昆虫農業と無脊椎動物の生理学のための汎用性の高いオルソプテランモデルである Gryllus bimaculatusの実験室培養の維持

これらの技術は、動物飼料と人間の食物のために養殖された重要なミニ家畜種であり、ますます重要になっている代替モデル生物であるGryllus bimaculatusを飼育するための実用的で実績のある方法を描いています。Gryllus bimaculatusの培養のためのこれらの実験室の方法は、北米のクリケット農業業界全体に共通する技術に由来し、クリケット養殖事業の実験室規模のファクシミリを表しています。まず、天秤の上にきれいな容器を風袋に入れ、人間の拳ほどの大きさの乾燥ココナッツコイアの塊を量ります。

次に、密閉可能な清潔な容器にコイアを入れ、元の体積の6倍までの膨張に対応できます。きれいな手で、大きなブロックから取り出した部分からコイアの塊を静かに分解します。次に、250ミリリットルのメスシリンダーを使用して、脱イオン水の正しい体積を測定して、水5部と乾コイア1部の質量で5対1の比率を達成し、測定された脱イオン水をゆっくりと加え、すべてのコイア粒子を均等に水和する。

その後、手動で凝集塊を浸軟させて均一な水分補給を確保し、コイアが以前に計量された容器を再皮塗りする。75グラムの濡れたコイアの重さを量り、清潔なプラスチックスプーンを使用して100ミリメートル×15ミリメートルのペトリ皿に移し、コイアが皿の底に均等に広がり、塊がないことを確認します。次に、ペトリ皿の側面に、出生時のコロニーと採卵イベントの日付を示すラベルの付いたラボテープでラベルを付けます。

さらに45ミリリットルの脱イオン水をメスシリンダーに入れ、ペトリ皿のパックされたコイアの表面に均等に水を加えて、均一な水分補給を確保します。ペトリ皿が梱包されたら、残りの濡れたコイアを気密容器に密封し、摂氏マイナス20度で保管します。水和産基質を、飼料からできるだけ離れたところにクリケットの所望の親ストックを含むケージに入れ、日付と時刻を文書化する。

次に、オートクレーブ可能な小さなごみ箱を作業台に置きます。次に、清潔で空の29.3リットルのプラスチックケージをゴミ箱の隣のベンチに置きます。空のケージからゴミ箱の反対側に、親クリケットストックと産卵基板を含む別の29.3リットルケージを置きます。

24時間後、親クリケットケージから産卵基質を取り出し、オートクレーブ可能な廃棄物容器の上に配置します。産卵基板の上部に、コオロギがコイアの表面に蹴りつけた可能性のあるフラスまたは飼料の粒子がないか調べます。次に、きれいなスクープラまたはプラスチックスプーンでコイア汚染物質を廃棄物容器に除去し、プラスチックスプーンを廃棄物容器に入れます。

次に、洗浄した産卵基板を清浄な29.3リットルのケージに入れます。その後、ケージを摂氏27度に設定したインキュベーターに入れ、相対湿度60%で、12時間の暗所、12時間の明光周期で置きます。繁殖用ストックを入れたケージを元の場所に戻し、作業台からすべてのアイテムをクリアします。

次に、廃棄物容器を、クリケットの卵で汚染されている可能性のあるアイテムを保管するための施設内の冷凍庫に入れます。次に、10%漂白剤溶液で作業面を消毒し、60秒間放置します。作業面を清潔なペーパータオルで拭き取ってください。

冷凍庫を開けた後、ペーパータオルをゴミ受けに捨てます。未使用の30.8センチ×30.8センチの市販の卵箱フラットを2つ選択してください。そして、ユーティリティナイフまたは強力なはさみで、これらを同じサイズの6つの別々の10.1センチメートル幅のストリップに切ります。

次に、切り取られた端を手で拭き取って、段ボールのぶら下がっている粒子を取り除きます。次に、6つの10.1センチメートル×30.8センチメートルのカートンをケージの底に垂直に置き、カートンの長い軸が29.3リットルのケージの狭い水平軸にまたがります。7枚目のカートンを6枚の直立した部分の上に平らに置きます。

約25センチ×25センチの粗い茶色のペーパータオルを3枚選んだら、それぞれを半分に折ります。次に、カートン構造の近位側の上部を覆うように2つを置き、遠位側のカートンスタックの上に1つを置きます。産卵後11日目に、産卵基質をケージの近位右隅に移動させる。

ハッチが観察されたら、カートンの上部に置かれたペーパータオルを濡らすまで霧をかけますが、積極的に水を流さないでください。その後、100ミリメートルのペトリ蓋の両面を70%エタノールで十分に拭き取り、乾燥させます。次に、50グラムのフィードを60ワットのシングルサービングブレンダーにすくい込み、10,000rpmで1分間粉砕します。

飼料1グラムを測定した後、ケージ内のペトリ皿の蓋の上に振る。スプーンまたはスクープラのきれいな端を使用して、皿の底にできるだけ均一に飼料を広げます。その後、2日ごとに飼料を交換してください。

オートクレーブ可能な廃棄物容器内の古い飼料を廃棄する。飼料中のカビの成長を監視します。そして、飼料が白くまたは緑がかったように見え始めたら、ペトリ皿を捨ててすぐに餌をやる。

産卵後14日目に、2.54センチメートルのペイントブラシを使用して、すべてのコオロギをコイア表面およびペトリ皿の側面からケージにブラッシングすることによって、出生用コイア基材にしがみついているクリケットを除去する。次に、取り出した産卵基板をオートクレーブ可能な廃棄物容器に入れ、オートクレーブ処理するまで冷凍庫に保管する。次に、出生用基質を水和用の新鮮なコイア皿と交換する。

脱イオン水洗浄ボトルを使用して、コイアの表面が輝くまで水を加えますが、溜まりません。クリケットは、平均質量が21ミリグラムの集団から貯蔵された。実験の終わりに、すべての少年と成体のクリケットを合わせた平均質量は0.724グラムでした。

実験が終了した65日齢では、30人の成人男性が存在し、平均質量は0.721グラムであったが、58人の成人女性の場合、平均質量は0.841グラムであった。飼育と収穫の間の生存率は89%であり、すべてのケージ内のすべての個々のクリケットの総数によって毎週測定されました。65日目には、すべてのクリケットの約68%が大人のインスターに達していました。

散水や霧吹きの際にエンクロージャの底に水滴が形成されないようにしてください。レフュジアの上にペーパータオルを置くと、湿度の勾配が可能になり、霧から水滴を吸収します。この手順は、多くの生命科学分野の研究者がGryllus bimaculatusをモデル生物として育てるためのテンプレートとして機能します。

今日まで、Gryllus bimaculatusまたは他のタウロ代謝モデル生物を飼育するための正式なプロトコルはほとんど発表されていない。昆虫農業で用いられる昆虫の飼育方法を体系化・標準化することで、研究グループ間での成果の比較が可能になる。