Name: オプトジェネティクスを使用して神経可塑性を逆転させ、ラットのコカイン探索を阻害する (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: 学ぶオプトジェネティクスを用いた神経可塑性の可逆化とラットのコカイン探索行動の抑制方法。視床-扁桃体回路における長期抑制的効果を誘導し、薬物再発の神経メカニズムを解明する技術です。

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著者らは、USPHS助成金K01DA031745(MMT)、R01DA042029(MMT)、DA035805(YHH)、F31DA039646(MTR)、T32031111(MTR)、およびペンシルベニア州保健省からの支援に感謝したいと思います。

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開示するものは何もありません。

上述したように、適切な実験結果を達成するために重要ないくつかの重要なステップがある。このプロトコルは、コカインの自己投与を適切に獲得した動物にのみ有効である可能性が高く、これまでのところ、上記で概説したパラメーターを使用してのみテストされています。コカインの投与量、強化のスケジュール、およびキューパラメータは、行動の結果にほとんど影響を与えずに変更できる可能性がありますが、これは直接テストされていませんが、二次的な強化スケジュールが扁桃体非依存性のコカインシークにつながる可能性があることを除いて、これは直接テストされていません14。.プロトコル全体を通して、光ファイバーの適切な構造と機能を検証することが、光刺激の成功を確実にするのに役立ついくつかのポイントがあります。ヘッドキャップからの損失を防ぐためにフェルールを適切にスコアリングし、光ファイバーを研磨し、インプラントを介した光出力の損失が30%を超えないことをテストする必要があります9。さらに、レーザー刺激パラメータは重要な考慮事項です。レーザーは比較的低出力(5〜7 mW)で操作する必要...

薬物乱用は、米国および世界中で非常に深刻な公衆衛生問題です。何十年にもわたる集中的な研究にもかかわらず、効果的な治療オプションはほとんどありません1,2。治療の大きな後退は、慢性的な薬物使用が環境手がかりと薬物自体との間に長期的な連想記憶を生成するという事実です。薬物関連の手がかりへの再曝露は、継続的な薬物使用と再発を動機付ける生理学的および行動的反応を促進します3。新しい治療戦略は、薬物と手がかりの関連を調節することに関与する回路を操作することを目的とした記憶ベースの治療法を制定することです。最近、外側扁桃体(LA)のシナプス、特に視床の内側生殖核(MGN)から生じるシナプスは、手がかりに関連するコカインの自己投与を繰り返すことによって強化され、この増強がコカイン探索行動をサポートできることが観察されました4,5。したがって、MGN-LAシナプスの可塑性を逆転させることで、キュー誘発による回復を減衰させることができると提案されました。
特定の脳回路のシナプス可塑性を正確に標的にする能力は、この分野にとって大きな課題でした。従来の薬理学的ツールは、再発行動を減少させることにある程度成功しているが、個々のシナプスを操作できないことによって制限されている。しかし、in vivoオプトジェネティクスの最近の開発は、これらの制限を克服し、時間的および空間的精度で神経経路を制御するために必要なツールを提供しました6,7,8。特定の脳回路で光感受性オプシンを発現させることにより、レーザー光を使用して回路を活性化または阻害することができます。周波数依存性光刺激は、行動する動物における回路のシナプス可塑性を特異的に操作するために利用することができる。
この原稿は、 in vivo オプトジェネティクスを使用して行動に関連するMGN-LA回路を操作するために取られた手順を概説します。まず、興奮性オプシンoChIEFをMGNで発現させ、光ファイバーをLAに両側に移植した。次に、動物は、MGN-LA経路を増強する手がかり依存的な方法でコカインを自己投与するように訓練されました。次に、473nmのレーザー光による持続的な低周波刺激を用いて、回路固有のLTDを製造した。 コカイン使用によって誘発される可塑性を逆転させることは、薬物探索行動に関連する行動を引き起こす手がかりの能力の長期的な低下をもたらした。

