イン・ヴィヴォ 大型動物の眼球神経節細胞と視神経機能と構造を評価する方法

ねえ皆さん。温州眼科病院のユツイ・ザンさんです。上の神経は、オレキシン神経節細胞からのエクソンを欠き、その後、脳に視覚信号を伝達する。

上部神経損傷のより大きなモデルは、ロボットモデルからリンパの適用に新しい治療を翻訳するために不可欠です。ここでは、大型動物における上神経におけるオレキシン神経節細胞の構造および機能を評価するin vivo方法について説明する。この方法を段階的に提示することで、実験的な生殖障害を増加させ、より大きな眼科の眼科神経症の使用を促進したいと考えています。

電子カミソリで剃ります。そして、70%アルコールを3回準備し、皮膚をきれいにし、皮下静脈を露出させます。末梢静脈ヒマを静脈内に挿入する。

その後、アトロピンとプロポフォールを滴下します。6ミリメートルの気管管でヤギを挿管し、人工呼吸器に接続します。麻酔は、一定の2リットル管理流量で酸素中の3.5%イオブルランで維持された。

温度センサーをヤギの舌の下に置きます。ヤギの耳の近位端に酸素飽和切断をクリップします。血圧カフを太ももの基部に結びます。

クランプECGは順番に手足に切断します。その後、ヤギの重要な指標を監視することができます。髪を剃り、前頭骨の中心にベタジンと70%アルコールで皮膚を3回消毒します。

はさみと爪を含む滅菌袋を開きます。はさみで頭蓋骨を露出させるために皮膚切開を行います。前頭骨の中心に埋め込まれたスチール製ネジ。

髪を剃り、後頭部骨の2つの耳の中間点でベタジンと70%アルコールで皮膚を3回消毒します。皮膚切開を行います。後頭部骨の2つの耳の中間点に埋め込まれた鋼鉄ねじ。

接地針電極は、前頭頭蓋骨ねじの下に皮下に挿入される。活性電極と参照電極は、電極インポテンスを低減するために、アリゲータークリップでそれぞれ前頭および後頭ねじに接続されています。片目にパッチを当てる。

局所麻酔用点眼剤を眼表面に塗布する。両側の瞳孔は、点眼薬によって拡張される。ヤギの頭をガスで満たされた刺激装置に置きます。

黒い毛布を刺激器の上に置き、ヤギの頭を5分間適応させます。まぶた鏡は瞳孔を完全に露出させるために使用される。電極組織の接触インポテンスを確認してください。

同じ部屋の他の電気機器からの電磁干渉を避けるために、インポテンスがそれぞれ10キロメートル以下であることを確認してください。光刺激を受けずにベースラインノイズを確認します。FVEP 録音を開始します。

なお、各光強度でのFVEP記録は2回行われる。乾燥しているように見える場合は、人工涙で角膜を湿らせたことに注意してください。対側の目に対して約手順を繰り返します。

連続して異なる光強度でFVEP記録を開始します。各記録について、64のトレースが平均化され、1つの波形が得られます。FVEP波形における最初の正および活性ピークはP1およびN1として指定された。殺菌された地面の電極は耳たぶの中に置かれる。

滅菌された活性電極と基準電極は、それぞれ中線と前頭骨および後頭骨に沿って皮下に挿入される。まぶた鏡は瞳孔を完全に露出させるために使用される。片目にパッチを当てる。

連続して異なる空間周波数で他の目のパターンVEP応答を記録します。アリゲータークリップで接地電極に接続します。2つの滅菌された針の参照電極は両側の側面カンサスの1センチメートル後ろの皮の下に置かれる。

まぶた鏡は瞳孔を完全に露出させるために使用される。2つの分解されたERG記録電極は、人工涙の局所適用後に両方の角膜を中心とする。2つの刺激装置は50センチメートルの視野の間隔の各目の前に置かれる。

インポテンスが10キロメートル以下であることを確認してください。光刺激なしでベースラインノイズを追跡します。アンビュラントライトを目指します。

連続して異なる空間周波数で同時に両眼から開始パターンERG記録。最後に、視覚刺激器やアクティブなコントロールを使わずに、画面を戻してERGパターンを記録する。バンドパスフィルタは、3つのCPDパターンERGに対して1~75ヘルツの範囲に設定されています。

バンドパスフィルターは、その振幅に影響を与えることなく形状を滑らかにするために1〜50ヘルツです。波形の最初の正およびアクティブピークは、P1 と N1 として指定されます。N1から測定したパターンERG振幅は電極インポテンスを減ら P1.To、前頭皮膚の下に滅菌された針の基準が置かれる。そして、滅菌された針の参照電極は、片側の側面カンサスの後ろに1センチメートルの皮膚の下に置かれる。

人工涙の局所適用に対して、電化されたERG記録電極を角膜上に設置する。片目にパッチを当てる。表示は50センチメートルの表示距離に配置されます。

まぶた鏡は瞳孔を完全に露出させるために使用される。その後、ヤギはあごの残りの部分に置かれます。ヤギをカメラに合わせて、視神経ヘッドを共焦点スキャンレーザー眼科画像に送ります。

開始ボタンをクリックして、検出終了フェーズに入ります。マシンの読み込みが完了するまで待ちます。黄色のスタートボタンを押して、正式なイメージングを開始します。

ジョイスティックを調整して、赤外線画像を均等に照らし、画質を向上させます。右上の画面に直立した RET-0 画像が表示されるまで、カメラを前方にスライドさせます。ジョイスティックを変更して、水平のレティナル OCT イメージで均等に踊るようにします。

ジョイスティックのボタンを押して、画像を自動的にキャッチします。このジョイスティックを保持して、イメージの実行が完了するまでライブイメージ画面の画質を維持します。次に、取得を押します。

高品質の初期写真を選択します。右クリックして、[参照の設定]を選択します。フォローアップボタンを押して、プログラムが自動的にベースラインスキャンに現在のスキャンを一致させます。

マッチしたら、ジョイスティックのボタンを押して、リアルタイム自動追跡を有効にします。測定ボタンをクリックして、測定プラットフォームに入ります。消しゴムを選択し、RFL ラインを拭きます。

IPL と INL の境界を手動でアウトライン化するには、線描画ツールを選択します。赤と青の線の間には、GCC複合体があります。アカゲザルにおけるレティナ改変画像は、ヤギと同じ装置および手順を用いて行われる。

図Aはヤギの代表的なFVEPを示す。図Bはヤギにおける代表的なパターンERG波形を示す。図Cは、アカゲザルにおける代表的なパターンFVEPを示す。

そして、図Dはアカゲザルにおける代表的なパターンERG波形を示す。図2は、ヤギおよびアカゲザルの異なる末梢領域における視神経頭部およびGCC複合体の厚さの周りの代表的なレチナルOCT画像を示す。大型動物モデルは、翻訳研究において重要な役割を果たしています。

多くの場合、小動物モデルにおける有望な治療効果は、ヒト患者に翻訳されなかった。本研究では、ヤギとアカゲザルにおけるFVEP、PERG、OCTのビデオプロトコルを発表した。このインビボ法は、緑内障虚血性または外傷性視神経障害および視神経炎などの様々な眼神経症のより大きなモデルに適用することができる。