Name: マウス頸部異所性心臓移植モデルのための修正カフ法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 学ぶマウス頸部異所性心臓移植モデルの修正カフ法。血管吻合の複雑性を軽減し、移植片生存率を向上させる手術技術を習得できます。免疫学的拒絶メカニズムの研究に応用可能です。

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この研究は、中国国家自然科学財団(81870304)からJun Liの支援を受けました。

すべての動物実験は、実験動物の世話と使用のためのガイド、第8版、国立研究評議会(米国)2011に準拠して実施されました。動物を対象とする手順は、中国の重慶にある重慶大学がん病院の動物管理および使用委員会によって承認されています。市販の供給源から入手した体重20〜30gの雄のBALB / cおよびC57BL / 6マウス( 材料の表を参照)を同種異系心臓移植研究に使用しました。C57BL/6マウスはドナーおよび同系レシピエントとして使用され、BALB/cマウスは同種異系レシピエントとして使用されました。プロトコルの概略図を 図1に示します。 注意: 手術器具や溶液を含む、手術中に使用されるすべての消耗品は無菌です。外科的処置は、無菌手術技術の原則に準拠しています。
1. 受取手続き
<ol><li>フードに接続された15 x 10 x 10 cmの誘導チャンバーを通して5%イソフルランを吸入 することにより 全身麻酔を誘発します( 材料の表を参照)。</li>
	<li>受信者のマウスを加熱パッドで手術台に固定します。鼻と口の上のフェイスマスクを通して2%イソフルランの連続吸入で麻酔を維持します。. 注:呼吸数とリズムが遅いこと、角膜反射が消失していること、およびつま先にペダル反射がないことは、麻酔の有効性を示しています。</li>
	<li>髪を剃った後、ポビドンヨードスクラブとそれに続くアルコールの3ラウンドを交互にラウンドして手術領域を消毒します。次に、右下顎角から尾端まで頸部の正中線に平行に1.5〜2 cmの皮膚を切開します。</li>
	<li>電気凝固装置とマイクロ鉗子を使用して右外頸静脈の~1cmを解剖します。近位端の静脈を非外傷性微小血管クランプでクリップし、遠位端で結紮します。</li>
	<li>静脈の遠位端を、ベベル端と表面溝のある22 Gポリウレタンとげのあるカフ( 材料表を参照)に通します。微小血管クランプを使用してカフのハンドルで静脈を固定します。</li>
	<li>8-0を削除します遠位端の結紮縫合糸、表面のとげで引っ掛けられたカフの上に内腔を裏返し、表面の溝に10-0の外科用縫合糸で固定します。</li>
	<li>右舌下腺を切除して心臓移植片を移植するための窩を形成し、顎下腺の右葉と右胸鎖乳突筋を予約します。</li>
	<li>マイクロ鉗子を使用して右総頸動脈を~1 cm解剖し、近位端の非外傷性微小血管クランプで動脈をクリップします。遠位端で、動脈を結紮して切断します。</li>
	<li>動脈の遠位端を、ベベル端と表面に溝がある26 Gのポリウレタンとげのあるカフ( 材料の表を参照)に通します。微小血管クランプを使用して、カフのハンドルで動脈を固定します。</li>
	<li>遠位端の結紮縫合糸を取り外し、内腔をカフの上で裏返しにし、10-0外科用縫合糸で表面的なとげと溝で固定します。</li>
	<li>レシピエントの血管を準備した後、血栓症を防ぐために100IU / mLのヘパリン生理食塩水を血管に落とします。その後の移植のために、頸部切開部を滅菌済みの湿った生理食塩水ガーゼで覆います。</li>
</ol>2. 寄付者の手続き
<ol><li>ドナーマウスに同じ麻酔手順(ステップ1.1)を採用します。</li>
	<li>電気かみそりを使用して腹毛を剃り、ポビドンヨードスクラブとそれに続くアルコールを交互に3回に分けて手術部位を消毒します。</li>
	<li>腹部(2〜3 cm)を恥骨結合から恥骨下への正中線に沿ってハサミで切開し、開創器で切開領域を広げます。</li>
	<li>電気凝固装置と微小鉗子を用いて腹部大動脈と下大静脈1cmを解剖し、下大静脈からヘパリン250IU/mLを添加した生理食塩水1mLを注入してヘパリン化を行う。この後、腹部大動脈と下大静脈を切除します。</li>
	<li>外科用ハサミを使用して両側の前腋窩線に沿って胸部を切除し、胸壁を分離します。上大静脈を8-0で結ぶ外科用縫合糸。</li>
	<li>肝上下大静脈に頭皮針を挿入します。次に、肝上下大静脈から頭皮針に100IU / mLのヘパリンを添加した氷冷生理食塩水を注入し、血液の色が薄くなるまでドナーの心臓に灌流します。</li>
	<li>ドナー心筋を保護するために、大動脈弓から頭皮針を使用して、2〜3 mLの氷冷ヒスチジン-トリプトファン-ケトグルタル酸(HTK)溶液( 材料の表を参照)でドナー心臓を再灌流します。平均温虚血時間は5分です。</li>
	<li>上大静脈と下大静脈と肺静脈を5-0の外科用縫合糸で結紮します。分岐する前にドナー大動脈と肺動脈を解剖して切断します。その後、上大静脈と下大静脈と肺静脈を分けてドナーの心臓を取り除きます。</li>
</ol>3.移植
<ol><li>ドナーの心臓をレシピエントマウスの頸部ポケットに逆さの位置で移植します。</li>
	<li>エバーテッドレシピエント頸静脈でカフをドナー肺動脈の内腔に引き込み、ドナー肺動脈をレシピエントの外頸静脈にエンドツーエンドで吻合します。吻合を固定するために、10-0外科用縫合糸を通して表面の溝を使用してカフを結紮します。</li>
	<li>レシピエント頸動脈へのドナー大動脈のエンドツーエンドの吻合にも同様の手順を採用します。</li>
	<li>頸静脈の非外傷性微小血管クランプを解放し、続いて頸動脈を解放して、ドナーの心臓を再灌流します。平均寒冷虚血時間は15分です。</li>
	<li>心臓移植片を固定し、移植片のねじれを防ぐために適切に縫合します。</li>
	<li>5-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸を使用して、連続縫合糸で頸部切開を閉じます(材料の表を参照)。 注意: 傷が完全に治癒したら、縫合糸を取り外します。</li>
	<li>麻酔から回復するまで、レシピエントマウスを暖かく乾燥した清潔なケージに入れたままにします。 注意: 回復には5〜10分かかります。</li>
	<li>術後鎮痛のために、ブプレノルフィン(0.05 mg / kg)をレシピエントマウスに6時間ごとに48時間皮下注射します。. 注:鎮痛剤の投与量は、この研究のために最適化されました。ただし、鎮痛レジメンは、施設の動物使用ガイドラインに従って痛みの兆候がある場合は延長/変更できます。</li>
</ol>

