Name: エラスターゼの血管周囲適用により誘導されるマウス腹部大動脈瘤モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: 学ぶエラスターゼ誘導型マウス腹部大動脈瘤モデルの標準化手術プロトコル。C57BL/6マウスを用いて血管外膜にポルシン膵エラスターゼを適用し、術後14日で91.7%の高発生率を達成。心血管生物学と治療標的発見の研究に有用です。

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ミシガン大学の実験動物医学ユニットには、動物の給餌と繁殖に関する彼らの助けに感謝します。この研究は、J. Zhangに対するNIH RO1 HL1 HL153710、J. ZhangへのNIH RO1 HL1 HL109946、Y.E. ChenへのRO1 HL134569、およびG. Zhaoへの米国心臓協会の助成金20POST35110064によって支持されている。

動物プロトコルは、ミシガン大学機関動物ケアおよび使用委員会(PRO00010092)によって承認された。雄および雌のC57BL/6J野生型(WT)マウス、〜7週齢を、実験に使用した。
1. 動物の準備
<ol><li>手術の前後に標準的な固形飼料( 材料表を参照)をマウスに給餌する。 注:マウスの異なる系統および年齢を使用することができる。しかし、最大発生率を達成するためには、5.5〜12週齢の範囲の年齢が推奨される。</li>
	<li>各マウスについて、麻酔開始の30分前に5mg / kgのカルプロフェンを皮下投与する。</li>
	<li>30分後、100mg / kgのケタミンおよび5mg / kgのキシラジンを腹腔内注射 で 投与し、麻酔を誘発する。</li>
</ol>2. 手術の準備
<ol><li>手術材料を準備する。<ol>
<li>ニトリル手袋を4 cm x 4 mmの短冊に切ります。綿のパッドを3 cm x 2 mmの断片に切ります。これらを、外科用はさみ、組織鉗子、およびハルステッド蚊止血器を含む他の手術器具でオートクレーブする( 材料表を参照)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>マウスを滅菌吸収性ドレッシングパッド上の仰臥位に置きます。前足と後足を外科用テープで固定します。</li>
	<li>綿先のアプリケーター( 材料表を参照)を使用して、中腹部と下腹部にヘアリムーバーローションをブラッシングし、手術用ガーゼでその領域を拭き取って髪を取り除きます。</li>
	<li>70%アルコールとヨウ素系またはクロルヘキシジン系のスクラブを交互に塗布して、円運動で手術領域を少なくとも3回消毒する。乾燥させます。</li>
</ol>3. 手術手順
<ol><li>腹腔にアクセスするには、次の手順を実行します。<ol>
<li>皮膚切開前につま先ピンチ反応の欠如についてマウスをテストします。</li>
		<li>外科用はさみを使用して、中腹部および下腹部の正中線に沿って皮膚に2.5cm縦切開を行う。</li>
		<li>下にある筋肉を静かに引き上げ、腹腔にアクセスするためにアルバ線に沿って2.5cmの縦方向切開を行う。</li>
	</ol>
</li>
	<li>腹部大動脈を露出させる。<ol>
<li>濡れた綿先のアプリケーターを使用して、腸と胃をマウスの右側に動かします。 注:理想的には、これは大動脈の収縮部を露出させる。大動脈を見つけるのが難しい場合、右腎臓と右腎動脈は大動脈を識別することができます(右腎臓は左腎臓よりも解剖学的位置がわずかに低いため)。</li>
		<li>鉗子を使用して、腹部大動脈および下大静脈(IVC)を覆う結合組織を静かに除去する。 注:腹部大動脈とIVCは同じ血管シース内に含まれています。完全な除去はこれら2つの血管を損傷するリスクを増加させるので、すべての結合組織を除去する必要はない。</li>
		<li>鉗子を使用して、腹部大動脈の裏側とIVCを下層の筋肉から静かに解剖します。 注:鉗子の先端は、横方向にシースの裏側に入り、シースを基礎となる筋肉に接続する筋膜に穴を開ける必要があります。穴が開いたら、鉗子をゆっくりと離してサイズを広げます。</li>
		<li>4 cm x 4 mm の手袋ストライプ (前述のように、ステップ 2.1.1) を腹部大動脈と IVC の裏側から挿入し、ストライプをまっすぐにします。縞模様を右腎動脈から約0.5cm離して置きます。 メモ: 周囲の筋膜が縞模様をねじらないように、穴が十分に大きいことを確認してください。</li>
		<li>ストライプの上に、腹部大動脈とIVCの裏側を通して3cm x 2mmの綿パッドを置き、綿パッドをまっすぐにします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>エラスターゼをインキュベートする。<ol>
<li>ピペットを使用して、30 μLのブタ膵臓エラスターゼ(総酵素活性1.8単位、 材料表を参照)を綿パッドの上の大動脈セグメントに滴下し、綿パッドを包み込み、大動脈とIVCの周りにストライプします。10 cm x 10 cmガーゼを滅菌した0.9%生理食塩水ですすぎ、腹部に置きます。 注:ガーゼは、過度のやり過ぎが下のエラスターゼを希釈する危険性があるため、部分的なすすぎのみが必要です。</li>
		<li>30分後、鉗子でストライプと綿のパッドを取り除きます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>以下の手順に従って腹腔を閉じます。<ol>
<li>大動脈および腹腔を500μLの滅菌0.9%生理食塩水で灌漑する。10 cm x 10 cmのガーゼを使用して、残りの生理食塩水を吸収します。</li>
		<li>ランニング6-0非吸収性モノフィラメント縫合糸で筋肉層を再近似する。</li>
		<li>3-4中断された6-0非吸収性モノフィラメント縫合糸で皮膚を閉じる。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 術後ケア
<ol><li>術後1日目に5mg / kgのカルプロフェンを皮下投与する。</li>
	<li>術後10日目に皮膚縫合糸を除去する。</li>
</ol>5. 腹部大動脈瘤径の測定
<ol><li>術後14日目にCO2 過剰摂取によりマウスを安楽死させる。これは、最大拡張の時点を表します。</li>
	<li>ステップ3.1の説明に従って腹腔にアクセスします。</li>
	<li>左心室を通る循環に0.9%生理食塩水10mLを注入して血管灌流を行う。</li>
	<li>ステップ3.1-3.2で説明されているように腹部大動脈の背部部分を露出させる。周囲の結合組織を慎重に除去し、腹部大動脈をIVCから分離する。</li>
	<li>ノギスで腹部大動脈の直径を測定します。</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice%3A+Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice: Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (22), 2101-2108 (2014).</li>
<li>Karthikesalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+from+ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+Clinical+lessons+from+a+comparison+of+outcomes+in+England+and+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mortality from ruptured abdominal aortic aneurysms: Clinical lessons from a comparison of outcomes in England and the USA.</a> Lancet. 383 (9921), 963-969 (2014).</li>
<li>Noel, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+The+excessive+mortality+rate+of+conventional+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ruptured abdominal aortic aneurysms: The excessive mortality rate of conventional repair.</a> Journal of Vascular Surgery. 34 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Lederle, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rupture+rate+of+large+abdominal+aortic+aneurysms+in+patients+refusing+or+unfit+for+elective+repair%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Rupture rate of large abdominal aortic aneurysms in patients refusing or unfit for elective repair.</a> JAMA. 287 (22), 2968-2972 (2002).</li>
<li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+Final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22National+Vital+Statistics+Reports%22%5BJournal%5D)">Deaths: Final data for 2009.</a> National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1(2011).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+abdominal+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Atherosclerosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of abdominal aortic aneurysm formation.</a> Current Atherosclerosis Reports. 4 (3), 222-227 (2002).</li>
<li>Quintana, R. A., Taylor, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of aortic aneurysm formation.</a> Circulation Research. 124 (4), 607-618 (2019).</li>
