が約3.5%と非常に低い(図2B)。病変領域は皮質下構造の愛情なしに運動皮質を包含する。
光血栓症は、複合神経スコア17(<strong class=...

ここで説明するフォトトロンボミックストロークモデルは、感光性染料の投与後にレーザー照明を用いて永久的な微小血管閉塞を誘導することによって無傷の頭蓋骨を通してストロークが生成される。

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, ...

フォトトロンボシスのストロークモデルアプローチは、限られた境界と皮質の異なる領域で傷害を誘発する柔軟性のために皮質可塑性の細胞および分子研究に適している可能性があります。3つの主な利点は、フォトトロンボシスモデルを他のストロークモデルと区別し、病変を所望の領域に向ける可能性、再現性が高く、死亡率が低い。適切なバラベンガルのドージングは、成功とモデルの安定性のために重要です。結果は、レーザーパワー、クロスアプリケーションタイミング、影響を受けない皮質の光学シリングなどの技術仕様に依存します。1 ミリリットルあたり 10 ミリグラムの最終濃度の 0.9%生理食塩水にバラのベンガルを溶解することで始めます.ホットリード滅菌器を使用して細心の注意を払ってすべての器具を殺菌し、微生物消毒スプレーで手術前後のすべての表面を消毒します。塩水溶液を充填したシリンジを調製し、水分補給された操作領域を維持し、麻酔ガスを調製します。注射するローズベンガルの用量を調整するためにマウスの体重を測定します。マウスの体温を維持するために、関連するフィードバック制御加熱パッドを設定します。マウスが完全に麻酔され、立体的フレームに固定されたら、直腸プローブを静かに挿入して、外科的処置中にマウスの体温を監視します。両方の目にDexパンテノール眼軟膏を塗布し、消毒剤で皮膚と周囲の毛皮をきれいにします。はさみを使用して、縦切りから2センチの縦切りを1回作り、頭蓋骨を露出させるために引き込む。綿を使用して骨膜を静かに取り除き、コロナ縫合糸を見つけます。561ナノメートルのレーザーをオンにしながら保護メガネを着用し、プラス3ミリメートルを左にマークし、レーザーのスイッチを切り、マークされた座標に直径4ミリメートルの穴を持つステッカーをフックします。ローズベンガルでマウスのイントラパリアタールを注入します。頭蓋骨から4~5センチメートルの距離にレーザー光を置きます。レーザーのスイッチを入れ、頭蓋骨を20分間照らします。0.9%生理食塩水の2滴を塗布することによって、頭蓋骨を水分補給します。傷口を縫合した後、麻酔から回復するために摂氏37度の回復室にマウスを置きます。1時間後、温度調節された部屋のケージにマウスを戻します。結晶紫色染色を連続コロナ脳切片に、脳卒中誘導の24時間後の梗塞体積エントリ解析に使用した。この脳卒中モデルのばらつきは低く、平均梗塞容積は29.3立方ミリメートルで、1つの脳半球の23%を占めていた。光トロンボシス病変は、複合神経スコアによって示される中等度および長期の感覚運動障害を引き起こした。脳卒中動物は手術後24時間後に神経スコアに有意な変化を示した。違いは持続したが、脳卒中マウスは時間の経過とともに改善した。ローズベンガルプラスイルミネーションを施したマウスでは、手術後24時間で

modeling-stroke-in-mice-focal-cortical-lesions-by-photothrombosis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このビデオは、感光性色素の投与後に無傷の頭蓋骨をレーザー照射することにより、マウスモデルで光血栓性脳卒中を生成する手順を示しています。...

マウスモデルにおける光血栓性脳卒中のモデリング:光血栓症を誘発するための感光性色素投与後のマウス頭蓋骨を介したレーザー照明技術

Photothrombosisは、再現性の高い方法で、興味のある分野での小よく区切り梗塞を誘発するための迅速、低侵襲技術です。これは、トランスジェニックマウスの脳の可塑性の根底にある細胞および分子応答を研究するために特に適している。...

Photothrombotic虚：マウス脳卒中研究のための低侵襲かつ再現性の光化学皮質病変モデル

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マウスにおけるモデリングのストローク：遠位中大脳動脈の永久的な凝固

ここでは、マウスの体性感覚皮質にRose Bengal光血栓をin vivoで誘導するための半侵襲的光学顕微鏡法のアプローチについて説明します。...

共焦点光学イメージングによるローズベンガル光血栓<em&gt;インビボ</em&gt;：単一の容器ストロークのモデル

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マウスの脊髄損傷のモデルとしての光血栓誘発性局所虚血

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全光学的アプローチを使用して、虚血性脳卒中を誘発すると同時に、覚醒して行動しているマウスの新たな脳卒中コアで蛍光バイオセンサーを使用してニューロンのCa2+...

行動マウスの虚血性脳卒中を誘発および監視するための同時光血栓症とファイバー測光法

このプロトコルは、ウイルスの送達、視球体の着床、光血栓誘導、アストロサイトおよびニューロン活動の同時記録、アストロサイトのオプトジェネティック刺激を含む統合的な手法を提供します。この統合手法は、虚血性脳卒中の急性期から慢性期にわたり、アストロサイトとニューロンの関係を同時に調査することを目的としています。...

振る舞うマウスの神経細胞およびアストロサイト活動の光血栓性脳卒中モデリングおよび in vivo 光学記録のための統合手法

学ぶマウスにおける光血栓症による焦点性皮質脳卒中の標準化プロトコル。Rose Bengal腹腔内投与と561nmレーザー照射により、侵襲を最小限に再現性の高い病変を誘導し、脳卒中後のメカニズムと治療戦略の評価を支援します。

マウスにおける脳卒中のモデリング:光血栓症による焦点性皮質病変

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