Name: メラノーマ転移の新規メディエーターの同定のための堅牢な発見プラットフォーム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: 学ぼう、メラノーマ転移の新規メディエーター評価のための標準化されたin vivoワークフロー。この頑健な動物モデルは、標的発見と治療開発の再現性を高め、オミクスデータ由来の候補を検証します。

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我々は、NYU Langone Healthの先端研究技術部門(DART)、特に、Perlmutter Cancer Center Support Grant NIH/NCI 5P30CA016087によって部分的に支援されている実験病理学研究所、ゲノム技術センター、サイトメトリーおよび細胞選別研究所、前臨床イメージングコアに感謝する。我々は、IRBが承認したプロトコール(ユニバーサル・コンセント研究#s16-00122および学際的メラノーマ協同組合グループ研究#10362)を通じて得られた患者由来のメラノーマ短期培養物+ (10-230BMおよび12-273BM)へのアクセスを提供してくれたNYU学際的メラノーマ協同組合グループ(PI:Dr. Iman Osman)に感謝する。113/6-4Lおよび131/4-5B1メラノーマ細胞株*を提供してくれたロバート・カーベル博士(トロント大学)と、WM 4265-2、WM 4257s-1、WM 4257-2メラノーマ短期培養**を提供してくれたMeenhard Heryn博士(Wistar Institute)に感謝します。E.H.は、NIH/NCI R01CA243446、P01CA206980、米国癌協会-メラノーマ研究同盟チームサイエンス賞、およびNIHメラノーマSPORE(NCI P50 CA225450;パイ:I.O.)。 図 1 は、 Biorender.com を使用して作成されました。

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著者は宣言する利益相反を持っていません。

このテクニカルレポートの目的は、メラノーマ転移における潜在的なアクターの調査のための標準化されたトップツーボトムのワークフローを提供することです。 in vivo 実験はコストと時間がかかる可能性があるため、効率を最大化し、得られる情報の価値を高める戦略が最優先事項です。
同じ実験内で調査結果をクロスバリデーションするために、全体を通して補完的なアプローチを使用することが不可欠です。例えば、NuMA免疫組織化学染色およびBLIはいずれも包括的ではないため、転移性負荷を定量する相補的な方法である。BLIは、 インビボでの腫瘍進行を追跡する非常に貴重で非侵襲的な方法ですが、これらのデータは本質的に低分解能です。NuMA染色は、固定臓器における転移性負荷の詳細な分析を可能にする。しかし、組織全体の厚さを網羅した切片化は実用的ではありません。そのため、各臓器のサンプルのみを染色することができます。実際、著者らの経験では、BLIの結果は、組織病理学的解析で明らかな腫瘍量に必ずしも正比例するわけではない。これは、部分的には、経頭蓋減衰<sup class="...