<li>Kuivaniemi, H., Ryer, E. J., Elmore, J. R., Tromp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Understanding the pathogenesis of abdominal aortic aneurysms.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 13 (9), 975-987 (2015).</li>
<li>Trollope, A., Moxon, J. V., Moran, C. S., Golledge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+and+their+role+in+furthering+management+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal models of abdominal aortic aneurysm and their role in furthering management of human disease.</a> Cardiovascular Pathology. 20 (2), 114-123 (2011).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Senemaud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+relevance+and+recent+advances+of+animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Translational relevance and recent advances of animal models of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (3), 401-410 (2017).</li>
<li>Lysgaard Poulsen, J., Stubbe, J., Lindholt, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+used+to+explore+abdominal+aortic+aneurysms%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Animal models used to explore abdominal aortic aneurysms: A systematic review.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 52 (4), 487-499 (2016).</li>
<li>Tsui, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Cardiovascular+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Experimental models of abdominal aortic aneurysms.</a> Open Cardiovascular Medicine Journal. 4, 221-230 (2010).</li>
<li>Manning, M. W., Cassi, L. A., Huang, J., Szilvassy, S. J., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%3A+Fresh+insights+from+a+novel+animal+model+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms: Fresh insights from a novel animal model of the disease.</a> Vascular Medicine. 7 (1), 45-54 (2002).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> Journal of Surgical Research. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Allaire, E., Guettier, C., Bruneval, P., Plissonnier, D., Michel, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+arterial+grafts%3A+Morphologic+characteristics+of+aortic+isografts%2C+allografts%2C+and+xenografts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Cell-free arterial grafts: Morphologic characteristics of aortic isografts, allografts, and xenografts in rats.</a> Journal of Vascular Surgery. 19 (3), 446-456 (1994).</li>
<li>Anidjar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-981 (1990).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+modulate+the+pathogenesis+of+elastase-induced+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mast cells modulate the pathogenesis of elastase-induced abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 117 (11), 3359-3368 (2007).</li>
<li>Bhamidipati, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+murine+model+of+aortic+aneurysms+using+peri-adventitial+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase.</a> Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).</li>
<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Tanaka, A., Hasegawa, T., Chen, Z., Okita, Y., Okada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rat+model+of+abdominal+aortic+aneurysm+using+a+combination+of+intraluminal+elastase+infusion+and+extraluminal+calcium+chloride+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel rat model of abdominal aortic aneurysm using a combination of intraluminal elastase infusion and extraluminal calcium chloride exposure.</a> Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1423-1432 (2009).</li>
<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+surgical+modifications+to+the+classic+elastase+perfusion+aneurysm+model+enable+haemodynamic+alterations+and+extended+elastase+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four surgical modifications to the classic elastase perfusion aneurysm model enable haemodynamic alterations and extended elastase perfusion.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 56 (1), 102-109 (2018).</li>
<li>Liang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KLF11+protects+against+venous+thrombosis+via+suppressing+tissue+factor+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">KLF11 protects against venous thrombosis via suppressing tissue factor expression.</a> Thrombosis and Haemostasis. , (2021).</li>
<li>Marinov, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+the+infusion+of+elastase+in+the+abdominal+aorta+of+the+Yucatan+miniature+swine+consistently+produce+experimental+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Can the infusion of elastase in the abdominal aorta of the Yucatan miniature swine consistently produce experimental aneurysms.</a> Journal of Investigative Surgery. 10 (3), 129-150 (1997).</li>
<li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments. (153), e60169(2019).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もありません。

