Na+ に対するミトコンドリア内膜感受性が部分的にセグメント化された機能的CoQプールを明らかにする

このプロトコルは、セカンドメッセンジャーとしてのナトリウムの役割を強調し、部分的に分化したユビキノールプールの存在も示しています。この技術は、ユビキノールプールの研究のための非常に単純なアプローチを示していますが、そうでなければ非常に特異的な細胞モデルが必要です。このアプローチは、他の膜、特に脂質滴内の酵素における電子移動の研究に使用することができる。

サンプルをそれぞれ 20 マイクログラムの 4 つのサブサンプルに分割し、それらを A から D にラベル付けします。サンプル A と B をそれぞれ 10 マイクログラムの 2 つのサブサンプルに分割し、A1、A2、B1、および B2 としてラベル付けします。テキストプロトコルの説明に従ってC1/C2バッファを準備し、摂氏37度に予熱します。1ミリリットルのキュベットに、各サブサンプルを30マイクロリットルのシトクロムcおよび10マイクロリットルのマロン酸塩に加える。C1/C2 バッファーを追加して、キュベット A1 および B1 では 980 マイクロリットル、A2 および B2 では 979 マイクロリットルにボリュームを上げます。キュベットA1およびA2に1モル塩化カリウム10マイクロリットル、B1およびB2に1モル塩化ナトリウム10マイクロリットルを加える。1マイクロリットルの1ミリモルのロテノンをキュベットA2およびB2に加える。測定の直前に、10マイクロリットルの10ミリモルNADHをすべてのキュベットに加える。