ワンポット2ステッププロトコールを用いた1-(2-[^18F]フルオロエチル)-L-トリプトファンのラジオ合成

このプロトコルの全体的な目標は、1ポット、2ステップのアプローチによってF18放射性標識トリプトファントレーサーを放射合成することです。放射性トレーサーは、トリプトファン代謝をイメージングするための広範な用途を見出すことができる。この技術は、より長い半減期、より少ない反応前駆体、より少ない反応量、および精製のための環境にやさしい相を有する放射性同位元素を使用する。

放射性トレーサーは、てんかん、神経精神障害、および神経腫瘍学を含むがこれらに限定されない、脳に影響を及ぼす様々な障害の診断に使用され得る。この方法は、他の市販の放射性標識モジュールに適用することができる。F18フッ化物溶液を受け取ったら、まず表面の鉛箱を調査し、1メートルの距離から最大放射線被ばく率を記録します。

出荷箱が汚染されていないことを確認するためにワイプテストを実施した後、F18フッ化物の線量と時間を記録します。F18フッ化物溶液を放射化学合成システムに移す。アルゴンラインを短い針で、F18フッ化物移送ラインを長い針でF18フッ化物バイアルに接続します。

次に、ホットセルガラスドアとリードドアを閉じます。アルゴン供給ラインをオンにするには、[アルゴン供給]をクリックします。アルゴン圧力を上げ、F18フッ化物押し出しラインをオンにして、フッ化物水溶液F18をQMAライトカートリッジに押し込みます。

すべての放射能がQMAライトカートリッジに閉じ込められ、放射能検出器の読み取り値が安定したら、アルゴン圧力を上げ、カートリッジを通してアルゴンをさらに5分間吹き付けて余分な水を除去します。F18フッ化物押し出しラインをオフにした後、アルゴン圧力をゼロに下げ、6ポート2ポジションバルブをF18フッ化物トラップ位置から溶出位置に切り替えます。反応バイアルを開き、入力MVP位置1本のアルゴンラインをオンにし、K222および炭酸カリウム溶液をQMAライトカートリッジを介して入力MVP位置1バイアルに押し込み、放射能を反応バイアルに溶出させる。

F18フッ化物溶出位置をトラップ位置に切り替えます。[加熱] ボタンをクリックして反応器を摂氏 110 度に加熱し、反応器に接続する出力 MVP 位置 4 アルゴン ラインをオンにして、溶媒を蒸発させて出力 MVP 位置 4 バイアルにします。冷却ボタンをクリックして、圧縮二酸化炭素で反応器を室温まで冷却します。

掃引ラインをオフにし、入力MVPポジション1をポジション2に切り替え、バイアル2に無水アセトニトリルを追加します。掃引ラインとヒーターを2回オンにして、F18フッ化物を摂氏110度で共沸乾燥させます。反応器が室温に達したら、掃引ラインをオフにし、入力MVP位置2を位置3に切り替え、トシル酸放射性標識前駆体をバイアル3に追加します。

反応器を閉じ、反応混合物を摂氏100度で10分間加熱する。反応溶媒を蒸発させるには、反応器が冷却されたら、掃引ラインをオンにして、摂氏100度で反応溶媒を蒸発させる。原子炉が冷却されたら、掃引ラインをオフにし、入力MVPの位置を3の位置から4の位置に切り替えます。

塩酸アセトニトリル混合物が加えられたら、反応物を摂氏100度で10分間加熱し、放射性標識前駆体中のtert-ブチルオキシカルボニル保護基およびtert-ブチルオキシカルボニル保護基を脱保護する。反応を中和するために、反応器が室温に達したら、入力MVP位置4を位置5に切り替え、反応混合物に2モルの水酸化ナトリウムを加え、入力MVPアルゴンラインをオフにする。次に、出力 MVP の F ボタンをクリックして出力 MVP をベント位置 4 から位置 5 に切り替え、次に入力 MVP の F ボタンをクリックして入力 MVP を位置 5 から位置 6 に切り替えて、反応混合物の中間ファイルへの転送を開始します。

出力MVPアルゴンラインをオンにした後、積層された中性酸化アルミニウムおよびC8カートリッジを通して、HPLCサンプルループの前に設置された中間バイアルに反応混合物を押し込む。反応器をすすぐために、出力MVP位置5を位置6に切り替え、すすぎ液を反応バイアル、カートリッジ、および中間バイアルを通して出力MVP位置6のバイアルに、順次押し込む。次に、HPLCループを注入位置から負荷位置に切り替え、入力MVPアルゴンラインをオンにすることによって、混合物の精製を開始する。

混合物が 5 ミリリットルの HPLC ループにロードされたら、[ロード] ボタンを [インジェクション] に切り替え、[HPLC の注入] をクリックして 1 分間に 3 ミリリットルの流量で HPLC クロマトグラムを開始し、[HPLC モニター] ボタンをクリックしてリアルタイム HPLC クロマトグラムにアクセスします。「転換MVP」ボタンをクリックして、ターゲットHPLCフラクションを約12分で短いC18カラムにそらします。C18カラムで目標放射能が収集されたら、4ポート2ポジション迂回バルブを廃棄物収集位置に切り替え、毎分4ミリリットルの割合で6分間キラルカラムをフラッシュして、マイナーなD F18 FETrp鏡像異性体および他の紫外線不純物を除去する。

「転換MVP」ボタンをクリックして、HPLC移動相を毎分3ミリリットルで製剤MVP位置1に戻します。移動相がキラルカラムおよびC18カラムを通過して、C18カラムに保持されたL-F18 FETrpを精製することを確認します。およそ32〜34分で、標的画分を製剤MVP位置2バイアルに集める。

次いで、製剤MVP位置2バイアル溶液を送達ラインおよび滅菌フィルターを通して最終用量バイアルに押し込む。滅菌フィルターを除去した後の最終用量活性および体積をアッセイする。システムを超純水で洗い流し、続いてエタノールを毎分4ミリリットルの流量で洗浄あたり少なくとも15分間流します。

HPLCポンプとPLCボックスの電源を切り、プログラムを閉じ、圧縮されたエアライン、アルゴンライン、二酸化炭素ライン、およびモジュールの主電源をシャットダウンします。約0.1ミリリットルの最終用量をQCバイアルの0.2ミリリットル挿入物に引き出す。部分シーケンス・プログラムがテキスト原稿に記述されているように、ホット・サンプルを実行します。

鏡像異性過剰値およびモル活性における化学的および放射化学的純度を計算することによってQCデータを分析します。pH値を決定した後、すべての試験結果が許容範囲に合格した場合は用量を放出する。QCについての代表的なHPLCクロマトグラムが示されている。

プログラムの10分間におけるボイド体積間のわずかなピークをブランククロマトグラムで検出した。非放射性標識標準参照L−フルオロエチル−トリトファンは、そのD対応物の標準参照から十分に分離された単一の異性体の存在を示した。L-F18トリプトファンの最終用量は、高い化学的純度および放射化学的純度を示した。

最高用量濃度での最終生成物の安定性試験を最大8時間行ったところ、L-F18トリプトファンは化学純度、放射化学的純度、鏡像異性過剰、およびpH値の点で安定であることが示されました。95%を超える化学的および放射化学的純度は、このプロトコルを使用して達成された。トレーサー精製には2つのカラムが使用されます。

化学不純物を除去するためにC18カラムに切り替えることを忘れないでください。この方法をフッ素-18標識トリプトファン放射性トレーサーの臨床生産に迅速に適応させることができます。