エラスターゼ誘導AAAモデルは、1990年にラットを用いてAnidjarらによって最初に報告された17。様々な修正版が過去30年間に導入され、外科的技術19,20,21,22の大幅な改善が伴った。何百もの研究機関が、AAA研究で2番目に多く使用されているげっ歯類実験モデルとしてエラスターゼ誘導AAAモデルを使用しています12。異なるグループがこのモデルの手術をわずかに異なる方法で行うことは当然のことです。その結果、このモデルの1つの注意点は、手術の実施方法の必然的な変動であり、このモデルを使用する異なるグループのデータの比較を非常に困難にする。バリエーションには、大動脈のインフラレナルセグメントがどのように露出されるか、大動脈を覆う筋膜層がどの程度広範囲に洗浄されるか、潜伏期間がどれくらい...

腹部大動脈瘤(AAA)は、血管径1の少なくとも50%の増加を伴う腹部大動脈の分節拡張として定義される。AAAは、破裂が介入2,3,4であっても非常に高い死亡率をもたらす可能性があるため、潜在的に致命的である。AAAは米国で年間約13,000人の死亡の原因となっていると報告されており、これは1,5人の死因の第10位となっています。
AAAの病因はまだ完全には理解されていない6,7,8。AAAの分子機構を調査し、潜在的な治療標的を試験するために、いくつかの実験的AAAモデルが確立されている9、10。AAAのげっ歯類モデルには、エラスターゼ、塩化カルシウム、アンジオテンシンIIおよび異種移植片モデルが含まれ、その中でエラスターゼ誘導AAAモデルは、2番目に多く使用されるモデル10、11、12、13、14、15、16、17である。このモデルは、大動脈の炎症領域へのブタ膵臓エラスターゼ(PPE)の直接注入または適用を含む。大動脈の内側層へのエラスターゼの浸透は、弾性層状の分解および炎症性細胞の浸潤を引き起こし、大動脈壁の完全性の喪失およびその後の腹部大動脈の拡張をもたらす7,18。エラスターゼ誘導AAAモデルは、1990年にAnidjarらによってラットを用いて最初に報告され、大動脈の単離された部分をエラスターゼ17で灌流した。2012年後半に、PPEの周到性適用を用いた改変モデルがBhamidipatiらによって報告された19。今日、エラスターゼ誘導AAAモデルのほとんどの手術は、バミディパティのグループに触発され、PPEの管腔内灌流ではなく外部適用で行われます。外部適用は、細かい外科的技能に対する要求が少ないが、AAAの発生率は比較的低く、管腔内灌流のそれよりも幾分小さいサイズ11,19。
AAA研究で広く使用されているが、エラスターゼ誘導AAAモデルには一定の限界がある。このモデルの1つの注意点は、手術の実施方法の必然的な変動であり、再現性の問題につながる可能性があります。例えば、大動脈の破腎セグメントがどのように単離されるか、およびセグメントのどの部分が異なる実験室間でPPE適用のために選択されるかに関して、外科的処置に相違が存在する可能性がある。PPEの酵素活性およびPPEインキュベーションの時間持続時間も変化し得る。しかし、これらはすべて、最終的なAAA形成速度および動脈瘤直径に影響を及ぼす重要な決定因子である。これらの重要な決定要因の変動は、このモデルを使用する異なるグループからのAAA研究のデータ比較を非常に困難にする。したがって、標準化された外科的処置は、様々な機関から同等の結果を得るためのツールとして必要とされている。
本稿では、マウスの腹部内大動脈の外側へのPPEの直接適用によるエラスターゼ誘導AAAモデルの標準化された外科的プロトコールについて説明する。このモデルを用いたマウスにおけるAAAの正常かつ堅牢な生成に不可欠な外科的材料および手順に関する詳細についても議論する。