<table><tbody><tr><td>0.9% 生理食塩水</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>NC0291799</td><td></td></tr><tr><td>A.M.P.I. 刺激アイソレーター</td><td>Iso-Flex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AAV5.hSyn.oChIEF.tdTomato</td><td>Duke ウイルス ベクター コア (Roger Tsien 経由)</td><td>#268</td><td>Lin et al., 2009;Nabavi et al., 2014</td></tr><tr><td>AAV5.hSyn.tdTomato (Control)</td><td>Duke Viral Vector Core Control</td><td></td><td>See Lin et al., 2009;Nabavi et al., 2014</td></tr><tr><td>Artificial Tears (Opthalmic Ointment)</td><td>Covetrus</td><td>70349</td><td></td></tr><tr><td>ATP マグネシウム 塩</td><td>Fisher Scientific</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Butler Schein</td><td>38250</td><td></td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>Fisher Scientific</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>塩化セシウム</td><td>Fisher Scientific</td><td>289329</td><td></td></tr><tr><td>セシウム水酸化物</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>516988</td><td></td></tr><tr><td>セシウム・メタンスルホン酸</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>C1426</td><td></td></tr><tr><td>コカイン HCl</td><td>NIDA ドラッグ・サプライ・センター</td><td>9041-001</td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット</td><td>ライカ</td><td>CM1950</td><td></td></tr><tr><td>D-グルコース</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>BP231-1</td><td></td></tr><tr><td>デュアルチャネル温度コントローラー</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>TC-344C</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>ピッツバーグ大学 化学 ストックルーム</td><td>200C5000</td><td></td></tr><tr><td>フェルール ダストキャップ</td><td>トールラボ</td><td>CAPL</td><td>1.25 mm フェルール用白色プラスチックダストキャップ</td></tr><tr><td>フェルール嵌合スリーブ</td><td>ドーリックレンズ</td><td>F210-3011</td><td>Sleeve_BR_1.25、ブロンズ、1.25 mm ID</td></tr><tr><td>フェルール</td><td>精密繊維製品</td><td>MM-FER2007C-2300</td><td>&Oslash;1.25 mmマルチモードLC / PCセラミックフェルール、およびOslash;230 &MU;m穴サイズ</td></tr><tr><td>光ファイバー</td><td>トールラボ</td><td>FP200URT</td><td>200 &mu;mコアマルチモードファイバー(0.5 NA)</td></tr><tr><td>光ファイバーロータリージョイント</td><td>Prizmatix</td><td>(Amazonから注文)</td><td>直径18 mm、ファイバーファイバーストリッピングツール用FC-FCコネクタ</td></tr><tr><td></td><td>Thor Labs</td><td>T12S21</td><td></td></tr><tr><td>DAPI付きフルオロシールド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6057</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Henry Schein</td><td>6913</td><td></td></tr><tr><td>GTP ナトリウムソル</td><td>トフィッシャーサイエンティフィック</td><td>G8877</td><td></td></tr><tr><td>ハミルトン シリンジ</td><td>ハミルトン</td><td>80085</td><td>10 &mu;Lボリューム、26ゲージ、2インチ、ポイントスタイル3</td></tr>ヒート<tr><td>ガンAllied</td><td>Electronics</td><td>972-6966</td><td>250 V、750-800 &deg;F</td></tr><tr><td>熱硬化型エポキシ</td><td>精密繊維製品</td><td>PFP-353ND-8OZ</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>55737</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>塩酸</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック<td>・219405490イ</td><td></td></tr><tr><td>ソフルラン</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン HCl</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>55853</td>ケ<td>タミンは規制物質であり、施設のガイドラインに従って取り扱われるべき</td></tr>です <tr><td>Lactated Ringer's</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>9846</td><td></td></tr><tr><td>レーザー、ドライバー、レーザーとファイバーのカプラー</td><td>OEM レーザー システム</td><td>BL-473-00100-CWM-SD-xx-LED-0</td><td>100 mW、473-nm、ダイオード励起固体レーザー (1 