Generating Transgenics and Knockouts in <em>Strongyloides</em> Species by Microinjection

Michelle L. Castelletto; Elissa A. Hallem

doi:10.3791/63023

マイクロインジェクションによるストロンギロイデス種におけるトランスジェニックとノックア...

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Immunology and Infection

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Generating Transgenics and Knockouts in Strongyloides Species by Microinjection

マイクロインジェクションによるストロンギロイデス種におけるトランスジェニックとノックアウトの生成

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09:42 min

October 7, 2021

DOI: 10.3791/63023-v

Michelle L. Castelletto¹, Elissa A. Hallem^1,2

¹Department of Microbiology, Immunology, and Molecular Genetics,University of California, Los Angeles, ²Molecular Biology Institute,University of California, Los Angeles

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

寄生性線虫 Strongyloides stercoralis および Strongyloides ratti のための機能的ゲノムツールキットには、トランスジェネシス、CRISPR/Cas9媒介突然変異誘発、およびRNAiが含まれる。このプロトコルは、生殖腺内マイクロインジェクションを使用して、導入遺伝子およびCRISPR成分を S. stercoralis および S. rattiに導入する方法を実証する。

マイクロインジェクションを使用してDNA構築物をストロンギロイデスに送達することで、ノックアウトとトランスジェニックを生成することができ、これらのワームがどのように発達し、環境をナビゲートし、宿主に寄生するかを研究するために使用できます。これまでのところ、これはこれらの寄生虫にノックアウトとトランスジェニックを生成するための唯一の成功した技術です。マイクロインジェクションの1日前に、ガラスパスツールピペットを使用して180マイクロリットルのアガロース溶液をカバースリップに加え、すぐに2番目のカバースリップを上に落としてアガロースを薄いパッドに平らにします。

5~10秒後、2つをスライドさせてトップカバースリップを取り外し、寒天パッドがどちらがオンになっているかを確認し、上を向いて置きます。次に、壊れたカバースリップから小さなガラス片を選択し、鉗子を使用して、パッドの上端近くの寒天に静かに押し込みます。マイクロインジェクションの日に、2つのプラスチックリングで作られたふるいであるBaermannホルダーに、2つの層のナイロンチュイルネットが3つの重なり合ったラボ組織で固定されています。

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