<table><tbody><tr><td>6-0非吸収性モノフィラメント縫合糸</td><td>Pro Advantage</td><td>P420697</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis Inc.</td><td>NDC:54771-8507</td><td></td></tr><tr><td>Chow Diet</td><td>LabDiet</td><td>3005659-220</td><td>PicoLab 5L0D</td></tr><tr><td>コットンアプリケー</td><td>ターDynarex</td><td>4303</td><td></td></tr><tr><td>コットンパッド</td><td>Rael</td><td>UPC:810027130969</td><td></td></tr><tr><td>GraphPadプリズム8</td><td>GraphPadソフトウェア株式会社</td><td></td><td>バージョン 8.4.3</td></tr><tr><td>Grarfe 鉗子</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>ハルステッド モスキート止血</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>パー ファーマシューティ</td>カル <td>NDC: 42023-0115-10</td><td></td></tr><tr><td>ニトリル手袋</td><td>フィッシャーブランド</td><td>19-130-1597</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>豚の膵臓のエラスターゼ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250-100MG</td><td></td></tr><tr><td>はさみ</td><td>の細かい科学用具</td><td>14068-12</td><td></td></tr>滅菌<tr><td>0.9%生理食塩水</td><td>Baxter</td><td>2B1324X</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn</td><td>NDC:59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

エラスターゼの血管周囲適用により誘導されるマウス腹部大動脈瘤モデル

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

腹部大動脈瘤(AAA)は、主に無症候性であるが、AAAの破裂は通常壊滅的な結果をもたらすため、潜在的に生命を脅かす可能性がある。現在、AAAのいくつかの異なる実験モデルがあり、それぞれがAAAの病因における異なる側面を強調している。エラスターゼ誘導AAAモデルは、2番目に多く使用されるげっ歯類AAAモデルである。このモデルは、大動脈の炎症領域へのブタ膵臓エラスターゼ(PPE)の直接注入または適用を含む。技術的な課題のため、今日のほとんどのエラスターゼ誘導AAAモデルは、PPEの管腔内注入ではなく外部適用で実施される。エラスターゼの浸潤は、内側層における弾性層層の分解を引き起こし、その結果、大動脈壁の完全性の喪失およびその後の腹部大動脈の拡張をもたらす。しかしながら、エラスターゼ誘導AAAモデルの1つの欠点は、手術の実施方法の必然的な変動である。具体的には、大動脈の内腎セグメントを単離する外科的技術、大動脈ラッピングおよびPPEインキュベーションに使用される材料、PPEの酵素活性、およびPPE適用の時間持続時間はすべて、最終的なAAA形成速度および動脈瘤径に影響を及ぼす重要な決定因子となり得る。特に、AAAに関するさまざまな研究からのこれらの要因の違いは、再現性の問題につながる可能性があります。本稿では、マウスの腹部内大動脈の外側へのPPEの直接適用によるエラスターゼ誘導AAAモデルの詳細な外科的プロセスを説明する。この手順に従うと、雄および雌マウスにおいて約80%の安定したAAA形成率が達成可能である。エラスターゼ誘導AAAモデルを用いたAAA研究の一貫性および再現性は、標準的な外科的処置を確立することによって有意に増強され得る。