つのオプション)</td></tr><tr><td>L-グルタチオン</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>G4251</td><td></td></tr><tr><td>リドカイン</td><td>バトラー シャイン</td><td>14583</td><td></td></tr><tr><td>光センサー</td><td>トール研究所</td><td>PM100D</td><td>デジタルディスプレイ付きコンパクトエネルギーメーターコンソール</td></tr><tr><td>ロックタイトインスタント接着剤</td><td>グレインジャー</td><td>5E207</td><td></td></tr><tr><td>硫酸マグネシウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>203726</td><td></td></tr><tr><td>微小電極増幅器/データ収集</td><td>分子デバイス</td><td>MULTICLAMP700B/Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>マイクロインジェクターポンプ</td><td>ハーバード装置</td><td>70-4501</td><td>デュアルシリンジ</td></tr><tr><td>マイクロマニピュレーター</td><td>サッター機器</td><td>MPC-200/ROE-200</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>BX51WI</td><td>電気生理用正立顕微鏡</td></tr><tr><td>オ</td><td>リンパス</td><td>BX61VS</td><td>エピ蛍光スライド走査顕微鏡</td></tr><tr><td>N-メチル-D-グルカミン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>M2004</td><td></td></tr><tr><td>オルソジェット歯科用セメント・液体</td><td>ラングデンタル</td><td>1504BLK</td><td>黒</td></tr><tr><td>オルソジェット歯科用セメント、粉末</td><td>ラング歯科</td><td>1530BLK</td><td>コンテンポラリー パウダー、黒</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>パッチ ケーブル</td><td>トール ラボ</td><td>FP200ERT</td><td>マルチモード、FT030 チューブ</td></tr><tr><td>ピクロトキシン</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td></td> AC131210010 <td></td></tr><tr><td>研磨ディスク</td><td>トール ラボ</td><td>D50FC</td><td></td></tr><tr><td>研磨パッド</td><td>Thor Labs</td><td>NRS913</td><td>9" x 13"</td></tr><tr><td>研磨紙</td><td>Thor Labs</td><td>LFG5P</td><td>5 &mu;mグリット</td></tr><tr><td>研磨紙</td>ト<td>ールラボ</td><td>LFG3P</td><td>3 &mu;mグリット</td></tr><tr><td>研磨紙</td>ト<td>ールラボ</td><td>LFG1P</td><td>1 &mu;Mグリット</td></tr><tr><td>研磨紙</td><td>Thor Labs</td><td>LFG03P</td><td>0.3 &mu;m grit</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>水酸化カリウム</td><td>Fisher Scientific</td><td>P5958</td><td></td></tr><tr><td>メタンスルホン酸カリウム</td><td>Fisher Scientific</td><td>83000</td><td></td></tr><tr><td>QX-314-Cl</td><td>Alomone Labs</td><td>Q-150</td><td></td></tr><tr><td>Rimadyl (Carprofen)</td><td>Henry Schein</td><td>24751</td><td></td></tr><tr><td>自己投与チャンバー/ソフトウェア</td><td>Med Associates</td><td>MED-NP5L-D1</td><td></td></tr><tr><td>重炭酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1064980500</td><td></td></tr><tr><td>L-アスコルビン酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7631</td><td></td></tr><tr><td>ペントバルビタールナトリウム</td><td>Henry Schein</td><td>24352</td><td></td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr>ホ<tr><td>スホクレアチンナトリウム</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>P7936</td><td></td></tr>ピル<tr><td>ビン酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス鋼小ネジ</td><td>WWグレインジャー</td><td>&nbsp;6GB25</td><td>M2-0.40mm 小ネジ、パン、フィリップス、A2 ステンレス鋼、プレーン、3 mm</td></tr><tr><td>フェルール用定位固定装置アダプター</td><td>Thor Labs</td><td>XCL</td><td></td></tr><tr><td>定位固定装置フレーム</td><td>Stoelting</td><td>51603</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8501</td><td></td></tr><tr><td>縫合糸</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>18020-50</td><td>絹糸;サイズ:5/0、直径:0.12 mm</td></tr><tr><td>TEA-Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>T2265</td><td></td></tr><tr><td>チオ尿素</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8656</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond 組織接着剤</td><td>Covetrus</td><td>001505</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Butler Schein</td><td>33198</td><td></td></tr></tbody></table>

