HIV-1感染ヒト化マウスにおける経口併用抗レトロウイルス治療

このプロトコルは、ヒト化マウスにおけるHIV RNA複製を首尾よく抑制する経口併用抗レトロウイルス薬(ART)を送達するための新しい方法を説明しています。新しい経口ART法は、その安全性、調製と投与の容易さ、および毎日の注射に起因する動物のストレスの軽減により、以前の送達の試みを上回っています。ヒト化マウスにおけるHIV RNA複製を抑制するために提案された経口送達法は、慢性HIV感染者の薬物送達を厳密に模倣する新しい治療法を開発するための前臨床概念実証研究にとって非常に価値があります。

手順を実演するのは、私たちの研究室のラボマネージャー兼技術者であるヴァレリーレザックです。個々の薬の重さを量ることから始めます。滅菌セルスクレーパーを使用してcARTで10個のフードカップを作成し、250ミリグラムのFTC、375ミリグラムのTDF、および500ミリグラムのRALまたはELVを、バイオセーフティキャビネット内の個々の滅菌50ミリリットルの遠心分離機チューブに計量します。

DMSOをFTCおよびTDFチューブに追加してミリリットルあたり250ミリグラムの最終濃度にし、RALまたはELVチューブに500ミリリットルあたり500ミリグラムの最終濃度にします。透明な溶液が得られるまで攪拌およびピペッティングによって薬液を混合する。滅菌シリンジ付きの0.22マイクロメートルの親水性PVDFメンブレンフィルターを使用して溶液を滅菌します。

個々の薬液は、摂氏マイナス20度で12週間保存できます。使用前に各薬液のアリコート1個を、溶液が透明になるまで摂氏37度で新たに解凍します。ピペットを使ってよく混ぜます。

DMSOに溶解した薬剤を混ぜ合わせてよく混ぜ合わせ、FTC1ミリリットル、TDF1.5ミリリットル、ELVまたはRAL1ミリリットルを含むマスターミックスを作ります。350マイクロリットルのcARTマスターミックス溶液をカップに加えて、1つのダイエットジェルブーストcARTカップを準備します。0.75ミリリットルのトリメトプリムスルファメトキサソールをカップに加えます。

1ミリリットルの滅菌ピペットチップを使用して十分に攪拌します。ピペットチップを使用して、cARTを含むフードカップを60ミリメートルのペトリ皿に分注します。マウスの数に応じてケージごとに餌を量ることにより、フードカップ内のcARTの量を計算します。

ケージから通常のチャウチャウを取り出し、cARTを含むフードカップと交換します。週に3回cART食品を更新します。使用済みのカップの重量を量って摂取量を監視します。

次に、マウスの体重を毎週測定して消費量を確認します。HIV-1感染の4週間後、マウスは、皮下注射によるFTC / TDF / RALレジメン、またはFTC / TDF / RALまたはFTC / TDF / ELVの経口投与のいずれかで、さらに7.5週間治療されました。マウスの体重は、毎日のcART皮下注射中に継続的に減少しました。

対照的に、ダイエットジェルは、経口cART投与の5週間後にマウスの体重をART開始前のレベルに回復させました。さらに、RALまたはELVグループ間で有意な体重変化は観察されませんでした。4週間以内に、FTC / TDF / ELVおよびRAL/ART食品レジメンは、ウイルス複製をそれぞれ100%および80%抑制した。

SC注射を受けたマウスの70%は、4週間の治療後に検出できないレベルに達しました。.その結果、経口投与は皮下注射よりも迅速かつ効率的にウイルス複製を抑制することが確認された。さらに、cARTの食事療法は、毎日の注射よりも早く末梢血中のCD4とCD8の比率のさらなる低下を防ぎました。

プロセス全体を通してプロトコルに関与する材料の無菌性を維持し、cARTストック溶液の複数回の凍結と解凍を回避することが重要です。