<ol><li>Khush, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+thoracic+organ+transplant+registry+of+the+international+society+for+heart+and+lung+transplantation%3A+Thirty-sixth+adult+heart+transplantation+report+-+2019%3B+focus+theme%3A+Donor+and+recipient+size+match%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The International thoracic organ transplant registry of the international society for heart and lung transplantation: Thirty-sixth adult heart transplantation report - 2019; focus theme: Donor and recipient size match.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 38 (10), 1056-1066 (2019).</li>
<li>Stehlik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+registry+of+the+international+society+for+heart+and+lung+transplantation%3A+29th+official+adult+heart+transplant+report--2012%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The registry of the international society for heart and lung transplantation: 29th official adult heart transplant report--2012.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 31 (10), 1052-1064 (2012).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+intrathymic+and+intravenous+injection+of+mesenchymal+stem+cells+can+prolong+the+survival+of+rat+cardiac+allograft+associated+with+decrease+in+miR-155+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Combined intrathymic and intravenous injection of mesenchymal stem cells can prolong the survival of rat cardiac allograft associated with decrease in miR-155 expression.</a> Journal of Surgical Research. 185 (2), 896-903 (2013).</li>
<li>Eggenhofer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+synergism+between+mesenchymal+stem+cells+and+immunosuppressive+drugs+in+a+murine+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Features of synergism between mesenchymal stem cells and immunosuppressive drugs in a murine heart transplantation model.</a> Transplant Immunology. 25 (2-3), 141-147 (2011).</li>
<li>Sula Karreci, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+treatment+with+a+highly+selective+immunoproteasome+inhibitor+promotes+long-term+cardiac+allograft+acceptance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Brief treatment with a highly selective immunoproteasome inhibitor promotes long-term cardiac allograft acceptance in mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (52), 8425-8432 (2016).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 6, 238(2007).</li>
<li>Lin, C. M., Gill, R. G., Mehrad, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+killer+cell+activating+receptor%2C+NKG2D%2C+is+critical+to+antibody-dependent+chronic+rejection+in+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The natural killer cell activating receptor, NKG2D, is critical to antibody-dependent chronic rejection in heart transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 21 (11), 3550-3560 (2021).</li>
<li>Ito, H., Hamano, K., Fukumoto, T., Wood, K. J., Esato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+blockade+of+CD4+and+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules%3A+An+effective+immunosuppressive+treatment+in+the+mouse+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Bidirectional blockade of CD4 and major histocompatibility complex class II molecules: An effective immunosuppressive treatment in the mouse heart transplantation model.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 17 (5), 460-469 (1998).</li>
<li>Zhou, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+rejection+correlates+with+expression+of+major+histocompatibility+complex+class+I+antigens+on+peripheral+blood+CD3%28%2B%29CD8%28%2B%29+T-lymphocytes+following+skin+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+International+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Acute rejection correlates with expression of major histocompatibility complex class I antigens on peripheral blood CD3(+)CD8(+) T-lymphocytes following skin transplantation in mice.</a> Journal of International Medical Research. 39 (2), 480-487 (2011).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753(2014).</li>
<li>Cui, D., Tan, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+technique+of+arterial+anastomosis+in+mouse+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An alternative technique of arterial anastomosis in mouse heart transplantation.</a> Clinical Transplantation. 32 (6), 13264(2018).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> Journal of Investigative Surgery. 26 (4), 223-228 (2013).</li>
<li>Fang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+two-stitch+sleeve+technique+for+arterial+anastomosis+of+cervical+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">A simplified two-stitch sleeve technique for arterial anastomosis of cervical heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> American Journal of Translational Research. 5 (5), 521-529 (2013).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Fensterer, T. F., Miller, C. J., Perez-Abadia, G., Maldonado, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+cuff+design+to+facilitate+anastomosis+of+small+vessels+during+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel cuff design to facilitate anastomosis of small vessels during cervical heterotopic heart transplantation in rats.</a> Comparative Medicine. 64 (4), 293-299 (2014).</li>
</ol>