オプトジェネティクスを使用して神経可塑性を逆転させ、ラットのコカイン探索を阻害する

Using Optogenetics to Reverse Neuroplasticity and Inhibit Cocaine Seeking in Rats

このプロトコルは、視床-扁桃体回路でコカイン誘発性を逆転させ、ラットにおけるその後のコカイン探索行動を減らすために光遺伝学的ツールを使用するために必要なステップを示しています。私たちの研究では、ラットが視聴覚キューと組み合わせてコカインを静脈内投与すると、視床の内側膝状核(MGN)から外側扁桃体(LA)の主要なニューロンへの入力で形成されるシナプスが、キューとコカインの関連が学習されるにつれて強くなることがわかりました。これらのシナプスでのコカイン誘発可塑性の逆転は、合図動機によるコカイン探索行動を減少させるという仮説を立てた。このような神経調節を in vivoで実現するために、MGN-LAシナプスの強度を低下させるシナプス長期抑制(LTD)を誘導したいと考えました。この目的のために、私たちは光を使って脳回路の神経調節を可能にするオプトジェネティクスを使用しました。興奮性オプシンoChiEFは、oChiEFを含むAAVをMGNに注入することにより、LAのシナプス前MGN末端に発現しました。次に、光ファイバーをLAに埋め込み、473 nmのレーザー光を1 Hzの周波数で15分間パルスして、LTDと逆コカイン誘発可塑性を誘導しました。この操作は、薬物探索行動を誘発するコカインに関連する手がかりの能力の長期的な低下をもたらします。

実験の順序を概説するタイムラインを 図1に示します。行動実験を通して、コカイン注入の数とアクティブレバーで行われた反応の数は、コカイン探索行動の強度の尺度として機能します。コカインの自己投与の最初の数日間は、積極的な反応の数は、2週目に安定する前に、各獲得日にわたって徐々に増加するはずです。逆に、非アクティブなレバー応答は、実験全体を通して低いままである必要があります(図2A)。器械消滅の初日には、コカインの予期せぬ欠如がコカイン探索行動のエスカレーションをもたらすため、通常、アクティブなレバー反応の数が増加します。ただし、ラットが新しい偶発事象を学習するにつれて、この応答はその後のセッションで徐々に減少し、6〜10 d以内のアクティブなレバー応答の数が少なく安定した数になります(図2B)。実験の自己投与段階または機器絶滅段階のいずれかで指定された取得基準に達しなかったラットは研究から削除され、データは最終分析に含まれません。
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ここで説明する方法は、ラットの行動関連回路におけるコカイン誘発可塑性を光遺伝学的に逆転させるために使用される手順を概説する。視床-扁桃体シナプスの持続的な低周波光刺激は、長期うつ病(LTD)を誘発します。コカインを経験したラットにおける in vivo 光遺伝学的に誘導されたLTDは、その後の手がかり動機による薬物探索の減弱をもたらした。

This protocol demonstrates the steps needed to use optogenetic tools to reverse cocaine-induced plasticity at thalamo-amygdala circuits to reduce ...

