C. elegansピック、ヘラ、メスを滅菌するための無炎法
2022年3月4日
この記事では、裸火の代わりにマイクロ焼却炉を使用してワームピック、ヘラ、メスを滅菌する方法について説明します。
このプロトコルは、裸火の必要性を排除するC.Elegansで使用するための無菌技術を提示する。この技術の主な利点は、直火を排除することによって安全上の危険を軽減し、ガスラインのない実験室空間や層流フードで使用できることです。側面に触れずに器具を滅菌エリアに出し入れするのは難しいかもしれませんが、ガイドを追加して手を安定させると動きが簡単になります。
まず、ループホルダーアクセサリガイドを外側のバレルにクリップしてマイクロ焼却炉に取り付けます。必要に応じて、マイクロ焼却炉を標準の120ボルトまたは230ボルトのコンセントに差し込みます。マイクロ焼却炉を「高」設定にし、10 ~ 20 分間ウォームアップして、摂氏 800 ~ 825 度の最適温度に達します。
ガイドに沿ってスライドさせて、側面に触れることなく円筒形の滅菌領域に器具を挿入します。器具を滅菌エリアに5~7秒間保持します。ガイドに沿って後方にスライドさせて、側面に触れずに楽器を取り外します。
ピックの場合は、ワームを燃やさないようにワームに触れる前に、楽器を3〜5秒間冷やします。ワームをピッキングした後、ピックをチャンバーに5〜7秒間挿入し直して、ピック上のワームを焼却します。ゴムチューブを使用して、ブンゼンバーナーをガスラインに接続します。
チューブをしっかりと固定し、バーナーを頭上の物体から遠ざけてください。ガスラインのつまみを回してガスを入れます。ストライカーまたはライターを使用してバーナーに点火します。
青い円錐形が見えるまで、ガスノブと吸気口を使用して炎を調整します。ピック、ヘラ、またはメスを赤く光るまで炎の中に入れます。ピックの場合は、ワームを燃やさないようにワームに触れる前に、楽器を3〜5秒間冷やします。
ワームをピッキングした後、ピックを炎の中に挿入し直して、ピック上のワームを焼却します。ルリアブロス中のOP50大腸菌を摂氏37度のシェーカーで一晩培養する。一晩培養した後、培養物を滅菌水で1:100の割合で希釈する。
ブンゼンバーナーまたはマイクロ焼却炉で滅菌したワームピックを菌液に浸し、再滅菌し、100マイクロリットルの滅菌水で渦巻く。陽性対照の場合は、ピックを菌液に浸し、滅菌水に旋回させ、陰性対照の場合は、菌液に浸さずにピックを殺菌してから、滅菌水に旋回させる。100マイクロリットルの水を10センチメートルのルリアブロス寒天シャーレにプレートし、滅菌細胞スプレッダーを用いて水を広げ、蓋をして室温で24時間インキュベートした。
潜伏期間後にコロニーを手動でカウントする。相対汚染率は、試料あたりのコロニー数をカウントすることにより測定した。陰性対照プレートでは、ゼロコロニーが見出された。
4.7コロニーの平均数と標準誤差0.3コロニーは、ブンゼンバーナーを使用してピックを滅菌したときに得られました。マイクロ焼却炉条件では、標準誤差1.2コロニーで3.3コロニーの平均数が観察された。しかし、陽性対照条件では298.3コロニーの平均数が得られた。
これにより、マイクロ焼却炉はブンゼンバーナーと同等の効果で無菌性の結果を達成した。この手順に続いて、C.Elegansのピッキングまたはチャンク化を含む任意の方法を実行することができる。したがって、それは多種多様な研究課題に適用可能である。
概要
この記事では、C. elegansを用いた実験で使用する器具を滅菌するためのプロトコルを提示しています。具体的には、従来の明火の代わりにマイクロ焼却装置を使用しています。この技術は実験室の安全性を高め、ガスラインのない環境を含む様々な設定で効果的に活用できます。
主要な研究構成要素
研究領域
- 微生物滅菌技術
- 実験室環境における安全プロトコル
- 線虫研究における応用
背景
- 現在の方法は明火による安全上の危険性をもたらす
- 代替的な滅菌技術の必要性
- 汚染防止における滅菌の重要性
使用方法
- 滅菌にマイクロ焼却装置の利用
- C. elegansへの適用
- 汚染を測定するためのコロニー数測定アッセイ
主要な結果
- マイクロ焼却装置はバンセンバーナーと同等の滅菌結果を生み出す
- 最も低いコロニー数は陰性対照サンプルで観察され、陽性対照では重大な汚染が確認された
- 平均コロニー数は両方の方法による効果的な滅菌を示している
結論
- この研究は、マイクロ焼却装置がC. elegans研究における器具滅菌の有効な代替手段であることを示しています。
- 信頼性の高い生物学的研究のために、実験室手順における安全性と無菌性の向上が重要です。
よくある質問
Executive Industry Relevance
Reliable sterilization of laboratory instruments is critical for maintaining experimental integrity in early discovery and screening workflows. The adoption of a flame-free micro-incinerator for sterilizing C. elegans picks, spatulas, and scalpels reduces operational hazards and expands laboratory compatibility, supporting reproducible research in diverse R&D environments. This approach enables safer, standardized workflows essential for scalable biopharma discovery pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables contamination-free manipulation of model organisms for hypothesis-driven studies.
- Supports functional target validation by ensuring aseptic transfer and handling of biological samples.
- Reduces confounding variables in mechanistic studies by minimizing microbial contamination risk.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of validated biological systems for downstream screening assays.
- Improves assay reproducibility by standardizing instrument sterilization across experiments.
- Enables reliable quantitative readouts by reducing contamination-driven assay variability.
Translational & Preclinical Research
- Maintains integrity of disease-relevant model systems by preventing cross-contamination.
- Supports continuity from discovery to preclinical validation by ensuring consistent aseptic technique.
- De-risks translational workflows by providing robust sterility controls in organism handling.
Pipeline & Workflow Integration
This flame-free sterilization method integrates into early discovery, screening, and preclinical workflows where aseptic manipulation of model organisms is required.
- Discovery Biology: Enhances hypothesis testing by ensuring uncontaminated sample transfer and manipulation.
- Screening: Standardizes instrument preparation for reproducible, scalable assay development.
- Analytics: Provides quantitative contamination assessment via colony counting, supporting data-driven decision-making.
- Translational Research: Preserves model fidelity for downstream translational studies when supported by organism-based assays.
- Enterprise Reuse: Offers a reusable, flame-free sterilization capability adaptable across laboratory settings.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by minimizing contamination-related artifacts.
- Operational Value: Enhances laboratory safety and enables use in facilities without gas infrastructure.
- Strategic Value: Supports scalable, standardized workflows for efficient portfolio progression.
- Portfolio Impact: Reduces risk of experimental failure due to contamination, supporting robust advancement decisions.
Implementation Considerations
- Requires basic laboratory training in aseptic technique and instrument handling.
- Needs access to an infrared micro-incinerator and compatible electrical outlets.
- Demands cross-team standardization of sterilization timing and handling protocols.
- Adaptable to various model systems where instrument sterilization is critical.
- Instrument insertion and removal technique must avoid contact with sterilization chamber sides to maintain efficacy.