著者は開示するものは何もありません。

マウス心臓移植モデルは、心臓移植後の拒絶反応メカニズムの解明に貢献し、心臓同種移植レシピエントの長期生存率を向上させる独自のアプローチの開発に貢献しています。しかし、マウスの心臓移植は複雑で困難な作業であり、特に血管吻合において、高度な顕微手術技術が必要です11、12、13。マウス腹部異所性心臓移植モデルは、レシピエント大動脈および下大静脈へのドナー大動脈および肺動脈の吻合によるステッチを用いて行われる。この手術では、レシピエントの大動脈と下大静脈をブロックする必要があります。したがって、下半身の虚血および下大静脈の血栓症は、レシピエントマウスの障害および死亡を増加させる可能性がある。移植中の血管吻合の困難を軽減するために、松浦らは1991年にカフ技術を使用してマウスに頸部心臓移植モデルを最初に導入しました14。このモデルでは、カフとの結紮による血管のオーバースリーブ状のエバーテッド吻合が吻合効率を高めた...

心臓移植は末期心不全の標準的な治療法となっています。国際心臓肺移植学会に登録されている組織では、年間5,500件以上の心臓移植が行われています。同種異系心臓移植レシピエントでは、1年間の拒絶率は依然として>10%ですが、3年間の拒絶率は36%に増加しました1,2。しかし、心臓同種移植片拒絶反応を有する患者に対する効果的な予防的治療は不足している。したがって、心臓同種移植片の免疫学的および病理学的拒絶の根底にある生理学的メカニズムを解明する動物モデル研究が保証されています。このような研究は、効果的な薬剤の開発に必要な新規標的の調査に貢献し、心臓同種移植片拒絶反応を防ぎ、これらの患者集団の生存率を改善するのに役立ちます。
心臓同種移植片拒絶反応のいくつかの潜在的な免疫学的および病態生理学的メカニズムが、異所性心臓移植のマウスモデル研究において最近提案されている3,4,5。その結果、マウスヘテロトピック心臓移植は、ヒト遺伝子との相同性が高いため、心臓移植後の心臓同種移植片で発生する免疫拒絶反応と病理学的損傷のメカニズムを調べるための理想的な前臨床モデルになりました。一般的な概念は、通常の人体解剖学的構造と同様に、ステッチを使用してレシピエント大動脈と下大静脈の腹部エンドツーエンド吻合によってマウスモデルで異所性移植を行うことです。しかしながら、この手順は、レシピエントの血液供給および下半身6の静脈逆流を妨げる可能性がある。したがって、マウスモデルにおける修正異所性心臓移植手順がここで提案される。
ドナーの心臓には、修正されたカフ技術を使用したエンドツーエンドの頸部吻合によって、レシピエントの頸動脈と頸静脈が埋め込まれます。この修正された手順は、手術の実現可能性を促進し、下半身の血液供給および静脈逆流を妨げることなく心臓移植片の生存を確保した。