このプロトコルは、光遺伝学的技術の新しい進歩と薬物乱用の前臨床モデルを使用して、再発の促進に関与する神経回路の可塑性を逆転させるため、重要です。この技術の主な利点は、覚醒中の動物におけるシナプス活動の回路特異的操作を可能にすることであり、これは、将来の手がかり動機によるコカイン探索行動に対して長期的な阻害効果を有する。この方法は、行動に関連する神経可塑性を具体的に操作するために、他の多くのシステムおよび回路にわたって利用することができる。26ゲージのステンレス鋼注射カニューレを1マイクロリットルの濃縮AAV溶液で満たされたハミルトン注射器に接続して、手術の準備を開始します。動物に麻酔をかけた後、テキスト原稿に記載されているように、手術領域を剃り、目を滑らかにして乾燥を防ぎます。次に、ラットに体重量の鎮痛剤カルプロフェンを背中上部の皮膚から皮下注射し、5ミリリットルの乳酸リンゲル液を腰部の皮膚から皮下注射する。その後、静脈内カテーテル移植を行います。カテーテル移植直後に、ラットを定位固定装置フレームに固定し、アデノ随伴ウイルス注射を行う。頭蓋骨の上の皮膚からリドカインのボーラスを皮下注射して局所的に麻酔をかけ、頭蓋骨の前部から後部に0.5ミリメートルの切開を行います。頭蓋骨の表面を露出させるために上にある組織を取り除きます。ラットの頭を前後軸に沿って水平にし、脳定位座標をゼロにしてブレグマに水平にし、小さなドリルビットを備えたドレメルツールを使用して頭蓋骨に3つの小さな穴を開け、ドライバーでステンレス鋼のネジを所定の位置に取り付けます。AAVの注入のために、内側の生殖器核またはMGNのためにラットブレインアトラスからの座標に基づいて両側の穴を開けます。ブレグマに対して使用される座標は、前後軸でマイナス5.4ミリメートル、内側外側軸でマイナス3ミリメートル、背側腹軸でマイナス6.6ミリメートルです。カニューレがMGNに適切に配置されるまで、注射カニューレを毎分約4ミリメートルでゆっくりと下げ、濃縮AAV溶液を毎分0.1マイクロリットルの速度で注入します。注入が完了したら、注射カニューレを5分間そのままにして、カニューレからウイルスを拡散させてから、カニューレをゆっくりと脳から引き出します。次に、内側膝状核外側扁桃体末端を標的とした光ファイバーの移植に進む。ドレメルツールを使用して、原稿で説明されている座標で、外側扁桃体の上に両側の穴を開けます。鉗子を使用して光ファイバーインプラントのフェルールをつかみ、フェルールを定位固定装置アダプターに固定します。繊維の先端がLAの背側部分に位置するまで、毎分2ミリメートルの速度でゆっくりと繊維を下げます。最初にロックタイトインスタント接着剤の薄層を使用してフェルールを皮膚に固定し、次に歯科用セメントを使用します。歯科用セメントが十分に乾いたら、フェルールスリーブとダストカバーでフェルールを覆います。外科的処置の後、ラットを個別に収容し、ゲンタマイシン1ミリリットルあたり5ミリグラム、ヘパリン1ミリリットルあたり30USP単位を含む生理食塩水でカテーテルを毎日洗い流します。.行動実験開始の24時間前に、食物はラットを自由摂食体重の90%に制限します。ラットをオペラントチャンバーに入れて、コカイン1ミリリットルあたり2ミリグラムの自己投与のための毎日1時間のトレーニングセッションを、一定の比率で1スケジュールの強化の下で受けます。チャンバー内で、ラットがレバープレスできるようにします。指定されたアクティブレバーを押すと、1キログラムあたり1ミリグラムのコカイン注入が行われ、コンパウンドライトとトーンのキューが10秒間表示されます。指定された非アクティブなレバーを押しても、プログラムされた効果はありません。ラットが3日間連続して1日あたり少なくとも8回の注入に成功するまで、少なくとも10日間自己投与実験を続けます。.20日目までに取得基準に達しなかった場合、研究から除外されます。取得基準が正常に満たされた後、ラットがオペラントチャンバー内で自由にレバープレスできるようにすることにより、ラットを6〜10日間1時間の機器絶滅セッションにかけます。2日間連続して平均最大25回のレバープレスが発生するまで、毎日機器の消火を続けます。