クローン病における機械的ストレスの病原的役割を研究するためのTNBS誘発げっ歯類モデル

したがって、我々のプロトコルでは、TNBSの結腸内点眼は、点眼部位における経壁炎症および炎症に近位にあるセグメントにおける機械的膨張をもたらす。したがって、これは狭窄性クローン病を模倣しています。近位セグメントは機械的に遠ざかっているが目に見える炎症を示さないので、近位セグメントと炎症部位の比較研究は、機械的ストレスがクローン大腸炎において役割を果たすかどうかを判断するのに役立つ。

以前の研究では、炎症部位のみに焦点を当てています。モデル内のさまざまな部位で作業する我々のプロトコルは、クローン病、特に狭窄性クローン病における機械的ストレスの重要な役割を強調している。まず、ラットを麻酔テーブルの上に仰臥位に置きます。

大腸炎を誘発するには、医療グレードのオープンエンドのポリウレタンカテーテルを肛門から約7〜8センチメートル肛門に挿入し、TNBSを結腸に優しく点滴します。偽対照ラットに250マイクロリットルの生理食塩水を投与する。TNBSまたは生理食塩水の分布を助け、こぼれを避けるために、ラットを仰臥位に保ち、頭を約30度の角度で下向きにし、肛門を2分間閉じます。

外科用グレードのはさみと鉗子を使用してラット腹部を開きます。肛門管の上の結腸全体を慎重に取り除き、結腸を直ちに氷冷1x HBSS緩衝液に移す。バッファー内のコロンをまっすぐにし、定規を使用してコロンの長さを測定します。

ナイロン糸を取り、結腸の周りをぐるぐる回して、対照およびTNBS処置ラットにおける結腸セグメントの外周を測定した。組織学のために全厚組織を取る。腸間膜ボードに沿って結腸を切り開き、HBSSバッファーで結腸を徹底的に清掃します。

最小限の修正で事前定義された基準に基づいて巨視的炎症スコアについて結腸を評価する。炎症部位の口腔縁の2~3センチメートル前の部分である部位P、I、および D.Site PでTNBS処理ラットから結腸組織サンプルを採取する。サイトIは、TNBSが点眼される炎症部位であり、典型的には結腸の端部から4〜6センチメートルである。

最後に、部位Dは、炎症部位の腹腔縁に対して遠位1~2センチメートルの部分である。ラットにおけるTNBSの結腸内点眼は、遠位結腸の点眼部位において肥厚した腸壁および狭くなった管腔を有する長さ約2センチメートルの局所的な経壁炎症を誘発した。TNBS点眼の部位は、経壁性炎症および狭窄の結果として部位 I.As と呼ばれ、炎症および機械的ストレスの両方が部位Iに存在していた.部位Iの狭窄は、部位Pと呼ばれるTNBS点眼の部位に近位にあるセグメントに顕著な内腔膨満をもたらし、結腸周囲は、偽対照結腸と比較して部位PおよびIにおいて有意に増加した。

機械的に歪んでいる間、部位Pは目に見える炎症を示さなかった。それどころか、部位Dと呼ばれるTNBS点眼の遠位結腸セグメントは、炎症も機械的膨満も示さなかった。TNBS処置ラットにおける部位Iにおける炎症の巨視的スコアは、大腸炎ラットの部位PおよびDにおける偽対照と比較して劇的に増加した。

部位PおよびDにおける炎症スコアは、偽物と比較して有意に増加しなかった。したがって、クローン病における機械的ストレスの病原性の重要性を認識するのに役立つため、モデル内の部位Iだけでなく、部位PおよびDを研究することが重要です。機械的ストレスが腸内炎症の病原性因子であるかどうかをさらに決定するために、動物に流動食のみを与えて機械的膨張を放出し、これが炎症および腸機能に役立つかどうかを確認することもできる。