転移性黒色腫に関連する高い死亡率と、世界中で黒色腫の発生率の増加1(2025年までに推定7.86%増加)が相まって、新しい治療アプローチが求められています。標的発見の進歩は、非常に複雑なプロセスである転移の再現可能なモデルにかかっています。転移性カスケードのステップ全体を通して、メラノーマ細胞は、免疫系の回避および遠隔組織のコロニー形成を達成するために無数の障壁を克服しなければならない2。メラノーマ細胞の回復力と適応性は、その高い遺伝子変異負荷3および神経堤起源を含む多数の要因から生じ、重要な表現型可塑性3,4,5を付与する。各ステップにおいて、転写プログラムは、転移メラノーマ細胞が、免疫系6、細胞外環境7,8、およびそれらが接触する物理的障壁9の細胞アーキテクチャを含む微小環境とのクロストークからの手がかりに基づいて、ある状態から別の状態に切り替えることを可能にする。例えば、メラノーマ細胞は、重要な免疫プライミング腫瘍分泌因子6の発現をダウンレギュレートすることによって免疫監視を逃れる。
研究は、メラノーマ細胞がケモカインおよびサイトカインを分泌して、転移のために遠くの「標的」器官をプライミングする「転移前ニッチ」を記述している10。この新知見は、転移性黒色腫細胞の臓器指向性と、それらが遠隔組織にアクセスするためにとる解剖学的経路について重要な疑問を提起する。血管内投与後、メラノーマ細胞はリンパ管(リンパ性スプレッド)および血管(血行性スプレッド)を介して転移することが知られている2,11。ほとんどの患者は限局性疾患を呈するが、症例のごく一部は遠隔転移性疾患を呈し、リンパ管播種(陰性リンパ節関与)を示さず11、黒色腫の代替転移経路の存在を示唆している。
転移部位に定着すると、メラノーマ細胞はエピジェネティックおよび代謝適応を受ける12,13。新しいコンパートメントにアクセスして侵入するために、メラノーマ細胞はプロテアーゼ14および細胞骨格修飾11,15を採用し、それによって新しい場所を横断し、成長することができる。メラノーマ細胞を標的にすることの難しさは、そのような適応の複雑さと数にある。したがって、フィールドはできるだけ多くのステップと適応を実験的に再現する努力をする必要があります。オルガノイドおよび3D培養物16,17などのインビトロアッセイにおける多数の進歩にもかかわらず、これらのモデルは、インビボ転移カスケードを不完全にしか再現しない。 
マウスモデルは、再現性、技術的実現可能性、およびヒト疾患のシミュレーションのバランスをとることによって価値を示してきた。患者由来の異種移植片または短期培養物から免疫不全またはヒト化マウスに血管内、同時および異所性に移植されたメラノーマ細胞は、転移性メラノーマにおける標的発見のバックボーンを表す。しかし、これらのシステムはしばしば転移に対する重要な生物学的制約、すなわち免疫系を欠いている。この制約を有する同系黒色腫転移モデルは、この分野では比較的希少である。これらの系は、免疫担当マウスにおいて開発された、B16−F1018、YUMMファミリーの細胞株19、SM120、D4M3 21、RIM322、またはより最近では、RMS23およびM1(Mel114433)、M3(HCmel1274)、M4(B2905)24メラノーマ細胞株を含む、メラノーマ進行における宿主免疫応答の複雑な役割の調査を容易にする。
ここでは、メラノーマ転移標的同定のためのパイプラインが提示される。メラノーマ患者コホートから生成される「オミック」データセットがますます増えるにつれて、最も臨床的に有望な研究はビッグデータ統合から生じる研究であり、細心の注意を払った機能的および機械的な尋問につながると仮定します25,26,27,28。転移過程における潜在的な標的を研究するためにマウスモデルを使用することにより、生体内特異的事象および組織相互作用を説明することができ、したがって臨床翻訳の確率を高めることができる。転移性負荷を定量化するための複数の方法が概説され、任意の所与の実験の結果に関する補完的なデータを提供する。様々な臓器の腫瘍から単一細胞単離のためのプロトコルは、単一細胞またはバルクRNAシーケンシングに先行する可能性のある転移細胞における遺伝子発現の偏りのない特性評価を支援するために記載されている。