<table><tbody><tr><td>&nbsp;5-0 ポリアミドモノフィラメント縫合糸</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>C3090954</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;8-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>C2090880</tr><tr><td>10-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>G0090781</tr><tr><td>22 G ポリウレタン カフ</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>4251628-02</td><td></td></tr><tr><td>26 Gポリウレタンカフ</td><td>蘇州Linhua Medical Instrument Co.、LTD</td><td>REF383713</td><td></td></tr><tr><td>麻酔誘導室</td><td>RWDライフサイエンス株式会社、株式会社</td><td>V100</td><td></td></tr><tr><td>非外傷性微小血管クランプ</td><td>Beyotime</td><td>FS500</td><td></td></tr><tr><td>BALB / cおよびC57BL / 6マウス(20&ndash;30 g)</td><td>Centre of Experimental Animals(陸軍医科大学、重慶、中国)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>US Biological life Sciences</td><td>352004</td><td></td></tr><tr><td>Electrocoagulator</td><td>Guangzhou Runman Medical Instrument Co., Ltd</td><td>ZJ1099</td><td></td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Henan piaoan group Co., Ltd</td><td>10210402</td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Guangzhou Dewei Biological Technology Co.,株式会社</td><td>DK0032</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>北中国薬剤Co.、株式会社</td><td>2101131-2</td><td></td></tr><tr><td>HTKの解決</td><td>シンセンChangyiの薬剤Co.、株式会社</td><td>YZB/Min8263-2013</td><td></td></tr><tr><td>の注入のシリンジ(10のmL)</td><td>山東weigaoのグループ医学ポリマーCo.、株式会社</td><td>20211001</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>RWDの生命科学Co.、株式会社</td><td>21070201</td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td>南西製薬株式会社</td><td>H50021610</td><td></td></tr><tr><td>頭皮針</td><td>Hongyu Medical Group</td><td>20183150210</td><td></td></tr><tr><td>Shaver</td><td>Beyotime</td><td>FS600</td><td></td></tr><tr><td>小動物麻酔器</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>R500</td><td></td></tr><tr><td>外科手術顕微鏡</td><td>Tiannuoxiang Scientific Instrument Co. , Ltd, 北京, 中国</td><td>SZX-6745</td><td></td></tr><tr><td>綿棒</td><td>Yubeiの医学材料Co.、株式会社</td><td>21080274</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス頸部異所性心臓移植モデルのための修正カフ法

A Modified Cuff Technique for Mouse Cervical Heterotopic Heart Transplantation Model

心臓同種移植片拒絶反応は、心臓移植後の患者の長期生存を制限します。マウス心臓移植モデルは、ヒト遺伝子との相同性が高いため、前臨床試験における心臓同種移植片拒絶反応のメカニズムを調べるのに最適です。この理解は、心臓同種移植片で治療された患者の長期生存を改善するための独自のアプローチを開発するのに役立ちます。マウスモデルでは、腹部ドナー心臓移植は、通常、ステッチを使用してレシピエントの大動脈および下大静脈にエンドツーエンドの吻合で行われます。このモデルでは、ドナーの心臓は、修正カフ技術によってレシピエントの頸動脈と頸静脈にエンドツーエンドの吻合によって移植されます。移植手術は縫合せずに行われるため、血液供給や下半身の静脈逆流に干渉しないため、レシピエントの生存率を高めることができます。このマウスモデルは、心臓同種移植片の免疫学的および病理学的(急性/慢性)拒絶反応の根底にあるメカニズムを調査するのに役立ちます。

このマウス子宮頸部異所性心臓移植モデルでは、レシピエントマウスの生存率は約95.2%でした(21匹中20匹が生存しました)。主な死因は術後出血でした。規則的なリズムを伴う速い心拍は、移植されたドナー心臓の生存の指標として役立つ。
C57BL/6およびBALB/cマウスは、このモデルにおいてMHC(H-2b)およびMHC(H-2d)タイプであり、それぞれ7,8であった。これら2つの株は、急性T細胞媒介拒絶反応を引き起こすH-2によって異なる9。すべての心臓同種移植片のうち、心拍を触診して評価したように、62.5%が移植後7日以内に失われました。すべての心臓同種移植片は移植後8日以内に失われました。対照的に、すべての同種心臓移植は4週間を超えて生存しました(図2)。4週間を超えて生存したマウスを、CO2吸入により安楽死させた。
<p ...