長期うつ病またはLTDの光遺伝学的誘導のために、清潔で標準的なげっ歯類のハウジングケージの上に吊り下げられた回転ジョイントを介して、パッチケーブルを473ナノメートルの青色レーザーダイオードに接続します。取扱説明書に従ってレーザーの電源を入れ、レーザーをパルス発生器に接続します。設定を調整して、ラットに1ヘルツで2マイクロ秒で900パルスの光を与えます。光センサーを使用してパッチコードを介した光出力を測定し、パッチケーブルを介した光出力が約5〜7ミリワットになるようにレーザー強度を調整します。ラットを清潔なハウジングケージに入れ、フェルールを露出させているダストカバーとフェルールスリーブを取り外します。次に、パッチコードを各フェルールに両側に接続します。適切に設定されていれば、げっ歯類は光遺伝学的刺激中にケージの周りを自由に動き回ることができます。ラットが3分間環境を探索した後、パルス発生器をオンにして光遺伝学的刺激を開始します。長期のうつ病誘発後、ラットをケージに3分間留まらせてから、ホームケージに戻します。in vivo光遺伝学的刺激の24時間後、ラットをオペラントコンディショニングチャンバーに戻し、コカイン探索行動を評価するために1時間の標準的な合図誘発復帰セッションを受けます。アクティブレバーを押すと、ライトとトーンのキューが10秒間表示されます。最初の検査から少なくとも1週間後に、2回目の復職試験を行い、光遺伝学的LTD誘導がコカイン探索の長期的な抑制をもたらすかどうかを判定する。代表的な解析では、コカイン自己投与の獲得および消滅が示されている。コカイン注入と能動的レバー反応は獲得全体で増加し、非アクティブレバー反応はほとんどなかった。コカインの自己投与中、能動的反応の数は、2週目に安定する前に、各獲得日にわたって徐々に増加した。絶滅の初日には、レバープレスの最初のブーストが観察され、その後、両方のレバーでの応答が減少しました。器械の消滅に続いて、手がかりの再導入は、アクティブなレバー反応の数の増加に代表されるコカインシークを復活させました。光学LTDは、コントロールと比較してアクティブなレバープレスの大幅な減少を引き起こしました。7日後、ラットを再び試験した。以前にMGN-LA LTDを受けた動物は、対照と比較してアクティブなレバープレスを有意に減少させ、光学LTDがコカインシークの長期的な減少をもたらしたことが明らかになりました。Ex vivo電気生理学的記録は、光学LTDに続いて、LAニューロンにおける光学的に誘発された興奮性シナプス後電流の振幅の減少を示した。さらに、興奮性シナプス後電位の上昇勾配は、偽刺激を受けた動物からのニューロンにおけるex vivo光刺激によって減少したが、in vivo光学LTDを有する動物からのニューロンでは減少しなかった。光ファイバーインプラントの配置とウイルス発現は、外側扁桃体とMGNで組織学的に検証されました。コカイン探索行動をうまく減らすためには、光ファイバーインプラントを通して適切な光出力を達成し、持続的な低周波刺激を使用して長期的なうつ病を促進することが重要です。この手順に続いて、神経記録技術を使用して神経活動の変化を決定し、コカイン探索または他の学習行動の他の行動テストを実施することができます。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

出典: Rich, MT, et al.ラットにおける神経可塑性を逆転させ、コカイン探索を阻害するための光遺伝学の利用J. Vis. 経験。(2021年)このビデオは、光遺伝学を使用して、内側膝状核から外側扁桃体 (MGN-LA) シナプスに長期抑制 (LTD) を誘発し、ラット モデルにおける手がかり誘発性麻薬探索行動を弱める方法を示しています。ラットは外科的に光ファイバーを埋め込み、光感受性イオンチャネルを発現するようにウイルス形質導入され、低周波光パルスによる光遺伝学的刺激を受け、神経伝達物質の放出とシナプスの弱体化を引き起こします。このプロセスは、神経伝達物質受容体の内在化を通じて MGN-LA...

ラットにおける麻薬探索行動を抑制するための長期うつ病の光遺伝学的誘導

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