<table><tbody><tr><td>#15 スケーペルブレード&nbsp;</td><td>WPI</td><td>500242</td><td>外科手術用</td></tr><tr><td>#3 スケープ ハンドル</td><td>WPI</td><td>500236</td><td>外科手術用</td></tr><tr><td>1 mL ツベルクリン シリンジ、スリップ チップ&nbsp;</td><td>BD</td><td>309626</td><td>注射剤</td></tr><tr><td>10 mL シリンジ、スリップチップ&nbsp;</td><td>BD</td><td>301029</td><td>灌流</td></tr><tr><td>10% ホルマリン ナトリウム緩衝</td><td>EK インダストリー</td>ズ <td>4499-20L</td><td>灌流/組織固定用</td></tr><tr><td>15 mL コニカル</td><td>コーニング&nbsp;</td><td>430052</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>15 mL 円錐形ポリプロピレン遠心分離管</td><td>ファルコン</td><td>352196</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>200 プルーフ エタノール</td><td>Deacon Labs</td><td>04-355-223</td><td>組織学</td></tr><tr><td>22G &ndash; 22mm 針</td><td>BD</td><td>305156</td><td>灌流</td></tr><tr><td>4-0 ビクリル縫合糸</td><td>Ethicon</td><td>J464G</td><td>縫合糸</td></tr><tr><td>4% カーソンリン酸緩衝液パラホルムアルデヒド&nbsp;</td><td>EMS</td><td>15733-10</td><td>灌流/組織固定用</td></tr><tr><td>40&micro;m</td><td>Corning</td><td>431750</td><td>組織処理</td></tr><tr><td>5-0 吸収性縫合糸&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>6542000</td><td>クロー</td></tr>ジャー <tr><td>50 mL コニカル&nbsp;</td><td>コーニング&nbsp;</td><td>430828</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>50mL 円錐形ポリプロピレン遠心分離管</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>7-0 シルク縫合糸&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-70</td>結<td>紮糸70</td></tr><tr><td>&micro;m</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>ティッシュプロセッシング</td></tr><tr><td>アンチフェード封入剤&nbsp;&nbsp;</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000-10</td><td>鉗</td></tr><tr><td>子を塗布する免疫蛍光近似器、10cm&nbsp;</td><td>WPI</td><td>14189</td><td>顕微手術用</td></tr><tr><td>Avance</td><td>Bruker</td><td>3 HD</td><td>NMR Console&nbsp;</td></tr><tr><td>バイオスペック7030&nbsp;</td><td>ブル</td><td>カー7030</td><td>マイクロMRI</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioreg</td><td>A941</td><td>NuMA染色</td></tr><tr><td>カストロビエホ縫合鉗子、ストレートチップ5.5mm結束プラットフォーム、11cm&nbsp;</td><td>WPI</td><td>WP5025501</td><td>顕微手術用</td></tr><tr><td>Coplin Staining Jar</td><td>Bel-Art&nbsp;</td><td>F44208-1000</td><td>組織学</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-1MG</td><td>免疫蛍光</td></tr><tr><td>dCas9-KRAB</td><td>Addgene</td><td>110820</td><td>遺伝子操作</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>NEB</td><td>M0303L</td><td>組織処理</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>コーニング</td><td>21-030-CM</td><td>組織処理</td></tr><tr><td>超シャープ コーティングされていない片刃</td><td>GEM</td><td>62-0167</td><td>ティッシュプロセッシング</td></tr><tr><td>細胞外マトリックス基質&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>354234</td>、<td>成長因子の減少を考慮します(代替案として&nbsp;</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Cytiva</td><td>SH30910.03</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>Fiji Image J</td><td>Fiji Image J</td><td>Software</td><td>Immunofluorescence</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit HRP conjugated multimer&nbsp;</td><td>サーモフィッシャー</td><td>A16104</td><td>NuMA 染色</td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>Gibco</td><td>PCN5000</td><td>免疫蛍光</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>コーニング</td><td>21-020-CV</td><td>組織処理</td></tr><tr><td>ヘマトキシリン&nbsp;</td><td>リチャード・アラン・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>7231</td><td>組織学</td></tr><tr><td>イルミナIII&nbsp;</td><td>PerkinElmer</td><td>CLS136334</td><td>BLIイン</td></tr><tr><td>スリン注射器28G-8mm針</td><td>BD</td><td>329424</td><td>注射</td></tr><tr><td>インスリン注射器31G-6mm針&nbsp;</td><td>BD</td><td>326730</td><td>注射</td></tr><tr><td>虹彩鉗子、10.2cm、フルカーブ、鋸歯状</td><td>WPI</td><td>504478</td><td>灌流および外科的処置用</td></tr><tr><td>イソフルラン