コンピューター断層撮影ベースの3次元可視化のサンプル調製

ここでは、マイクロX線コンピュータ断層撮影を用いたマウス後肢血管の可視化と定量方法について述べている。

ステッププロトコルを使用して下肢および腹部器官の血管のCT画像を撮ることは可能である。この方法により、血管全体を総合的に評価することができます。また、動脈のみ、あるいは同時に、動脈と静脈を評価することが可能である。

血栓を防ぎ、漏れたり、血液をうまく漏らしたり、気泡を避けることは非常に重要です。操作の前に、マウスの腹腔内腔にPBSで1単位/グラムのヘパリンを注入する。30分後、安楽死させたマウスの胸骨に正中線切開を行い、開いた胸郭をピンで固定します。

心臓を取り除く前に上昇大オルタを切り、肺を取り除いて下降大根を露出させる。下降大動脈を斜めに切り、船の断面を明らかにします。次に、血管拡張バッファーを実行しながら、22ゲージのカテーテルを下方大陸に挿入します。

カテーテルの根をピン留めし、逆流による漏れを防ぐために結び目を作ります。完了したら、13〜15キロパスカルの間の固定圧力で温めた血管拡張溶液で灌流を開始します。3分後、4%パラホルムアルデヒドの溶液をPBSに3分間浸透させます。

灌流を停止し、カテーテルに接続された延長管を、1:1の比率で希釈した新たに調製したコントラスト媒体の2mLで13〜15キロパスカルの間の固定で浸透する。動脈を可視化するには、口の足の爪を調べて、コントラスト媒体が動脈に到達したことを確認する。同様に、ダイヤフラムの下の大静脈をチェックして、造影剤の完全な循環を確認し、すべての血管を可視化します。

コントラスト媒体の循環が完了したら、三方向栓を閉じてチューブを取り外します。摂氏4度で一晩サンプルをインキュベートします。このプロトコルでは、マウスの下肢にあるすべての血管を可視化した。

後肢虚血モデルの結果は、非結紮大腿動脈が大腿静脈と平行に走っていることを確認した。また、コントラストメディアの中断により、結紮された大腿動脈や副次血管の発達が容易に見えやすかった。対照培地で満たされたいくつかの容器を見ることができる。

一方、非造影媒体の混合による造影媒体の破壊、または不十分な灌流も注目された。対照培地の立体顕微鏡観察の顕微鏡観察によって身体表面の動脈を見ることは不可能であり、血管構造の欠陥を評価しやすくなった。カテーテルを挿入する際には気泡を避けることは非常に重要です。

腹部の臓器もリラックスしているので、臓器から取り出してCTスキャンを行うことができます。この方法を使用することで、新しい4分の1の飽和を特定することができました。