12匹の雌および11匹の雄を含む合計23匹の7週齢の野生型(WT)マウスを、提示されたプロトコールに従って操作した。生存率は100%であった(外科的死亡率は除く)。腹部大動脈の最大径はノギスにより測定した。
AAAは、50%の血管径増加を伴う腹部大動脈を拡張することと定義した。したがって、腹部大動脈の最大径の50%の増加が、AAA誘導を成功させるためのカットオフポイントとして選択された。この基準に基づくと、術後14日目のAAAの発生率は雌動物で91.7%であり、手術を受けた12匹中11匹がAAAを発症した。一方、雄動物の発生率は72.7%であり、手術を受けた11匹中8匹がAAAを発症した(図1A)。AAAを発症した19匹の動物のうち、雌および雄では、非手術対照と比較して、それぞれ腹部大動脈の最大径が1.7倍および1.6倍増加している(図1B)。術後14日目の非手術群および手術群からの大動脈の代表的な画像を 図1C</str...

本プロトコールは、マウスの腹部内大動脈の外側へのエラスターゼの直接適用によるエラスターゼ誘導AAAモデルのための標準化された外科的方法を記載する。

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

これは、エラスターゼ誘発腹部大動脈瘤の標準化されたプロトコルであり、このモデルを用いた研究の再現性と一貫性を大幅に向上させるであろう。この技術は、腹部大動脈瘤の一貫した誘導率を有する。また、低コストと短い動作時間の利点も有しており、その結果、統計的検出力と再現性が向上します。エラスターゼが浸透する可能性が高くなるように、大動脈を覆う結合組織が除去されたことを確認する必要がありますが、血管を損傷しないように注意してください。開始するには、麻酔の誘導の30分前に、皮下にカルプロフェンのキログラムあたり5ミリグラムを投与する。麻酔をかけたマウスで、皮膚切開前のつま先のピンチ反応の欠如について試験する。中腹部と下腹部の正中線に沿って、皮膚に2.5センチメートルの縦切開を行う。下にある筋肉を静かに引き上げ、線アルバに沿って縦2.5センチメートルの切開を行います。濡れた綿の先端アプリケーターを使用して、腸と胃をマウスの右側に移動させ、腹腔にアクセスします。鉗子を使用して、腹部大動脈および下大静脈を覆う結合組織を優しく除去する。鉗子を使用して、腹部大動脈の裏側と下大静脈を下層の筋肉から静かに解剖します。腹部大動脈と下大静脈の裏側に4センチ×4ミリメートルの手袋の縞模様を入れ、縞をまっすぐにします。右腎動脈から約0.5センチメートル離れた場所に縞模様を置きます。縞の上に、腹部大動脈と下大静脈の裏側を通る3センチ×2ミリメートルの綿パッドの部分を置きます。次に、綿パッドをまっすぐにします。エラスターゼをインキュベートするには、ピペットを使用して、30マイクロリットルのブタ膵臓エラスターゼを綿パッドの上の大動脈セグメントに滴下する。大動脈と下大静脈の周りに綿パッドとストライプを巻き付けます。滅菌した0.9%生理食塩水で10センチ×10センチのガーゼをすすぎ、腹部に置きます。30分後、鉗子でストライプと綿のパッドを取り外します。大動脈および腹腔を500マイクロリットルの滅菌0.9%生理食塩水で灌漑する。ガーゼを使用して残りの生理食塩水を吸収します。ランニング6-0非吸収性モノフィラメント縫合糸で筋肉層を再近似する。次いで、6−0の非吸収性モノフィラメント縫合糸で中断された3〜4本で皮膚を閉じる。術後14日目に腹部大動脈瘤を発症した発生率は、雌動物で91.7%、雄動物で発生率は72.7%であった腹部大動脈瘤を発症した19匹のうち、雄雄ではそれぞれ最大腹部大動脈径の1.7倍および1.6倍の増加が観察された。 非手術対照と比較して。術後14日目の非手術群および手術群からの大動脈の代表的な画像が表示される。この技術は、トリプルAの病態生理学を解剖し、新しい潜在的な治療標的の発見に役立つ潜在的なツールとして役立った。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、腹部大動脈の大動脈セグメントにブタ膵臓エラスターゼの過渡腔内注入を介してマウスでは腹部大動脈瘤（AAA）を誘導する方法を示しています。モデルは、多数のトランスジェニックやノックアウトマウスの進展に伴い、AAAの病理に広範な洞察を追加する機能を持っています。...