USP</td><td>Covetrus</td><td>11695067772</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>宝石商 #7 鉗子 チタン 11 cm 0.07 x 0.01 mm チップ</td><td>WPI</td><td>WP6570</td><td>顕微手術用</td></tr><tr><td>ケタミン HCl 100mg/mL</td><td>マイラン インディアナ州</td><td>1049007</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>lentiCRISPRv2</td><td>Addgene</td><td>98290</td><td>遺伝子操作</td></tr><tr><td>Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin, DyLight 649</td><td>Invitrogen</td><td>L32472</td><td>血管内皮細胞マーカー</td></tr><tr><td>MEM 非必須アミノ酸 X 100</td><td>Corning</td><td>25-025-CI</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>Metzenbaum はさみ</td><td>WPI</td><td>503269</td><td>外科用手順</td></tr>マイクロ<tr><td>インジェクションユニット</td><td>KOPF</td><td>5000</td><td>心臓内注射NaCl</td></tr>フィ<tr><td></td><td>ッシャーS25877&nbsp;</td><td></td><td>NuMA染色</td></tr><tr><td>針 30G x 25mm</td><td>BD</td><td>305128</td><td>心臓内注射</td></tr><tr><td>針 33G x 15mm</td><td>ハミルトン</td><td>7747-01</td><td>頸動脈内注射</td></tr><tr><td>針ホルダー、Castroviejo、14cm、ロック付き、1.2mm 鋸歯状顎</td><td>WPI</td><td>14137-G</td><td>顕微手術</td></tr><tr><td>用 NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ マウス</td> ジャ<td>クソン研究所</td><td>005557</td><td>マウス モデル</td></tr><tr><td>NU/J マウス</td> ジャ<td>クソン研究所</td><td>002019</td><td>マウス</td></tr><tr><td>モデル 核 有糸分裂装置 タンパク質 ポリクローナルウサギ 抗ヒト&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>97585</td><td>NuMA 染色ペ</td></tr><tr><td>ニシリン-ストレプトマイシン 10000U/mL</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE</td><td>0891-01</td><td>密度分離溶液&nbsp;</td></tr><tr><td>PI クラシック サージカル グローブ</td><td>カーディナル ヘルス</td><td>2D72PT75X</td><td>手術</td></tr><tr><td>pLKO Tet-On</td><td>Addgene</td><td>21915</td><td>遺伝子操作</td></tr><tr><td>ポビドン - ヨウ素 10% 溶液</td><td>Medline</td><td>MDS093943</td><td>手術</td></tr><tr><td>プロパラカインは 0.5%</td> <td>Akorn Pharma</td><td>AX0501</td><td>眼科局所麻酔薬</td></tr><tr><td>Puralube ワセリン 眼科軟膏</td><td>Dechra</td><td>83592</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>カミソリブレードダブルエッジブレード&nbsp;</td><td>EMS</td><td>72000</td>シェ<td>ービングとバイブロトーム脳スライシング&nbsp;</td></tr><tr><td>リフレックス9mm EZクリップ&nbsp;</td><td>ブレイン</td><td>ツリーEZC-&nbsp;KIT</td><td>創傷閉鎖</td></tr><tr><td>RPMI 1640&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>10-040-CM</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>ハサミ、スプリング 10.5cm Str、8mm ブレード</td><td>WPI</td><td>501235</td><td>顕微手術用</td></tr><tr><td>半自動振動ブレード ミクロトーム</td><td>ライカ</td><td>VT1200</td><td>ブレインスライス 免疫蛍光</td></tr><tr><td>シングルチャンネル麻酔気化器 システム</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>VetFlo-1210S&nbsp;</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>Smartbox 卓上チャンバー システムと排気ブロワー</td><td>EZ システム</td><td>TT4000</td><td>CO2 安楽死</td></tr><tr><td>滅菌 穴あき使い捨てドレープ</td><td>Medline</td><td>NON21002</td><td>手術</td></tr><tr><td>滅菌 非強化オーロラ 手術用ガウン セットインスリーブ付き</td><td>Medline</td><td>DYNJP2715</td><td>手術</td></tr><tr><td>T25 フラスコ</td><td>コーニング&nbsp;</td><td>430639</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>トリス</td><td>コーニング</td><td>46-031-CM</td><td>NuMA染色トリ</td></tr><tr><td>トンX-100</td>シ<td>グマアルドリッチ</td><td>X100-500ML</td><td>免疫蛍光</td></tr><tr><td>トラウトマンタイイング鉗子、10cm、湾曲したGパターン、0.52mmチップタイイングプラットフォームWPI</td><td></td><td>WP505210</td><td>マイクロサージェキューション手順用</td></tr><tr><td>血管クリップ10G圧力5x0.8mmジョーズ、5 / pkg</td><td>WPI</td><td>15911</td><td>For顕微手術</td></tr><tr><td>Visiopharm</td><td>Visiopharm</td><td>NuMA</td><td>染色定量ソフトウェア</td></tr><tr><td>キシラシン 100mg/mL</td><td>Akorn Pharma</td><td>59399-111-50</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>フィッシャー</td><td>X3P-1GAL</td><td>組織学</td></tr></tbody></table>