本プロトコールでは、心臓同種移植片拒絶反応のメカニズムを調べるためにマウス心臓移植モデルが用いられる。この異所性心臓移植モデルでは、手術効率が向上し、修正カフ技術を用いた心臓移植の頸部エンドツーエンド吻合によって心臓移植片の生存が確保されます。

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for ...

マウス心臓移植モデルは、心臓同種移植片の免疫学的および傍矢状拒絶メカニズムの調査に役立ちます。この理解は、患者の長期生存を改善するための独自のアプローチを開発するのに役立ちます。この子宮頸部移植手術は、カフ法を用いて縫合せずに行われます。したがって、血管吻合の複雑さを軽減し、血液供給および下半身の静脈逆流との干渉を回避します。手順を実演するのは、私たちの研究室の外科医であるXin Mao博士です。まず、レシピエントマウスを手術台の加熱パッドに置き、手術部位の毛を剃ります。手術部位を消毒した後、右下顎角から尾端まで頸部正中線と平行に1.5〜2センチの切開を行います。電気凝固装置とマイクロ鉗子を使用して、右外頸静脈の約1センチメートルを解剖します。近位端の静脈をアトルアマティック微小血管クランプでクリップし、遠位端で結紮します。静脈の遠位端を、斜角端と表面溝のある22ゲージのポリウレタンとげのある袖口に通します。微小血管クランプを使用してカフのハンドルで静脈を固定します。8-0を削除します遠位端の結紮縫合糸、表面のとげで引っ掛けられたカフの上に内腔を裏返し、表面の溝に10-0の外科用縫合糸で固定します。右舌下腺を切除して心臓移植片を移植するための窩を形成し、顎下腺の右葉と右胸鎖乳突筋を予約します。マイクロ鉗子を使用して右総頸動脈を約1センチメートル解剖し、近位端の非外傷性微小血管クランプで動脈をクリップします。動脈を結睭化して切断する。動脈の遠位端を、斜角の端と表面に溝がある26ゲージのポリウレタン製のとげのある袖口に通します。微小血管クランプを使用して、カフのハンドルで動脈を固定します。遠位端の結紮縫合糸を取り外し、内腔をカフの上で裏返しにし、10-0外科用縫合糸で表面的なとげと溝で固定します。レシピエントの血管を準備した後、血栓症を防ぐために、ミリリットルヘパリン生理食塩水あたり100国際単位を血管に落とします。その後の移植のために、頸部切開部を湿った生理食塩水ガーゼで覆います。電気かみそりを使用して腹毛を剃ります。手術部位を消毒した後、恥骨結合から剣状骨下までの正中線に沿って腹部を切開し、開創器で切開部位を広げます。電気凝固装置と微小鉗子を用いて腹部大動脈と下大静脈の1センチメートルを解剖し、下大静脈からヘパリン1ミリリットルあたり250国際単位を添加した生理食塩水1ミリリットルを注入してヘパリン化を行います。腹部大動脈と下大静脈を切除します。外科用ハサミを使用して両側の前腋窩線に沿って胸部を切除し、胸壁を分離し、上大静脈を8-0で結紮します。外科用縫合糸。肝上下大静脈に頭皮針を挿入します。次に、肝上下大静脈から頭皮針に1ミリリットルあたり100単位のヘパリンを添加した氷冷生理食塩水を注入し、血液の色が薄くなるまでドナーの心臓を大量に注入します。ドナー心筋を保護するために、大動脈弓から2〜3ミリリットルの氷冷ヒスチジン-トリプトファン-ケトグルタル酸溶液でドナー心臓を再灌流します。上大静脈と下大静脈と肺静脈を5-0の外科用縫合糸で結紮します。分岐する前に、ドナー大動脈と肺動脈を解剖して切断します。次に、上大静脈と下大静脈と肺静脈を分割して、ドナーの心臓を取り除きます。ドナーの心臓をレシピエントマウスの頸部ポケットに逆さの位置で移植します。エバートレシピエント頸静脈でカフをドナー肺動脈の内腔に引き込み、エンドツーエンドの吻合を行います。吻合を固定するために、10-0外科用縫合糸を通して表面の溝を使用してカフを結紮します。レシピエント頸動脈へのドナー大動脈のエンドツーエンドの吻合にも同様の手順を採用します。頸静脈の非外傷性微小血管クランプを解放し、続いて頸動脈を解放して、ドナーの心臓を再灌流します。心臓移植片を固定し、移植片のねじれを防ぐために適切に縫合します。5-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸を使用して、連続縫合糸で頸部切開を閉じます。このマウス頸部異所性心臓移植モデルを使用すると、レシピエントマウスの生存率は約95.2%であり、移植後8日以内にすべての心臓同種移植片が失われました。対照的に、すべての同質遺伝子心臓移植は4週間を超えて生存しました。溝と袖口は、血管の繰り返し操作を避け、エバートされた血管をよりよく固定します。この手術における血管吻合のための修正カフ法は、異なる臓器移植動物モデルにおける別の吻合にも適用可能である。