エラスターゼによるマウス実験的腹部大動脈瘤の作成

我々は、マウスにおいて一貫して堅牢な下降胸部大動脈瘤を誘導する外科的プロトコルを説明する。この手順は、左胸部切読術、胸部大動脈暴露、および大動脈壁上のブタ膵臓エラスターゼに浸したスポンジの配置を含む。...

局所エラスターゼ誘発下下胸部大動脈瘤のマウス外科モデル

このプロトコルは、AAAの病理学的特徴と分子メカニズムを研究するためのリン酸カルシウム誘発腹部大動脈瘤(AAA)マウスモデルについて説明しています。...

リン酸カルシウム誘発マウス腹部大動脈瘤モデル

この原稿では、塩化カルシウムとエラスターゼを使用してマウス腹部大動脈瘤モデルを確立するためのプロトコルを提示し、以前のモデリング方法の利点を組み合わせています。このモデルは、腹部大動脈瘤の根底にある病態生理学的メカニズムを調査するために利用できます。...

アドベンチアル塩化カルシウムとエラスターゼ浸潤によるマウス腹部大動脈瘤モデル

このプロトコルは、エラスターゼを腎下大動脈に直接適用し、飲料水を通じてβ-アミノプロピオニトリルを投与することの組み合わせにより、マウスの進行性腹部大動脈瘤をモデル化するための系統的な外科的アプローチを説明しています。...

局所エラスターゼと経口β-アミノプロピオニトリルの組み合わせによるマウスにおける高度な腹部大動脈瘤モデリング

本プロトコルは、マウスモデルにおける頸動脈瘤を1回の外科手術による誘発のための標準化された外科的方法を説明しています。...

頸動脈瘤形成のマウスモデル

このプロトコルは、エラスチン感作と血管周囲エラスターゼの適用を用いてC57BL/6マウスにおける腹部大動脈瘤(AAA)を繰り返しかつ信頼性の高い誘導方法として提供し、免疫増細成分を含むAAAモデルとして提供します。...

エラスチン感作および血管周囲エラスターゼを用いたマウス腹部大動脈瘤モデルの信頼性の高い作成

卵巣癌の同所性動物モデルは、より良い人間の病気を複製し、従って、癌の進行と治療に対する腫瘍の反応の理解を高める。マウスモデルでは、ルシフェラーゼを発現する卵巣腫瘍細胞のintrabursal注射を受け取ります。治療は、経口胃管栄養法により投与される。腫瘍の成長はによって監視されています...

生体イメージングおよび卵巣癌の同所性マウスモデルにおける治療的処置の

彼らは多能性のための標準的なテストを通過した時、誘導多能性幹細胞（IPSC）ラインを生成することはあっても発生能の異なる行が生成されます。ここでは、所有している完全な多能性としてIPSC行を定義性IPSC、から完全に由来するマウスを作製するためのプロトコルを記述する...

人工多能性幹細胞に由来するマウスの作製

造血幹細胞および前駆細胞（HSPCs）および骨髄ニッチの間の相互作用の性質は、ほとんど理解されている。カスタムハードウェアの修正および多段階取得プロトコルは、ex vivo画像骨髄エリア内ホーミング標識HSPCs、追跡相互作用及び運動に二光子共焦点顕微鏡の使用を可能にする。...

成体マウス頭蓋冠骨髄中の造血幹細胞および前駆細胞のin vivo 4次元トラッキングで

学ぶエラスターゼ誘導型マウス腹部大動脈瘤モデルの標準化手術プロトコル。C57BL/6マウスを用いて血管外膜にポルシン膵エラスターゼを適用し、術後14日で91.7%の高発生率を達成。心血管生物学と治療標的発見の研究に有用です。

エラスターゼの血管周囲適用により誘導されるマウス腹部大動脈瘤モデル

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