メラノーマ転移の新規メディエーターの同定のための堅牢な発見プラットフォーム

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

転移は複雑なプロセスであり、 インビトロ アッセイによって不完全にしかモデル化されない障壁を克服するために細胞を必要とする。メラノーマ転移における新規プレーヤーを同定するための、堅牢で再現性のある in vivo モデルおよび標準化された方法を使用して、体系的なワークフローが確立されました。このアプローチにより、特定の実験段階でのデータ推論が可能になり、転移における遺伝子の役割を正確に特徴付けることができます。モデルは、遺伝子組み換えメラノーマ細胞を心臓内、皮内、または皮下注射を介してマウスに導入し、続いて連続 インビボ イメージングでモニタリングすることによって確立される。予め確立されたエンドポイントに到達すると、原発性腫瘍および/または転移を有する器官が採取され、様々な分析のために処理される。腫瘍細胞を選別し、単一細胞RNAシーケンシングを含むいくつかの「オミックス」プラットフォームのいずれかに供することができる。臓器は、転移の全体的な負担を定量化し、その特定の解剖学的位置をマッピングするために、イメージングおよび免疫組織病理学的分析を受ける。生着、モニタリング、組織採取、処理、および分析のための標準化されたプロトコルを含むこの最適化されたパイプラインは、患者由来の短期培養物および様々な固形がんタイプの確立されたヒトおよびマウス細胞株に採用することができる。

以下の図は、記載されたワークフローがメラノーマ転移の新規ドライバーの同定にどのように適用されたかを示す。 図2 は、 in vivo メラノーマ転移におけるフコシルトランスフェラーゼFUT8のサイレンシングの効果が研究された公表された研究の結果をまとめたものである26。簡単に言えば、ヒト患者のグリコミックデータ(レクチンアレイによって得られた)およびトランスクリプトームプロファイリングの分析は、原発性黒色腫から転移性黒色腫への進行に関連するα−1,6−フコースのレベルの増加を明らかにし、対応するフコシルトランスフェラーゼ(FUT8)の増加と一致した。
FUT8 shRNAまたは対応する非標的コントロール(shNTC)を担持するレンチウイルスで形質導入された113/6-4Lメラノーマ細胞を、上述のように、超音波誘導心臓内注射によって免疫不全マウス(NSG)に導入した(セクション2.9)。マウスを、 in vivo BLIによる転移性播種につい...

この記事では、メラノーマ転移の新規候補メディエーターを試験するために使用される技術のワークフローとその作用機序について説明します。

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

このプロトコルは、メラノーマ転移の候補調節因子のインビボ効果を評価するために使用することができる連続ワークフロー内の一連の技術を記述するが、他の固体悪性腫瘍の転移のも評価する。当社の体系的なワークフローの主な利点は、堅牢で標準化されたin vivoモデルおよび技術によるデータの再現性の向上です。このパイプラインは、オミックスデータから推測される候補を試験するか、またはin vivo環境でインビトロアッセイを行うことによって、標的発見および治療法開発のための経路を提供する。このプロトコルで提示された技術に関連する学習曲線は、提供された材料を使用し、ステップを実践するときに詳細な説明に従うことによって短縮される。この手順の実証を手伝うのは、The Preclinical Imaging Coreの研究科学者であるOrlando Aristizabalと、私の研究室のインストラクターであるRan Moubarakです。皮内注射の場合は、無菌状態を維持しながら、バイオセーフティキャビネット内で生後8~10週間のマウスを麻酔して剃毛します。次に、針刺しの軌道に対して皮膚を後方につかんで引っ込め、長さ6ミリメートル、31ゲージのインスリン注射針を用いて、斜めを上に向けて鋭角に皮膚を優しく穿刺する。ドーム型の車輪が観察されるまで、30マイクロリットルの腫瘍細胞懸濁液をゆっくりと注入する。腫瘍の成長、体重減少、および全体的な健康状態の進行を監視します。これらのモニタリングセッション中に、ノギスで測定を行い、腫瘍の長さと幅の寸法を使用して体積を計算します。心臓内注射のために、麻酔をかけられたマウスを超音波装置の加熱されたプラットフォーム上に移す。次いで、低アレルギー性テープを用いて、マウスを鼻円錐に固定する。まっすぐなカミソリの刃またはメスの刃で胸部を剃り、30度の角度で傾け、10%ポビドンヨウ素で処置領域の周りの皮膚をきれいにする。次に、超音波プローブをマウスの左側に胸郭の中央に配置し、水平方向の窓を撮像し、左心室の断面図を得た。プローブの長軸を上に向けて、プローブを50度の角度で固定し、加熱されたプラットフォームを20度の角度で固定してから、プローブとサポートフレームをその位置にロックします。安全キャビネット内で作業しながら、30ゲージの1インチ針を備えたツベルクリン1ミリリットルの注射器に細胞懸濁液を引き出します。シリンジ内に存在する気泡をすべて取り除きます。シリンジを定位インジェクターにロックします。次いで、超音波誘導下で、胸壁を通って心臓の左心室に針を前進させ、100〜250マイクロリットルの腫瘍細胞懸濁液をゆっくりと注入する。段階的な生存手術のために、麻酔をかけられたマウスを温暖化パッドの上に置き、10%ポビドンヨウ素溶液で処置領域の周りの皮膚をきれいにする。滅菌

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

この記事では、ヒト癌細胞株の転移能を決定するために使用される実験的転移アッセイの手順を説明します。...

