Gタンパク質共役受容体(GPPC)を組み込んだモデル脂質膜の構築

このプロトコルは、アガロース膨潤を、巨大な単層脂質小胞(GUV)に組み込むための強力かつ一般化可能な技術として利用し、ここで述べるように、ヒト1Aセロトニン受容体タンパク質(_5-HT1AR)の再構成に関して、薬理学的に重要なGタンパク質結合型受容体の1つである。

原形質膜の複雑さから、生体内のタンパク質を自在環境で研究することは課題となっています。巨大な単層脂質小胞、またはGUVは、生体膜特性を研究するための最も顕著なプラットフォームの1つであり、様々な生理学的条件を模倣するように設計することができます。このプロトコルは、ヒドロゲルの腫脹に続く自発的な組み込みに基づいて、タンパク質組み込まれたGUVを作製する方法を記述する。GUVを製造する従来の方法は、一体膜タンパク質の組み込みのために一般化することはできません。これらの方法は、多くの場合、低収率、方法論的に複雑でアドホックであり、広範なクラスのタンパク質には適用されません。一方、このプロトコルは、GUVに機能積分膜タンパク質を組み込むための柔軟で堅牢で簡単な方法を表しています。ここで紹介した例では、Gタンパク質共役受容体(GPCR)をGUVsに組み込みました。この間、カバースリップをメタノールに入れ、40分で30分間超音波処理して清掃します。