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マウス異所性心臓移植モデルは、拒絶反応や免疫応答のメカニズムを研究するための重要な方法であると多くの研究者によって証明されています。しかし、関係する技術はまだ厳しいです。標準的な技術を変更することにより我々は1000以上の移植で成功を収めている。...

マウスにおける異所心臓移植

マウスの子宮頸心臓移植モデルは、免疫学的ならびに虚血再灌流障害の研究によく適している。私たちは、非縫合カフ技術を使用して手順を変更し、このアプローチに1,000以上の成功移植を行った。 ここで、私たちはビデオを補足するためにこの技術のさらなる詳細を提供する。...

変更されたカフ法を用いたマウス子宮頸心臓移植モデル

マウスの心臓の異所性移植のための顕微手術のための技術が実証されています。これには、ドナー採取とレシピエント血管の吻合のための簡略化された方法が含まれています。...

異マウスハートTransplantion用に変更する方法

カフ技術は、技術的に困難な小血管の縫合糸吻合を避けることにより、マウスにおける異所性子宮頸部心臓移植のモデルを短縮し、促進します。このビデオペーパーで示されている技術的な詳細により、研究者は自分の研究室でこのモデルを確立できるはずです。...

マウスにおける異子宮頸心臓移植

ここでは、子宮頸部マウスモデルにおける非縫合カフ技術を用いたマウスにおける異所性大動脈移植のプロトコルを提示する。このモデルは、慢性同種移植片血管症(CAV)の基礎病理を研究するために使用することができ、その形成を防ぐために新しい治療薬を評価するのに役立ちます。...

改変非縫合カフ技術を用いたマウス子宮頸動脈大動脈移植モデル

マウス子宮頸部異所性心臓移植のためのカフ技術にインナーチューブアプローチを導入し、カフ上の血管をエバートするのに役立ちます。我々は、2人の経験豊富な外科医間の協力が著しく手術時間を短縮することを発見した。...

マウスの心臓移植のためのカフ技術の最適化

異重症性腹部マウス心臓移植モデルにおける血液回路再建の新しい技術が実証されている。...

腹部マウス心臓移植モデルにおける血液回路再建

マウス心臓移植モデルは、移植免疫学を研究するための貴重な研究ツールとなります。本プロトコルは、層流を可能にするためにレシピエントの総頸動脈およびドナーの肺動脈幹にカフを配置することを含むマウス異所性頸部心臓移植を詳述する。...

血管カフを用いたマウスヘテロトピック頸部心臓移植

このプロトコルはマウスにおけるカフフリーの縫合を使った頸部異所性心臓移植技術を提示し、生理学的条件下で異物からの干渉を最小限に抑えた形で、ドナー特異的免疫寛容を評価するために、2つ目の異所性心臓移植片を確実に配置できるように設計されています。...

マウスにおけるドナー特異的免疫寛容を評価するための二次ヘテロトピオト心臓移植のためのカフフリー縫合ベースの頸部モデル

このプロトコルは、マウス頸部心臓移植のための簡略化された端側縫合吻合技術を提示し、移植免疫学の研究において堅牢かつ再現性の高いモデルを提供します。...

エンドツーサイド吻合技術を用いた子宮頸部ヘテロトピオマウス心臓移植による移植免疫学の研究

学ぶマウス頸部異所性心臓移植モデルの修正カフ法。血管吻合の複雑性を軽減し、移植片生存率を向上させる手術技術を習得できます。免疫学的拒絶メカニズムの研究に応用可能です。

マウス頸部異所性心臓移植モデルのための修正カフ法

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