実験的転移アッセイ

このビデオでは、大腸がん患者由来異種移植片またはPDXの自然転移マウスモデルを確立するためのプロトコルについて説明しています。これらの異種移植モデルは、ヒトのがんの特徴を部分的に模倣し、浸潤や転移など、ヒトの悪性腫瘍の重要な側面を理解しています。...

自然転移マウスモデル:同所注射された結腸直腸癌細胞の転移能を研究するためのプラットフォーム

このビデオでは、マウスモデルの尾静脈からメラノーマ細胞を静脈内注射しています。黒色腫細胞はさらに循環器系を移動し、遠くの微小環境に適応して肺などの臓器に転移を引き起こします。...

実験的転移性黒色腫マウスモデル:肺の黒色腫細胞の転移能を研究するためのプラットフォーム

このプロトコルは、卵巣外植片を卵管がん細胞と共培養することによるサンプル調製の技術について説明しています。これらのサンプルは、イメージング質量分析法(IMS)を使用して視覚化され、腫瘍の発生につながる細胞と組織間の小分子交換を検出します。...

イメージング質量分析のための卵巣がんコミュニケーションのモデリング:転移性卵巣腫瘍の発生における低分子化学コミュニケーターを同定する方法

転移は癌の病原性に深い役割を果たしており、死亡者の推定90%を占めています。...

同系マウスメラノーマ細胞の注入は、肺におけるそれらの転移能を決定するために、

ここで、両方のアーキテクチャを繰り返す 3 D...

黒色腫切片 3 D 回転楕円体の皮膚モデル

がん患者からの血漿サンプル マイクロ Rna (Mirna) の循環の表現のレベルを評価するためのプロトコルを提案します。特に、マイクロ Rna 抽出および逆のトランスクリプションを循環させるため市販のキットを使用しました。最後に、斑点を付けられた前のリアルタイム プローブ カスタム プレートを使用して 24 選択した Mirna...

転移性大腸癌患者における循環マイクロ Rna カスタム パネルの検出

免疫療法と単一細胞ゲノムプロファイリングの時代において、がん生物学は、適切な時空間コンテキストで腫瘍と免疫のインターフェースを研究するための新しいin...

in vitro腫瘍微小環境における免疫応答を解剖するためのマイクロ流体共培養モデル

これは、抑制剤または癌転移のドライバーをスクリーニングするための効果的な方法です。発現ライブラリーを用いて細胞を導入し、鶏絨毛管内膜血管構造中に注入して転移性コロニーを形成する。浸潤性の減少または増加を有するコロニーは、切除、拡張、再注入して表現型を確認し、最後に、ハイスループットシーケンシングを用いて分析する。...

迅速かつ定量的なチック絨毛管内膜モデルを用いた転移性調節因子の発見

メラノーマは、すぐに他の臓器に広がる非常に攻撃的な病気です。このプロトコルは、転移性黒色腫のBraf/Ptenマウスモデルにおける鼠径リンパ節の体積を監視するために、3Dレンダリングと組み合わせた超高周波超音波イメージングの適用を説明する。...

メラノーマのBraf/Pten遺伝子操作マウスモデルにおける超高周波超音波イメージングによるリンパ節容積の解析

ここでは、新鮮なメラノーマ組織から解離細胞懸濁液を培養することにより、メラノーマ患者由来のオルガノイドを生成するプロトコルを紹介します。これらのオルガノイドは 、in vitro で患者特異的な腫瘍を忠実に再現し、腫瘍免疫抑制メカニズム、薬物スクリーニング、薬剤耐性メカニズム、およびがんサーベイランスアプローチを探索するための革新的なアプローチを提供します。...

メラノーマ患者由来オルガノイドモデルによる治療機会の解明

学ぼう、メラノーマ転移の新規メディエーター評価のための標準化されたin vivoワークフロー。この頑健な動物モデルは、標的発見と治療開発の再現性を高め、オミクスデータ由来の候補を検証します。

メラノーマ転移の新規メディエーターの同定のための堅牢な発見プラットフォーム

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